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动物细胞工程设计方案一、项目名称：____________________二、项目背景：____________________三、项目目标：____________________四、实验材料：1. 动物细胞：____________________2. 试剂：____________________3. 仪器设备：____________________五、实验方法与步骤：1. 动物细胞的培养：（1）取动物组织，剪碎并加入胰蛋白酶分解成单个细胞。
（2）制备动物细胞培养液体培养基，将细胞接种至培养基，放入二氧化碳培养箱中进行初代培养。
（3）当细胞增殖达到一定程度，出现接触抑制现象时，用胰蛋白酶再次处理，并用细胞悬液吹打贴壁生长的细胞。
进行细胞计数。
（4）依照计数结果，分瓶培养，进行传代培养。
获得细胞系或细胞株。
2. 动物细胞融合：（1）选择适当的融合方法，如电融合、聚乙二醇诱导融合等。
（2）将目的细胞和辅助细胞进行融合实验。
（3）筛选融合细胞，并进行鉴定。
3. 动物细胞核移植：（1）取成熟雄性青蛙的体细胞，去除细胞核。
（2）将正常雄性青蛙的体细胞的细胞核移植到去核卵细胞中。
（3）将移植后的卵细胞培养至胚胎阶段。
（4）将胚胎移植到受体青蛙中，观察发育情况。
六、预期结果：1. 成功培养出所需的动物细胞株。
2. 实现动物细胞融合，获得具有特定性状的融合细胞。
3. 成功进行动物细胞核移植，获得具有全能性的核移植胚胎。
七、实验结果分析与讨论：1. 分析培养出的动物细胞株的特性，与预期目标进行对比。
2. 分析融合细胞的性状，探讨融合效率和稳定性。
3. 分析核移植胚胎的发育情况，探讨细胞核全能性的实现程度。
八、实验结论：1. 成功实现了动物细胞工程的实验目标。
2. 掌握了动物细胞培养、融合和核移植的基本技术。
3. 为后续相关研究提供了实验基础和参考。
九、实验注意事项：1. 严格遵守无菌操作原则，确保实验材料的纯净度。
动物细胞培养的研究和应用动物细胞培养是一种非常重要的技术，它可以用来进行重要的研究、药物开发和生产等。
近年来，随着科技的进步，动物细胞培养技术也得到了很大的发展和广泛的应用。
本文将对动物细胞培养的研究和应用进行介绍和分析。
一、动物细胞培养的方法动物细胞培养是指将生物组织中的细胞，以一定条件下的体外培养方式，使细胞继续生长和增殖的技术。
动物细胞培养可以分为原代细胞培养和细胞系培养两种。
原代细胞培养是指将从生物组织中直接分离出来的细胞在一定条件下培养，可培养出小规模的细胞群，用于相关的实验研究。
而细胞系培养是先从生物组织中原代培养得到的细胞，经过放射线和化学物质等处理，其中一部分细胞经过某些条件或选择，使其具有无限增殖和传代的潜力，形成细胞系。
二、动物细胞培养的意义动物细胞培养具有重要意义，其主要体现在以下几个方面：1、科学研究动物细胞培养技术可以为生物学、医学、药学等科学领域的研究提供大量的细胞材料，推动了相关领域的研究进展。
在细胞遗传和细胞代谢研究方面，动物细胞培养也发挥了重要作用。
2、药物开发和生产动物细胞培养技术被广泛用于药物开发和生产领域。
通过长期大规模的细胞培养和检测，可以获得大量的生物数据，为开发新的药物提供重要的基础。
目前，动物细胞培养技术已应用于制造多种生物制品和药物。
3、临床医学动物细胞培养技术在临床医学领域也得到了广泛的应用，例如在体外人工合成器官等方面。
三、动物细胞培养的挑战和问题尽管动物细胞培养技术非常重要，但还存在着一些挑战和问题：1、细胞生长和传代能力在动物细胞培养过程中，细胞的生长和传代能力往往是一个挑战。
为了维持细胞的生命，需要给细胞提供适宜的生长和存活条件。
2、细胞纯度和稳定性动物细胞培养过程中，随着培养时间的增加及细胞的转移，细胞浓度和杂质含量会发生变化，需要对培养物进行定期监测，以保证细胞纯度和稳定性。
3、较高的成本和复杂性动物细胞培养技术往往需要耗费大量的时间、人力和物力，成本也相对较高。
2.2.1 动物细胞培养教学设计1.讲授法：对细胞培养过程进行疑难讲解。
2.自学法：学生先自学基本知识，完成导学案。
3.学案导学4.新授课教学基本环节：情境导入、激发兴趣→合作探究、精讲点拨→阅读教材、独立思考→反思总结、当堂检测课时安排：1 课时引入：烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？[动物细胞培养]动物细胞培养的概念：动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中, 让这些细胞生长和增殖. 动物细胞的培养过程：见课本P45：动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础（一）动物细胞培养的过程学习活动一：【合作学习】阅读教材并完成下列问题：1.为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？2.如何将动物组织分散成单个的细胞？系3. 胰蛋白酶的作用是什么？ 由此可说明细胞间的物质主要是什么成分？4. 培养瓶或培养皿的内表面为何要光滑、无毒？5、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？ 【动动手】请完成动物细胞培 养的流程图。
