(精品)结核分枝杆菌与实验室生物安全

二级生物安全实验室涉及主要菌种及样本
二级生物安全实验室是研究和操作较高级别生物材料的实验室，拥有更严格的安全措施和操作规范。

在二级生物安全实验室中，主要涉及以下菌种和样本：
1. 流感病毒：包括甲型流感病毒和乙型流感病毒等。

这些病毒是引起流感的主要病原体。

2. 结核分枝杆菌：结核分枝杆菌是引起肺结核的病原体，具有较高的传染性和致病性。

3. 空肠弯曲菌：空肠弯曲菌是引起食物中毒和胃肠炎的主要病原微生物之一。

4. 传染性单核细胞增多症病毒：也称为巨细胞病毒，是一种引起多种感染性疾病的病原体。

5. 慢性乙型肝炎病毒：这是一种引起慢性乙型肝炎的病毒，具有较高的传染性和病原性。

6. 肺炎支原体：肺炎支原体是引起肺炎的主要病原菌之一，可引起呼吸道感染。

在二级生物安全实验室中，使用以上菌种和样本时要严格遵守操作规程，确保实验过程的安全性和有效性。

投稿邮箱：sjzxyx88@·医学检验·（下转第114页）0 引言由于分枝杆菌有较强的传染性，操作结核分枝杆菌的实验室人员结核病发病率比其他人群高3倍，因此在进行分枝杆菌分离培养时实验室安全问题已经成为结核病防治机构实验室必须关注的问题[1]。

就更好地保障实验室的生物安全问题，本人根据多年的工作经验，总结一些粗浅的看法。

分枝杆菌分离培养实验室的生物安全工作的开展，应严格遵循科学合理、安全第一、严格管理、远离病原、预防为主、简便易行的原则[2]，具体实施如下。

1 实验室要配备必须的安全设施（1）有独立的实验室，室内有上下水，分区与布局符合生物安全防护的基本要求；（2）实验室出口处应设专用洗手池，应设紧急洗眼设施；（3）实验室的墙壁、天花板和地面要平整，易清洁、不渗水、耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防 滑；（4）实验室门应带锁可自动关闭，并有可视窗；（5）实验室应设实验操作间和准备间，具有足够的空间进行实验和放置物品；（6）实验室所在建筑内应配备高压蒸气灭菌器，并按期检查和验证，以保证符合要求；（7）实验室内应配备Ⅱ级生物安全柜，紫外线灯，废物桶，感应水龙头；（8）实验室必需有可靠的电力供应和应急照明，重要设备如生物安全柜、培养箱、冰箱等宜用设备电源；（9）实验室出入口应有在黑暗中明确辨认的标识。

2 要做好个人防护实验室工作人员要配备专用防护服，进入实验室应使用专用防护服，操作时应戴一次性N95口罩、一次性帽子、鞋套和一次性乳胶手套。

3 操作环节中严格遵守相关操作规程实验前首先要用生物安全柜内及实验室内紫外线照射1h，工作人员进入实验室前必须穿好防护服，戴上口罩、帽子、手套、鞋套，并检查有无破损，女检验员头发装束在帽内；操作人员在操作时应严格遵守实验室安全操作规程和标准化操作程序（SOP）；操作过程中警惕分枝杆菌气溶胶的产生，禁止一切与实验无关的活动，保证聚精会神完成操作，实验过程中禁止吸烟、饮食及用嘴湿润铅笔或标签等，也不要以手抚摩头、面部等。

病理实验室建设中的生物安全级别与操作规范在病理实验室建设中，生物安全级别和操作规范是非常重要的考虑因素。

这些措施可以保护实验室工作人员和环境免受病原体和有害物质的影响。

本文将详细探讨在病理实验室建设中应采取的生物安全级别和操作规范。

1. 生物安全级别生物安全级别（BioSafety Level，简称BSL）是根据病原体的危险性和传播途径来划分不同级别的。

根据世界卫生组织（WHO）和美国疾病控制与预防中心（CDC）的指南，通常将实验室分为以下四个生物安全级别：BSL-1级实验室适用于处理低危害的微生物，如大肠杆菌等。

