维生素C 的鉴别试验、含量测定
041410122王磊 实验目的：
分析维生素c 性质，并分析其鉴别和含量测定方法。 药物简介：
生素C 即L-抗坏血酸：一般动物都可以利用体内葡萄糖代谢途径来合成维生素C 。但人类、猿猴、天竺鼠及一些鸟类、鱼类无法自行合成维生素C ，需通过食物来供应身体所需。因此，维生素C 是一种必需的营养素。维生素Ｃ极易受到热、光和氧的破坏。
一、维生素C 的性状检测
本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭，味酸；久置色渐变微黄；水溶液显酸性反应。本品在水中易溶，在乙醇中微溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。
熔点：本品的熔点为190~192℃，熔融时同时分解。
比旋度：取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml 中约含0.10g 的溶液，在25℃时，依法测定，比旋度为+20.5°至+21.5°。 二、维生素C 的鉴别试验
（1）方法 取本品0.2g ，加水10ml 溶解后，取溶液5ml ，加硝酸银试液0.5ml ，即生成金属银的黑色沉淀。
（2）方法 取本品0.2g ，加水10ml 溶解后，取溶液5ml ，加二氯靛酚钠试液1～2滴，试液的颜色即消失。 实验原理：
1.与硝酸银反应的原理
维生素C 与硝酸银发生氧化还原反应，产生黑色金属银沉淀。
3
3
2.与2,6-二氯靛酚反应的原理
2,6-二氯靛酚是一种染料，其氧化型在酸性介质中呈玫瑰红色，在碱性介质中显蓝色，与维生素C 反应后生成还原型无色的酚亚胺。反应式如下:
6
5
43
21
O
OH
HO
O C OH H CH 2OH
O
H Cl
Cl
N
O
O
H Cl Cl
H OH
三、维生素C 的杂质检查
杂质检查项目包括溶液的澄清度与颜色、炽灼残渣、铁、 铜、重金属、细菌内毒素。 1.溶液的澄清度与颜色
方法：取维生素C 供试品3.0g ，加水15ml ，振摇使溶解，溶液应澄清无色；如显色，将溶液经4号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照紫外-可见分光光度法，在420nm 的波长处测定吸光度，不得过0.03。
维生素C 及其制剂在贮存过程中易氧化变色，且颜色随贮存时间的延长而逐渐加深。《中国药典》规定采用测定吸光度的办法控制有色杂质的限量。 2.铁盐、铜盐的检查
方法：（1）铁的检查（原子分光光度法）
供试品溶液的配制：取本品5.0g 两份，分别置25ml 量瓶中，一份中加0.1mol/L 硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(B)；
对照溶液的配制：另一份中加标准铁溶液（精密称取硫酸铁铵863mg ，置1000ml 量瓶中，加1mol/L 硫酸溶液25ml ，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml ，置100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀）1.0ml ，加0.1mol/L 硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(A)。测定方法及判定标准：照原子吸收分光光度法，在248.3nm 的波长处分别测定，应符合规定[若对照溶液(A)和供试品溶液(B)测得吸光度分别为a 和b ，则要求b ﹤（a-b ）]。
（2）铜的检测方法与铁相同。
由于微量的铁盐和铜盐会加速维生素C 的氧化、分解，《中国药典》规定采用原子吸收分光光度法进行铁盐和铜盐的检查。 四、维生素C 的含量测定(碘量法)
1.方法 取本品约0.2g ，精密称定，加新沸过的冷水100ml 与稀醋酸10ml 使溶解，加淀
粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪。每1ml 碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。
2.注意事项
（1）稀醋酸的作用：在稀醋酸酸性介质中，维生素C受空气中氧的氧化速度减慢。但供试品溶于稀醋酸后仍应立即进行滴定。
（2）加新沸过的冷水：减少水中溶解氧对测定的影响。
（3）预处理：测定维生素C制剂时，为消除辅料的干扰，滴定前要进行必要的处理。如测定片剂时，片剂溶解后应滤过，取续滤液测定；测定注
射液前应加丙酮，以消除注射液中抗氧剂亚硫酸氢钠的干扰。
实验原理：
1.原理维生素C具有较强的还原性，在醋酸酸性条件下，可被碘定量氧化。根据消耗碘滴定液的体积，即可计算维生素C的含量。反应式如下：
I
2
H+参考文献：2010版《中国药典》
