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酒曲根霉的纯化筛选初报

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INITIAL REPORT ON PURIFYING AND SELECTING YEAST STARTER RHIZOPUS
ZHOU Guang- lai, TIAN Guo- zheng ( Hubei Institute for Nationalities, Enshi 445000, China)
ABSTRACT:Through purifying and selecting five samples of yeast starter from five plants in Ehshi prefecture of Hubei, 14 Rhizopus strains are gained. Then, through the comparative study on their growth quant ity, saccharidase and Liguefiase, two purified strains with high productive Rhinopus and high activation of saccharidase and liquef iase are se lected .
KEY WORDS: Yeast starter Rhizopus; selecting
强, 是酒厂普通反映较好的酒曲;
糖 化酶( ∀ 102 / g)
4 号曲样液化酶活性相对较低; 5 液 化酶( ∀ 103 / g)
1 1. 7∀ 102
1. 22 1. 92
2 1. 5∀ 104
1. 44 1. 43
3 3. 5∀ 104
0. 83 1. 06
4 5. 0∀ 104
1. 11 0. 57
1 材料与方法
1. 1 菌株 从恩施州各酒曲厂取 5 个酒曲样品。
1. 2 培养基 PDA 培养基: 马铃薯 200 克, 葡萄糖 20 克, pH 值自然。 发酵培养基: 取 10 克麸皮, 加入 12ml 蒸馏水润料 1 小时, 灭菌( 121 ) 40 分钟后迅速摇散。
1. 3 方法: 1. 3. 1 根霉数量的测定: 按参考文献[ 1] 的方法进行。 1. 3. 2 分离纯化: 对 5 个曲样中的根霉进行分离纯化[ 1] , 从中得到编号为 Rhizopus11、12、13、14、21、22、23、 31、32、34、41、42、51、52 等 14 个菌株。将其分别接种于麸皮培养基上培养得到鲜曲。 1. 3. 3 生长速度的测定: 将 14 个菌株接种于 PDA 培养基上, 25 摄氏度培养 24 小时, 测定菌的直径。 1. 3. 4 酶活力的测定: 分别对五个曲样纯化前后进行酶活力的测定。
号曲样虽然糖化酶液化酶活性都
5 7. 0∀ 102
4. 38 4. 73
较高, 但其酿酒工艺适合于液态发酵, 不适于恩施州的传统酿造工艺。由此可见 5 个样曲均无明显优势。因
此采取对 5 个样曲进行分离纯化, 从中筛选优势菌株。
2. 2 纯化菌株生长速度及酶活力的测定
5 个曲样的纯化菌株生长速度及酶活力的测定结果见表 3。
中图法分类号: S192. 60 年代出现纯种酒曲以来, 80 年代被引入恩施州 。目前恩施州主要是以玉米为原料, 采用传统 工艺生产小曲白酒, 其酒曲主要是纯种的根霉和酵母。每年恩施州大约有两万吨以上的玉米被用来酿造小 曲白酒, 且有不断上升的趋势。调查中发现酒曲质量很不稳定, 加之工艺落后, 技术缺乏等方面的原因, 造成 出酒率低, 白酒质量低劣, 资源浪费极其严重。为了改变这一状况, 本研究对恩施州 5 个酒曲曲样的根霉进 行了分离、纯化并分别对纯化前后酶活力进行了测定, 从中筛选出两个优势菌株。以期为酒曲优势菌群的构 建, 降低成本, 提高出酒率, 提供一些基础资料。
( 1) 粗酶液提取[ 1] : 取 1 克鲜曲加 20ml 蒸馏水, 40 水浴 1 小时, 并间隔 4 ! 5 分钟搅拌一次, 然后用纱 布过滤得粗酶液。