有关概念:• 原代培养： 从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。
初次培养称为原代细胞培养。
细胞株细传代培养： 将原代细胞 胞从培养瓶中取出， 配制成细胞悬浮液， 分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养， 称为传代培养。
细胞株： 原代细胞一般传至 10 代左右细胞生长停滞， 大 部分细胞衰老死亡， 少数细胞存活到 40~50 代， 这种传代细胞为细胞株。
细胞系： 细胞株传代至 50 代后又出现细胞生长停滞状态， 只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件 下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。
传代培养原代培养细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。
学习活动二：寻根问底，加深巩固1、选用组织时，一般用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做培养材料，而不用老龄动物的，这是为什么？2、胰蛋白酶处理组织时要注意什么问题？能够用胃蛋白酶代替吗？3、动物细胞培养能否最终培养成新个体？(二）动物细胞培养的条件思考：多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论以下问题：1.动物细胞培养时通常要添加抗生素，为什么？2.动物细胞培养时通常要添加血清，为什么？3.添加5%的CO2 是为了刺激细胞呼吸，还是为了维持培养液的pH 值？（三）动物细胞培养技术的应用1.大规模生产有重要价值的生物制品。
组织细胞实验室设计以下是一个组织细胞实验室的设计，用于进行细胞培养和组织工程的研究：1.实验室布局：实验室应设计为开放式的，以便研究人员可以方便地进行交流和合作。
实验室应包括多个工作台、试剂柜和储存柜。
实验室应具有良好的通风和光线条件，以及适当的温度和湿度控制系统。
2.培养室：实验室的一部分应专门用于细胞培养。
这个区域应该有一个无菌环境，并且必须配备培养箱、细胞培养罩和显微镜等设备。
培养室还应配备培养介质、培养皿、离心机和冰箱等设备，以满足细胞培养的需求。
3.流体系统：实验室应配备适当的流体系统，以便提供细胞培养所需的培养液和其他溶液。
这个系统应包括水槽、水龙头、紫外线消毒设备和净化器等设备。
4.分析设备：实验室应配备各种分析设备，以便研究人员可以分析细胞的功能和特性。
这些设备可能包括流式细胞术仪、荧光显微镜和倒置显微镜等。
5.实验台和器材：实验室应提供充足的实验台和器材，以便研究人员可以进行实验和研究。
这些工作台应具有足够的空间，以便容纳实验设备和试剂。
实验台上还应配备显微镜、离心机、冷冻离心机、电子天平、振荡器等设备。
6.数据分析和处理：实验室应配备计算机和数据分析软件，以便研究人员可以对收集到的数据进行分析和处理。
这些设备应具有高性能和高存储容量，以满足分析和处理大量数据的需求。
7.安全设备和措施：实验室应配备必要的安全设备和措施，以确保研究人员和实验品的安全。
这些设备可能包括生物安全柜、防护服、手套和眼镜等。
8.储存和管理：实验室应配备适当的储存设备和管理系统，以便存储实验数据和实验样本。
这些设备包括冰箱、液氮罐和标本柜等。
综上所述，一个组织细胞实验室的设计需要考虑到各种方面，包括实验室布局、培养室、流体系统、分析设备、实验台和器材、数据分析和处理、安全设备和措施以及储存和管理。
这些设备和措施的配备将有助于研究人员开展细胞生物学和组织工程的研究工作。
《动物细胞培养》一节教学设计及实践反思导读：学校每学期每位老师都有一节校内公开课。
本学期我选择了《2.2.1动物细胞培养和核移植技术（第一课时）》即《动物细胞培养》作为公开课即录像课的教学内容。
在课前经过了自己精心准备但是具体实施的教学结果却不令人满意。
通过“有效上课”专题的学习研究，我认真反思了自己这节课不成功的原因，与大家交流。
说明：第一部分公开课时《动物细胞培养》的教学设计第二部分课后的几点教学反思第三部分反思后的《动物细胞培养》教学设计一、教学目标简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