实验十一、维生素C 含量的测定 一、实验目的 1、掌握碘标准溶液的配制方法与标定原理。 2、掌握直接碘量法测定维生素C 的原理、方法及其操作。 二、实验原理 用I 2标准溶液可以直接测定维生素C 等一些还原性的物质。维生素C 分子中含有还原性的二烯醇基，能被I 2定量氧化成二酮基，反应式如下： C O C C C C CH 2OH O OH OH H OH H + I 2C O C C C C CH 2OH O OH H H O O + 2HI 由于反应速率较快，可以直接用I 2标准溶液滴定。通过消耗I 2溶液的体积及其浓度即可计算试样中维生素C 的含量。直接碘量法可测定药片、注射液、蔬菜、水果中维生素C 的含量。 等物质的量关系:n(Vc )==n(I 2) 即：3 10)(176 %(2 -?=?I C cV V m 试样） ∴ Vc %= 试样） ()(176.02 m cV I 三、仪器和试剂 (1)仪器 分析天平，250ml 锥形瓶，100ml 量筒，10ml 量筒，酸式滴定管，滴定基管架，25ml 移液管。 (2)试剂 医药维生素C 药片，HAc(2 mol/L )，淀粉(0.5%)，Na 2S 2O 3标准溶液(0.1 mol/L )，I 2标准溶液(0.1 mol/L )。
三、实验步骤 1. 0.05 mol·L -1 I 2标准溶液的配制与标定 将3.3g I 2与5g KI 置于研钵中，在通风柜中加入少量水（切不可多加！）研磨，待I 2全部溶解后，将溶液转入棕色瓶中，加水稀释至250mL ，摇匀。 用移液管移取25.00mL Na 2S 2O 3 标准溶液于250mL 锥形瓶中，加50mL 水、5mL0.5%淀粉溶液，用I 2标准溶液滴定至稳定的蓝色，30s 内不褪色即为终点。平行标定三次。 2. 维生素C 含量的测定 准确称取约0.2g 维生素C 片（研成粉末即用），置于250mL 锥形瓶中，加入新煮沸过并冷却的蒸馏水100mL 、10mL 2mol·L-1 HAc 和5mL0.5%淀粉指定剂，立即用I 2标准溶液滴定至溶液显稳定的蓝色, 30s 内不褪色即为终点。平行滴定3次，计算维生素C 的含量。 四、实验数据记录与处理 试样1 试样2 试样3 维生素C 的质量/g 滴定前液面读数/ml 滴定后液面读数/ml 滴定消耗I 2溶液的体积/ml 维生素C 的含量% 维生素C 的平均含量% 计算公式： %1001000 )()()()(68668622??= O H C O H C I I W M V c C 维生素 式中ｃ——I 2标准溶液的浓度(mol/L)； Ｖ——滴定时所用I 2标准溶液的体积(ml)； Ｍ(Ｃ6Ｈ8Ｏ6)——维生素Ｃ的摩尔质量(g/mol)； Ｗ(Ｃ6Ｈ8Ｏ6)——称取维生素Ｃ的质量(g)。
维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比较 目前研究维生素C测定方法的报道较多,有关维生素C的测定方法如荧光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等,各种方法对实际样品的测定均有满意的效果. 为了解国内VC含量测定方法及其应用方面的现状及发展态势.方法以"维生素C 或抗坏血酸和测定"为检索词对1994～2002年中国期刊网全文数据库(CNKI)中的理工A、B和医药卫生专辑进行篇名检索,对所得有关维生素C含量测定的文献数据分别以年代、作者区域、载刊等级、样品类型、测定方法等进行计量分析.结果核心期刊载刊文献占文献总量的45.06％,其中光度法占65.69％,电化法占18.63％,色谱法占12.75％;复杂被测样品文献占文献总量的45.06％,其中光度法占60.92％,色谱法占19.54％,电化法占10.34％.结论目前国内维生素C含量测定仍以光度法为主流,但近年来色谱法,特别是HPLC法上升趋势尤为明显. 一．荧光法 1．原理 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022 g/ml。 2．适用范围 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 3. 注意事项 3.1 大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用偏磷酸-醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生C。 3.2 某些果胶含量高的样品不易过滤，可采用抽滤的方法，也可先离心，再取上清液过滤。 3.3活性炭可将抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，但它也有吸附抗坏血酸的作用，故活性炭用量应适当与准确，所以，应用天平称量。我们的实验结果证明，用2g活性炭能使测定样品中还原型抗坏血酸完全氧化为脱氢型，其吸附影响不明显。 二、2，6-二氯靛酚滴定法（还原型VC）
抗坏血酸（维生素C）的测定方法（1） 在测定维生素C的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法，2、4－二硝基苯肼法作为第二法。 一、荧光法 1．原理 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022 g/ml。 2．适用范围 GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 3．仪器 3．1．实验室常用设备。 3．2．荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。 3．3．打碎机。 4．试剂 本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。 （1）偏磷酸－乙酸液：称取15g偏磷酸，加入40ml冰乙酸及250ml水，搅拌，放置过夜使之逐渐溶解，加水至500ml。4℃冰箱可保存7～10天。 （2）0.15 mol/L硫酸：取10ml硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200ml。 （3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液，其余同4.1.配制。 （4）50％乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH3COONa·3H2O），加水至1000ml。 （5）硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100ml乙酸钠溶液（4.4）中。临用前配制。（6）邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml。 （7） 0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝，加0.02mol/L氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为10.75ml，磨溶后用水稀释至250ml。 变色范围：pH=1.2 红色 pH=2.8 黄色 pH＞4.0 兰色 （8）活性炭的活化：加200g炭粉于1L 1+9盐酸中，加热回流1~2h，过滤，用水洗至滤液中无铁离子为止，置于110~120℃烘箱中干燥，备用。 （9）标准 抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：准确称取50mg抗坏血酸，用溶液（4.1）溶于50ml容量瓶中，并稀释至刻度。 抗坏血酸标准使用液（100μg/ml）: 取10ml抗坏血酸标准液，用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml。定容前试pH值，如其pH＞2.2时，则应用溶液（4.3）稀释。 标准曲线的制备：取下述"标准"溶液（抗坏血酸含量10μg/ml）0.5、1.0、1.5和2.0ml 标准系列，取双份分别置于10ml带盖试管中，再用水补充至2.0ml。 5.操作步骤 5.1 样品制备 全部实验过程应避光。 称取100g鲜样，加100g偏磷酸-乙酸溶液，倒入打碎机内打成匀浆，用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度。如呈红色，即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释，若呈黄色或兰色，则用偏磷
抗坏血酸（维生素C）的测定方法 在测定维生素C的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法，2、4－二硝基苯肼法作为第二法。 一、荧光法 1．原理 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022 g/ml。 2．适用范围 GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 3．仪器 3．1．实验室常用设备。 3．2．荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。 3．3．打碎机。 4．试剂 本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。 （1）偏磷酸－乙酸液：称取15g偏磷酸，加入40ml冰乙酸及250ml水，搅拌，放置过夜使之逐渐溶解，加水至500ml。4℃冰箱可保存7～10天。 （2）0.15 mol/L硫酸：取10ml硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200ml。 （3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液，其余同4.1.配制。 （4）50％乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH3COONa·3H2O），加水至1000ml。 （5）硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100ml乙酸钠溶液（4.4）中。临用前配制。（6）邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml。 （7） 0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝，加0.02mol/L氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为10.75ml，磨溶后用水稀释至250ml。 变色范围：pH=1.2 红色 pH=2.8 黄色 pH＞4.0 兰色 （8）活性炭的活化：加200g炭粉于1L 1+9盐酸中，加热回流1~2h，过滤，用水洗至滤液
