同型半胱氨酸HCY检测

同型半胱氨酸(hcy)检 测试剂方法学比较
目录
Contents
• 同型半胱氨酸(Hcy)简介 • 同型半胱氨酸(Hcy)检测试剂的种
类 • 各种Hcy检测试剂的比较 • Hcy检测试剂的应用场景 • Hcy检测试剂的发展趋势和展望
01 同型半胱氨酸(Hcy)简介
Hcy的生理功能
参与蛋氨酸循环
同型半胱氨酸是蛋氨酸循环的重要中 间产物，参与细胞内甲基化反应，对 维持细胞功能具有重要作用。
电化学检测法
总结词
电化学检测法是一种快速、简便的检测方法，适用于临床常 规检测。
详细描述
电化学检测法利用电化学原理，通过测量同型半胱氨酸在电 极上的氧化还原反应产生的电流来定量检测同型半胱氨酸的 浓度。该方法具有快速、简便、准确度高等优点，适用于临 床常规检法是一种高灵敏度的检测方法，具有较好的稳定性和准确性。
详细描述
随着人们对Hcy认识的深入，对Hcy检测的灵敏度和特异性 要求越来越高。高灵敏度检测技术的研究和应用，能够更 准确地检测低浓度Hcy，避免漏检和误检，提高临床诊断 的准确性。
多指标联合检测的研究
总结词
多指标联合检测是Hcy检测试剂的另一个重 要发展方向，能够同时检测多种与Hcy相关 的指标，提供更全面的诊断信息。
04 Hcy检测试剂的应用场景
临床诊断
01
辅助诊断心血管疾 病
同型半胱氨酸(Hcy)水平升高与 心血管疾病风险相关，Hcy检测 试剂可用于辅助诊断相关疾病。
02
预测脑卒中风险
03
评估肾脏功能
高Hcy水平与脑卒中风险增加有 关，通过检测试剂可预测个体脑 卒中风险。
Hcy水平与肾脏功能有关，检测 试剂可用于评估肾脏功能状况。

同型半胱氨酸速率法检测说明书I. 介绍同型半胱氨酸（Homocysteine，简称Hcy）是体内一种重要的氨基酸，它在蛋氨酸代谢过程中形成。

近年来，研究发现Hcy与多种心血管疾病、神经系统疾病以及某些遗传代谢病的发生发展密切相关。

因此，准确、快速地检测Hcy的水平对于疾病诊断与治疗具有重要意义。

II. 检测原理同型半胱氨酸速率法检测基于同型半胱氨酸在特定条件下与酶的催化作用，通过测定反应体系中底物和产物的生成速率来间接测定Hcy的浓度。

该方法的原理简单，操作方便，能够准确地测定Hcy的水平。

III. 检测设备与试剂1. 检测设备：同型半胱氨酸速率法检测仪2. 试剂：- 试剂A：同型半胱氨酸标准品- 试剂B：底物溶液- 试剂C：酶溶液IV. 检测步骤1. 样本处理：- 取适量样本，加入适量去蛋白液混匀，沉淀离心，取上清液作为待测样本。

