纯化水微生物限度

纯化水微生物限度滤膜法微生物检测：将适当孔径的滤膜放入滤器，过滤样品，由于滤膜的作用而将微生物保留在膜的表面上。

样品中微生物生长抑制剂可在过滤后用无菌水冲洗滤器而除去。

然后，将滤膜放在培养基上培养，营养物和代谢物通过滤膜的微孔进行交换，在滤膜表面上培养出的菌落可以计数，并和样品量相关。

滤膜法的优点：- 与直接法比较，可以检测大量的样品- 浓缩效应使微生物检测的准确度提高- 带有菌落的滤膜，可作为检测的永久记录存档- 可见的菌落和样品量直接对应，得出定量结果操作具体一点就是：薄膜过滤法检测，一个样过滤一份，就是200ml的纯化水通过滤膜，将该滤膜浸泡在灭菌好的l生理盐水中，再接种到平皿中，制成10级、100级、1000级稀释倍数的细菌、霉菌和酵母菌稀释培养皿，即可用平皿法检测纯化水的微生物限度摘要：目的探讨平皿法检查纯化水微生物限度的可行性。

方法采用《中华人民共和国药典》2005年版二部附录平皿法和薄膜过滤法同时时纯化水进行微生物限度检壹并作出比较。

结果平皿法操作简便，菌落清晰．准确可靠。

结论平皿法检测纯化水微生物限度是可行的，尤其适用药厂、医院开展此项检验。

关键词；纯化水；微生物限度；平皿法；薄膜过滤法纯化水为蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其它适宜的方法制得的供药用的水，不含任何附加剂。

纯化水的优劣，直接关系到药品质量。

《中华人民共和国药典》2005年版规定其微生物限度检查采用薄膜过滤法。

并规定其细菌、霉菌和酵母菌总数每毫升不得过100个。

由于此法操作较繁，滤膜较小(直径只有50mm)，菌落多时清晰度欠佳，影响计数的准确性。

笔者采用平皿法进行比较，该法操作简便，菌落清晰，计数准确，效果较为理想。

1 材料和仪器1．1 样品来源 19批纯化水系辖区内7家制药厂生产的为微生物限度检查验证用送样检品。

其中用盐水瓶盛装的12个批次，三角烧瓶盛装的7个批次。

1．2 培养基和仪器设备1．2．1 培养基：营养琼脂培养基批号050401，玫瑰红钠琼脂培养基批号050202，蛋白胨批号050523均为北京三药科技开发公司生产。

001纯化水微生物限度检查法操作规程操作规程：001纯化水微生物限度检查法一、目的和适用范围本操作规程适用于纯化水微生物限度检查法的操作流程。

检查目的是为了评估纯化水中微生物的数量和种类，确保纯化水的质量符合相关法规和标准。

二、设备和试剂1.无菌工作台2.显微镜3.火焰消毒器4.纯化水样品5.温度控制设备6.无菌试剂瓶7.营养基培养物8.细菌计数板三、操作步骤1.检查前准备1.1确保工作区域干净整洁，并进行必要的消毒。