二、教学重点、难点1. 教学重点动物细胞培养的过程及条件。
2. 教学难点动物细胞培养的过程及条件三、教材分析动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。
在动物细胞培养技术之后介绍的核移植技术、动物细胞融合技术、生产单克隆抗体以及胚胎工程都要用到动物细胞培养技术。
掌握好这项技术才能为其他技术打好铺垫。
所以把动物细胞培养讲的清清楚楚、明明白白就十分重要了。
在动物细胞培养的教学中，可把这部分内容归纳成三个问题：（1）为什么要进行动物细胞的培养？——即培养的用途（2）什么是动物细胞的培养？（3）怎样进行动物细胞的培养？第三个问题是本节课的重点。
四、学情分析动物细胞在体内的增殖学生是了解的，在体外如何实现细胞增殖的，有什么特点以及培养后的细胞有什么用途都是可以激发学生的学习兴趣。
对于动物细胞培养的条件，则要从学生已有的内环境的知识出发，启发学生自己动脑思考这个问题，以加深对培养条件的理解。
学习了植物细胞工程的基础上再去联系动物细胞培养技术，并能作出二者的比较。
五、教学过程（我将本节所以设置的问题或问题组或活动编号）5.1课堂导入：师展示两幅烧伤程度不同的病人图片。
提问如何治疗呢？生答。
师进一步提问：如何获得大量健康的自体皮肤来治疗？生答。
5.2新知学习师：通过培养皮肤细胞可获得健康皮肤细胞，那么什么是动物细胞培养?培养过程有什么特点以及培养的细胞用途有哪些呢？本节课一起来解决？师展示图片:动物细胞培养的概念。
动物细胞培养教案教学设计一、教学目标1.让学生了解动物细胞培养的基本原理和步骤。
2.培养学生动手操作能力，提高实验技能。
3.引导学生思考动物细胞培养在实际应用中的意义。
二、教学内容1.动物细胞培养的基本原理2.动物细胞培养的步骤3.动物细胞培养的应用三、教学重点与难点1.教学重点：动物细胞培养的基本原理和步骤。
2.教学难点：动物细胞培养的具体操作方法。
四、教学过程（一）导入1.利用多媒体展示一些与动物细胞培养相关的图片，如细胞培养皿、细胞培养液等。
2.邀请学生分享他们对动物细胞培养的了解。
（二）基本原理1.介绍动物细胞培养的基本原理，包括细胞生长、细胞分裂、细胞代谢等。
2.通过图示和案例，让学生了解细胞培养过程中所需的营养物质、生长因子、氧气等。
（三）操作步骤1.介绍动物细胞培养的操作步骤，包括细胞悬液的制备、细胞接种、细胞培养、细胞观察等。
2.利用视频或现场演示，让学生直观地了解每个步骤的具体操作方法。
（四）实验操作1.将学生分组，每组分配一个实验任务，如细胞悬液的制备、细胞接种等。
2.指导学生按照操作步骤进行实验，并及时解答他们在实验过程中遇到的问题。
（五）应用拓展1.介绍动物细胞培养在实际应用中的意义，如疾病治疗、药物研发等。
2.通过案例分析，让学生了解动物细胞培养在科研和生产中的应用。
（六）课堂小结2.鼓励学生在课后进一步了解动物细胞培养的相关知识。
五、教学反思1.学生对动物细胞培养的基本原理和步骤的理解程度。
2.学生在实验操作中的表现，如动手能力、实验技能等。
3.学生对动物细胞培养在实际应用中的认识和理解。
4.教学过程中存在的问题和不足，如何改进教学方法和手段。
通过本次教学，教师应努力提高学生的实验技能和动手能力，激发他们对生物科学的兴趣，为培养创新型人才奠定基础。
【重难点补充】一、教学重点与难点教学重点：动物细胞培养的基本原理和步骤。
教学难点：动物细胞培养的具体操作方法。
（二）基本原理1.教师讲解：同学们，我们知道细胞是生物体基本的结构和功能单位。
细胞工程实验方案设计题目：小鼠肝脏上皮细胞系的建立设计者：班级生物1101姓名刘鑫20113085 指导教师：***日期： 2013年11月11日西南科技大学生命科学与工程学院目录一、基本原理（一）基本概念（二）细胞冻存及复苏原理二、操作器材、设备及灭菌处理（一）准备室的设备（二）配液室的设备（三）培养室的设备（四）细胞培养用液的配制器材与试剂（五）灭菌操作三、基本用液的配置（一）水的制备（二）PBS的制备与消毒（三）胰蛋白酶溶液的配制与消毒（四）血清的灭活四、实验步骤（一）传代前准备工作（二）取材（三）原代培养（四）传代培养（五）细胞纯化（六）细胞系的建立（七）细胞冻存（八）冻存细胞的复苏五、实验记录及基本注意事项（一）基本注意事项（二）实验记录小鼠肝脏上皮细胞系的建立动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
这个实验方案就是选取小鼠肝脏上皮利用动物细胞培养技术建立细胞系。
一、基本原理（一）基本概念1、原代培养（primary culture）直接从有机体中取出的细胞、组织或器官开始进行体外培养直到第一次传代为止。