( 2) 葡萄糖标准曲线制作: 按照参考文献[ 3] 方法进行, 得回归方程: A= 0. 71775C+ 0. 01024, r= 0. 9970。 ( 3) 液化酶( ! 淀粉酶) 活力测定[ 1] : 取 1. 5ml 1. 33% 可溶性淀粉 60 预热 5min, 加入 0. 5ml 粗酶液( 一 般稀释 10 倍) , 60 反应 10min, 冷却终止反应, 取 0. 1ml 反应液, 加入 10ml 碘液, 摇匀后在 680 处测吸光度。 酶活力单位( / g) : 在上述条件下每分钟使淀粉 ! 碘液吸光度下降 10% 的酶量为 1 个酶活力单位。 ( 4) 糖化酶活力测定[ 1] : 取 1ml 1. 33% 可溶性淀粉溶液 60 预热 5min , 加入 1ml 酶液( 粗酶液稀释 100 倍) 60 反应 10min 立即加入 1. 5ml DNS 试剂。沸水溶液 15min, 冷却后加入 21. 5ml 蒸馏水, 摇匀后在 500 nm 处 测定吸光度。酶活力单位( / g) : 上述条件下每分钟催化形成 1 mol 还原糖所需酶量为 1 个酶活力单 位。
参考文献:
[ 1] 范秀容, 李广武, 沈萍. 微生物学实验[ M] . 北京: 高等教育出版社. 1994. [ 2] 李宪臻, 张宇, 金风燮. 两株曲霉糖化性质的比较研究[ J] . 食品与发酵工业. 1994( 4) : 42- 46. [ 3] 袁化, 杨中权. 植物生理学实验[ M] . 北京: 高等教育出版社. 1993. [ 4] 薛应龙. 植物生理学实验[ M] . 北京: 高等教育出版社. 1985.
液化酶( ∀ 103 / g) 4. 40 2. 80 2. 60 0. 74 1. 34 1. 70 2. 20 1. 66 3. 40 4. 40 0. 96 2. 60 2. 60 2. 80
从表 3 分析: 2 号曲样分离的 22、23 号菌株、4 号曲样分离的 41、42 号菌株表现差, 生长速度慢, 酶活力较
它高产株菌未分离出来, 或存在其它类型的产酶菌; ( 3) 酒曲厂在制曲过程中可能加入了其它高效酶制剂, 提 高了曲样中的酶活力。从以上实验结果及分析表明, 分离纯化得到的 Rhizopus11、34 菌株表现为较强的酶活
力, 对酶反应条件及生产应用有待进一步的研究。而 Rhizopus 51 也可作为进一步研究的菌株。
研究简报
周光来, 田国政
( 湖北民族学院 园艺系, 湖北 恩施 445000)
摘 要: 从恩施州 5 家酒曲厂采得五个酒曲样, 经分离纯化, 获得 14 个根 霉菌株, 通过 对其生 长量, 糖化酶 和
液化酶的比较研究, 从中筛选出了两个霉产量大 , 糖化酶和液化酶活性高的纯化菌株。
关键词: 酒曲根霉; 筛选
样品
1
2
色泽 深棕色 浅 棕色
颗粒粗细 较细
粗
香味
淡
香
3 黄色 较细 较香
4 深黄色
粗 浓香
5 黄色 较粗 洒香
味差, 但该酒曲液化淀粉的能力相对较强; 2 号曲样外观色泽
较好、香味浓、但根霉孢子数量相
表 2 纯化前 五个曲样根霉数量及酶活力测定结果
对不足; 3 号曲样外观色泽黄色、
样品
香味较浓、根霉数较多, 且活力较 根霉( 孢子数/ 克酒曲)
表 3 纯化菌株生长速度及糖化酶、液化酶活力比较
编号
11
12
13
14
21
22
23
31
32
34
41
42
51
52
直径( mm) 74
53
60
45
56
56
47
48
44
46
46
45
67
60
糖化酶( ∀ 102 / g) 1. 89 1. 39 1. 42 0. 80 0. 89 1. 56 1. 20 1. 29 1. 95 1. 93 0. 78 1. 11 0. 89 0. 80
第 18 卷第 4 期 2000 年 11 月
湖北 民族学院学报( 自然科学版) Journal of Hubei Institute for Nationalities( Nat. Sci. )
文章编号: 1008- 8423( 2000) 04- 0019- 02
酒曲根霉的纯化筛选初报
Vol. 18 No. 4 Nov. 2000
收稿日期: 2000 05 09 作者简介: 周光来( 1966- ) , 男( 土家族) , 湖北鹤峰人, 实验师.
20
湖北民族学院学报( 自然科学版)
第 18 卷
2 结果与讨论
表 1 酒曲外观质量的感官评价
2. 1 酒曲样品外观, 根霉数量及酶活力测定 外观质量的感官评价、根霉数量测定以及纯
化前酶活力测定结果分别见表 1、2、3。 从表 1、2 看出, 1 号曲样陈旧、粉米较细、香
弱, 不作进一步研究。从 1 号曲样和 3 号曲样分离 11、34 号菌株生长速度较快, 产糖化酶和液化酶的活性相 对较高, 菌株优势明显。5 号曲样在纯化前的酶活力表现较强, 但分离纯化后得到的 51、52 号菌株并无产酶
优势, 产酶量少, 酶活性较低, 分析主要有三个方面的原因: ( 1) 培养条件未达到两菌株的适宜条件; ( 2) 有其