1.2准备所需的设备和试剂。

1.3校验设备的准确性和完整性。

2.样品取样2.1使用无菌容器取样纯化水样品。

2.2尽量避免样品接触到空气。

2.3快速将样品送至检测实验室。

3.样品处理3.1使用无菌器具将样品分配到多个无菌试剂瓶中。

3.2确保样品的稀释比例符合标准要求。

4.培养试验4.1取一定量的样品，将其滴入细菌计数板的每个孔中。

4.2使用无菌移液器将细菌计数板放入孔内的细菌培养基中。

4.3将细菌计数板密封，并标注好样品信息。

4.4将细菌计数板放置于设定好的温度和湿度下进行培养。

4.5培养时间根据实验要求确定。

5.计数和分析5.1培养结束后，取出细菌计数板，使用显微镜在指定区域进行微生物计数。

5.2统计每个孔中微生物的数量，并记录下来。

5.3分析结果，与相关法规和标准进行比较。

5.4如结果符合要求，则纯化水样品通过检查；如结果不符合要求，则需进行进一步处理。

6.结果记录和报告6.1将检查结果记录在检测报告中，包括样品信息、检测日期、微生物数量等。

6.2将报告存档，并按要求进行归档保存。

四、操作注意事项1.操作过程必须保持无菌状态，避免样品的污染。

2.使用的设备和试剂必须保持干净和完整。

3.细菌计数板的培养条件必须按标准要求进行控制。

4.操作人员应熟悉操作流程和相关法规和标准，严格遵守操作规程。

五、操作记录1.操作人员应按要求记录操作流程、设备校验、样品信息等重要数据。

2.操作记录应包括操作日期、操作人员、操作步骤和结果等信息。

1。

目的：建立一个纯化水微生物限度检测方法的标准操作规程。

2. 适用范围：适用于纯化水的微生物限度检测。

3. 责任者：微生物限度检测人员。

4。

操作规程：4。

1 本操作过程应在无菌环境下进行，操作前用紫外光灯照射30分钟以上进行灭菌。

4.2 将待测纯化水样品、培养基及其他所需用具放入无菌室中。

4.3 纯化水稀释：4。

3.1 取6支已灭菌的试管，分别加入9ml无菌水，并按10—1～10—6的顺序编号.4。

3。

2 用移液枪吸取1ml纯化水样品，注入10-1倍稀释的试管中。

用移液枪吹吸三次，使纯化水样品与无菌水水充分混匀。

4.3。

3 从10-1倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入10—2倍稀释的试管中，重复第2步的混匀操作。

依次类推，直达完成最后一支试管的稀释.4。

4 涂布平板操作：4。

4.1 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。

4.4.2 取100μl稀释液，滴加到培养基表面;4。

4.3 将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后,冷却8～10s；4.4。

4 用涂布器将稀释液均匀地涂布在培养基表面。

涂布时可转动培养皿,使涂布均匀.4.4。

5 按上述方法依次将10—1～10-6的稀释液涂布于平板上，每个稀释度的样品涂布两个平板。

4。

5 将涂布好的培养基置于36±0。

5℃培养箱中培养,连续培养3～5天。

4。

6 培养3～5天后对所有培养基进行菌落计数。

微生物限度检查方法验证——纯化水的微生物限度检查方法验证验证方案制定人：部门：日期：验证方案审核人：部门：日期：验证方案批准人：部门：日期：1验证目的：当建立纯化水的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌和酵母菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于纯化水的细菌、霉菌和酵母菌检查。

2验证方案：照《中国药典》2005版二部附录Ⅺ J 方法。

2.1仪器与试药2.1.2仪器：STV3无菌检查薄膜过滤器（浙江宁海白石药检仪器厂），微孔滤膜（孔径0.45um,直径50mm）。

2.1.3试药：2.1.4培养基：营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，营养肉汤培养基。

来源：北京三药科技开发公司生产中国药品生物制品检定所监制2.1.5试液：生理盐水，pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。

（均按照《中国药典》2005版二部附录Ⅺ H、J要求配制）2.1.6对照菌株：大肠埃希菌[CMCC(B) 44 102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26 003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63 501]、白色念珠菌[CMCC(F) 98 001]、黑曲霉 [CMCC(F) 98 003]。

来源：广州药物研究中心2.2对照菌液的制备：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面新鲜培养物各1环分别接种于15ml 营养肉汤培养基内，于30～35℃培养18～24小时后，稀释至1：105～1：107，，取1ml注入平皿中，注入约45℃的营养琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置30～35℃培养48h，进行活菌计数。

取白色念珠菌的玫瑰红钠琼脂斜面新鲜培养物1环接种于改良的马丁琼脂培养基内，于25～28℃培养24～48小时后稀释至1：105～1：106，取1ml注入平皿中，注入约45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置25～28℃培养72h，进行活菌计数。

取黑曲霉的玫瑰红钠琼脂新鲜培养物1环接种于改良的马丁琼脂培养基内斜面中，于25～28℃培养5～7天后，用3～5ml0.9%的无菌氯化钠溶液洗脱。

生产单位：水系统编号：
取样日期：检验日期：
「微生物限度」（需氧菌总数）：
1.1培养基和设备室温：℃；相对湿度：%RH
A.R2A培养基供应商：配制批号：有效期至：
B.生化培养箱型号：编号：有效期至：
C.立式蒸汽灭菌器型号：编号：有效期至：
D.净化工作台型号：编号：
E.集菌仪型号：编号：
F.滤膜孔径：直径：
1.2供试液的制备
取纯化水10ml，加至50ml已灭菌的纯化水中，混匀，用薄膜过滤器（0.45±0.02um，50MM直径）过滤，减压抽干。

