实验九 染色体核型分析-推荐下载
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1. 细胞培养。
收集患者外周血或其他组织。
实验一人类体细胞染色体标本制备与核型分析Metaphase Chromosome Preparation and Analysis of Karyotype【实验目的】1.熟悉人类外周血淋巴细胞的培养方法及染色体标本的制备方法。
2.熟悉人类染色体G显带标本制备与分析。
【实验原理】染色体是在显微镜下可见细胞有丝分裂过程中出现的结构。
因此,必须获得染色体标本才能进行检查分析,通常情况下,都是利用外周血淋巴细胞进行核型分析。
正常情况下,人体外周血淋巴细胞不再分裂,但植物血凝素(PHA)可刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞,使其恢复增殖能力。
因此,可采取少量外周静脉血,做短期培养,培养至72小时细胞进入增殖旺盛期,此时加入秋水仙素抑制细胞分裂,使细胞分裂停止在中期以获得足够量的分裂期细胞,经低渗、固定、制片、染色后镜下观察进行核型分析。
上述制备的染色体标本经胰蛋白酶消化、Giemsa染色后,可在染色体纵轴上显示出着色深、浅相间的横纹——带,表明每条染色体的特征。
【实验用品】1.采血器材、酒精灯、培养瓶、超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机、刻度离心管、乳头吸管、试管架、量筒、试剂瓶、载玻片、吹风机、托盘天平、显微镜、镜油、二甲苯、擦镜纸、镊子、烧杯、记号笔、玻片架、火柴、10ml注射器。
2.RPMI 1640液体培养基、小牛血清、肝素(500 U/ml)、植物血凝素(PHA)、秋水仙素(10mg/ml)、KCl低渗液(0.075mol/L)、甲醇、冰乙酸、Giemsa 原液、磷酸缓冲液(PH6.8)。
3.2.5%胰酶溶液(Hanks液配制)、0.4%酚红、Giemsa染色液、1N盐酸、1N氢氧化钠。
【实验步骤】精品文档一.外周血淋巴细胞染色体标本制备与分析1. 采血及接种培养1.1 在酒精灯火焰上,用灭菌注射器(一次性注射器)抽取肝素0.2ml,使肝素湿润至管壁。
1.2 常规消毒后,采集外周静脉血5ml,转动注射器使血液与肝素混匀。
染⾊体核型分析姓名程开源系年级2010级临床医学⼋年制同组者孙琳、孙晶鑫、窦云德科⽬分⼦细胞⽣物学题⽬染⾊体核型分析学号201000232012【实验⽬的】1.了解⼩⽩⿏睾丸细胞染⾊体的形态及数⽬。
2.初步掌握⼩⽩⿏睾丸细胞染⾊体的玻⽚标本制作⽅法。
3.观察动物细胞染⾊体的数⽬和形态。
【实验原理】染⾊体的制备在原则上可以从所有发⽣有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常⽤的途径是从⾻髓细胞、⾎淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染⾊体。
⼩型动物的染⾊体制⽚最好最有效的材料就是⾻髓组织。
⾻髓细胞中,有丝分裂指数相当⾼,因此可以直接得到中期细胞⽽不必象淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培养;对⼤型动物通常采⽤对⾻骼、脊或胸⾻穿刺术吸取红⾻髓,⼩型动物多采⽤剥离术取股⾻以获得⾻髓细胞。
制作染⾊体标本的先决条件1. 细胞具有旺盛的分裂能⼒选择活跃的组织:胸腺,⾻髓,睾丸,⼩肠施加药物使细胞分裂:PHA2. 设法得到⼤量的中期细胞:秋⽔仙素(1) PHA:粗细胞分裂,使淋巴细胞返幼,变为淋巴母细胞(2) 秋⽔仙素:破坏微管装配,使纺锤体不能形成,使⼤量细胞停⽌在分裂中期。
(3) 低渗作⽤:⽔进⼊细胞内,细胞内容空间变⼤,染⾊体间的距离拉⼤,易于染⾊体展开(4) 空⽓⼲燥:使细胞和染⾊体展开(5) 固定:⽤甲醇:冰醋酸=3:1作⽤使蛋⽩质变性,对染⾊体内的组蛋⽩讲,变性后硬度增加,保持了染⾊体的“及时形态”,对细胞膜蛋⽩讲,变性使细胞膜硬度增强,形成屏障作⽤,防⽌了细胞内物质外溢和丢失。
对于⼩⿏精巢染⾊体标本的制作,⼀般包括以下⼏个要点: 1. ⽤⼀定剂量的秋⽔仙素破坏纺锤丝的形成,使细胞分裂停滞在中期, 使中期染⾊体停留在⾚道⾯处; 2. ⽤低渗法使将细胞膨胀, 以⾄于在滴⽚时细胞被胀破, 使细胞的染⾊体铺展到载玻⽚上; 3.空⽓⼲燥法可使使细胞的染⾊体在载⽚上展平, 经Giemsa染⾊后便可观察到染⾊体的显微图象。