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黄酒酒曲中霉菌筛选及其制曲研究

黄酒酒曲中霉菌筛选及其制曲研究

黄酒酒曲中霉菌筛选及其制曲研究俞剑燊;杨昳津;夏永军;胡健;方逸群;艾连中【期刊名称】《江西农业学报》【年(卷),期】2016(028)005【摘要】从上海地区黄酒企业的主发酵液、麸皮、生麦曲和自然块曲中分离出22株霉菌，经透明圈平板初筛和制曲实验复筛，得到3株高产糖化酶、淀粉酶和蛋白酶的曲霉菌株BR84、BR88和BR100。

BR84和BR100菌株混合制曲有最高的酶活力，糖化酶、液化酶和蛋白酶活力分别达1099．82、80．65、284．44U／g。

以筛选出的曲霉进行混合制曲并进行黄酒模拟发酵，发现混合制曲发酵黄酒中还原糖和氨氮的生成速率显著高于纯种制曲的。

【总页数】4页(P79-82)【作者】俞剑燊;杨昳津;夏永军;胡健;方逸群;艾连中【作者单位】上海金枫酒业股份有限公司，上海 200120; 上海黄酒工程技术研究中心，上海 200093;上海理工大学医疗器械与食品学院，上海 200093; 上海黄酒工程技术研究中心，上海 200093;上海理工大学医疗器械与食品学院，上海200093; 上海黄酒工程技术研究中心，上海200093;上海金枫酒业股份有限公司，上海 200120; 上海黄酒工程技术研究中心，上海 200093;上海金枫酒业股份有限公司，上海 200120; 上海黄酒工程技术研究中心，上海 200093;上海理工大学医疗器械与食品学院，上海 200093; 上海黄酒工程技术研究中心，上海 200093【正文语种】中文【中图分类】TQ925.7【相关文献】1.糯米甜酒曲根霉的筛选及强化曲的研究 [J], 魏浩林;周金虎;刘凤春;管健;邓其锦;陈茂彬;方尚玲2.黄酒酒饼中曲霉菌株的筛选 [J], 黄剑波;温海祥3.包包曲及制曲环境中可培养霉菌的分离与鉴定 [J], 雷学俊; 张霞; 刘多涛; 李智; 罗青春; 施思; 郑佳4.基于风味和产酶性能的霉菌M2的筛选及制曲工艺优化 [J], 韩英; 赵恒山; 田宇敏; 王晓勇; 刘帅; 蔚慧欣; 贾丽艳5.黄酒曲酵母的筛选和耐受性研究 [J], 巩园园; 毛志海; 王奕芳; 夏瑛; 陈茂彬; 方尚玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

酒曲中根霉的分离纯化及酶活性研究

酒曲中根霉的分离纯化及酶活性研究

JIANGXI AGRICULTURAL UNIVERSITY 本科毕业论文（设计）题目：酒曲中根霉的分离纯化及酶活性研究二0一三年五月目录摘要 (I)Abstract (II)前言 (1)1材料与方法 (2)1.1材料 (2)1.1.1实验酒曲 (2)1.1.2 培养基 (2)1.1.3 试剂与仪器 (2)1.2方法 (2)1.2.1 根霉的分离与纯化 (2)1.2.2根霉的生化特性研究 (2)（1）麸皮曲的制备 (3)（2）粗酶液的提取 (3)（3）糖化酶活力测定 (3)2 根曲试饭发酵特性的研究 (3)2.1 酒酿样品的制备 (3)2.2 糖化酶活力的测定 (3)2.3酒精度的测定 (3)2.4酒酿的感官品质评定 (3)3 结果与分析 (3)3.1 葡萄糖标准曲线的制作 (4)3.2 根霉的分离纯化 (4)3.3 根霉的生化特性研究 (4)3.3.1麸皮曲糖化酶活力 (4)3.3.2霉曲试饭发酵特性的研究 (5)3.4 结论分析 (6)4 小结与讨论 (7)参考文献 (8)致谢 (9)摘要本文对两种不同来源酒曲中的根霉进行了分离、纯化，得到了一株产糖化酶能力较高的根霉，通过发酵试验对该根霉菌产糖化酶的相关理化性质进行了初步分析鉴定。