紫外分光光度法测定维生素 一、实验目的 1、了解紫外分光光度计的主要结构及工作原理。C片中的V C含量2、掌握紫外分光光度计的操作方法及紫外定性定量分析方法 3．掌握紫外分光光度法测定水中维生素C含量的原理与分析条件的选择。 二、实验原理 维生素C是人体重要的维生素之一，它影响胶元蛋白的形成，参与人体多种氧化-还原反应,并且有解毒作用。人体不能自身制造Vc，所以人体必须不断地从食物中摄入Vc，通常还需储藏能维持一个月左右的Vc。缺乏时会产生坏血病，故又称抗坏血酸。 维生素C属水溶性维生素，分子式C 6H 8O 6。分子结构中具有二烯醇结构，其结构如下：它易溶于水，微溶于乙醇，不溶于氯仿或乙醚。分子中的二烯醇基具极强的还原性，性质活泼，易被氧化为二酮基而成为脱氢抗坏血酸。维生素C分子结构中有共轭双键，固在紫外光区有较强的吸收。 根据维生素C在稀盐酸溶液中，Vc吸收曲线比较稳定，在最大吸收波长处，其吸收值A的大小与维生素C的浓度c的大小成正比，符合郎伯—比尔定律： A=εbc 其中A为吸收度；c为试样中维生素C的浓度，mol·L-1；b为吸收池厚度，cm；ε为摩尔吸收系数，L·mol-1·cm-1。若在最大吸收波长下，首先绘制出维生素C在最大吸收波长下的标准曲线，然后在相同条件下测定出吸光度A，由测得的吸光度A在标准曲线上查得浓度,换算为药品中含量(mg/片)。。
三、实验仪器与试剂 1．仪器TU1810型紫外分光光度计。电子天平1台，研钵1个，50mL容量瓶7只和500mL容量瓶1只,10mL移液管2支，100mL、1000mL烧杯2只。 2．试剂维生素C标准品(抗坏血酸)，市售维生素C含片（100mg/片），冰醋酸，蒸馏水。 四、实验步骤 1.配制维生素C标准贮备液500mL(浓度约为1.5×10-4mol/L): 称取约0.0132g维生素C标准品于100mL的烧杯中，用超声波助溶后定容于500mL容量瓶中，摇匀，配成贮备液。 2.配制标准系列： 分别吸取上述贮备液1.00、2.00、4.00、8.00、16.00mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容。4.绘制标准曲线 以蒸馏水为参比，用上述标准系列溶液在 max处分别测出吸光度，并绘制标准曲线。 5．样品测定 取3片Vc片剂研细,准确称取0.02g于100mL烧杯中,以去离子水稀释至500mL。移取样品溶液 5.00mL于50mL容量瓶中,定容。在 max处测吸光度。 五、实验结果和讨论 1.绘制吸收曲线，确定最大吸收波长。 2.以标准溶液浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线图。
维生素C的测定方法 郑世豪 {摘要}： 维生素C亦称抗坏血酸，具有氧化还原功能，广泛参与细胞间质的合成及解毒过程等作用，它能帮助减低臭氧、二氧化碳等空气污染毒性抑制膳食中有致癌作用的亚硝胺的合成，还具有降低血铅浓度的作用，既能保持皮肤弹性，延缓衰老，又有助于消除人体不可缺少的营养素之一，故许多人把它作为防病治病的灵丹妙药，殊不知应用合理与否，会产生不同的作用。 {关键词}：维生素C 测定原理、检测方法 引言 维生素C是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构最简单的维生素。维生素C有防治坏血病的功能，所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。维生素C 在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件中较稳定，维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸(有生理作用)。维生素C能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒作用等。其广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。准确测定维生素C的含量，对饮食健康、医疗保健都具有十分重要的意义。本文总结近年来的文献报道维生素C测定方法主要有滴定法、荧光法、光度分析法、高效液相色谱法。
滴定法测定维生素C 1.1测定原理 2，6一二氯靛酚法和碘量法是较常见的滴定测定维生素C的方法。还原型抗坏血酸还原染料2，6一二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原2，6一二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2，6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。 碘量法的原理：维生素C包括氧化型、还原型和二酮古乐糖酸三种，当用碘滴定维生素C时，所滴定的碘被维生素C还原为碘离子，随着滴定过程中维生素C全被氧化，所滴入的碘将以碘分子形式出现。碘分子可以使含指示剂（淀粉）的溶液产生蓝色，即为滴定终点。 1.2测定操作 2，6一二氯靛酚法：取适量的样品可食部，加入100 mL 2%草酸溶液，制成匀浆。取同一样品匀浆10g，加入1%草酸溶液20 mL，摇匀，用滤纸过滤，取5mL过滤液于锥形瓶中，用2，6一二氯靛酚钠盐溶液滴定(1 mL≈0.02 mgVitC)，以淡红色存在30 s内不褪色为滴定终点。记录2，6-二氯酚靛酚钠盐溶液的消耗量，根据结果计算出样品中维生素C含量(mg/100 g)。 碘量法的原理：维生素C包括氧化型、还原型和二酮古乐糖酸三种，当用碘滴定维生素C时，所滴定的碘被维生素C还原为碘离子，随着滴定过程中维生素C全被氧化，所滴入的碘将以碘分子形式出现。碘分子可以使含指示剂（淀粉）的溶液产生蓝色，即为滴定终点。 荧光法测定维生素C 1.1测定原理： Deutsch和Weeks曾经报道过一种检测维生素C的荧光分析法(OPDA)，并被指定为维生素C的经典荧光分析法。