茶叶中糖类物质分析方法综述
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茶叶中糖类物质的测定
茶叶中的糖类物质包括单糖、寡糖、多糖及少量其他糖类,这些糖类物质对于茶汤的滋味和香气有着重要影响,同时也是茶汤的主要甜味成分。
为了测定茶叶中的糖类物质,可以采用多种方法,下面介绍其中两种常用的方法。
方法一:重量测定法
这是一种比较简单和常见的方法。
首先,称量一定量的茶叶,然后将其放入烘干箱中,在一定温度下烘干一段时间。
之后再次称量茶叶,如果重量减轻,则说明茶叶中含有挥发性成分,如糖分。
这种方法虽然简单易行,但是准确度相对较低,只能作为初步判断茶叶中是否含有糖类物质的方法。
方法二:高效液相色谱法(HPLC)
高效液相色谱法是一种比较准确和灵敏的方法,可以用于测定茶叶中的各种糖类物质。
该方法通常采用示差折光检测器(RI)或荧光检测器进行检测。
样品前处理:将茶叶粉碎并过筛,然后用水或其他适当的溶剂提取茶叶中的糖类物质。
色谱条件:选择适当的色谱柱和流动相,将提取液注入色谱柱中进行分离。
检测和定量:通过检测器检测分离后的糖类物质,并根据标准曲线计算其含量。
需要注意的是,采用高效液相色谱法测定茶叶中的糖类物质时,需要进行前处理和衍生化处理,操作相对繁琐,但是准确度较高,可以用于科研和生产中的质量控制。
除了以上两种方法外,还有其他一些方法可以用于测定茶叶中的糖类物质,如比色法、化学滴定法、气相色谱法、气质联用、离子色谱法、凝胶色谱法、高效毛细管电泳法等。
这些方法各有优缺点,可以根据实际需要选择合适的方法进行测定。
茶叶中蔗糖的检测方法1范围本文件规定了使用高效液相色谱仪测定茶叶中蔗糖的方法。
本文件适用于茶叶中蔗糖含量的测定。
第一法适用于蔗糖含量大于等于0.075g/100g的试样,第二法适用于蔗糖含量大于等于1.5g/100g的试样。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8302茶取样GB/T8303茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定第一法蒸发光散射检测器法3原理试样用乙酸乙酯提取,去除蜡质、色素等干扰成分后,再用水提取蔗糖。
提取液经固相萃取柱净化,去除茶多酚、色素等干扰成分后,用高效液相色谱仪分离,蒸发光检测器检测,外标法定量。
4试剂和材料除非另有说明,本方法所用的试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
4.1试剂4.1.1乙腈(CH3CN,CAS号:75-05-8):色谱纯。
4.1.2乙酸乙酯(C4H8O2,CAS号:14-78-6)。
4.2材料4.2.1微孔滤膜:0.45µm,水相。
4.2.2茶叶专用净化小柱:NPP,200mg/2.5mL。
注:NPP净化小柱是北京科德诺思技术有限公司的商品型号,给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不是表示对该产品的认可。
可使用其它等效的产品。
4.3标准品蔗糖(C12H22O11,CAS号:57-50-1):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
4.4标准溶液配制4.4.1标准储备液(20.0mg/mL):称取经过96℃±2℃干燥至恒重的蔗糖1g(精确到0.0001g),用水定容至50mL,密封置于4℃下可贮藏1个月。
4.4.2标准中间液(1.00mg/mL):准确吸取储备液0.500mL于10mL容量瓶中,用水定容。
1绪论1.1 茶多糖的结构与功能茶多糖是茶叶中极具开发价值的一种生理活性物质,是一种酸性糖蛋白,并结合有大量的矿质元素,称为茶叶多糖复合物,简称为茶叶多糖或茶多糖(Tea Polysaccharide)。
其是蛋白部分主要由约20种常见的氨基酸组成,糖的部分主要由阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖等,矿质元素主要由钙、镁、铁、锰等及少量的微量元素,如稀土元素等组成。
