探讨临床常见真菌分布的特点及药敏试验

真菌药敏试验简介真菌体外药物敏感试验简介刘根焰，赵旺胜南京医科大学第一附属医院医学检验科/南京医科大学检验系, 南京210029 随着移植、肿瘤和免疫缺陷患者的增多，侵袭性真菌感染（Invasive fungal infections ，IFI）病例也明显增加；随着临床真菌耐药性的出现，经验性抗真菌治疗越来越困难；随着新的抗真菌药物不断投入临床，传统的抗真菌药物敏感试验标准已难以覆盖。

诸多因素都要求临床微生物室真菌药物敏感试验能够与时俱进。

然而，当前国内临床微生物室真菌药物敏感试验开展的情况却不容乐观，首先表现在开展这项临床服务的实验室少，多局限于少数教学医院；其次，各个实验室采用的方法参差不齐，相互之间的结果可比性差。

为此，本文将介绍临床真菌药物敏感试验的标准参考方法和市场上关于真菌药物敏感试验的仪器和试剂，希望有助于各级医院临床真菌药物敏感试验的规范化开展。

1.真菌体外药物敏感试验的基本概念1.1 常见抗真菌药物介绍开展真菌药物敏感试验前提是了解抗真菌药物的基本知识，包括分类、作用机制及抗真菌特性，见表1[1]。

对于不能从上述特性中推断出药物敏感性结果的部分进行体外药物敏感试验。

表1 常见抗真菌药物简介分类代表药物作用机制抗真菌作用多烯类两性霉素B 直接和细胞膜上的麦角固醇结合，导致细胞膜对单价和二价阳离子的通透性增加而导致细胞死亡。

对念珠菌、隐球菌、球孢子菌、孢子丝菌、芽生菌、毛霉菌和大部分曲霉敏感，对土曲霉、构巢曲霉、Aspergillus fumigateaffinis 和Aspergillus lentulus天然耐药。

三唑类酮康唑氟康唑伊曲康唑伏立康唑通过抑制真菌细胞色素P450 依赖的-羊毛甾醇14α-去甲基化酶作用，导致麦角固醇合成受阻氟康唑抗菌谱窄,对大多数念珠菌、隐球菌有效，对曲霉无抑制活性,对克柔念珠菌天然耐药；伊曲康唑较氟康唑抗菌谱宽,并对曲1泊沙康唑舍他康唑霉有抑制作用；伏立康唑较氟康唑抗菌谱宽,并对曲霉、镰刀菌和其它透明丝孢霉有抑制作用；泊沙康唑抗菌谱最宽,对念珠菌,曲霉、镰刀菌、接合菌和其它透明丝孢有效；舍他康唑主要对皮肤癣菌和念珠菌抗菌活性较强烯丙胺类特比萘芬萘替芬抑制角鲨烯环氧化酶而干扰麦角固醇的生物合成。

322株酵母样真菌医院感染分布和耐药现状分析摘要目的：了解临床常见真菌的检出率、分布特点及耐药情况。

方法：使用改良沙氏琼脂（sda）培养基，有真菌生长用api条进行鉴定及药敏试验，药物包括制霉菌素、氟康唑、伊曲康唑、两性霉素b及特比奈芬进行等。

结果：分离出322株酵母样真菌，检出率依次为白色念珠菌209株（64.9%），光滑假丝酵母菌49株（15.2%），克柔假丝酵母菌24株（7.5%），热带假丝酵母菌23株（7.1%），其他17株（5.3%）；标本分布情况依次为痰61.3%、分泌物及引流物17.1%、尿液9.3%、粪便6.2%、血液1.6%、其他4.0%；白色假丝酵母菌对特比奈芬、氟康唑、伊曲康唑、制霉菌素、两性霉素b的耐药率依次为88.5%、21.5%、17.7%、8.6%、2.9%。