2. 准备工作：- 分别将试剂A、试剂B和试剂C室温静置至室温。

- 预热同型半胱氨酸速率法检测仪至37°C。

3. 检测步骤：a. 取一定体积的底物溶液加入反应池中。

b. 加入一定体积的试剂A并混匀。

c. 加入一定体积的待测样本混匀。

d. 加入一定体积的试剂C并立即混匀。

e. 将反应池放入预热好的同型半胱氨酸速率法检测仪中进行反应。

f. 按照仪器指示记录一定时间内反应速率的变化。

g. 通过与同型半胱氨酸标准品的比对，计算出待测样本中Hcy的浓度。

V. 结果解读根据检测结果得出的Hcy浓度，可以用作评估患者的心血管疾病和神经系统疾病的风险。

一般来说，Hcy的浓度越高，表示患相应疾病的风险越大。

但具体的标准值要根据医生的指导和临床实际情况来确定。

VI. 注意事项1. 检测前应严格按照说明书的要求储存试剂及设备，避免高温、湿度等不利因素。

2. 操作过程中应注意实验室内无任何污染物干扰，避免误差。

3. 操作时需穿戴个人防护装备，做好安全防护工作。

4. 检测结果仅供医生参考，不能用于自我诊断和自我治疗。

4
的代谢研究, 1955年获得了诺贝尔化学奖。
同型半胱氨酸尿症的特点
马凡样的表现: --中枢神经系 统的表现，如 智力缺陷
骨骼肌的表 现: 骨质疏 松症
血管表现: 血管闭 塞，血栓栓塞
眼睛的表现: 异位 晶状体
该图为HCy尿症的特 点, 其中我们可以 很明显的看到, 血 管闭塞, 血栓栓塞
的血管表现。
23
• 第五，增殖性疾病的影响: 细胞增殖加快可以使同型半胱氨酸浓度升 高，例如慢性炎症性疾病，以及恶性疾病如急性淋巴细胞白血病时都
会出现同型半胱氨酸浓度升高。快速的细胞分裂增加了对于叶酸的需 求可能是造成这种表现的原因之一。
• 第六，肾功能的影响: 目前对于肾衰竭患者血浆同型半胱氨酸浓度增 加的机制还不是很清楚。不管原因如何，终末期肾脏病的患者总同型
2
同型半胱氨酸（HCY）的研究历史
3
同型半胱氨酸（Homocysteine, Hcy）
同型半胱氨酸（Homocysteine, 简称Hcy）, 1931年由Vicent du Vigneaud首次从膀胱结石
中分离到, 它是一种含硫的氨基酸。du Vigneaud主要进行有机硫化合物, 包括含硫氨基酸
• 研究表明: Hcy的升高是与中风有重要关联的危险因子。美国最新的 数据显示中年后期男性中风发病率，处于55-64这个年龄段的男性相 对于45-54年龄段的男性而言，前者患中风的几率是后者的三倍。
• 高HCY是造成老年痴呆症与帕金森的重要因素，英国研究发现， Hcy 水平大于11.2μmol/L的病人，三年后随访，发现他们大脑颞叶（包 括海马）快速萎缩。
2.同型半胱氨酸的代谢主要有再 甲基化途径和转硫途径两个。
1）再甲基化途径：是指约有50% 同型半胱氨酸在蛋氨酸合成酶的作用 下，以维生素Ｂ12为辅酶因子，以N5-甲基四氢叶酸为甲基供体，发生再 甲基化，重新合成蛋氨酸。

同型半胱氨酸的检测及临床意义一、同型半胱氨酸同型半胱氨酸（homocysteine, Hcy）是一种人体内的含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要中间产物，部分以同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化物存在，微量以还原型同型半胱氨酸存在，大部分通过二硫键与白蛋白结合而存在。

大量对Hcy的研究表明Hcy是心脑血管疾病的独立危险因素，危险度随着浓度的升高而增加。

Boushey等的研究结果显示，血浆总Hcy水平每升高5umol/L，相当于胆固醇升高500umol/L。

伴有血浆Hcy升高(>10umol/L)的原发性高血压定义为H型高血压。

二、影响血液Hcy水平的因素1、遗传因素：C667T点突变可引起Hcy升高。

CBS基因多态性。

蛋氨酸合成酶基因多态性。

2、性别与年龄：国内外不少研究发现，Hcy随年龄增长而升高，而且男性>女性。

女性在绝经前的水平较低，绝经后显著升高，认为其机制可能与雌激素水平的变化有关。

3、营养因素：①VitB6、VitB12、叶酸等Hcy代谢辅酶摄入不足时，则Hcy升高。

②饮酒：长期饮酒可引起肝细胞蛋氨酸合成酶活性下降，从而造成Hcy血症。

③饮食中蛋氨酸过高：有报道认为高动物蛋白饮食可能是Hcy血症的危险因素之一。

三、同型半胱氨酸致病机理1、内皮毒性作用。

2、刺激血管平滑肌细胞增生。

3、致血栓作用：Hcy可促进血栓调节因子的表达，激活C蛋白和凝血因子Ⅻ、Ⅴ，血小板内前列腺素合成增加，从而促进血小板粘附和聚集。

4、脂肪、糖、蛋白代谢紊乱：Hcy可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可改变动脉壁糖蛋白分子纤维化结构，促进斑块钙化。

