培养基模拟灌装试验.ppt

关键因素三: 培养基及培养条件 (3/3)
• 培养温度 全部样品应在20-35℃(±2.5℃)下培养14天。通常 在 20-25℃下 培养 7 天，然后在30-35℃下培养 7 天；或者在30-35℃培养 7 天后，再转移到 2025℃培养 7 天。 • 原则：选择的温度适宜那些从环境中分离的微生 物或生物负荷中的微生物的培养。 • 关于培养条件的选择，补充一个没有形成共识的 建议，在培养过程的前半个周期，将所有产品进 行倒置后培养；然后在剩余时间内，将产品恢复 直立位置后进行培养。

关键因素八:灌装的持续时间
• 通常情况，培养基灌装的时间应该足够长，能够 包括所有的必需的干扰、生产中断，包括正常的 无菌操作如开始前的安装、重量或体积的调整、 改变设备或手动维修等，还包括更衣、暂停、换 班等，持续时间还应能反映出潜在的人员疲劳。 • 对于非常大的批量或较长的生产过程，通常使用 一些空白样品（空的或者灌水）以维持模拟试验 的动态环境。这些技术可以应用于持续多个工作 日的工艺验证，用于验证可以批准的最长的生产 周期。

关键因素二: 试验的次数和频率
• 培养基模拟试验的初始验证，至少需要成功的连 续进行 3 次独立的模拟试验（建议在不同的工作 日进行试验）。 • 首次验证后，培养基模拟试验通常每年进行2次， 每次进行1批即可。 • 当生产线发生变更，并且经过评估可能对无菌生 产工艺有潜在危险时，应当进行额外的培养基灌 装试验。

培养基灌装方案
• 需要考虑的关键因素 : • 起始步骤 • 试验的次数和频率 • 培养基及培养条件 • 灌装数量 • 容器体积 • 灌装体积 • 灌装速度

培养基灌装方案
• • • • • • • • 灌装过程的持续时间 人员和工作班次 环境监测措施 干预措施 容器的检查 培养方法 可接受标准 污染调查

如果手工操作（灌装），每条生产线的员工都应该参加开始的三次验证；在 再验证（每6个月1次）过程中，至少有一条生产线的员工参加。
培养基灌装方案
关键因素: 环境监测措施
在许多法规和制药规范中，都提出了对微生物的要求。 在试验过程中，可以使用主动采样或被动采样的方法进行空气采样；表面采 样最好在无菌操作结束后进行。另外还应该对操作人员进行监测。 在培养灌装过程中，微生物监测（空气、表面、人员）和悬浮粒子监测应该 按照各自的操作规程有效的进行。 有时候，取样点的数量可以较日常监测适当增加。
必须考虑可能采取那些干预措施 ?
模拟试验: 液体无菌灌装生产线
压盖机
压塞机
清洗设备
隧道烘箱
灌装设备
模拟试验: 培养基灌装方案
需要考虑的关键因素 :
•
试验的数量和频率
•
培养基 (产品的替代品)
•
灌装的数量
•
容器 (玻璃瓶) 体积
•
灌装体积
•
生产速度(或 灌装速度)
•
灌装过程的持续时间
•
工作班次
•
监测措施
•
干预措施 –常规的和非常规的
•
培养方法
•
可接受标准
模拟试验: 培养基灌装方案
培养基灌装方案
关键因素: 试验的次数和频率
培养基模拟试验的初始验证，至少需要成功的连续进行 3 次独立的模 拟试验（建议在不同的工作日进行试验）。
首次验证后，培养基模拟试验通常每年进行2次。
当生产线发生变更，并且经过评估可能对无菌生产工艺有潜在危险时， 应当进行额外的培养基灌装试验。
培养基灌装试验方案
培训目的
评估无菌生产模拟试验（培养基灌装或肉汤灌装） 了解在培养基灌装试验方案设计过程中的关键点，以符合