1.3需氧菌总数检查
1.3.1需氧菌总数：取出滤膜，将滤膜放入制备好的R2A培养基平板上，在30～35℃培养5天，计数。

1.3.3阴性对照
1.3.3.1需氧菌阴性对照：取50ml已灭菌的纯化水按供试品同法处理，作为阴性对照。

1.4结果记录
1.4.1需氧菌培养
检验者/日期：校对者/日期：
审核结论：该检验记录原始、真实，内容完整、齐全，书写清晰，所有检测项目全部符合规定。

□是□否审核者/日期：。

纯化水微生物限度检测纯化水微生物限度检测包括了对水中微生物污染程度的评估与监测，其重要性在于确保水的纯度达到合适的标准。

该检测是环境监测中的重要部分，相对于检测其他物质，水质检测需要对多种微生物进行监测。

本文将从纯化水微生物限度检测的必要性、检测方法、影响因素等方面展开分析。

一、纯化水微生物限度检测的必要性纯化水微生物限度检测是确保现代社会得到健康饮用水供应的必要手段。

水是支撑人类生产和生活不可缺少的资源，为了保障水的安全，国际水研究会提出了对水安全的三条标准：化学安全、生物学安全和物理学安全。

其中生物学安全主要是指检测水体中的细菌、病毒、藻类、真菌等微生物是否达到了国家卫生标准水净化处理后的标准要求。

通常情况下，对于自然水源或市政供水，人们都会采用纯水处理技术，除去其中存在的大部分异质物、有机物、无机物和微生物，但这并不意味着此时的水已经完全可供直接饮用或是直接应用于生产和科研实验等领域。

因此，水质检测是必要的，并且其微生物检测部分尤为重要。

二、纯化水微生物限度检测的方法微生物检测主要包括菌落计数法和涂布法等。

菌落计数法是确定水中菌落总数的标准方法，其主要包括直接计数法和滤膜计数法。

直接计数法是指直接将样品涂在平板上，然后通过计算实现细菌数目的统计。

滤膜计数法与直接计数法类似，我们可以先将样品过滤然后直接将过滤膜放在培养基上，然后进行培养，统计出菌落数。

涂布法是将样品涂在培养基上，通过培养时间、培养温度等环境条件来判断样品中有无微生物存在。

当然根据实验需要，也可对微生物进行分离鉴定。

三、影响纯化水微生物限度检测的因素微生物检测在水质检测中占有重要的位置，但同时在微生物检测过程中也有一些因素可能引起检测结果的偏差，例如缺氧、污染源、物种种类等因素将影响样品的真实性。

使用的培养基和培养条件也会影响到微生物的生长情况。

当检测样品来源于管道、水井等地下水源时，还需注意该地区自然生存的微生物种类、菌株以及排放规模等因素。

纯化水微生物限度检查标准操作规程1目的规定纯化水微生物限度检查操作。

2适用范围本文件适用于纯化水微生物限度检查操作。

3职责微生物限度检查操作人员。

4微生物限度检查方法纯化水采用薄膜过滤法进行检查。

滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm。

5内容5.1设备洁净工作台、恒温培养箱（30~35℃）、恒温水浴锅、电热干燥箱（250~300℃）、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果检查并应定期请有关部门检定）。

5.2仪器及器皿5.2.1薄膜过滤器、放大镜、显微镜。

5.2.2玻璃器皿：蓝盖试剂瓶（250ml）、培养皿（90mm）、吸管（l0ml分度0.l）、载玻片、盖玻片。

玻璃器皿用前应洗涤干净无残留抗菌物质。

吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm的适宜疏松棉花，置吸管桶内或用牛皮纸包好。

玻璃器皿，均于高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干备用。

5.3用具5.3.1大、小橡皮胶头（放于干净带盖的容器中，并应定期用75%乙醇溶液浸泡）。

纯化水微生物限度检查标准操作规程5.3.2无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。

也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。

5.3.3酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、试管架、无菌滤杯、无菌滤膜、打火机、记号笔、接种环、灭菌抹布等。