5、干扰谷胱甘肽的合成：谷胱甘肽是一种重要的高氧化剂，它能防止很多细胞成分的氧化互相作用，对血管产生保护作用。

Hcy干扰谷胱甘肽的合成，从而对机体造成危害。

6、影响体内的转甲基化反应：Hcy浓度的升高会影响体内许多物质的甲基化过程，甲基化能力的降低影响细胞的发育及分化，这可能是Hcy致病的关键因素。

14.7
<0.001
↑1.87
2370
第27页
高HCY是造成老年痴呆症与帕金森主要原因：
弗明汉医学研究中心对1092例（>76岁）追 踪调查8年Hcy值，结果：Hcy超出14μmol/L， 患老年性痴呆危险性增加1.8倍，患多异古 怪痴呆发生率增加1.6倍。
英国OPTIMA项目研究发觉： Hcy水平大于 11.2μmol/L病人，三年后随访，发觉他们 大脑颞叶（包含海马）快速萎缩。
（1）HCY升高与动脉粥样硬化(AS)关系：
1969年就曾有些人从尸检中发觉2例血
浆Hcy浓度超出正常人几十倍病儿存在广泛
动脉粥样硬化和动脉血栓。临床上发觉高胱
氨酸尿症病人早年多因全身动脉粥样硬化和
血栓形成死于脑梗塞和心肌梗塞，这与血中
Hcy升高相关。
2024/4/10
同型半胱氨酸的检测及临床应用
1199
2024/4/10
同型半胱氨酸的检测及临床应用
* Mayer E L, Robinson K, Jacobsen D W. et al .Low plasm
homocyseine levels predic reduced atheroma burden in patient undergoing coronary intervention:Evideence from intravascular ultrsund.J Am Coll Cardiol,1995,25(special issum):81 A.
（试剂2体积）： 45ul
Measure Wave1（主波长） ：340nm
Measure Wave2（副波长） ：700nm
2024/4/10

同型半胱氨酸的检测及临床意义一、同型半胱氨酸同型半胱氨酸（homocysteine, Hcy）是一种人体内的含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要中间产物，部分以同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化物存在，微量以还原型同型半胱氨酸存在，大部分通过二硫键与白蛋白结合而存在。

大量对Hcy的研究表明Hcy是心脑血管疾病的独立危险因素，危险度随着浓度的升高而增加。

Boushey等的研究结果显示，血浆总Hcy水平每升高5umol/L，相当于胆固醇升高500umol/L。

伴有血浆Hcy升高(>10umol/L)的原发性高血压定义为H型高血压。

二、影响血液Hcy水平的因素1、遗传因素：C667T点突变可引起Hcy升高。

CBS基因多态性。

蛋氨酸合成酶基因多态性。

2、性别与年龄：国内外不少研究发现，Hcy随年龄增长而升高，而且男性>女性。

女性在绝经前的水平较低，绝经后显著升高，认为其机制可能与雌激素水平的变化有关。

3、营养因素：①VitB6、VitB12、叶酸等Hcy代谢辅酶摄入不足时，则Hcy升高。

②饮酒：长期饮酒可引起肝细胞蛋氨酸合成酶活性下降，从而造成Hcy血症。

③饮食中蛋氨酸过高：有报道认为高动物蛋白饮食可能是Hcy血症的危险因素之一。

三、同型半胱氨酸致病机理1、内皮毒性作用。

2、刺激血管平滑肌细胞增生。

3、致血栓作用：Hcy可促进血栓调节因子的表达，激活C蛋白和凝血因子Ⅻ、Ⅴ，血小板内前列腺素合成增加，从而促进血小板粘附和聚集。

4、脂肪、糖、蛋白代谢紊乱：Hcy可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可改变动脉壁糖蛋白分子纤维化结构，促进斑块钙化。

5、干扰谷胱甘肽的合成：谷胱甘肽是一种重要的高氧化剂，它能防止很多细胞成分的氧化互相作用，对血管产生保护作用。

Hcy干扰谷胱甘肽的合成，从而对机体造成危害。

6、影响体内的转甲基化反应：Hcy浓度的升高会影响体内许多物质的甲基化过程，甲基化能力的降低影响细胞的发育及分化，这可能是Hcy致病的关键因素。

同型半胱氨酸概述同型半胱氨酸（Hcy）是一种含巯基的氨基酸，是人体内蛋氨酸和半胱氨酸代谢的重要中间产物，是心脑血管疾病的独立危险因子，常用于心脑血管疾病的诊断、鉴别诊断和监测。