这种培养称之为原代培养。
2、传代培养（subculture）细胞从一个培养皿以1：2或1：2以上的比率转移或移植到另一个器皿的培养，这种培养称之为传代培养。
（二）细胞冻存及复苏原理在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。
如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。
在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。
贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。
动物细胞培养实验报告实验目的本实验的目的是通过培养和观察动物细胞，了解细胞的结构和功能。
实验材料和设备•动物细胞培养基•细胞培养皿•细胞培养罩•无菌移液器•显微镜•离心机实验步骤步骤一：准备工作1.将工作台、实验室器材和手部清洗消毒，确保无菌环境。
2.准备所需的实验材料和设备。
步骤二：细胞培养基的制备1.将细胞培养基倒入细胞培养皿中，每个培养皿倒入适量的培养基。
2.用无菌移液器将细胞培养基均匀涂布在培养皿内表面。
3.将培养皿放入细胞培养罩中，用透明膜封闭。
步骤三：细胞的收获1.从实验动物体内提取所需的组织样本，保持组织样本的完整性和无菌状态。
2.将组织样本置于离心管中，加入少量的预先准备好的细胞培养基。
3.使用无菌移液器将组织样本与细胞培养基充分混合。
4.将混合液转移到培养皿中，确保液体均匀覆盖培养皿表面。
步骤四：细胞培养1.将培养皿放入孵化器中，设置合适的温度和湿度，提供细胞生长所需的最佳环境条件。
2.定期观察培养皿内细胞的生长情况，记录细胞的数量和形态变化。
步骤五：细胞观察1.从培养皿中取出一小部分细胞，放入显微镜载玻片上。
2.将载玻片放入显微镜下，使用适当的倍率观察细胞的形态特征和细胞器的结构。
3.记录细胞的形态特征、大小和细胞器的分布情况。
实验结果和讨论通过以上步骤，我们成功地进行了动物细胞的培养实验，并观察到了细胞的生长和形态变化。
在显微镜下观察到的细胞形态特征和细胞器的结构，可以帮助我们更好地理解细胞的组成和功能。
细胞培养是生物学研究中常用的技术手段，通过培养和观察细胞，我们可以深入了解细胞的生命活动和疾病发生机制。
在实验过程中，我们需要保持无菌操作，以确保细胞的纯度和生长条件的良好。
细胞培养实验的结果和观察对于生物医学研究和药物开发具有重要意义。
通过改变培养条件和添加适当的药物，我们可以研究细胞的响应和代谢途径，为新药物的筛选和评估提供重要依据。
结论通过本次实验，我们成功地培养和观察了动物细胞。
动物组织细胞培养实验室的设计姓名：梁洪学号：11310010214（一）环境要求组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
要求工作环境清洁，空气清新,干燥和无烟尘。
（二）面积与预算实验室总面积96用左右，大约耗资40万（不含特殊先进设备）。
（三）细胞培养实验室的布局细胞培养实验室布局大致为：无菌操作区、孵育区、制备区、清洗区、消毒灭菌处理区、储藏区。
1 •无菌操作区（1）无菌操作室：无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，最好能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。
无菌操作间的空气消毒：紫外线灯，空气过滤的恒温恒湿装置。
（2）超净工作台：操作简单，安装方便，占用空间小且净化效果很好。
超净工作台工作原理（大致相同）一-通常是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
2.孵育区本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，但仍需清洁无尘，因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。
孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行，后者费用高，一般实验室多采用孵箱进行工作。
3.制备区在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。
4.储藏区主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境也需要清洁无尘。
5.清洗和消毒灭菌区清洁和消毒灭菌区应与其他区域分开，主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。
