新药毒理实验动物组织病理学图谱_11840095

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动物实验模型病理切片展示一、CCl4诱导的肝脏纤维化简介：肝纤维化是肝细胞坏死或损伤后常见的反应，是诸多慢性肝脏疾病发展至肝硬化过程中的一个中间环节。

肝纤维化的形成与坏死或炎症细胞释放的多种细胞因子或脂质过氧化产物密切相关。

CCl4为一种选择性肝毒性药物，其进入机体后在肝内活化成自由基，如三氯甲基自由基，后者可直接损伤质膜，启动脂质过氧化作用，破坏肝细胞的模型结构等，造成肝细胞变性坏死和肝纤维化的形成。

通过CCl4复制肝纤维化动物模型通常以小鼠或大鼠为对象，染毒途径主要为灌胃、腹腔注射或皮下注射。

动物模型图. 经过3个月的CCl4注射造模，小鼠的肝脏在中央静脉区形成了比较明显的肝纤维化，中央静脉之间形成了纤维桥接。

（Masson染色）二、CXCL14诱导的急性肝损伤动物模型简述：CCl4是最经典的药物性肝损伤造模毒素之一，其在肝内主要被微粒体细胞色素P450氧化酶代谢，产生三氯甲烷自由基和三氯甲基过氧自由基，从而破坏细胞膜结构和功能的完整性，引起肝细胞膜的通透性增加，可溶性酶的大量渗出，最终导致肝细胞死亡，并引发肝脏衰竭。

根据CCl4代谢和肝毒性机制可复制不同的肝损伤模型，其中给药剂量和给药方法是其技术关键。

对于复制急性肝衰竭动物模型，往往采用大剂量一次性灌胃或腹腔注射给药。

图. (A) CCl4注射后0.5 d的HE染色表明CXCL14过表达增加了肝脏组织的嗜酸性变性面积(在照片中用虚线标记)(p < 0.05)。

(B) 1.5天组织样本的HE染色表明CXCL14过表达造成了比对照组更大面积的细胞坏死(p <0.05)。

(C)同时还造成了中央静脉周围肝细胞中明显的脂肪滴积累。

α 荼异硫氰酸酯诱导小鼠胆汁淤积性肝纤维化及其炎症通路罗怡爽，郑秀婷，章浩月，徐丽萍，裘加鹏，徐港铭，刘爱明△（宁波大学医学院，浙江宁波３１５２１１）【摘要】　目的：探讨 荼异硫氰酸酯（ＡＮＩＴ）诱导的胆汁淤积性肝纤维化的发展及其炎症通路。

方法：将１５只体重为（２３±２）ｇ的１２９／Ｓｖ小鼠随机分为对照组（ｎ＝５）和实验组（ｎ＝１０）。

对照组常规饲料喂养，实验组小鼠给予０．０５％ＡＮＩＴ饲料食饲。

实验组分别在１４ｄ和２８ｄ各处死５只小鼠，收集胆囊、血清、肝脏等标本。

按试剂盒程序检测胆汁淤积生化指标，组织病理学评估肝细胞损伤程度，Ｑ ＰＣＲ和ＷＢ分析肝纤维化、炎症反应等水平。

结果：与对照组相比，造模第２周ＡＮＩＴ １４ｄ组（Ａ Ｄ１４）中的主要胆汁淤积指标总胆汁酸（ＴＢＡ）从（３．２±０．９）μｍｏｌ／Ｌ显著增加至（３１．６±４．３）μｍｏｌ／Ｌ，肝损伤指标谷草转氨酶（ＡＳＴ）和谷丙转氨酶（ＡＬＴ）也显著升高（Ｐ＜０．０５）；纤维化因子金属蛋白酶组织抑制因子１（ＴＩＭＰ １）、单核细胞趋化因子（ＭＣＰ １）、Ｉ型胶原蛋白（ＣｏｌｌａｇｅｎＩ）表达高于对照组（Ｐ＜０．０５）；ＣｏｌｌａｇｅｎＩ和α ＳＭＡ纤维化蛋白表达均上调；肝脏胶原纤维大量沉积，纤维化已产生（Ｐ＜０．０５）。