最差条件---在SOP范围内，由工艺参数的上、下限和相
关因素组成的一个或一系列条件。与理想条件相比时，最 差条件使产品或者生产工艺失败的几率为最大，但这类最 差条件不一定必然导致产品或工艺的不合格。
.
17
培养基灌装设计
3.1培养基和培养温度的选择 3.2灌装装量及规格的选择 3.3灌装的持续时间 3.4灌装速度与瓶子规格 3.5人员数量
3.6人为干预
.
18
培养基灌装设计
3.7剔废原则 3.8储存时间 3.9环境监测及取样 3.10验证的频率 3.11抑菌作用的避免
.
19
3.1培养基和培养温度的选择
➢ 培养基的选择 ✓适应广谱微生物生长，包括细菌和真菌 ✓较好的澄明度，较小的粘度 ✓易于除菌过滤 ✓常用培养基：大豆胰蛋白肉汤（TSB） ✓厌氧培养基仅在特殊情况下使用
评价结果，确定实际生产中（如灌装前的调试、加入无菌原辅材料、无菌连接、 灌装和密封）产品污染的可能性。
.
16
如何进行无菌工艺模拟？
➢ 在培养基灌装设计中，工艺条件的选择应选取合理的 “最差条件”，用最差条件来对工艺流程、设备和整个 体系进行挑战。最差条件是指在工艺允许范围内正常生 产时可能遇到的最差情况，并不包括由于偏差引起的超 出工艺要求的特殊情况。如果在最差条件下能获得好结 果，说明在比最差情况要好的实际生产中，无菌保证的 可靠性更有保证。
容器
隔离柜
.
14
无菌工艺产品的无菌保证
内源性的影响因素
◦ 系统 ◦ 设备 ◦ 工艺过程 ◦ 物料和中间体的质量
外源性的影响因素
◦ 人员
.
15
工艺模拟试验的通常流程
将培养基暴露于设备、容器胶塞密封系统的表面和关键环境条件中，并模拟实际 生产完成工艺操作。

FDA CFR Sec. 211.113 Control of microbiological contamination
3
法规及相关指南（二）
药品GMP指南•无菌药品：12 无菌工艺模拟试验
PDA technical report NO.22 Process simulation testing for aseptically filled products, 2011
7
培养基模拟灌装流程-方案
培养基的选择
一般原则：选择适合绝大多数微生物生长的 胰蛋白大豆肉汤培养基（TSB）；
2015-06-24 特殊情况：硫乙醇酸流体培养基（FTM）
（1）无菌工艺需要在一个严格无氧环境中进行； （2）环境监测或无菌检查中发现厌氧菌的存在； （3）厌氧环境和FTM促生长的研究。
鉴定
试验
调查
微生物 限度
无菌 检查
溯源
环境 监测
24
45
40 39
35
34
32
30
25
24
菌种统计
20
15 12 10 10
10 7 6
2015-06-24
5
4 33
2222 2
11111 111111 111111 111
0
系列1
藤黄 微球
菌
科式 葡萄 球菌
人葡 萄球
菌
克氏 葡萄 球菌
萎缩 芽孢 杆菌
H
48h
48h
H
20人
20人
M
150-400
视情况 设置
M
16h
16h
12
培养基模拟灌装流程-方案
干扰动作的设计原则： 识别干扰-干扰汇总表 干扰分类：计划性干预和非计划性干预

制定环境监测计划，综合形成书面方案
如何制定环境监测计划 其他一些因素的考虑 方案的批准
制定培养基灌装过程的微生物负荷的监控计 划, 便于偏差调查
21
环境监控方案
应用风险评估的方法确定关键监控点
给产品构成最大风险的位置，如产品暴露位置 、直接接触表面
人员
按实际需要选择合适的监测方法
正常生产溶液ｐＨ 值偏高或偏低
配制好的溶液在低 温下保存
酸性或碱性环境 不利于微生物生 长 低温会抑制微生 物生长
控制方法
将配制培养基的注射用 水冷却到室温，在室温 下（20-25℃）配制
培养基的pH调整到适合 微生物生长的范围
培养基在储存容器中常 温保存
27
抑菌因素影响分析
抑菌影响分析---灌装
ห้องสมุดไป่ตู้空气浮游菌
沉降菌
接触碟/棉签法
合理制定控制标准