结论：在酵母样真菌感染中，以白色假丝酵母样菌检出率最高，痰液送检标本检出率最高，4种酵母样真菌对特比奈芬耐药率最高，其次为氟康唑。

关键词酵母样真菌药敏试验耐药性本文目的是了解医院真菌感染的分布特点及对抗真菌药物的敏感情况，以便为指导临床合理有效使用抗真菌药物提供依据。

资料与方法标本来源：2009年1月～2010年11月住院和门诊患者各种标本中分离得到。

培养及鉴定：改良沙氏琼脂培养基来自于oxoid公司、真菌api 鉴定条来自于梅里埃公司。

按照《全国临床检验操作规程》第3版进行手工鉴定，标本接种于改良沙氏琼脂培养基，生长真菌转种科玛嘉显色培养基中，经35℃、24～48小时培养，根据菌落不同的颜色判断菌种；并通过api条进行手工鉴定。

药敏试验：药敏参照2003nccls关于真菌纸片扩散法，m-h平皿、药敏纸片购自rosco公司。

结果真菌检出分布：2009年1月～2010年11月从医院门诊及住院患者不同标本分离出322株酵母样真菌，所有标本中痰标本最多，分泌物次之，分布情况，见表1。

科室分布以老年病科为最多，门诊最少，见表2。

老年呼吸道真菌感染分布和药敏结果分析【摘要】目的了解我院老年人下呼吸道真菌感染和药敏测试情况。

方法收集我院老年呼吸道标本980株,对其检出232株真菌进行5种常用抗真菌药的体外敏感性检测。

结果通过痰涂片结合分离培养,菌种分布以白色念珠菌为主,占18.6%。

对5种常用药物(氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、卡泊芬净、两性霉素B)进行耐药性分析,发现除克柔念珠菌外,其他真菌对卡泊芬净、两性霉素B和唑类比较敏感,克柔念珠菌对氟康唑耐药。

结论对痰标本进行涂片和培养,发现真菌感染仍以白色念珠菌为主,克柔念珠菌对氟康唑耐药。

其他真菌对两性霉素B和唑类比较敏感,因此应重视真菌分离鉴定和药敏检测指导临床合理用药。

【关键词】呼吸道感染;真菌;药敏试验;老年患者随着医疗技术的发展,近年来广谱抗生素,免疫抑制剂,介入性检查治疗手段的广泛应用,肿瘤化疗、放疗,器官移植和社会老龄化等因素引起的免疫功能低下人群比例增高,临床真菌感染近年呈上升趋势,尤其是近年来抗真菌感染的治疗,或者预防性治疗,导致真菌感染株及耐药趋势发生变化。

而下呼吸道感染最常见继发真菌二重感染[1]。

因此对痰液标本真菌分离,正确鉴定和药敏试验指导用药显得尤为重要。

现将本院2008年10月至2010年4月呼吸道感染患者的痰培养念珠菌分布及药敏试验结果总结报告如下。

1 材料方法1.1 标本来源980株痰标本均系2008年10月至2010年4月在我院内科、外科及肿瘤科的老年患者。

有呼吸道感染后用抗生素史,年龄60~92岁。

平均73岁,全部病例均符合医院内获得性支气管肺感染诊断标准:从980株分离出232株真菌。

1.2 材料血平板,麦康凯和沙保罗培养基;念珠菌显色培养基,真菌鉴定及药敏板条。

FUNGUS(法国梅里埃生物公司)1.3 真菌分离标本按照《全国临床检验操作规程》,将痰消化去污后直接涂片镜检[2]。

取镜下白细胞数＞25/HP上皮细胞＜10/HP并伴有出芽酵母样菌菌丝的痰液进行接种,分区划线接种血平板、中国蓝和沙保罗培养基。

临床酵母样真菌感染特点及药敏分析目的通过了解沈阳医学院沈洲医院检验科微生物室收检的各类临床标本中分离到的各类酵母样真菌的菌群分布特点及耐药情况，从而指导临床合理使用抗真菌药物、有效预防真菌感染和耐药性的发生。