这些实验室通常拥有基本的实验室设施，如安全柜和生物废弃物处理设备。

BSL-2级实验室用于处理中等风险的病原体，如结核分枝杆菌和流感病毒。

该级别实验室要求工作人员使用个人防护设备，如实验手套和防护眼镜，并在操作中遵循严格的清洁和消毒程序。

BSL-3级实验室适用于处理高危害的病原体，如沙门氏菌和艾滋病病毒。

这些实验室需要具备更高级别的生物安全设施，如病原体实验室柜和负压空气系统，以最大程度地降低病原体的泄露风险。

BSL-4级实验室只用于处理最严重的致命病原体，如埃博拉病毒。

这些实验室需要最高级别的生物安全设施和严格的工作程序，以确保工作人员和环境的最大安全。

在病理实验室建设中，应根据实验室工作的特性和所处理病原体的危险性选择适当的生物安全级别。

建议在项目初期就进行合理的风险评估，并咨询专业机构的建议。

2. 操作规范除了生物安全级别，病理实验室还应制定严格的操作规范，以确保实验室工作的安全和可靠性。

以下是一些常见的操作规范：个人防护措施：实验室工作人员必须穿戴适当的个人防护装备，如实验服、手套、防护眼镜和口罩等。

这些措施旨在减少病原体对皮肤和黏膜的接触，防止可能的感染。

实验室设施和设备：病理实验室应配备必要的实验设备，如生物安全柜、负压空气系统和自动化实验台。

这些设备有助于最小化病原体的扩散和泄露。

生物实验室安全培训试题选择题1、乙型肝炎病毒，按危害程度分类，属于第几类病原微生物?( )A、第一类B、第二类C、第三类D、第四类2、结核分枝杆菌，按危害程度分类，属于第几类病原微生物？ ( ）A、第一类B、第二类C、第三类D、第四类3、根据所操作的生物因子的危害程度和采取的防护措施，将生物安全的防护水平分为四级,哪一级的防护水平最低？（）A、I 级B、II级C、III级D、IV级4、下列不属于实验室一级防护屏障的是： ( )A、生物安全柜 B 、防护服 C、口罩D、缓冲间5、下列哪项措施不是减少气溶胶产生的有效方法：（）A、规范操作B、戴眼罩C、加强人员培训D、改进操作技术6、二级生物安全实验室必须配备的设备是 ( ）A、生物安全柜、培养箱B、生物安全柜和水浴箱C、生物安全柜和高压灭菌器D、离心机和高压灭菌器7、PCR实验室要求严格分区，一般分为以下四区（）A、主实验区、样本置备区、产物扩增区、产物分析区B、试剂准备区、样本置备区、产物扩增区、产物分析区C、主实验区、样本置备区、产物扩增区、试剂准备区D、主实验区、试剂准备区、产物扩增区、产物分析区8、作为甲类传染病的霍乱进行大量活菌的实验操作应该在哪种级别的实验室？（）A、BSL- 1B、BSL—2C、BSL-3D、BSL—49、实验记录本的封面被细菌污染,适宜的消毒方法是: （）A、干烤B、高压蒸汽灭菌法C、75％酒精浸泡D、紫外线照射10、脱卸个人防护装备的顺序是( )A、外层手套→防护眼镜→防护服→口罩帽子→内层手套B、防护眼镜→外层手套→口罩帽子→防护服→内层手套C、防护服→防护眼镜→口罩帽子→外层手套→内层手套D、口罩帽子→外层手套→防护眼镜→内层手套→防护服判断题1、生物安全Ⅱ级实验室的建造、使用和管理无需参照生物安全Ⅰ级实验室的有关要求.( )2、在生物安全Ⅱ级实验室中工作人员应当穿工作服，戴防护眼镜。