体现全面监控、动态监控 22
至冻干机
胶塞漏斗 灌装站
风险点 - 产品暴露区域 瓶子裸露区 灌装站区域 胶塞裸露区
干热隧 道
23
胶塞漏斗 灌装站
干热隧
例如：
道
在左、中、右各设置一个连续粒子监测点
在灌装站左右设置两个浮游菌取样点
在左、中、右各设置一个沉降菌取样点
34
污染调查举例
（9）微生物鉴定结果，至少要鉴定到属。有条件的话可 以鉴定到种以帮助确定来源
（10）清洁消毒流程的执行情况 （11）设备仪器的校验结果 （12）生产前后产品过滤器的泄露测试数据 （13）生产过程发生的偏差 （14）设备的CIP/SIP的情况 （15）培养基的培养研究 （16）生产线和培养基的历史数据分析
最小的瓶子规格最快的速度单一规格的瓶子正常或略慢速度1011最长允许的灌装时间如考察操作人员疲劳操作风险有代表性的正常性操作活动的数量种类和复杂性非常规的干扰和各类突发事件如维修灌装中断等无菌设备的装配最差条件挑战12具有代表性数量的无菌操作如添加容器密封件无菌原料成分或者转移各个工艺步骤的最长持续时间挑战最差条件挑战13应当根据产品的剂型培养基的选择性澄清度浓度和灭菌的适用性选择培养基tsb或ftm澄清某些情况下应该考虑使用厌氧性培养基应该进行促菌生长实验标准菌株环境分离菌培养基选择14应当根据产品的剂型培养基的选择性澄清度浓度和灭菌的适用性选择培养基tsb或ftm澄清某些情况下应该考虑使用厌氧性培养基应该进行促菌生长实验标准菌株环境分离菌培养基选择15在2025条件下培养7天培养真菌3035下7天培养细菌无缺损的瓶均应该培养任何不作培养的瓶子都应说明不作培养的原因要进行物料平衡计算培养及读数培养基灌装的先决条件洁净室设备的验证状态确认经过重大维修或变更后进行了生产线的运行确认或性能确认参与培养基灌装的人员接受了培训无菌操作洁净室行为培养基灌装方案明文规定的工艺过程及最差条件16培养基灌装方案设计分析工艺流程确定风险因素绘制流程图通过分析确定可能造成产品污染的风险因素灌装时间干扰活动时间次数种类包括停机维修调整冻干过程设备装配如灌装前的装机人员数量及其活动无菌操作如各种无菌部件操作产品转移不同班次轮换着装更换生产中出现的无菌管道连接无菌样品取样灌装速度重量检查容器密闭性大小种类与设备匹配程度某些特殊操作如进行清洁前的操作17灌装过程流程图灌装部件装配管道正式灌装灌装量检查添加胶塞处理倒瓶人员进出班次轮换设置灌装参数停机维修环境监测收集转移暂存压盖人员操作人员操作时间时间风险因素灌装速度灌装时间长短干扰操作及次数人员数量停机操作

消费人员的技艺、所接受的培训及其任务态度是到达上述目 标的关键要素
3|
国家大容量注射剂工程技术研讨中心 ;
无菌特性组成
容器密封 质空量调保系证统 质公量用控设制 备 消费设备
质量授权人
|
过程控制
4|
无菌药品
清洁消毒 质量保证 更资衣质确职认责 人人员员卫操生作 环境监控
文件体系
物料质量
国家大容量注射剂工程技术研讨中心 ;
应根据产品的剂型以及培育基的选择性、廓清度、浓度 和灭菌的适用性选择培育基。应尽能够模拟常规的无菌消费工
艺，8 |包括一切对产品的无菌特性有影响的关键操国作; ，家及大消费容中量注射剂工程技术研讨中心
2020版GMP附录一：无菌制剂
培育基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。批量较小的 产品，培育基灌装的数量应至少等于产品的批量。培育基模拟灌装 实验的目的是零污染，应遵照以下要求：
6、实验用培育基和培育温度的选择
培育基选择 顺应广谱微生物生长，包括细菌和真菌 较好的澄明度，较小的粘度 液体培育基易于除菌过滤 常用培育基：3％大豆胰蛋白肉汤〔TSB〕
培育厌温氧培度育基仅在特殊情| 况下运用〔FTM〕 2干0粉-3工5艺℃：具，备目与干的粉值产品±流2动.性5℃能类，似不的无少菌T于SB1干4粉天或；如选择两个温度， 无那菌么抚慰每剂一粉末温〔度PEG下,乳至糖,少甘露培醇育…〕7天，从低温开场。
… 培育基灌装验证是对设备、环境以及人员操作的
一种批系统量验〔证,瓶是判〕别无菌保证程度的3关00键0手段… 4750
允许染菌的数量〔瓶〕 0
≤1
6300 7760
≤2
≤3
10 |
国家大容量注射剂工程技术研讨中心 ;

自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
1、不要轻言放弃，否则对不起自己。
2、要冒一次险!整个生命就是一场冒险。走得最远的人，常是愿意 去做，并愿意去冒险的人。“稳妥”之船，从未能从岸边走远。-戴尔．卡耐基。
梦 境
3、人生就像一杯没有加糖的咖啡，喝起来是苦涩的，回味起来却有 久久不会退去的余香。
无菌生产工艺验证—培养基模拟灌装试验 4、守业的最好办法就是不断的发展。 5、当爱不能完美，我宁愿选择无悔，不管来生多么美丽，我不愿失 去今生对你的记忆，我不求天长地久的美景，我只要生生世世的轮 回里有你。 浅析