在该方法中，维生素C先被活性炭(Norit)氧化为脱氢抗坏血酸(DHAA)，DHAA再与荧光底物邻苯二胺(OPDA)结合生成荧光产物，通过对该荧光产物的检测实现对维生素C的定量分析。孙振艳等[1]提出了一种新的测定维生素C的荧光分析方法。基于维生素C被Cu2+氧化为DHAA，DHAA进一步与苯甲酸及十六烷基三甲基溴化铵产生荧光协同增敏作用，通过对体系荧光强度的测定进行维生素C的定量分析。 1.2测定操作： 荧光分析法(OPDA)的测定方法：称取一定量样品，研磨后用水浸泡，取清液加入适量1%草酸溶液，振摇约3min，加入0.2g已处理好的活性炭再充分振摇约3min后过滤，滤液加于两个25mL比色管再加入5.0mL缓冲溶液,，其中一管加入 2.0mL硼酸溶液(即空白)摇匀，放置15min后，两管均加入邻苯二胺溶液10mL，避光放置30min待测。样品荧光强度减去空白荧光强度值即为样品相对荧光强度值。 孙振艳等的荧光分析法：在25 mL比色管中依次加入0. 6 mL CuSO4溶液，2. 0 mL十六烷基三甲基溴化铵溶液，2. 0 mL苯甲酸溶液，一定体积的维生素C标准溶液，，5. 0 mLNaOH-邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液，用蒸馏水定容，摇匀。在35℃恒温水浴中加热30 min，将溶液流水冷却至室温，激发波长为308 nm，在发射波长408nm处，测量荧光强度F，以不含维生素C的试剂空白为F0，计算ΔF=F-F。
维生素C含量测定 1、2,6-二氯酚靛酚滴定法 2、碘量法 3、2,4-二硝基苯肼比色法 碘量法 VC在水果中主要以还原型存在(还有氧化型及少量结合态)，因此通常测定的是还原型VC J。VC属于不稳定维生素，尤其是在液态时，易被热、碱、氧和光破坏，氧化型VC更不稳定，在测定中易受杂质的干扰。采用二氯酶法测定VC极不稳定，易受到还原性杂质的干扰，所以测定VC的准确性很大程度上取决于分析技术。选择合适的提取剂可以延长VC的稳定时间，提高VC的提取效率。VC在酸性溶液中相对稳定，因此试验中采用2％的偏磷酸、2％草酸、10％三氯乙酸、2％草酸+10％盐酸溶液作为提取剂，分别对5种水果中的VC进行提取，并采用碘量法测定其含量。 1 试验原料与试剂 1．1 原料 草莓、鲜枣、香蕉、西瓜、桃：市售，长春本地产。 1．2 试剂 1％淀粉指示剂，0．01 mol／L的碘溶液，2％偏磷酸，2％草酸，10％三氯乙酸，2％草酸+10％盐酸。 2 工作原理 碘可将VC氧化，且2分子碘可氧化1分子VC，碘遇淀粉变蓝，
C2H8O6+2I2!=C2H4O6+4HI。在提取的水果样液中加人淀粉指示剂，用0.01mol／L碘标准溶液进行滴定。当样液变蓝且保持15 S不褪色时，记录所用碘液的体积，计算得VC的含量【。 3 步骤与方法 3．1 样品的制备 取各水果样品400 g清洗、沥干，将每份样品平均分成4份，即每份100 g，用破碎机破碎。在破碎的同时加人提取剂，以减少VC损失。之后，用榨汁机榨汁，然后每份样品分别用2％偏磷酸、2％草酸、10％三氯乙酸和2％草酸+10％盐酸提取。 3．2 VC含量的测定 在各份提取液中加人淀粉指示剂，用酸式滴定管装人碘标准溶液进行滴定，当溶液变蓝15 S不褪色时即为终点，记录碘液的体积. 4 计算结果 VC含量的计算公式为(176／2)×0．01×V ，将消耗I2标准溶液的体积代人上式，得VC含量。 5 结论 2,4-二硝基苯肼比色法 方法原理： 维生素C总量包括还原型Vc、脱氢型Vc和二酮古乐糖酸，将样品中的还原型抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，进一步水解为二酮古乐糖
维生素C不同的测定方法 目前研究维生素C测定方法的报道较多,有关维生素C的测定方法如荧光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等,各种方法对实际样品的测定均有满意的效果. 为了解国内VC含量测定方法及其应用方面的现状及发展态势.方法以"维生素C或抗坏血酸和测定"为检索词对1994～2002年中国期刊网全文数据库(CNKI)中的理工A、B和医药卫生专辑进行篇名检索,对所得有关维生素C含量测定的文献数据分别以年代、作者区域、载刊等级、样品类型、测定方法等进行计量分析.结果核心期刊载刊文献占文献总量的45.06％,其中光度法占65.69％,电化法占18.63％,色谱法占12.75％;复杂被测样品文献占文献总量的45.06％,其中光度法占60.92％,色谱法占19.54％,电化法占10.34％.结论目前国内维生素C含量测定仍以光度法为主流,但近年来色谱法,特别是HPLC 法上升趋势尤为明显. 一．荧光法 1．原理
样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022 g/ml。 2．适用范围 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 3. 注意事项 3.1 大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用偏磷酸-醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生C。 3.2 某些果胶含量高的样品不易过滤，可采用抽滤的方法，也可先离心，再取上清液过滤。 3.3活性炭可将抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，但它也有吸附抗坏血