炎症因子表达高于对照组，ＪＮＫ、ｃ Ｊｕｎ、ＳＴＡＴ３等均被激活（Ｐ＜０．０５）。

ＡＮＩＴ ２８ｄ组（Ａ Ｄ２８）中除ＡＳＴ、基质金属蛋白酶２（ＭＭＰ ２），ＣｏｌｌａｇｅｎＩ指标稍有降低外，其余胆汁淤积、肝损伤、肝纤维化、炎症等指标继续上调或保持稳定（Ｐ＜０．０５）。

结论：０．０５％的ＡＮＩＴ饲料干预１４ｄ，小鼠即发生明显的胆汁淤积性肝纤维化；２８ｄ后，胆汁淤积性肝纤维化趋于稳定；ＪＮＫ炎症通路在肝纤维化的发生发展中起着至关重要的作用。

【关键词】　α 荼异硫氰酸酯；胆汁淤积；肝纤维化；ＪＮＫ通路；小鼠【中图分类号】Ｒ３６６ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１０００ ６８３４（２０２０）０２ １５２ ００６【ＤＯＩ】１０．１２０４７／ｊ．ｃｊａｐ．５９０３．２０２０．０３４Ｔｈｅｃｈｏｌｅｓｔａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙα ｎａｐｈｔｈｙｌｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅｉｎｍｉｃｅａｎｄｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙＬＵＯＹｉ ｓｈｕａｎｇ，ＺＨＥＮＧＸｉｕ ｔｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＨａｏ ｙｕｅ，ＸＵＬｉ ｐｉｎｇ，ＱＩＵＪｉａ ｐｅｎｇ，ＸＵＧａｎｇ ｍｉｎｇ，ＬＩＵＡｉ ｍｉｎｇ△（ＭｅｄｉｃａｌＳｃｈｏｏｌｏｆＮｉｎｇｂｏＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎｉｎｇｂｏ３１５２１１，Ｃｈｉｎａ）【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｃｈｏｌｅｓｔａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙα ｎａｐｈｔｈｙｌｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ（ＡＮＩＴ）ａｎｄｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｆｉｆｔｅｅｎ１２９／Ｓｖｍｉｃｅｗｅｉｇｈｉｎｇ（２３±２）ｇｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ２ｇｒｏｕｐｓ：ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ｎ＝５）ａｎｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｇｒｏｕｐ（ｎ＝１０）．Ｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓｆｅｄｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｃｈｏｗｄｉｅｔａｎｄｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｇｒｏｕｐｗａｓｆｅｄｔｈｅｓａｍｅｄｉｅｔｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈ０．０５％ＡＮＩＴ．Ｆｉｖｅｍｉｃｅｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓａｃｒｉｆｉｃｅｄｏｎｄａｙ１４ａｎｄ２８ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒ，ｓｅｒｕｍａｎｄｌｉｖｅｒｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｏｆｃｈｏｌｅｓｔａｓｉｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｆｏｌｌｏｗｉｎｇｔｈｅｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓｉｎｔｈｅｋｉｔ．Ｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ．ＨｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙＱ ＰＣＲａｎｄＷＢ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｏｔａｌｂｉｌｅａｃｉｄ（ＴＢＡ），ｔｈｅｍａｉｎｃｈｏｌｅｓｔａｓｉｓｂｉｏｍａｒｋｅｒ，ｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｆｒｏｍ（３．２±０．９）μｍｏｌ／Ｌｔｏ（３１．６±４．３）μｍｏｌ／ＬｉｎＡ Ｄ１４ｇｒｏｕｐ．