临床上通常检测的是总Hcy。

血清中Hcy 的正常参考范围为5~15 μｍo/Ｌ。

《中国高血压防治指南（2018 年修订版）》指出，人体空腹血浆Hcy > 15 μmol/L，则可诊断高同型半胱氨酸血症（HHcy）。

根据血清总同型半胱氨酸的浓度不同，可分为轻度(15~30 μmol/L)、中度(30~100 μmol/L) 和重度(> 100 μmol/L)。

01、同型半胱氨酸的代谢Hcy 在体内的代谢主要通过再甲基化途径与转硫化途径两条途径。

如下图所示。

两条途径互相补充，当一个途径活性下降时，另一条途径可以部分代偿Hcy 的代谢，从而维持Hcy 的稳态。

这两条途径各自依赖不同的辅酶和酶类参与催化反应，所以两者不能完全相互替代，如果一条途径发生严重阻滞，仅依靠另一途径很难完全满足Hcy 的代谢需求。

只有两条途径保持协调平衡，才能保证体内Hcy 浓度在正常范围。

图：同型半胱氨酸代谢图02、Hcy 异常有何临床意义血液中积累的Hcy 可以通过各种方式诱发疾病，Hcy 积累会引起内皮细胞损伤，破坏血管壁的弹力层和胶原纤维。

Hcy 还可诱导动脉壁平滑肌细胞增殖、动脉内皮细胞脱落，加速粥样硬化。

Hcy 升高可促进血栓调节因子的表达，使血小板存活期缩短，粘附性与聚集性增高，破坏正常凝血机制，从而促进血栓形成。

Hcy 促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，改变动脉壁糖蛋白分子纤维化结构，促进斑块钙化。

此外，体内Hcy 可干扰谷胱甘肽的合成，造成氧化损伤等。

1. 心脑血管疾病高同型半胱氨酸血症已被证实是动脉粥样硬化和冠心病发生的独立危险因素。

研究发现同型半胱氨酸与早期动脉粥样硬化启动子有关，冠心病患者空腹血清同型半胱氨酸水平显著高于无冠心病患者。

同型半胱氨酸HCY检测1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2 实验原理同型半胱氨酸（Hcy）是蛋氨酸代谢产生的一种含硫氨基酸，80%在血中通过二硫键与蛋白结合，只有很少一部分游离同型半胱氨酸参加循环。

同型半胱氨酸经过一系列的反应后，生成340nm波长检测吸收光度值变化与HCY浓度呈线性关系。

3 标本：3.1 病人准备:应禁食12小时抽血.3.2 类型：新鲜不溶血的血清3.3 标本存放留取标本后请尽快分离血清。

在冰箱保存的条件下（2～8℃）稳定3天，-20℃保存至少可以稳定3个月。

3.4 标本运输室温条件下运输3.5 标本拒收标准细菌污染的不能做测定。

4 实验材料4.1 试剂:北京万泰德瑞诊断技术有限公司HCY测定试剂盒（京械注准20152401106）4.1.1 试剂组成乳酸脱氢酶 >35KU/L 丝氨酸 0.76mmol/lNADH 0.47mmol/l 胱硫醚合成酶>20KU/L胱硫醚裂解酶>10KU/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃密闭保存，效期为12个月；开盖2～8℃保存，可稳定28天。

4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

4.2 校准品：使用北京万泰德瑞诊断技术有限公司提供的HCY标准品血清进行校准操作。

4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。

5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。

6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。

6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪，西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。