方法所有菌株均分离自沈洲医院临床送检的痰液、尿液、粪便、咽拭子、分泌物等。

实验采用贝瑞特公司的沙保弱琼脂培养基分离培养真菌，用法国生物梅里埃公司生产的ATB Expression 微生物半自动鉴定/药敏分析仪进行真菌鉴定和药敏分析。

结果临床酵母样真菌检出率最高的为白假丝酵母菌（65.6%），其次为热带假丝酵母菌（13.9%）、光滑假丝酵母菌（11.1%）、近平滑假丝酵母菌（6.1%）、其他酵母样真菌（3.3%）；180株酵母样真菌对5种抗真菌药物（两性霉素B、5-氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑、氟康唑）的平均耐药率依次为2.1%、5.5%、22.3%、25.6%、39.6%。

结论180株酵母样真菌中，白假丝酵母菌检出率最高，其次为热带酵母菌；标本来源中痰液标本所占比例最高，其次为便和尿液标本；耐药监测中酵母样真菌对两性霉素B耐药性最低，对氟康唑耐药性最高。

标签：酵母样真菌；抗真菌药物；药敏试验；耐药真菌广泛存在于自然界，并寄生于人体皮肤和黏膜，属于条件致病菌。

近年来，由于广谱抗生素、抗肿瘤药物、激素和免疫抑制剂在临床的广泛应用，器官移植及导管技术的开展以及艾滋病和糖尿病发病率的不断上升，真菌感染的发病率呈上升趋势，临床上分离到的酵母样真菌菌株逐年增多，加之抗真菌药物有限，而耐药率有增无减。

因此，加强真菌感染的控制及药物监测，有效防治真菌感染及提高治愈率已成为目前临床医学领域中的一个重要课题。

现将沈洲医院2011年1～12月临床标本中分离到180株的酵母样真菌分布及耐药情况报道如下：1 材料与方法1.1 标本来源180株酵母样真菌均分离自沈洲医院2011年1～12月临床送检的痰液、尿液、粪便、咽拭子、分泌物等。

真菌的鉴定及药敏试验分析真菌对人类健康的危害包括由病原性真菌、条件致病真菌所致的深部真菌病和浅部真菌病；由气传真菌所致的变态反应真菌症即过敏；由污染真菌产毒所致的真菌中毒症。

随着医学的发展，特别是抗生素的广泛使用，大量治疗手段的开展，免疫障碍疾病的大量发生，使真菌感染的情况日益增加，医院感染中的真菌感染也不断增加，因而，掌握真菌检验的方法就成为检验工作中的一个重要组成部分。

1 材料与方法1.1 真菌来源收集临床送检标本所分离出的真菌120例，男性84例，女性36例，其中痰液96株，粪便11例，咽拭子12例、尿液5例、血液4例，分泌物3例。

1.2 采集及处理根据真菌侵犯组织和器官的不同而采集不同的标本，而采集最合适的标本是决定能否找到病原性真菌的关键，要尽量用消毒方法采集标本以免污染。

深部真菌病的标本如血液、脑脊液、脓液、尿、痰等应及时收集检查，一般不超过1～2h，以免变质污染，标本采取前，应忌用药。

为避免污染杂菌，在收集标本时，应严格无菌操作，必要时在培养基内加入抗生素类。

1.3 检验方法1.3.1 酵母样菌的检验直接涂片法各类标本，除脑脊液、尿、胸水、腹水等需离心沉淀后取沉淀物作涂片外，其他均可用生理盐水或10％～40％KOH作涂片后直接镜检或用革兰、墨汁、0.1％甲苯胺蓝染色后镜检。

分离酵母样菌所选用的培养基为沙保弱固体或液体培养基，在培养基中可加入各种抗生素抑制细菌的生长、有利于真菌生长含抑制剂的霉菌琼脂。

将备类标本直接接种上述培养基，除新型隐球菌需同时接种两支培养基；一支孵育于37℃，另一支孵育于22～28℃，其他酵母菌均孵育于22～28℃。

每日观察生长情况。

根据酵母菌在培养基上的菌落特征及在玉米粉吐温80培养基上生长物在显微镜下生长情况可作初步鉴定。

1.3.2 丝状真菌的检验某些丝状真菌如孢子丝菌或荚膜组织胞浆菌的直接涂片，必须染色后检查。

真菌的形态和结构通过染色更为清楚，不染色涂片不易保存，染色涂片可长期保存。