19
• 无菌条件下的运输、转移次数（如容器转移、 加胶塞、加无菌原辅材料） • 灌装过程中的称重 • 微生物污染水平测试 • 必要的书面规程说明，如无菌操作相关的规定 ，允许进行清场的条件
20
A、培养基选择 • 如无特殊要求，所用培养基能够支持微生物生长的菌谱 范围要宽，应能促进革兰氏阳性、革兰氏阴性、酵母菌和霉 菌的生长。 • 推荐使用大豆消化酪素琼脂培养基(SCD) ，以及大豆胰蛋白 胨肉汤(TSB)。 • 干粉工艺：具备与干粉产品流动性能相似的无菌TSB干粉 或无菌安慰剂粉末（乳糖,甘露醇…) • 如果产品在缺氧条件、通常在氮气保护下灌装时，需要 使用厌氧培养基:液体硫乙醇酸盐培养基(FTM)。
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环境监控方案 • 应用风险评估的方法确定关键监控点 – 给产品构成最大风险的位置，如产品暴露位置 、直接接触表面 – 人员 • 按实际需要选择合适的监测方法 – 空气浮游菌 – 沉降菌 – 接触碟/棉签法 • 合理制定控制标准 • 体现全面监控、动态监控
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胶塞漏斗 灌装站 至冻干机
风险点 - 产品暴露区域 瓶子裸露区 灌装站区域 胶塞裸露区
27
灌装数量
• 例1：某冻干产品，冻干机容量为30,000瓶，分布 在九个层板上，请问：较合理的一次培养基灌装 数量为多少？如是初始验证，如何考虑不同层板 的分布？
• 9000瓶。层板1、4、7，2、5、8，3、6、9，分三 次三层均匀分布。
28
• 例2：某冻干产品为人工灌装，共有三个操作人员 具有无菌灌装资格，批量为3000瓶，请问：此种 情况较为合理的一次培养基灌装数量为多少？
39
I、培养基灌装过程记录
• 文件记录：
• •
过程控制检测和实验室检测结果

5. 法规和指南
为编写本方案，参考了以下法规和指南：
1. 法规 ✓ 国பைடு நூலகம்食品药品监督管理总局（CFDA ），中国，药品生产质量管理规范（2010年修订）， 2011年03月
2. 指南 ✓ EudraLex 第四卷 欧盟药品生产质量管理规范指南医药产品人用及兽用，2008年11月 ✓ 美国食品药品监督管理局，美国，美国FDA行业指南—无菌工艺所生产的无菌药品—现行药 品生产质量管理规范， 2004年9月29日 ✓ 国家药典委员会，中国，中国药典（ChP）2015年版
4. 职责
1. 生产部职责 ✓ 方案编写 ✓ 报告编写 ✓ 方案的执行
2. 质量保证部职责 ✓ 审核方案 ✓ 保证在执行前所有的先决条件得到满足 ✓ 方案监督执行 ✓ 审核报告
3. 质量控制部职责 ✓ 检测各项指标是否合格
4. 设备部、物资管理部门各职责 ✓ 对方案中的相关项目进行协助确认
5. 质量管理负责人职责 ✓ 批准方案 ✓ 批准报告
为编写本方案，参考了以下文件： 文件名称
文件编号
版本
5
书山有 路
6
7. 生产工艺描述 1. 工艺流程图
书山有 路
后超滤 除菌过滤
C 级洁净区 A/B 级洁净区 A/C 级洁净区
分装
轧盖
7
7.2. 模拟灌装验证流程图 模拟灌装前的准备工作
（设备、环境、器具、清洗、清
洁、消毒、灭菌的确认）
模拟灌装 环境监测
在工艺模拟过程中，需要对配制好的培养基和灭菌后的培养基进行无菌和促生长能力测试， 以 确认工艺模拟使用的培养基适合微生物的生长。
11. 密闭和开放系统 本工艺中包含在“密闭”和“开放”系统下的两种操作。有无菌物料暴露的“开放”环节采用 A 级送风保护。对开放系统下的操作判定为高风险，每次都要在验证中进行确认；对密闭 系

EU GMP Annex1 无菌药品的生产
Validation of a|septic processin snhgould include a process simulation test using a nutrient t medium (media fill).
7|
国家大容量注射剂工程技术研究中心
PDA 关于培养基模拟灌装的技术报告
– PDA Technical Repo ort No. 28, Process Simulation Testing orfoSterile Bulk Pharmaceutical Chem micals, Revised Supplement 2019
– PDA Technical Repo ort No.22 2019, Process SimulationfoT| esting or Aseptically Filled Products ）
8|
国家大容量注射剂工程技术研究中心
2019版GMP附录一：无菌制剂
培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。批量较小的 产品，培养基灌装的数量应至少等于产品的批量。培养基模拟灌装 试验的目标是零污染，应遵循以下要求：
（1）灌装数量少于5000支时，不得检出污染品； （2）灌装数量在5000至10000支时：
|
员，保证每年至少参加一次成功的培养基灌装试验。
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
变更后培养基模拟灌装试验
变更及其评估
对产品或生产线的每一种变更，均应根据书面的变更控 制系统进行评估 。
如果通过评估认为此项变更会影响到无菌生产工艺产品 的无菌保证水平，则需要进行增补性培养基模拟灌装实 验。
比如，设施或设备的变化、生产线配置的变动、人员重