直接法优点
➢ 原理设计
• 胱硫醚循环酶法（简称间接法）的Hcy检测试剂在基本的 设计上存在着问题，其检验是靠测量Hcy转化为β-胱硫醚 时产生的胱硫醚，但是却不能够消除内生β-胱硫醚，而 恰恰有很多人，尤其是肾脏疾病患者的内生β-胱硫醚水 平非常高（可高达>300μmol/L，大部份< 20μmol/L)。 间接法的Hcy试剂受到了内生胱硫醚的明显干扰。它测的 是同型半胱氨酸(Hcy)与内源性胱硫醚的总和，因此被称 为是很好的检测胱硫醚的试剂而非检测Hcy的试剂。
Hcy自发形成的巯基内酯化合物，可以和反式视黄酸共同 引起血小板的凝集，与此同时，同型半胱氨酸巯基内酯还 可引起血栓素（TXB2）的形成。
同型半胱氨酸巯基内酯，与低密度脂蛋白形成复合体，随 后被巨噬细胞吞噬，形成泡沫细胞。促进血凝块的形成， 从而引起临床上常见的梗塞性疾病。
同型半胱氨酸（Hcy）简介
直接法优点
➢ 目前国际市场上，能够在生化分析仪器上使用的 Hcy试剂有两种，都是循环酶法。一种为直接法 （水解酶循环酶法），另一种为间接法（胱硫醚 循环酶法）。
➢ 水解酶循环酶法，该法特异性高、抗干扰力强、 适用于各种生化仪，该类产品被国际大公司(如 罗氏， 奥林帕斯等)广泛采用。
如何区分两种方法学的试剂
参考文献：同型半胱氨酸检测技术的研究进展及评价；谭功军等，实用预防医学， 2010，11（24）：2334-2337
直接法测定Hcy原理
同型半胱氨酸在体内的主要代谢途径： 间接法（胱硫醚法）
数据来源：www.kegg.jp
直接法（水解酶法）
直接法测定Hcy原理
① ATP + L-methionine + H2O = phosphate + diphosphate + S-methyl-L-methionine ② S-methyl-L-methionine + L-homocysteine = L-methionine+S-adenosyl-L-homocysteine ③ S-adenosyl-L-homocysteine + H2O = L-homocysteine + adenosine ④ adenosine + H2O = inosine + NH3 ⑤ 2-oxoglutarate + NH3 + NADH+ H+= L-glutamate + H2、间接法检测准确性及线性范围存在问题 •间接法的试剂检测线性范围窄，对于高于50 μmol/L的样本 中报告出假阴性结果，往往无法给出正确的结果，试验很可 能只报告出30μmol/L或更低。

参考文献：同型半胱氨酸检测技术的研究进展及评价；谭功军等，实用预防医学， 2010，11（24）：2334-2337
直接法测定Hcy原理
同型半胱氨酸在体内的主要代谢途径： 间接法（胱硫醚法）
数据来源：www.kegg.jp
直接法（水解酶法）
直接法测定Hcy原理
① ATP + L-methionine + H2O = phosphate + diphosphate + S-methyl-L-methionine ② S-methyl-L-methionine + L-homocysteine = L-methionine+S-adenosyl-L-homocysteine ③ S-adenosyl-L-homocysteine + H2O = L-homocysteine + adenosine ④ adenosine + H2O = inosine + NH3 ⑤ 2-oxoglutarate + NH3 + NADH+ H+= L-glutamate + H2O + NAD+
关于直接法试剂的几个问题

3、间接法为何在国内也有市场 – 虽然Hcy的终端销售价格相同，但考虑到国内医 药体制的特殊情况，间接法试剂（只用到两种 主要酶）具有生产成本更低的优势，有能力给 销售渠道出让更多的利润； – 也有采用2酶或者3酶的直接法试剂，其成本大 大降低，但其检测灵敏度以及抗干扰物质的能 力都受到了极大的影响； – 综合来看，5酶直接法是目前美国FDA及AACC认 可的生化试剂中检测Hcy方法中特异性最高，最 可靠，最准确的方法，虽然生产成本相对较高， 但仍为罗氏 、雅培 、贝克曼等国际品牌所采 用。

同型半胱氨酸检测的临床意义同型半胱氨酸是一个用于测定心脑血管疾病的独立危险因子，主要临床意义有：（一）、hHCY与心血管系统疾病同型半胱氨酸自1931年被Vincent du Vigneaud发现，1969年McCully首次提出高水平的同型半胱氨酸浓度是引起血管病变的原因，从此，Hcy逐渐引起研究者的注意，到目前为止，大量对Hcy的研究表明Hcy是心脑血管疾病的独立危险因素，危险度随着浓度的升高而增加。