现代药理研究证实,茶多糖具有降血糖、降血脂、降血压及减慢心率、耐缺氧的作用,同时茶多糖在抗凝血、防血栓形成、保护血相和增强人体非特异性免疫功能方面均有明显效果[1]。
1.2 茶多糖测定的现状茶叶中多糖含量的测定对于提取茶多糖所用原料的选择及茶多糖提取工艺提取率高低的评价都具有重要的意义。
汪东风等[2]研究表明对同一品种的红茶和绿茶,均为六级茶,茶多糖的含量,红茶为0.85%±0.10%,绿茶为1.41%±0.06%,但该研究是以葡萄糖作标准曲线,而实际上如王丁剐[3]、汪东风[4]等报道,茶多糖是由阿拉伯糖、核糖、木糖、甘露糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖等组成的杂多糖,其具体的单糖组成与茶叶的品种有关。
而不同的单糖与蒽酮—硫酸试剂显色情况不同,不同单糖标准曲线的斜率不同,因而仅采用葡萄糖做标准的测定结果,会存在一定的误差,结果比实际含量偏低。
1.3 本文研究内容本文用精制茶多糖测得茶多糖对葡萄糖的换算因子,然后将经前处理除杂后的茶样用水提取,蒽酮一硫酸法比色测定,对江西婺源不同茶场茶叶中多糖的含量进行了测定,并与其它产地、品种的茶叶进行了比较。
2 实验部分2.1 实验仪器与材料2.1.1 实验仪器分光光度计,电子天平,水浴锅,旋转蒸发仪,真空干燥箱,离心沉淀机;2.1.2实验试剂蒽酮、浓硫酸、无水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、正丁醇,以上试剂均为分析纯;2.1.3 实验原料江西婺源红碎茶、绿茶、分宜绿茶、福建安澳乌龙茶。
2.2 实验方法2.2.1 实验原理选用精致茶多糖测得茶多糖对葡萄糖的换算因子,然后将经前处理后的茶样用水提取,蒽酮—硫酸法比色测定,对不同茶场茶叶中多糖的含量进行测定。
T logy科技分析与检测茶多糖富含灰分、果胶、蛋白质以及矿物质元素等,茶多糖作为一种天然活性物质,其营养丰富,应用价值广泛。
研究发现,茶多糖在调节免疫力、抗血栓、降血脂血糖等方面均有巨大的用途,对于治疗糖尿病有特殊功效。
目前,相关领域专家致力于茶多糖的提取及测定方法研究,挖掘茶多糖更大的应用价值。
1 茶多糖提取及测定方法研究 意义我国茶叶生产量较高,一些高端茶叶的销路比较好,但那些中低端茶叶因为没有销路,而造成资源的大量浪费。
同时在茶叶生产加工过程中产生大量粗枝叶和茶叶灰末等副产品,这些副产品大多没有被合理利用,因此,从中低档茶叶中提取茶叶多糖,有利于解决中低端滞销茶叶及其副产品的再利用问题,发挥其在保健、食品、医药等诸多领域的应用价值。
茶多糖是茶叶中的主要生理活性物质之一,目前我国针对茶多糖还没有具体的标准检测方法,主要是利用其他植物多糖的检测方法来测定茶叶中茶多糖含量[1]。
从茶叶当中提取茶多糖,有利于提高茶叶利用效率,减少资源浪费。
茶多糖的应用价值十分广泛,其具有良好的药理效果,茶多糖的药用作用主要体现在以下方面:首先,摄入适量的茶多糖,有利于保护人体心血管系统,茶多糖具有良好的降血脂、降血糖的功效,它能够增加冠状动脉流量;其次,茶多糖具有良好的抗凝血及抗血栓作用;最后,茶多糖还具有增加机体免疫功能的功效。
虽然茶多糖具有如此多的药理效果,但是由于茶多糖提取技术还比较落后,人们只能依靠饮茶来摄入茶多糖,但这样摄入的茶多糖量是非常小的,难以达到良好的药理效果。
目前的茶多糖提取工艺流程多,难度大,花费成本比较高。
研究茶多糖提取及测定方法,有利于提高茶叶的综合利用价值,优化提取方法,提高提取率,节省提取成本,更好的发挥茶多糖的药理功效。
2 茶叶中茶多糖的提取方法本文所提出的茶多糖提取方法工艺如下:采集茶叶,对其进行粉碎、脱脂等预处理—水浴提取—Sevage法脱蛋白—去除小分子杂质—沉淀称量。
2.1 茶叶预处理首先将采集来的茶叶洗净、晾晒后粉碎。