5.4消毒液5.4.10.1%苯扎溴铵溶液（供洗手、擦拭操作台面用）。

5.4.275%乙醇溶液5.4.33~5%来苏尔溶液5.5培养基R2A琼脂培养基5.5.1灭菌前后应对培养基的pH值进行校验。

5.5.2配制的培养基不应有沉淀，如有沉淀，应于溶化后趁热过滤灭菌后使用。

5.5.3培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。

包装时，塞子必须塞紧以免松动或脱落造成染菌。

5.5.4培养基配制后应在2h内灭菌，避免细菌繁殖。

5.5.5灭菌后的培养基在2~8℃处保存备用，放置时间不能过长，以免水分散失及染菌。

已熔化的培养基应一次用完，开启后不宜再用。

纯化水微生物限度第一篇：纯化水微生物限度的意义及相关标准纯化水作为一种高纯度水，广泛应用于制药、化妆品、食品等领域。

然而，由于其生产工艺的限制以及存储条件的不同，纯化水中可能存在微生物污染，对使用后的产品品质和安全性产生极大影响。

因此，为了确保纯化水质量，需要建立微生物限度标准，对纯化水中的微生物进行检测和控制。

本文就对纯化水微生物限度的意义及相关标准进行探讨。

1. 纯化水微生物限度的意义纯化水微生物限度的建立，可以保证纯化水的质量，把纯化水使用的过程中的风险控制在一定范围内。

其意义如下：（1）保证产品的高质量纯化水广泛应用于制药、化妆品、食品等行业，其质量直接影响到后续产品的质量。

由于微生物的污染会导致产品品质的下降和稳定性的降低，而纯化水微生物限度的建立可以防止这种情况的发生，保证产品的高质量。

（2）营造安全的工作环境对于制药、化妆品等高风险行业，纯化水微生物限度的建立可以在一定程度上降低员工的工作风险和安全隐患，营造安全的工作环境。

（3）切实维护客户利益对于各个行业从业者而言，客户利益是重中之重。

纯化水微生物限度的建立可以保证纯化水的质量，从而维护客户的合法权益。

2. 纯化水微生物限度的检测标准国内外对纯化水微生物限度的检测标准均有详细规定，主要包括药典标准和相关法规及行业标准。

下面分别介绍如下：（1）药典标准《中华人民共和国药典》（2015年版）规定了注射用水、纯化水和蒸馏水等药用水的微生物限度。

其中，注射用水的微生物限度为：总细菌数（TAMC）不超过10 CFU/mL，酵母菌和霉菌数（TYMC）不超过10 CFU/mL；纯化水的微生物限度为：TAMC不超过100 CFU/mL，TYMC不超过10 CFU/mL；蒸馏水的微生物限度为：TAMC不超过100 CFU/mL，TYMC不超过10CFU/mL。

（2）相关法规及行业标准对于纯化水微生物限度的检测标准，国家卫生部于2002年发布了《医疗机构感染管理规定》，规定了医疗机构制备药用水的质量要求及微生物限度，其中，纯化水的微生物限度为TAMC不超过100 CFU/mL，TYMC不超过10 CFU/mL。

目录A、验证方案1.概述2.适用范围3.验证目的4.验证小组及职责分工4.1 验证小组4.2 职责分工5.验证内容6.漏项与偏差及采取的纠偏措施.7.验证结论8.验证方案批准B、验证报告1.概述2.适用范围3.验证目的4.验证小组及职责分工4.1 验证小组4.2 职责分工5.确证内容6.漏项与偏差及采取的纠偏措施.7.验证结论8.最终批准9. 再验证周期与年度回顾性验证1 概述由于某些供试品抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性、重现性进行验证。

验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法进行。

对各试验菌的回收率应逐一进行验证。

2 适用范围纯化水微生物限度检查——薄膜过滤法的验证。

3 验证目的验证纯化水微生物限度检查——薄膜过滤法符合《中国药典》2005年版二部的规定要求。

4 验证小组及职责分工5 验证内容5.1 品种：纯化水5.2 验证方法：《中国药典》2005年版二部微生物限度检查——薄膜过滤法5.3 计数方法的验证5.3.1 验证试验用菌种验证试验用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC(B) 44 102〕金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CMCC(B) 26 003〕枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)〔CMCC(B) 63 501〕白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕黑曲霉(Aspergillus niger)〔CMCC(F)98 003〕5.3.2 菌液制备取经32.5℃培养18～24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤液体培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。

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