维生素C含量测定的实验设计方案 一、目的与要求 (1)掌握维生素C的含量测定的原理和操作。 (2)掌握维生素C的分子式和结构简式，了解维生素C的还原性。 (3)掌握紫外分光光度法维生素C含量的测定的方法。 (4)熟悉精密紫外可见分光光度计的使用方法。 (5)掌握用标准曲线法进行定量分析的原理和方法。 二、方法提要 维生素C（Vitamin C ，Ascorbic Acid）广泛存在于新鲜水果中，它具有保持肌肤润滑、防止衰老、抗坏血酸等作用，是人体必需的主要维生素之一，是人体正常生理代谢不可缺少的一类有机物[1]。维生素C在水果中主要以还原型（ASA）存在。维生素Ｃ又名抗坏血酸是一种含有6个碳原子的酸性多羟基化合物，分子式为C6H8O6，分子量为176.1。能溶于水、乙醇和甲醇，而不溶于其他有机溶剂，具有酸性和还原性，有4种异构体，即L—抗坏血酸、D—抗坏血酸、L—异抗坏血酸、D—异抗坏血酸。天然抗坏血酸主要以L—抗坏血酸为主，其效力最高。抗坏血酸在合适的条件下，可氧化成脱氢抗坏血酸，脱氢后的L—脱氢抗坏血酸在生物体内可还原为L—抗坏血酸，且这种变化是可逆的，故仍有生物活性。脱氢抗坏血酸可进一步被氧化，生成二酮古洛糖酸，而这一过程是不可逆的。在许多水果和蔬菜中，维生素C主要以还原型抗坏血酸存在。维生素C的固体较稳定，水溶性最容易受氧化，所以测定VC的准确性很大程度上取决于分析技术。水果中VC含量的测定一般采用2,6--二氯靛酚滴定法[2]、碘量法[3]、2,4—二硝基苯肼法[4]、荧光分光光度法[5]高效液相色谱法[6]和点位滴定法[7]等，这些方法都有所用试剂不稳、操作程序复杂、费时等缺点，为此，此实验采用分光光度法[8]，首先测定维生素C的标准曲线，以吸光度差值△A对抗坏血酸浓度C 绘制标准曲线，以此为基础测定样品的△A，并求得水果中维生素C的含量。本方法与常规方法比较，具有准确、快速、稳定、试剂易得等优点。 维生素C是烯醇化合物，具有—C=C—基，在可见光区无吸收，在紫外区有吸收。按实验方法，分别对不同浓度的标准维生素C与试剂空白溶液在200~400nm波长范围内进行扫描，通过吸收光谱曲线确定维生素C水溶液的最大吸收波长。又根据维生素C对碱不稳定的特性，于最大吸收波长处测定样品溶液与碱处理样品两者吸收光度之差，通过查标准维生素C 的标准曲线，即可计算样品维生素C的含量。这种方法具有准确、快速、重现性好等优点，还适合深色样品的测定。 由于维生素C极度不稳定，在样品前处理过程中，防止抗坏血酸的氧化是非常重要的。可采用添加偏磷酸、草酸的方法加以解决。因为它们均能抑制抗坏血酸的氧化酶，而起稳定作用。但由于2%草酸在波长200~400nm处有非常强的吸收，所以不能作为维生素C的提取液，而2%偏磷酸虽然在波长200~400nm处有微弱的吸收，可通过扣除其空白吸光值，便可计算出样品维生素C的吸光值差ΔA。因此，本实验选择2%偏磷酸作为分光光度法的溶剂。(本实验采用紫外分光光度法) 三、试剂与仪器 （1）试剂：标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）：精确称取抗坏血酸10mg（精确至0.1mg）, 用2%偏磷酸溶解并定容至100mL，此溶液应贮存在棕色瓶中，最好现配现用； 2%（W/V）偏磷酸溶液，0.5mol/mLNaOH，
水果、蔬菜维生素C含量测定法（2,6－二氯靛酚滴定法） 【标准名称】水果、蔬菜维生素C含量测定法（2,6－二氯靛酚滴定法） 【标准号】GB 6195-86 【标准文件】GB 6195─86GB 6195—86 水果、蔬菜维生素C含量测定法（2,6－二氯靛酚滴定法）（经济作物-瓜果、蔬菜种植与产品） 1 适用范围 本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定（不含二价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐），不适用于深色样品。 2 测定原理 染料2，6-二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态变为无色；二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，当到达滴定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。 3 仪器设备 a.高速组织捣碎机：8000～12000r/min。 b.分析天平。 c.滴定管：25ml、10ml。 d.容量瓶：100ml。 e.锥形瓶：100ml、50ml。 f.吸管：10ml、5ml、2ml、1ml。 g.烧杯：250ml、50ml。 h.漏斗。 4 试剂（凡未加说明者均为分析纯） 4.1 浸提剂 4.1.1 偏磷酸：2％溶液（W/V）* *偏磷酸不稳定，切勿加热。 4.1.2 草酸：2％溶液（W/V）。 4.2 抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：称取100mg（准确至0.1mg）抗坏血酸**，溶于浸提剂中并稀至100ml。现配现用。 **一般抗坏血酸纯度为99.5％以上，可不标定。如试剂发黄，则弃去不用用。若要检查其纯度，可按附录B方法标定。 