Abstract:Accordingtoalmostallliteraturesrelatingtocarbohydratesdeterminationsince1907,carbohydratesinteaandtheirdeterminationswereintroduced.Thosemethodsforcarbohydratesdetermination,especiallythosemainmethodssuchaschemicalanalysis,gaschromatography(GC),ionexchangechromatography(IEC),gelpermeationchromatography(GPC),highperformanceliguidchromatography(HPLC),capillaryelectrophoresis(CE)andmassspectrum(MS)weresystematicallyreviewed.Basedontheabove,astandardmethod,carbohydratesinteadeterminedbyHPLCwasadvised.Keywords:Tea;Carbohydrates;Analyze;Determination;Method;HPLC第33卷第5期2007年9月中国测试技术CHINAMEASUREMENTTECHNOLOGYVol.33No.5Sept.20071引言糖类物质是自然界存在的一大类具有广谱化学结构和生理功能的有机化合物,主要是由绿色植物经光合作用形成,不仅是动植物的能源(贮能材料如糖元)和燃料,也是代谢过程的中间产物,在生物过程中起着非常重要的作用,是除蛋白和核酸之外的又一类重要的生物大分子。
茶叶中的糖类物质占干物质的20%-25%,除构成细胞壁的纤维素、木质素,果胶质外,还有部分游离糖、结合态糖脂,蛋白糖等,是茶叶品质成分的重要组成部分。
I FOOD INDUSTRY I 139六堡茶中茶多糖的含量测定分析文 吴巧妮 潘敏清* 何姗珊 李君 陈婵梧州市食品药品检验所2.3.2.1苯酚-硫酸法标准曲线的配制精密吸取0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL0.1mg/mL 葡萄糖标准溶液(相当于0.000mg ,0.010m g ,0.020m g ,0.040m g ,0.060mg ,0.080mg ,0.100mg 葡萄糖)于7支10mL 比色管中,用水定容至1mL ,再依次加入1mL5%苯酚溶液及5mL 浓硫酸,每个试剂加入后都应充分混匀。
用涡流均匀器混匀后放置5min 后,置于100℃水浴下加热15min ,取出放冷。
以0管为参比,以葡萄糖含量(mg )为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
2.3.2.2蒽酮-硫酸法标准曲线的配制精密吸取0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL0.1mg/mL 葡萄糖标准溶液(相当于0.000mg ,0.010m g ,0.020m g ,0.040m g ,0.060mg ,0.080mg ,0.100mg 葡萄糖)于7支10mL 比色管中,用水定容至1mL ,分别加入0.2%蒽酮溶液3mL ,摇匀后置于100℃水浴下加热10min ,取出冷却,以0管为参比,以葡萄糖含量(mg )为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
2.3.3测定波长的确定2.3.3.1苯酚-硫酸法波长的确定精密移取0.1mg/mL 葡萄糖标准溶液1.0mL 及样品茶多糖溶液1.0mL ,分别置于10mL 比色管中,按2.3.2.1自“用水定容至1mL ……”起进行操作,测定。
以试剂空白和样品空白为参比,于400-700nm 间进行扫描,取两者最大吸收波长。
1.前言黑茶属于后发酵茶,是中国六大茶之一,主要分为湖南黑茶、广西六堡茶、安徽古黟安茶、云南普洱茶等。
茶叶中茶多糖含量的比较分析作者:宋励修秦建来源:《安徽农业科学》2016年第23期摘要 [目的]比较分析不同种类代表茶叶中茶多糖含量。
[方法]采用水提法提取各种代表茶叶中的茶多糖,用硫酸-酚比色法测量茶叶中的茶多糖含量。