Boushey等的研究结果显示，血浆总同型半胱氨酸水平每升5umol/L，相当于胆固醇升高500umol/L。

1、冠动脉疾病死亡率与Hcy浓度的关系：当血浆总Hcy水平在15-20umol/L，心血管患者五年期存活率不到75%。

总Hcy水平介于9-15umol/L之间，患者五年期存活率在90%左右。

低于9umol/L，则五年期存活率高于95%。

2、Hcy与冠动脉病变的关系：北京阜外医院惠汝太教授等的研究结果，显示冠动脉病变支数随着血浆Hcy 浓度增高而增加。

3、Hcy与其它因素对心脑血管疾病的协同作用:（1）Hcy与血脂异常协同对心脑血管疾病的影响同样在欧洲同型半胱氨酸协同作用计划中，观察了总胆固醇和同型半胱氨酸的昨合作用，发现同型半氨胱酸和胆固醇水平均为最高值组的患者与均为低值组相比，患心血管疾病的危险性增加4倍。

（2）Hcy与糖尿病协同对心脑血管疾病的影响在对587名经血管造影确诊冠心病的患者进行的研究中，Ueland等观察了同型半胱氨酸升高和糖尿病，对于总死亡率的复合作用。

结果发现：同型半胱氨酸升高和糖尿病联合，可使死亡的危险性呈指数上升。

（3）Hcy与高血压Lim等对美国国家第三次健康和营养调查的数据进行了分析。

他们发现当校正了心血管危险因子后，HCY与高血压呈独立的正相关关系。

同型半胱氨酸浓度升高5umol/L，受试者中男性的舒张压和收缩压分别增加0.5和0.7mmHg，女性分别增加0.7和1.2mmHg。

同型半胱氨酸的实验室检测方法和临床意义摘要:同型半胱氨酸与多种先天性代谢缺陷疾病有关,如胱硫醚β合成酶缺乏;血清内高同型半胱氨酸是潜在心血管疾病的标记,能促进动脉粥样硬化及血栓形成,是心血管疾病和中风的危险因素,使其发病率及死亡率增加。

因此,测定血中HCY浓度对心脑血管等疾病的早期诊断具有一定的临床意义。

关键词:同型半胱氨酸心血管病先天性代谢缺陷疾病引言同型半胱氨酸(HCY)是一种含硫氨基酸,又称为高半胱氨酸,为蛋氨酸代谢过程中的重要中间产物,是氨基酸半胱氨酸的异种。

正常人血浆中,HCY以还原型存在的占1%左右,与白蛋白结合的占70%左右,形成小分子二硫化物占30%左右。

同型半胱氨酸与多种先天性代谢缺陷疾病有关,如胱硫醚β合成酶缺乏;血清内高同型半胱氨酸是潜在心血管疾病的标记,能促进动脉粥样硬化及血栓形成,是心血管疾病和中风的危险因素,使其发病率及死亡率增加。