（√）3、任何单位和个人都有责任对违反生物安全规定的问题提出批评和建议。

h37rv标准菌株实验室等级
H37Rv是结核分枝杆菌的一个常用菌株，它最初是从一个患有肺结核的患者中分离出来的。

在实验室中，结核分枝杆菌通常被分为三个生物安全等级，BSL-2、BSL-3和BSL-4，具体的实验室等级取决于研究人员处理的具体菌株以及实验室内的安全措施。

对于H37Rv这种常见的结核分枝杆菌菌株，一般情况下可以在BSL-2级别的实验室中处理。

BSL-2级别的实验室要求具有较高的生物安全标准，包括实验室内部设施的要求、操作规程、个人防护装备等，以确保研究人员和周围环境的安全。

然而，对于某些特定实验操作或者研究项目，可能需要将结核分枝杆菌处理在更高级别的实验室，比如BSL-3级别。

BSL-3级别的实验室通常用于处理能够引起严重疾病的病原体，要求更严格的操作规程和实验室设施，以及更高级别的个人防护装备。

总的来说，对于H37Rv这种常见的结核分枝杆菌菌株，一般可以在BSL-2级别的实验室中进行处理。

但具体的实验室等级还是要根据研究项目的具体要求和实验室的安全标准来确定。

病原微生物实验室的了解（生物安全）及安全防护SICOLAB病原微生物学是一门重要的以实验为基础的基础医学课程，和细胞生物学，免疫学，分子生物学等学科都有交汇，由于在工作过程中会接触到许多致病微生物，为了安全操作病原微生物，所以我们除了掌握必要的科研素质，基本操作技能的同时，特别需要学习实验室的生物安全.1实验室的生物安全分级世界卫生组织（WHO）早就认识到安全,特别是生物安全,是一个重要的国际性问题,因此早在1983年就出版了《实验室生物安全手册》（Laborato—ry Biosafety Manual）第1版。

该手册倡导各国接受和执行生物安全的基本概念，并鼓励针对本国实验室如何安全处理致病微生物制订操作规范。

自1983年以来，已经有很多国家利用该手册来指导本国的病原微生物实验室的生物安全。

世界卫生组织根据操作微生物的危险度等级、生物因子、生物安全水平等将实验室分四级：基础实验室—-—一级生物安全水平、基础实验室——-二级生物安全水平、防护实验室———三级生物安全水平和最高防护实验室——-四级生物安全水平。

而我国生物安全分级则相反,一级最强，二级次之，四级最末。

一级生物安全水平实验室一般没有或存在极低的个体和群体危险,不太可能引起人或动物致病的微生物，供基础的教学、科研使用，房间必须具备基本的开放实验台，只能进行普通的实验，如细胞培养室（必须具有独自的房间，避免交叉污染）、分子生物学实验室等.二级生物安全水平实验室个体危险中等,群体危险低，病原体能够对人或动物致病,但对实验室工作人员、社区、牲畜或环境不易导致严重危害。

实验室必标明：生物危害安全标志、化学毒物危害标注、放射性危害标志。

进入实验室必须做好个人防护，操作致病微生物必须有生物安全柜。

三级生物安全水平个体危险高，群体危险低，病原体通常能引起人或动物的严重疾病，但一般不会发生感染个体向其他个体的传播。

要求实验室必须有严格的管理制度，实验室门口设置门禁，实验室系统必须保证负压环境，定向气流，出口淋浴以及污染物品的特殊处理。

抗酸杆菌痰涂片检验的实验室生物安全抗酸杆菌痰涂片检验作为对传染性肺结核的诊断手段比X线诊断准确性高；作为实验方法，技术相对简单，容易标准化和完成操作；其投入设备少、成本低；从收到标本到报告结果的时间短，能够及时、准确地评价涂阳患者的治疗效果，被我国设为结核病控制项目的主要实验室检验方法。

但结核分枝杆菌（抗酸杆菌）为二类高致病性病原菌，其自身的生物学特性使其容易在实验室造成对工作人员及相关人员的感染和环境的污染，形成对公众的伤害，操作结核分枝杆菌的实验室人员结核病发病率比其他人群高三倍，因此抗酸杆菌痰涂片检验的实验室安全问题已经成为当前结核病防治机构实验室必须关注的问题目前，在市、县、乡级结核病防治机构没有建立BSL-2实验室的情况下，就更好地保障实验室的生物安全问题，本人根据多年的工作经验，谈一些粗浅的看法。