来获得糖化酶活性达到最大的时间所用的时间，给酒曲发酵提供实验依据，提高出酒率，实验采用马丁孟加拉红培养基对浓缩甜酒药和安琪酒曲中酒曲的根霉进行分离，得到浓缩甜酒药酒曲1株霉，。

将这株根霉接入糯米饭中进行发酵，测定酒酿的糖化酶活力、酒精度，并对酒酿进行了感官评定，在发酵过程中，糖化酶活力在第3d达到最大，后逐渐减弱，酒精度在第4d达到最大，后趋于平缓。

关键词：根霉；分离；糖化酶活力；酒精度AbstractWith the separation and purification and the identification of glucoamylase activity to rhizopus,get the time that the glucoamylase activity reaching maxium,which provides experiment evidence for fermentation to increase the alcohol rate. By Martin Bengal medium for separation of rhizopus from concentrated ligueurs drugs and Angel koji,get 1 strain of rhizopus from concentrated ligueurs drugs,and the glucoamylase activity was 2636.625mg/h•g.Put these strains of rhizopus access glutinous rice to get fermented,determination of fermented rice glucoamylase activity, alcohol, and the fermented rice sensory evaluation.In the fermentation process, the glucoamylase activity reaches to the maximum on the 3rd day, then gradually weakened, alcohol reaches to the maximum on the 4th day, and then began to flatten.Key words: Rhizopus; separation; glucoamylase activity；alcohol0前言甜酒酿是我国的传统发酵食品其制造方法属黄酒范畴。

传统酒曲中高产乳酸根霉菌株的选育及发酵条件优化

传统酒曲中高产乳酸根霉菌株的选育及发酵条件优化

传统酒曲中高产乳酸根霉菌株的选育及发酵条件优化乳酸是世界三大有机酸之一,被广泛应用于各工业中,如食品、化工、医药、环保等。

微生物发酵法是工业化生产乳酸的主要方法,目前,用于发酵产乳酸主要有乳酸细菌及根霉菌。

用于发酵产乳酸的根霉菌中多见报道的为米根霉,偶见报道的只有华根霉和少根根霉,但它们产乳酸量较低,离开发应用还有较大差距。

因此,筛选出新的有潜力并满足未来工业生产应用的乳酸高产根霉菌种有着重大意义。

据此本文从以下4个阶段展开了研究工作。

由于传统酒曲中有着丰富的种质资源,于是本文选择酒曲为分离源,从中分离出60株霉菌单菌落。

经过高锰酸钾-溴化钾平板初筛,摇瓶发酵复筛,获得一株乳酸产量高达52.33 g/L的霉菌菌株G10。

通过PDA平板培养及玻片培养法观察菌落形态及其个体形态,结合18SrDNA基因测序方法对菌株G10进行鉴定,确定分离到的霉菌菌株G10为根霉属小孢根霉(Rhizopus microsporus)。

首先以致死率为依据设定诱变条件,对G10进行紫外诱变,经筛选后得到突变菌株Z2,产酸量达66.99 g/L。

再对Z2进行DES二次诱变,得遗传稳定的突变菌株D11,产酸量达73.29 g/L,比出发菌株高出40.05%。

通过单因素试验和正交试验对D11的发酵条件进行了优化,所得最佳培养基组成为:葡萄糖120 g/L,(NH4)2SO4 4 g/L,KH2PO4 0.4 g/L,MgSO4·7H2O 0.3 g/L,ZnSO4·7H2O 0.4 g/L,CaCO3 50.0 g/L。

最佳培养条件为:装液量50 mL/250 mL,接种量10%,温度32℃,转速200 r/min。

经优化后D11产酸量达80.91 g/L。

以玉米芯为载体,固定化小孢根霉D11发酵产乳酸,对载体参数及发酵条件进行了探讨,所得的最佳培养基配比为:玉米芯添加量2 g/L,玉米芯粉碎粒度40目,葡萄糖120 g/L,(NH4)2SO4 2 g/L,KH2PO4 0.3 g/L,MgSO4·7H2O 0.1 g/L,ZnSO4·7H2O0.3 g/L,CaCO3 60 g/L。