因此,测定血中HCY浓度对心脑血管等疾病的早期诊断具有一定的临床意义。

1 实验室检测方法1.1 同位素检测法该方法的原理是:14C标记的腺苷与HCY缩合后,通过色谱分离,液体闪烁计数放射强度来检测HCY的含量。

同位素检测法的灵敏度和特异度均较强,但实际操作比较复杂、繁琐,且可造成放射性污染,所以,未能得到临床大范围推广应用。

1.2 气相色谱检测法该方法可同时测定半胱氨酸、蛋氨酸、甲基甘氨酸和胱硫醚等多种相关物质。

尽管该方法的灵敏度和特异度均较高,但因为仪器价格昂贵,不能得以临床大范围推广应用。

目前比较成熟且推广应用的是高效液相色谱法(HPLC),但在样品处理、层析条件、样品检测及定量的存在许多变异的缺陷,容易出现随机误差,使其难以标准化。

根据HPLC为柱前或柱后衍生的方式、荧光、电化学检测方法的不同,又可分为多种检测方法。

只有具备优良的检测设备、熟练的检测技术和经验,应用HPLC的时间足够长,准确选择和制备内部质控,才能应用HPLC准确测定血清中同型半胱氨酸的含量。

同型半胱氨酸Hcy参与神经递质的合成和调 节，与认知功能、情绪和睡眠等神经精神功
能相关。
02
同型半胱氨酸Hcy检测的方法
血浆及血清Hcy的检测
血浆或血清中的同型半胱氨酸（Hcy） 水平可以反映人体内同型半胱氨酸的 代谢状况。
血浆或血清中的Hcy水平受多种因素影响， 如饮食、生活习惯、遗传和疾病等。
心血管疾病风险预测
高同型半胱氨酸Hcy水平与心血管疾病风险正相关，检测Hcy 有助于心血管疾病的早期预防和风险评估。
动脉粥样硬化
多项研究表明，高同型半胱氨酸Hcy水平可加速动脉粥样硬化 进程，增加心脑血管事件的风险。
同型半胱氨酸Hcy与糖尿病
糖尿病风险预测
研究表明，高同型半胱氨酸Hcy水平可增 加2型糖尿病的风险，检测Hcy有助于糖 尿病的早期预防。
血浆或血清中的Hcy水平检测方法 包括色谱法、酶联免疫法等。
尿液中Hcy的检测
尿液中同型半胱氨酸（Hcy）水平也可以反映人体内同型半胱氨酸的代谢状况。
与血浆或血清中的Hcy水平相比，尿液中Hcy水平较低，但是尿液中的Hcy水平不 受饮食等因素影响。
尿液中Hcy水平检测方法包括荧光法、酶联免疫法等。
它是一种细胞内信号分子，参与多种生物过程，如DNA甲基 化、神经递质的合成等。
同型半胱氨酸Hcy的代谢过程
同型半胱氨酸Hcy在叶酸循环中参与甲基化过程，转化为 蛋氨酸。
叶酸缺乏或维生素B12缺乏时，同型半胱氨酸Hcy代谢受 阻，导致血浆中同型半胱氨酸Hcy水平升高。
同型半胱氨酸Hcy的生理功能
同型半胱氨酸Hcy可以作为细胞增殖和凋亡 的调控因子。
VS
并发症风险
糖尿病合并高同型半胱氨酸Hcy水平可增 加并发症风险，如糖尿病肾病、视网膜病 变等。

小鼠同型半胱氨酸(Hcy)检测试剂盒说明书该试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测血液,细胞、组织内的特异性 CD40 抗原。

该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。

在所用的CD40一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。

小鼠同型半胱氨酸(Hcy)检测试剂盒所含试剂：试剂A通透液：0.1% Triton-X 10010 mL（选用）试剂B封闭缓冲液（封闭用）20 mL试剂C（原装进口分装）已稀释的即用型CD40一抗（2.5ml）试剂D（原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG 1支（浓度1.5 mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50μL+抗体稀释液20ml试剂E HRP-SA复合物1支（浓度1μM，稀释比1:50~1:200）100μL试剂F DAB显色液5ml用户自备试剂：1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，最后定容至1000mL TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH值至6.0，最后定容至1000mL或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0）EDTA·2H2O 186.1g加蒸馏水700mL，用10mM NaOH调pH值至8.0，最后定容至1000Ml3.缓冲甘油封固剂10 mL4.Tween 20 5 mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤（建议方案）：石蜡包埋组织切片3~4μm厚度1.烤片：将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr；2.脱蜡：切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；3.水化：切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85% 乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修复：根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附 1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进入第5步封闭。

参考文献：同型半胱氨酸检测技术的研究进展及评价；谭功军等，实用预防医学， 2010，11（24）：2334-2337
直接法测定Hcy原理
同型半胱氨酸在体内的主要代谢途径： 间接法（胱硫醚法）
数据来源：www.kegg.jp
直接法（水解酶法）
直接法测定Hcy原理
① ATP + L-methionine + H2O = phosphate + diphosphate + S-methyl-L-methionine ② S-methyl-L-methionine + L-homocysteine = L-methionine+S-adenosyl-L-homocysteine ③ S-adenosyl-L-homocysteine + H2O = L-homocysteine + adenosine ④ adenosine + H2O = inosine + NH3 ⑤ 2-oxoglutarate + NH3 + NADH+ H+= L-glutamate + H2O + NAD+

很多胱硫醚循环酶法的试剂其试剂比例也可以完
全够模仿水解酶循环酶法试剂。有一个方法可以
简易的区分两者：
• 胱硫醚循环酶法（简称间接法）：其试剂二（R2）是 淡黄色的！ • 水解酶循环酶法（简称直接法）：其试剂二（R2）是 无色的！
直接法优点
原理设计 1 干扰项目 2
直接法 循环酶法
间接法
3 4
市场选择 试剂性能
直接法优点

原理设计
2、间接法检测准确性及线性范围存在问题

同型半胱氨酸(HCY)测定试剂盒（酶循环法）说明书【产品名称】同型半胱氨酸(HCY)测定试剂盒（酶循环法）【包装规格】a)试剂1：1×18mL试剂2：1×5mLb)试剂1：1×33mL试剂2：1×9mLc)试剂1：2×66mL试剂2：2×18mLd)试剂1：1×66mL试剂2：1×18mL【预期用途】用于体外定量测定人血清中同型半胱氨酸的含量。