4.3 2，6-二氯靛酚（2，6-二氯靛酚吲哚酚钠盐）溶液：称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml 热蒸馏水中，然后称取2，6-二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至250ml，过滤至棕色瓶内，保存在冰箱中。每次使用前，用标准抗坏血酸标定其滴定度。即吸取1ml 抗坏血酸标准溶液于50ml锥形瓶中，加入10ml浸提剂，揺匀，用2，6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时，另取10ml浸提剂做空白试验。滴定度按式（1）计算： 滴定度T（mg/ml）=C.V/(V1-V2) (1) 式中：T──每毫升2，6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数； C──抗坏血酸的浓度，mg/ml； V──吸取抗坏血酸的体积，ml； V1──滴定抗坏血酸溶液所用2，6-二氯靛酚溶液的体积，ml； V2──滴定空白所用2，6-二氯靛酚溶液的体积，ml。 4.4 白陶土（或称高岭土）：对维生素C无吸附性。 5 测定步骤
蔬菜中维生素c的测定 制作人：薛钦时间：2016年5月20日 一、实验背景 ●维生素C又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。食物中的维生素 C被人体小肠上段吸收。一旦吸收，就分布到体所有的水溶性结构中，正常成人体的维生素C代活性池中约有1500mg维生素C，最高储存峰值为3000mg维生素C。正常情况下，维生素C绝大部分在体经代分解成草酸或与硫酸结合生成抗坏血酸-2-硫酸由尿排出；另一部分可直接由尿排出体外。 维生素C的作用： ●1、促进骨胶原的生物合成。利于组织创伤口的更快愈合。 ●2、促进氨基酸中酪氨酸和色氨酸的代，延长肌体寿命。 ●3、改善铁、钙和叶酸的利用。 ●4、改善脂肪和类脂特别是胆固醇的代，预防心血管病。 ●5、促进牙齿和骨骼的生长，防止牙床出血，防止关节痛、腰腿痛。 ●6、增强肌体对外界环境的抗应激能力和免疫力。 ●7、水溶性强抗氧化剂，主要作用在体水溶液中。 二、实验目的 ● 1.人类营养中最重要的维生素之一。缺乏时引起坏血病。 ● 2.维生素C含量可作为植物抗衰老和抗逆境的重要生理指标，也
可作为果品质量、选育良种的鉴别指标。 ● 3.水果、蔬菜保鲜贮藏必须测定维生素C含量，了解果蔬品质量 的高低。 ● 4.了解和掌握2,6-二氯酚靛酚测定维生素C含量的原理和方法。 三、实验原理 ●2，6—二氯靛酚是一种染料，其颜色反应表现为两种特性。一是 取决于氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态为无色；二是受其介质酸度的影响，在碱性介质中呈深蓝色，在酸性溶液介质中呈浅红色。 ●用蓝色的碱性染料标准液，滴定含VC的酸性浸出液，染料被还 原为无色，到达终点时，微过量的2、6—二氯靛酚染料在酸性溶液中呈浅红色即为终点。从染料消耗量即可计算出试样中还原型抗坏血酸量。 2.6-二氯酚靛酚滴定法 ●维生素C: 强的还原性 ●将染料2.6-D 还原成无色的2.6-二氯酚靛酚 ● 2.6-二氯酚靛酚:强的氧化性 ●中性/碱性: 蓝色酸性:红色
---------- O-------- C C C C O OH OH H 即: m(试样)V C% 176 3)l210^ 0.176(cV)|2 m(试样) 实验^一、维生素C含量的测定 一、实验目的 1、掌握碘标准溶液的配制方法与标定原理。 2、掌握直接碘量法测定维生素 C的原理、方法及其操作。 二、实验原理 用12标准溶液可以直接测定维生素 C等一些还原性的物质。维生素 C分子 中含有还原性的二烯醇基，能被12定量氧化成二酮基，反应式如下： H 只H I | °| I C—CH20H + 12 —C ——C——C—C——CH20H + 2HI I II II II I I 0H 0 0 0 H 0H 由于反应速率较快，可以直接用12标准溶液滴定。通过消耗12溶液的体积及其浓度即可计算试样中维生素 C的含量。直接碘量法可测定药片、注射液、蔬菜、水果中维生素C的含量。 等物质的量关系：n(V?==n(l2) 三、仪器和试剂 (1)仪器 分析天平，250ml锥形瓶，100ml量筒，10ml量筒，酸式滴定管，滴定基管架, 25ml移液管 ⑵试剂 医药维生素C药片，HAc(2 mol/L)，淀粉(0.5%)，Na2S2O3标准溶液(0.1 mol/L)， 12标准溶液(0.1 mol/L)。
三、实验步骤 1. 0.05 mol L-1 I2标准溶液的配制与标定 将3.3g I2与5g KI置于研钵中，在通风柜中加入少量水(切不可多加！)研磨，待I2全部溶解后，将溶液转入棕色瓶中，加水稀释至250mL，摇匀。 用移液管移取25.00mL N82S2O3标准溶液于250mL锥形瓶中，加50mL水、 5mL0.5%淀粉溶液，用I2标准溶液滴定至稳定的蓝色，30s内不褪色即为终点。平行标定三次。 2. 维生素C含量的测定 准确称取约0.2g维生素C片(研成粉末即用)，置于250mL锥形瓶中，加入新煮沸过并冷却的蒸馏水 100mL、10mL 2mol -L-1 HAc和5mL0.5%淀粉指定剂，立即用b标准溶液滴定至溶液显稳定的蓝色，30s内不褪色即为终点。平行滴定 3次，计算维生素C的含量。 四、实验数据记录与处理 计算公式： 维生素 c/MMg)100% W (C6H8O6)汉1000 式中C ―― 12标准溶液的浓度(mol/L); V ------- 滴定时所用12标准溶液的体积(ml); M(C 6 H806) ----- 维生素C的摩尔质量(g/mol); W(C6H806)——称取维生素C的质量(g)。 四、注意事项