[结果]在不同制备工艺茶叶中,青茶和黑茶的茶多糖含量较高,而黄茶和红茶的含量较低;在不同产地绿茶中,浙茶茶多糖含量比较高而徽茶的含量较低;在不同熏花种类中,素茶茶多糖含量较花茶高。
[结论]不同种类茶叶茶多糖的含量存在较大差异。
该研究为全面了解不同种类茶叶茶多糖含量提供了参考依据,为茶叶的种植、加工及质量评估提供了理论指导。
关键词茶叶;茶多糖;水提法;含量分析中图分类号 S37;S571.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2016)23-035-02茶叶的种植在我国已有几千年的历史,茶已成为一种深受人们喜爱的日常天然保健饮料。
现代科学研究证实,茶叶中含有丰富的生物活性物质、维生素、氨基酸以及人体必需的微量元素,具有降血糖、降血脂、降血压、抗衰老、防辐射、防龋齿、抗过敏、消炎灭菌、抗肿瘤、增强机体免疫力等多种生物学作用[1]。
茶多糖是茶叶中一类与蛋白质结合在一起的酸性多糖或酸性糖蛋白,作为茶叶中最主要的生物活性物质之一,在茶叶的多种药理作用中扮演重要角色[2],其分离提取及相关药理作用分析成为近年来茶叶研究的一个热点。
我国地域辽阔,茶叶资源非常丰富。
根据茶叶的主要产地,全国可分西南茶区、华南茶区、江南茶区和江北茶区四大茶区,每一茶区茶树品种资源丰富,主产多种不同类型的茶叶。
根据不同的制茶工艺,我国的茶叶又可分为绿茶、红茶、青茶、黑茶、白茶、黄茶六大类,每一大类又有多个代表品种[3]。
茶多糖作为茶叶中的一类重要药理活性物质,在不同产地或不同加工工艺产生的不同种类茶叶中茶多糖含量[4]的差异如何,目前国内外还鲜见系统地研究报道。
因此,有必要对不同品种代表茶叶中茶多糖含量进行比较分析,以期对茶多糖的相关研究和应用提供理论基础,为茶叶的种植、加工及综合质量评估提供理论依据,为茶叶的进一步研究开发提供参考依据。
Abstract:Accordingtoalmostallliteraturesrelatingtocarbohydratesdeterminationsince1907,carbohydratesinteaandtheirdeterminationswereintroduced.Thosemethodsforcarbohydratesdetermination,especiallythosemainmethodssuchaschemicalanalysis,gaschromatography(GC),ionexchangechromatography(IEC),gelpermeationchromatography(GPC),highperformanceliguidchromatography(HPLC),capillaryelectrophoresis(CE)andmassspectrum(MS)weresystematicallyreviewed.Basedontheabove,astandardmethod,carbohydratesinteadeterminedbyHPLCwasadvised.Keywords:Tea;Carbohydrates;Analyze;Determination;Method;HPLC第33卷第5期2007年9月中国测试技术CHINAMEASUREMENTTECHNOLOGYVol.33No.5Sept.20071引言糖类物质是自然界存在的一大类具有广谱化学结构和生理功能的有机化合物,主要是由绿色植物经光合作用形成,不仅是动植物的能源(贮能材料如糖元)和燃料,也是代谢过程的中间产物,在生物过程中起着非常重要的作用,是除蛋白和核酸之外的又一类重要的生物大分子。
茶叶中的糖类物质占干物质的20%-25%,除构成细胞壁的纤维素、木质素,果胶质外,还有部分游离糖、结合态糖脂,蛋白糖等,是茶叶品质成分的重要组成部分。
本课题组全面地检索了至1907年以来的国内外所有关于糖类物质分析的研究文献,涉及150多个国家、56种文字出版的2万多种科技期刊、科技报告、会议论文、学位论文、资料汇编、技术报告等,在此基础上本文介绍了茶叶中的糖类物质及其分析方法现状,并对糖类物质的主要分析方法进行了较为系统地评述。