高HCY水平可导致动脉血管壁内皮片状脱落，同时刺激平滑肌细胞增生，引起血管损伤，出现类似动脉粥样硬化性病理改变。

测定同型半胱氨酸常用于冠心病、中风、高血压、老年痴呆等疾病的辅助诊断[1]。

【检验原理】同型半胱氨酸被转化为游离型后，通过与共价底物反应，同时产生腺苷。

腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH）转化为NAD+，样本中的同型半胱氨酸的浓度与NADH的变化率成正相关。

【主要组成成分】试剂1主要组分磷酸盐缓冲液100mmol/L S-腺苷甲硫氨酸盐（SAM）0.1mmol/L β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH）0.2mmol/L 三（2羧乙基）磷氯化氢（TCEP）0.5mmol/L α-酮戊二酸 5.0mmol/L 修饰化的HCY甲基转移酶（HMTase） 5.0KU/L 谷氨酸脱氢酶（GLDH）10.0KU/L ProClin300适量试剂2主要组分磷酸盐缓冲液100mmol/L 修饰化的S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）水解酶 3.0KU/L 腺苷脱氨酶（ADA） 5.0KU/L ProClin300适量注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。

【储存条件及有效期】1.试剂原包装在2～8℃储存，有效期为12个月，生产日期、有效期见标签。

2.开口后的试剂在仪器仓中（2～8℃）可稳定30天。

【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200；日立HITACHI7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT008AS型；贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/ AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821；佳能TBA-FX8/TBA-120FR/ TBA-2000FR；罗氏cobas8000c702/cobas8000c701/cobas8000c502；西门子SIEMENS ADVIA1800/ADVIA2400；雅培ABBOTT ARCHITECTc8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200；西森美康SYSMEX BM6010/C；科华KHB卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ ZY-1280；迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/ CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/ CS-1400；迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/ BS-400/BS-430/BS-600/BS-800/BS-2000M；颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480；赛诺迈德SUNMATIK-9050型；雷杜Chemray420；英诺华D280；特康TC6010L；锦瑞GS400；普康6066。

同型半胱氨酸hcy检测的临床 意义
汇报人： 2023-12-26
目录
• 同型半胱氨酸Hcy检测简介 • 同型半胱氨酸Hcy与疾病的关
系 • 同型半胱氨酸Hcy检测的临床
应用 • 同型半胱氨酸Hcy检测的局限
性 • 同型半胱氨酸Hcy检测的展望
01
同型半胱氨酸Hcy检测简介
Hcy检测的定义
同型半胱氨酸（Hcy）是一种含硫氨 基酸，是人体内蛋氨酸代谢的中间产 测同型半胱氨 酸水平可以评估药物治疗的效果，指导医生 调整药物剂量或更换治疗方案。
非药物治疗效果
如饮食调整、补充维生素等非药物治疗方法 对同型半胱氨酸水平的影响，通过检测Hcy 水平可以评估非药物治疗的效果，指导患者
调整生活方式。
04
同型半胱氨酸Hcy检测的局限 性
Hcy与神经系统疾病
总结词
同型半胱氨酸水平升高与某些神经系统疾病风险增加相关。
详细描述
同型半胱氨酸（Hcy）水平升高与某些神经系统疾病风险增加有关，如阿尔茨海默病、 帕金森病和抑郁症等。高Hcy可能通过促进氧化应激、炎症反应和神经元凋亡等机制对 神经系统产生负面影响。然而，关于Hcy与神经系统疾病的关联仍需进一步研究，以便
Hcy检测在临床实践中的推广
普及与推广
通过宣传和教育，提高临床医生对Hcy检测重要性的 认识，促进其在日常诊疗中的应用。
标准化与规范
制定统一的Hcy检测标准和方法，确保检测结果的准 确性和可比性。
临床决策支持
Hcy检测结果将作为临床决策的重要依据，指导疾病 的预防、诊断、治疗和预后评估。
THANKS
临床应用的局限性
适用人群的局限性
同型半胱氨酸Hcy检测主要适用 于心血管疾病等慢性病的风险评 估，对于其他疾病的相关性尚不 明确。