（四）细胞培养实验室的设备1.常用的基本设备（1）仪器：a显微镜：倒置显微镜一一是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一，便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。
b）培养箱：体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，大多数情况下，最适温度是37C，温差变化一般不应超过土0.5 C。
恒温培养箱一一应选隔水式或晶体管自控温培养箱，此类培养箱灵敏度高，温度控制较稳定。
（一）细胞培养实验室的设置组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
目前，超净工作台的广泛使用，很大程度上方便了组织细胞培养工作，并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。
细胞培养实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。
01无菌操作区（1）无菌操作室：无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，最好能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。
理想的无菌操作室应划为三部分：a) 更衣室—―供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b) 缓冲间—―位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境，同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。
c) 无菌操作间—―专用于无菌操作、细胞培养。
其大小要适当，且其顶部不宜过高（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌效果；墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。
工作台安置不应靠墙壁，台面要光滑压塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。
无菌操作间的空气消毒：紫外线灯—－产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利于工作人员健康。
空气过滤的恒温恒湿装置—－最好。
无臭氧紫外线消毒器电子消毒灭菌器—－在高压电场作用下，电子管的内外电极发生强烈电子轰击，使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。
臭氧是一种强氧化剂，能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应，从而靠臭氧气体弥漫性扩散达到杀菌之目的，消毒时没有死角。
消毒后空间的残留臭氧只需30～40min即能自行还原成氧气，空气不留异味，消毒物体表面不留残毒。
（2）净化工作台：操作简单，安装方便，占用空间小且净化效果很好。
一般细菌培养室使用的净化工作台主要有两种：a)侧流式或称垂直式 b)外流式或称水平层流式。
净化工作台工作原理（大致相同）—－通常是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
侧流式工作台—－空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧，也有从上向下或从下向上流向对侧，形成气流屏障保持工作区无菌。
工作台结构为封闭式。
外流式（水平式）工作台—－净化后的空气面向操作者流动，因而外方气流不致混入操作，但进行有害物质实验操作则对操作者不利。
工作台结构为开放式（已少用）。
净化工作台应用注意：（1）净化工作台应安装在隔离好的无菌间或清洁无尘的房间内，以免尘土过多易使过滤器阻塞，降低净化效果，缩短其使用寿命。
（2）新安装的或长期未使用的工作台，工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作，然后再采用药物灭菌法或紫外线灭菌进行灭菌处理。
（3）使用净化工作台前，应先用75％酒精擦洗台面，并提前以紫外线灭菌灯照射30～50min处理净化工作区内积存的微生物。
关闭灭菌灯后应启动风机使之运转两分钟后再进行培养操作。
（4）净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流流型不受干扰。
（5）注意净化区内气流的变化，一旦感到气流变弱，如酒精灯火焰不动，加大电机电压仍未见情况改变则说明滤器已被阻塞，应及时更换。