糯米甜酒曲根霉的筛选及强化曲的研究

糯米甜酒曲根霉的筛选及强化曲的研究

糯米甜酒曲根霉的筛选及强化曲的研究魏浩林;周金虎;刘凤春;管健;邓其锦;陈茂彬;方尚玲【摘要】选取5种不同地域、较为畅销的市售糯米甜酒曲,以酒曲酶活力为评价指标,筛选出优良糯米甜酒曲.将优良酒曲中霉菌进行分离纯化,制作纯种根霉曲,与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)不同比例混合复配制作强化曲.通过强化曲与市售酒曲的酒曲酶活力对比,并结合试制糯米甜酒的总糖、总酸、总酯、酒精度对比验证.结果表明,强化曲的最佳复配比例为:接种量为1％(其中根霉M9曲添加量0.90％,酿酒酵母添加量0.10％).与市售甜酒曲相比,强化曲糖化力达796.5 U/g,提高14.8％;液化力达694.2 U/g,提高20.7％;试制糯米甜酒的总酯达0.78 g/L,提高168.9％;酒精度达12.1％vol,提高92.1％.经感官评价,强化曲酿制糯米甜酒口感醇甜、风味突出,感官评分为96分.%Choosing five kinds of popular commercial glutinous rice wine starter from different regions,using Jiuqu enzyme activity as evaluation index,the excellent glutinous rice wine starter was screened.The mold in the glutinous rice wine starter was isolated and purified,pure Rhizopus Qu was made and then was mixed with different proportion of Saccharomyces cerevisiae to make fortified Qu.Through the comparison of the Jiuqu enzymes activity of the fortified Qu and commercial Daqu,and the contents of total sugar,total acid,total ester and alcohol in glutinous rice wine fermented by the Daqu were detected.The results showed that the optimum complex proportion of fortifiedQu:inoculum 1％ (including Rhizopus M9 Qu 0.90％ and S.cerevisiae0.10％).Compared with the commercial Daqu,the saccharification power and liquefaction power of the fortified Qu were 796.5 U/g and 694.2U/g,respectively,and increased by 14.8％ and 20.7％,respectively.The total ester and alcohol contents of glutinous rice wine fermented by fortified Qu were up to 0.78 g/L and 12.1％vol,respectively,which increased 168.9％ and 92.1％,respectively.By sensory evaluation,the glutinous rice wine fermented by the fortified Qu had mellow and sweet taste and outstanding flavor,the sensory score was 96.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2017(036)009【总页数】4页(P41-44)【关键词】糯米甜酒曲;筛选;霉菌;强化曲【作者】魏浩林;周金虎;刘凤春;管健;邓其锦;陈茂彬;方尚玲【作者单位】湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程教育部重点实验室,湖北武汉430068;工业发酵湖北省协同创新中心,湖北武汉430068;工业微生物湖北省重点实验室,湖北武汉430068;湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程教育部重点实验室,湖北武汉430068;工业发酵湖北省协同创新中心,湖北武汉430068;工业微生物湖北省重点实验室,湖北武汉430068;湖北楚园春酒业有限公司,湖北宜昌444200;湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程教育部重点实验室,湖北武汉430068;工业发酵湖北省协同创新中心,湖北武汉430068;工业微生物湖北省重点实验室,湖北武汉430068;湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程教育部重点实验室,湖北武汉430068;工业发酵湖北省协同创新中心,湖北武汉430068;工业微生物湖北省重点实验室,湖北武汉430068;湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程教育部重点实验室,湖北武汉430068;工业发酵湖北省协同创新中心,湖北武汉430068;工业微生物湖北省重点实验室,湖北武汉430068;湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程教育部重点实验室,湖北武汉430068;工业发酵湖北省协同创新中心,湖北武汉430068;工业微生物湖北省重点实验室,湖北武汉430068【正文语种】中文【中图分类】TS262.4甜酒是我国传统的发酵类食品之一，因其酸甜可口、香味舒适，具备一定保健功效而深受大众喜爱[1]。