2茶叶中糖类物质的组成茶叶中的糖类物质包括单糖、寡糖、多糖及少量其他糖类,茶叶中可溶性糖占干物质的4%左右,是茶汤滋味和香气成分之一,是茶汤的主要甜味成分[1]。
单糖和双糖是构成茶叶可溶性糖的主要成分,但茶叶中的游离单糖含量很少,故至今未见有系统的研究报告。
据资料报道茶叶中单糖主要有葡萄糖、果糖,半乳糖、甘露糖,少量阿拉伯糖、鼠李糖、核糖和木糖等8种,含量为0.3%-1%;双糖主要是蔗糖,加工过程中还形成麦芽糖,此外还存在少量三糖的棉子糖和四糖的水苏糖。
多糖主要包括纤维素、半纤维素、淀粉和果胶。
在茯茶、康砖及普洱茶等特种茶加工中由于微生物的大量存在,纤维素酶将纤维素和半纤维素分解为可溶性糖。
淀粉在茶叶加工过程中也可水解成可溶性糖,参与茶叶的品质构成。
原果胶在茶叶加工过程中水解形成水溶性果胶素、半乳糖、阿拉伯糖等物质参与茶汤的滋味品质。
茶多糖(TeaPolysaccharides,TPS)由糖类、蛋白质、果胶和灰分等物质组成,具有多种生物活性且结构复杂的杂多糖或其复合物,但相关研究文献报道的关于茶多糖组成及分子量研究结果差别很大[2]。
大收稿日期:2007-03-06;收到修改稿日期:2007-05-15基金项目:国家科技条件平台(2004DEA71180)。
作者简介:谭和平(1957-),重庆市人,研究员,主要从事茶树育种、生理生化研究。
茶叶中糖类物质分析方法综述谭和平,叶善蓉,陈丽,邹燕(中国测试技术研究院,四川成都610061)摘要:在全面检索1907年以来国内外所有关于糖类物质分析方法研究文献的基础上,介绍了茶叶中的糖类物质及其分析方法现状,对糖类物质的主要分析方法进行了系统地介绍,并对化学分析法、气相色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、质谱法等主要分析方法进行了评述,并提出了用高效液相色谱法建立茶叶中糖类物质测定的标准方法。
关键词:茶叶;糖类物质;分析;测定;方法;液相色谱法。
中图分类号:TS272.7文献标识码:A文章编号:1672-4984(2007)05-0001-04ReviewofcarbohydratesdeterminationforteaTANHe-ping,YEShan-rong,CHENLi,ZHOUYan(NationalInstituteofMeasurementandTestingTechnology,Chengdu610061,China)中国测试技术2007年9月量研究文献表明茶多糖具有降血糖、降血脂,提高机体免疫力、抗凝血、抗血栓、耐缺氧、抗紫外线、X射线辐射等作用。
3糖类物质的分析方法糖类物质的分析是茶叶品质成分分析的重要部分。
由于糖类物质不是茶叶的特征物质,所以国内外对茶叶中糖类的研究不如多酚类、咖啡碱那样地系统和深入。
至1907年以来国内外关于茶叶糖的研究文献共1500余篇,国内近30年来有500余篇,但是研究热点主要集中在茶叶多糖的提取、分离、纯化及其生理作用方面。
涉及茶叶糖类分析方法的文献仅10余篇,其中5篇采用分光光度法测总糖;仅1篇文献采用了液相色谱法,是2001年由浙江大学屠幼英教授报道;此外气相法、气质法、薄层色谱法、凝胶色谱法分别有1篇文献报道。
但据资料检索结果可以看到涉及食品、植物样品中糖类物质分析方法的研究文献共计7万余篇,报道糖类组分分析的方法有很多,其中最多的是液相色谱法3600余篇,其次气相色谱法2700余篇。
另外,美国AOAC测定糖类物质的方法主要有比色法、气相色谱法、高效液相色谱法等。
下面对糖类物质的主要分析方法作一系统地介绍:3.1化学分析法美国FDA早期的AOAC方法为化学分析法,不具有专一性,仅能测一类糖如还原糖,无法测定某一种甚至同时测定几种糖。
如化学滴定法是将样品除蛋白后,利用某些试剂如硫酸铁、(亚)铁氰化钾等与样品发生氧化还原反应,再滴定氧化还原后的样品溶液,发生显色反应。
目前,我国测定糖的国家标准方法中单独测定某一种糖或同时测定几种糖的方法很少,大多是对还原糖、蔗糖和总糖的测定,这些方法以化学滴定法为主,如GB/T5009.7-2003《食品中还原糖的测定方法》第一法高锰酸钾滴定法,第二法直接滴定法。