一般情况下，高效过滤器三年更换一次。
更换高过滤器应请专业人员操作，以保持密封良好。
粗过滤器中的过滤布（无纺布）应定期清洗更换，时间应根据工作环境洁净程度而定，通常间隔3-6个月进行一次。
（6）净化工作台使用完毕应及时清理工作台面上的物品并用酒精擦洗台面使之始终保持洁净。
（7）净化工作台应定期进行功能测试，检查净化工作台各项工作指标是否达到要求，例如进行无菌试验，定期检查台面空气的洁净度是否达标。
超净工作台的无菌程度检查超净工作台在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数；取直径约90mm平皿，在超净工作台内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将平皿半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板，在30～35℃预培养48小时，证明无菌后将平板3个，以无菌方式带入超净工作台内左、中、右各放一个；打开平皿盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将平皿盖盖好，置30～35℃培养48小时，取出检查，100级清洁度要求：3个平皿上生长的菌落数平均不得超过1个。
超净工作台应定期请有关部门检查其洁净度，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪）检测尘埃粒径≤5祄的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75~1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况必要时置换过滤器。
02孵育区本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，但仍需清洁无尘，因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。
孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行，后者费用高，一般实验室多采用孵箱进行工作。
03制备区在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。
04储藏区主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境也需要清洁无尘。
05清洗和消毒灭菌区清洁和消毒灭菌区应与其他区域分开，主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。
(二)细胞培养实验室的设备组织细胞培养室除一般实验室的普通常规设备外，尚有一些特殊需要的设备。
基本可分为两大类：第一类为常用的基本设备；第二类为较高级的特殊设备。
01常用的基本设备（1）仪器：a）显微镜：倒置显微镜——是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一，便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。
——若有条件，尚可配置带有照相系统的高质量相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等，以便随时观察、记录、摄影细胞生长情况。
a）培养箱：体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，大多数情况下，最适温度是37℃，温差变化一般不应超过±0.5℃，细胞在温度升高2℃ 时，持续数小时即不能耐受，40℃以上将很快死亡。
因此需要有能控制温度的培养箱，如具有较高灵敏度的恒温培养箱及CO2培养箱。
恒温培养箱——应选隔水式或晶体管自控温培养箱，此类培养箱灵敏度高，温度控制较稳定。
一般的恒温培养箱价格较便宜，其缺点是只宜于作密闭式培养。
CO2培养箱——目前多数的细胞培养室已广泛使用。
CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2（常用浓度为5％），易于使培养液的pH保持稳定，适用于开放或半开放培养。
培养细胞的器皿可用培养皿、培养板或培养瓶；当使用培养瓶时，可将瓶盖略微旋松，使培养瓶内与外界保持通气状态。
由于这种培养方法培养器皿内部与外界相通，培养箱内空气必须保持清洁，应定期以紫外线照射或酒精消毒。
同时培养箱应放置盛有无菌蒸馏水的水槽，防止培养液蒸发，使箱内相对湿度始终保持为100％。
c）干燥箱：用于细胞培养箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。