脉动中维生素C的检测 维生素C是机体正常生命活动所必需的有机化合物，作为一种理想的保健食品功能因子，被添加于各种保健食品及饮料中，因此对维生素C含量测定方法的研究也较多。目前常规的维生素C含量测定方法有紫外分光光度法、碘量法等，但是维生素C具有较强的还原性，在中性和碱性环境下不稳定，遇热迅速分解，检测方法操作步骤复杂，具有试剂和试样溶液不稳定、灵敏度低、费时等缺点，尤其是有颜色的试样，其溶液颜色背景干扰大，对最终数据有影响。 高效液相色谱法具有高效、快速、稳定、灵敏度高的特点，能在较短时间内完成测定。 一、实验目的和要求 1、学习高效液相色谱定性定量分析方法； 2、熟悉高效液相色谱的分析操作规程； 3、学习高效液相色谱检测食品中的维生素C的方法。 二、实验原理 在以维生素C标准品保留时间定性，采用外标法定量维生素C含量。 1.标准曲线方程式为：Y=aX+b 2.根据标准曲线方程得到计算公式：X1=(Y1-b)/a （X1为样品中维C浓度，Y1为样品峰面积） 3.最后求出：C1=X1×N/V （C1为1ml脉动的维C含量，N为所取脉动稀释倍数=100ml/所取脉动体积，V 为所取脉动体积） 三、仪器、试剂 1、仪器：岛津高效液相色谱仪、超声波清洗仪、超纯水制备仪、千分之一天平、离心机 2、试剂：维生素C标准品、醋酸、超纯水、脉动 四、实验步骤 1、标准液的制备： 维生素C标准溶液配制:准确称取0.1219g维生素C，用0.1%醋酸溶液溶解，超声波振荡5min，再用0.1%醋酸定容至50mL，为标准溶液。分别吸取标准溶液0.05，
0.10，0.50，1.00，2.00，3.00mL于10mL容量瓶中，用0.1%醋酸溶液定容，进样测定。 2、样品的前处理： 试样处理试样为液体时，吸取适量体积试样原液用20mL0.5%醋酸溶液作为稀释液，再用水定容至100mL;试样为固体时，称取试样1g用0.1%醋酸溶液溶解(按照试样液中维生素C含量0.5~700mg/L换算)，超声波振荡5min，再用0.1%醋酸定容至100mL，过滤，用0.45m滤膜过滤，进样。 3、实验条件的选择 (1)色谱柱C18(250mm*4.6mm) (2)流动相含甲醇：含0.1%醋酸的水（10：90），流量1mL·min-1 (3)检测器紫外检测器，262nm (4)进样量20μL 4、测定 (1)将配制好的流动相甲醇、0.1%醋酸的水置于超声波发生器上脱气20min。 (2)根据实验条件，将高效液相色谱仪按照操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡时即可进样。 (3)依次分别吸取20μL的标准混合使用液和未知试液进样，记录各色谱图。五．数据处理及分析 （1）定性分析 （2）定量分析
高效液相色谱法测定维生素C的含量【摘要】高效液相色谱法已经成为解决生命科学、医药学发展中各种难题的重要手段，在实验室中也广泛应用于物质的定性定量分析。本实验中利用高效液相色谱法对维生素C进行定量分析，所采用的定量分析方法为外标法，通过做出标准溶液浓度与峰面积的标准曲线进而对样品中的维生素C进行定量检测。 【关键词】高效液相色谱法、维生素C、含量 1、引言 维生素C（VitaminC,Vc）又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。Vc在体内参与多种反应，如氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。人体内缺乏Vc时容易导致坏血病。同时，由于Vc是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成，它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。Vc在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔类水果中含量较高。樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中Vc含量在50- 300mg/100g。 溶于流动相（mobilephase）中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationaryphase）发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。高效液相色谱法（HighperformanceLiquidChromatography，HPLC）是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法（HighPressureLiquidChromatography，HPLC）。HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代HPLC仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。制备型HPLC仪还备有自动馏分收集装置。