实验室的生物安全工作的开展应遵循科学合理、安全首位、软件在先、严格管理、远离病原、预防为主、使用方便、厉行节约的原则，具体实施如下：实验室首先要配备必须的安全设施：1）有独立的实验室，室内有上下水，通风良好；2）室内设通风柜、高压灭菌器、紫外线灯、废物桶、感应水龙头；3）标本的收集、涂片、染色、镜检、登记和涂片的储存应在各自独立的区域；4）设有独立生物咳痰室，内设紫外线灯（按1.5W每立方米计算），每个病人咳痰后必须打开紫外线灯灭菌，如果没有此设施，要叮嘱病人在远离人群的开放空间留取标本，防止肺结核病人咳漱产生的结核杆菌气溶胶造成对人的传播及对环境的污染。

其次要做好个人防护，实验室工作人员要配备一次性聚氯乙烯手套、一次性帽子、口罩、鞋套和防护服。

第三要使用以下消毒剂：5%的苯酚溶液、75%的酒精、甲醛、2%的戊二醛及2%的乙醛溶液。

在操作环节上，严格遵守以下方法和措施：实验前首先要用紫外线灯将操作台面及室内照射一小时，工作人员进入实验室前必须穿好防护服、戴上口罩、手套、鞋套，病检查有无破损；女检验员长发束在帽内；操作人员在操作时应严格遵守实验室安全操作规程和标准化操作程序（SOP)；在实验过程中，禁止一切与实验无关的活动，保证集中精力完成操作；在操作过程中，要警惕分枝杆菌气溶胶的产生，涂片操作要小心谨慎，动作轻缓，固定和染色操作时产生气溶胶的几率较大，Allen Bw实验结果表明，样品热固定不能杀灭所有涂片标本中的结核杆菌，若涂片长时间暴露在高温中，残留活菌减少，并仅见于涂片厚的部分，从而提高热固定时痰液对细菌的保护作用，新鲜痰液粘滞度越大，加热固定时对细菌的保护作用越强，为避免此风险，操作人员要做到双手伸入操作台操作，面部通过通风柜的玻璃与操作台面隔开（在操作过程只利用通风柜的屏障功能）；完成涂片后立即染色，若不能及时染色涂片，应浸泡在2%乙醛溶液中，不可以将涂片暴露在空气中，涂片在空气中暴露的时间越长，感染的机会越大，这是操作者尤其需要注意的问题；另外涂片不能涂抹太厚尤其是新鲜痰液；经过染色的结核分枝杆菌已不能存活。

微生物安全等级分类四级
微生物安全等级分类四级（Biosafety Level 4, BSL-4）是最高级别的生物安全实验室，用于处理最危险的病原体，包括那些对人类健康和环境造成重大威胁的病原体。

BSL-4实验室通常采用高度密闭的设计和高级别的防护措施，以防止病原体的泄露和传播。

实验室内的工作人员必须穿着特殊的防护服和手套，并在实验室内采取严格的卫生和安全措施，以确保实验室内的安全。

BSL-4实验室通常用于研究和处理以下病原体：
1. 高度传染性的病原体，如埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉萨热病毒等。

2. 能够引起严重疾病的病原体，如结核分枝杆菌、鼠疫杆菌等。

3. 其他对人类和环境造成严重威胁的病原体，如霍乱弧菌、沙门氏菌等。

BSL-4实验室的建设和运行需要高度的技术和管理支持，以确保实验室内的安全和有效的生物安全措施。

一、实验室生物安全实验室环境安全：根据我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《人间传染的病原微生物名录》和《医疗机构临床实验室管理办法》的规定，结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级（Laboratory Biosafety Level 3）的环境中进行；样本检测（包括涂片、显微镜观察、样本的病原菌分离纯化、药物敏感性试验、生化鉴定、免疫学实验、PCR核酸提取等初步检测活动），可以在符合生物安全二级（Laboratory Biosafety Level 2）的环境中进行。