干热消毒时，电热干燥箱升温较高，一般需达到160℃以上。
通常使用鼓风式电热干燥箱。
其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。
升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至100℃时，停止鼓风，应避免包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑可影响细胞的生长。
消毒后，不能立即打开箱门以免骤冷而导致玻璃器皿损坏，应等候温度自然下降至100℃以下方可开门。
d）水纯化装置：细胞培养对水的质量要求较高，细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水必须事先严格纯化处理。
水纯化时可采用离子交换装置或蒸馏器。
离子交换纯水尚不能有效去除有机物，因此用水时尚需再次蒸馏。
进行细胞培养时配制各种培养液及试剂等均需使用三次蒸馏水：即使是用于玻璃器皿的冲洗，也应使用二次以上蒸馏水。
目前国内使用较多的是自动双重纯水蒸馏器（石英管加热），使用方便，安全、蒸馏速度快（1600ml/h）。
使用注意：○a不可采用普通自来水蒸馏，以免蒸馏器内很快结成水垢影响蒸馏效果；同时，还需视蒸馏器内存水垢程度定期彻底清洗蒸馏器。
○b正确的使用方法是将经金属蒸馏器蒸馏的蒸馏水加入玻璃蒸馏器内进行再次蒸馏。
一般配制培养液的用水应在配液前蒸馏，不宜使用存放数日的三蒸水，以免影响培养用水的质量。
目前市场上供应的是含有各种级别和类型的采用一种或多种纯化方法相结合的使普通水纯化为纯水和超纯水的纯水系统可供选择。
例如：设计灵活的可以挂壁、也可为台式，也可以有储水箱、也可直接用分液枪的纯水装置；还可根据各类实验用水需求选择配备有效杀菌或去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等，甚至可有效去除掉热原、内毒素的超滤型纯水器。
e）冰箱：细胞培养室必须配备○a普通冰箱或冷藏柜——储存培养液、生理盐水、Hank’s液试剂等培养用的物品及短期保存组织标本。
○b低温冰箱（-20℃）、超低温冰箱——用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂，如酶、血清等。
——细胞培养室的冰箱应属专用，不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质，且应保持清洁。
f）细胞冷冻储存器：储存器常用的是液氮容器。
根据使用需要分为不同的类型及多种规格。
选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小，取放使用方便及液氮挥发量（经济）三种因素。
液氮容器的大小可自25L～500L，可以储存1ml的安瓿250～15000个左右。
液氮温度可低达-196℃，使用时应防止冻伤。
由于液氮不断挥发，应注意观察存留液氮情况，及时定期补充液氮，避免挥发过多而致细胞受损。
目前，国内各类实验室已广泛使用新型的细胞冷冻储存器。
市场所提供的各种新型的细胞冷冻储存器具有性能优异，使用方便等特点。
例如：——可通过先进的电子控制器实现冻存自动化并监测液氮水平和样品温度，确保样品温度始终处于设定温度点；——可配备先进的报警系统，分别警报液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况：——同时具备热气体旁路系统，防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐，从而更有效地保护样品，防止升温。
另外，多种规格的先进液氮运输，供应罐系列不仅移动方便，还可通过连接管给储存罐补充液氮，提高工作效率，保证样品安全。
g）离心机：进行细胞培养时，常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作，通常需要使用离心机。
○a一般可常规配置4000rpm的国产台式离心机，例如细胞沉降，使用80～100g 的离心机即可，离心力过大有时可能引起细胞的损伤。
○b另外，可根据需要添置其他类型如大容量或可调节温度的离心机等○c若需特殊用途，例如某些细胞的分离制备需梯度离心，则需另行配置实验所需的具备其他特殊功能的离心机。
h）天平：常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。
分析天平的感量为0.1mg、0.01mg和0.001mg。
根据称取物质的量和称量精度的要求，选择适宜级别的天平。
要求精密称定时，当取样量大于100 mg 选用感量为0.1mg天平，在100－10 mg 选用感量为0.01mg 天平，小于10mg选用感量为0.001 mg天平。