化学滴定法虽然沿用已久,但是测定结果只是近似值。
酶比色法和酶电极法都是对葡萄糖具有专一性的分析方法,是葡萄糖氧化酶在有氧条件下催化β-D-葡萄糖氧化。
在GB/T16258-1996中酶比色法的最低检出限是0.01μg/mL,酶电极法的检出限为10μg/mL;GB/T5413.5-1997中第三法酶比色法的检出限为0.04μg/mL。
可见,酶比色法和酶电极法的检出限都很低,具有较高灵敏度,但是这两种方法前处理过程有其他组分转化为要测定的糖,导致测定结果并非真实值。
分光光度法是样品中的糖经热水提取,用硫酸脱水生成糠醛或糠醛衍生物,该物与芳香族酚类或胺类缩合生成黄色物质,在470nm处有最大吸收。
此方法同酶比色法和酶电极法都是通过化学反应生成有色物质。
但分光光度法测定的仍然是样品中的总糖。
总之,传统的滴定法、分光光度法等,由于无法对体系中的各种单糖进行预先分离,所以得到的只是单糖的总分析结果。
酶分析法虽然检测灵敏度高,但受到特异性及样品中污染物干扰的限制,所以这些方法现在已较少使用。
3.2糖类物质的气相色谱(GC)法和气质联用(GC-MS)法气相色谱法(GC)具有选择性好,样品用量少,分辨率高,灵敏度高等优点,在国内外得到广泛应用。
但由于糖类物质结构中通常含有NH,OH,SH等极性基团,这些基团的内氢键作用增强了分子内部的吸引力,使得一般糖和糖醇具有沸点高、挥发性低、难气化、热稳定性差等特点,不能用GC直接分析。
采用GC分析时,需要先将糖通过硅烷化法或乙酰化法衍生制成如三甲基硅醚、糖醇醋酸酯等低沸点的衍生物,然后才能进行GC分析。
GC常用的衍生化试剂包括甲基化类、酰基化类、三甲基硅醚化类等。
由于衍生化反应操作非常麻烦、误差也较大,使该类方法的实际应用受到了很大限制。
气相色谱-质谱联用(GC-MS)在复杂糖类物质定性定量分析方面具有独特优势,如多糖样品中的游离羟基通过甲基化反应全部被甲氧基取代得到甲基化多糖,经水解得到甲基化的单糖混合物,用硼氢化钠还原,再通过乙酰化得到甲基化链状多羟基醇的乙酰衍生物,应用GC-MS测定混合物,可了解多糖样品中单糖的组成及大致的分支情况。
3.3离子交换色谱法(IEC)和凝胶色谱法(GPC)离子交换色谱法是目前糖类物质分析的主要方法之一,通过改变固定相上离子交换基团类型可以获得不同的分离效果。
阴离子交换色谱[3]的分离主要基于糖分子的电荷大小、组成、结构特性(如支链、连接方式、同分异构体和位相异构体等)及疏水性相互作用,以氢氧化钠作流动相,使用脉冲安培检测直接检测,几乎所有的单糖和大部分的寡糖及低聚糖都能分析,检测限可达到μg/L水平。
此法具有高的选择性和灵敏度,勿须衍生,但必须使用金电极的脉冲安培检测器。
阳离子交换色谱包括多种金属配位离子,如钨、铅和银等,这类色谱柱包括多种分离机理,如配位交换、离子交换、离子排斥、正向和反向分配等,根据所2第33卷第5期用的流动相和温度,以上述的一种和多种分离机理为主,如对单糖和二糖的分析,一般在高温下(85℃)等度洗脱,用水作流动相,其选择性与阴离子交换不同,大分子糖的保留时间小于小分子糖,还原单糖较大分子糖保留时间长。
凝胶色谱法是20世纪60年代初发展起来的一种快速而又简单的分离技术,由于设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有很高的分离效果。
常用于大分子多糖的分析,其分子筛作用使得多糖按照其分子的大小顺序先后流出色谱柱,因此可以通过一系列多糖的分子量-保留时间标准曲线得出相应的分子量[4]。
此法用于测定多糖的纯度和分子量,具有快速、分辨率高、重现性好等特点。
目前最常用的商品柱是μBondagel柱系列和TSK柱系列,可用水、缓冲液和含水的有机溶剂作流动相。
3.4高效液相色谱法(HPLC)GC和HPLC都应用于糖类物质的分析检测中,一般地HPLC法更具优势。
HPLC分析糖类物质时不存在挥发性限制的问题,同时HPLC的多种分离模式可满足大部分不同性质糖的分离分析,已成为目前糖类物质分析的最主要方法。
在AOAC批准的糖类分析方法中HPLC是被公认为最合理的并被广泛应用的方法。