实验室所用设施、设备和材料（含防护屏障）均应符合相关的标准和要求。

实验室操作安全：由具有相关专业知识和操作技能的工作人员进行实验室操作，实验人员应该认真负责，格按照标准化、规化的操作程序进行各项实验室操作。

菌种或样本运输安全：为保障人体健康和公共卫生安全，在运输可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本时，须按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求进行包装、运输、操作、保藏和管理。

废弃物处理安全：为防止疾病传播，保护环境，保障人体健康，医疗废弃物的处理应格按照《中华人民国传染病防治法》和《中华人民国固体废物污染环境防治法》，以及《医疗废物管理条例》的相关规定妥善处理。

（一）痰涂片镜检实验室基本要求1.实验室应分区（痰涂片染色区域和读片镜检区域），布局应符合生物安全二级防护的要求。

2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。

3.个人防护，在实验室工作时，应穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。

4.实验室墙壁、天花板和地板应易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。

5.实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。

6.实验室应保证操作时的照明，避免不必要的反光和闪光。

医院实验室生物安全考核试题一、单选题（每题5分，共50分）1.国家根据实验室对病原微生物的生物安全防护水平，并依照实验室生物安全国家标准的规定，将实验室分为四级，其中生物安全防护水平最高的是：（）一级二级三级四级(正确答案)2.根据危害程度将病原微生物分为4类，危险程度最高的是：（）A.第一类(正确答案)B.第二类C.第三类D.第四类3.二级生物安全实验室必须配备的设备是（）A.生物安全柜和培养箱B.洗眼装置和超净工作台C.生物安全柜和消毒灭菌设备（如高压灭菌器）(正确答案)D.离心机和生物安全柜4.我国第十三届全国人民代表大会常务委员会第二十二次会议通过且于2021年4月1 5日起施行的是：（）中华人民共和国生物安全法(正确答案)病原微生物实验室生物安全管理条例医疗废物管理条例危险化学品安全管理条例5.艾滋病毒抗体检测所需最低的生物安全实验室级别为（）A.BSL-1B.BSL-2(正确答案)C.BSL-3D.BSL-46.下列哪类属于病理性医疗废物（）A.废弃的血液标本B.医学影像科废弃的化学试剂C.外科手术切除的患者组织标本(正确答案)D.医用针头7.盛装的医疗废物达到包装物或者容器的（）时，应当使用有效的封口方式，使包装物或者容器的封口紧实、严密。

A.1/2B.2/3C.3/4(正确答案)D.4/58. 用过的针头，应该放入：（）A.医疗废物专用包装袋B.锐器盒(正确答案)C.直接放入周转箱D.三种都可以9.剧毒化学品以及储存数量构成重大危险源的其他危险化学品，应当在专用仓库内单独存放，并实行以下哪种制度：（）双人收发、双人保管(正确答案)单人收发、双人保管双人收发、单人保管单人收发、单人保管10.既能保护操作者又能保护操作对象的是：（）通风橱超净工作台Ⅱ级生物安全柜(正确答案)Ⅰ级生物安全柜二、多选题（至少有一个正确选项，每题5分，共20分）1.医疗废物分类：（）A.感染性废物(正确答案)B.病理性废物(正确答案)C.损伤性废物(正确答案)D.药物性废物(正确答案)E.化学性废物(正确答案)2.以下哪些属于感染性废弃物：（）使用后废弃的一次性使用医疗器械(正确答案)病原微生物实验室废弃的病原体培养基、标本(正确答案)隔离传染病患者或者疑似传染病患者产生的废弃物(正确答案)废弃的血液制品居民日常生活中废弃的一次性口罩3.以下哪些属于二类病原微生物：（）艾滋病毒(正确答案)结核分枝杆菌(正确答案)霍乱弧菌(正确答案)甲型流感病毒埃博拉病毒4.以下属于危险化学品的是：（）甲醇(正确答案)异丙醇(正确答案)甲醛(正确答案)无水乙醇(正确答案)苯酚(正确答案)三、判断题（每题5分，共30分）1.超净工作台仅保护样品安全而不保护操作者安全。