ＡＳＴａｎｄＡＬＴ，ｔｈｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｏｆｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙ，ｗｅｒｅａｌｓｏｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｆｉｂｒｏｔｉｃｆａｃｔｏｒｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ１（ＴＩＭＰ １），ｍｏｎｏｃｙｔｅｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ１（ＭＣＰ １）ａｎｄｃｏｌｌａｇｅｎｐｒｏｔｅｉｎＩ（ＣｏｌｌａｇｅｎＩ）ｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｆｉｂｒｏｓｉｓｐｒｏｔｅｉｎＣｏｌｌａｇｅｎＩａｎｄα ＳＭＡｗｅｒｅａｌｓｏｕｐ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ．Ｔｈｅｃｏｌｌａｇｅｎｆｉｂｅｒｓｏｆｔｈｅｌｉｖｅｒｗｅｒｅｌａｒｇｅｌｙｄｅｐｏｓｉｔｅｄａｎｄｔｈｅｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｏｃｃｕｒｒｅｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ＪＮＫ，ｃ ＪｕｎａｎｄＳＴＡＴ３ｗｅｒｅａｃｔｉｖａｔｅｄ（Ｐ＜０．０５）．ＩｎＡ Ｄ２８ｇｒｏｕｐ，ｅｘｃｅｐｔＡＳＴ，ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ２（ＭＭＰ ２）ａｎｄＣｏｌｌａｇｅｎＩｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｗｅｒｅｓｌｉｇｈｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｏｔｈｅｒｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｏｆｃｈｏｌｅ ｓｔａｓｉｓ，ｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙ，ｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｃｏｎｔｉｎｕｅｄｔｏｂｅｕｐ ｒｅｇｕｌａｔｅｄｏｒｓｔａｂｌｅ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｆｔｅｒ１４ ｄａｙｔｒｅａｔ ｍｅｎｔｗｉｔｈ０．０５％ＡＮＩＴｄｉｅｔ，ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｈｏｌｅｓｔａｔｉｃｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｏｃｃｕｒｒｅｄｉｎｍｉｃｅ．Ａｆｔｅｒ２８ｄａｙｓｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｃｈｏｌｅｓｔａｓｉｓｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｋｅｐｔｓｔａｂｌｅ．ＴｈｅＪＮＫｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｐａｔｈｗａｙｐｌａｙｅｄａｃｒｕｃｉａｌｒｏｌｅｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ．【ＫＥＹＷＯＲＤＳ】　ＡＮＩＴ；　ｃｈｏｌｅｓｔａｔｉｃ；　ｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ；　ｊｎｋｐａｔｈｗａｙ；　ｍｉｃｅ 【基金项目】宁波市自然科学基金（２０１８Ａ６１０２５３，２０１８Ａ６１０３８４）；浙江省基础公益技术研究计划（ＬＧＤ１９Ｈ０７０００１，ＬＹ２０Ｈ０３０００１）；宁波大学研究生科研创新基金（Ｇ１９１３０）【收稿日期】２０１９ ０７ ０９【修回日期】２０２０ ０３ ２６　△【通讯作者】Ｔｅｌ：１３８１９８８０５８９；Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉｕａｉｍｉｎｇ＠ｎｂｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 肝纤维化的特征是由于慢性肝病导致肝组织反复受损从而引起细胞外基质蛋白的大量沉积［１］。

波棱瓜子总木脂素的急性和亚慢性毒性试验目录一、内容简述 (2)1.1 研究背景与意义 (2)1.2 国内外研究现状 (3)1.3 研究目的与内容 (4)二、材料与方法 (5)2.1 实验材料 (6)2.2 实验仪器与试剂 (7)2.3 实验设计 (7)2.4 样本制备与剂量设置 (8)2.5 数据采集与分析方法 (9)三、急性毒性试验结果与分析 (10)3.1 实验动物与剂量选择 (11)3.2 急性毒性症状观察 (12)3.3 生物毒性评价指标 (13)3.4 急性毒性试验结论 (13)四、亚慢性毒性试验结果与分析 (14)4.1 实验动物与剂量选择 (15)4.2 亚慢性毒性症状观察 (16)4.3 亚慢性毒性生理指标变化 (17)4.4 亚慢性毒性组织器官损伤评估 (17)4.5 亚慢性毒性试验结论 (18)五、波棱瓜子总木脂素的安全性评价 (18)5.1 急性和亚慢性毒性综合分析 (19)5.2 安全性评价标准与方法 (20)5.3 波棱瓜子总木脂素的安全性评级 (21)5.4 安全性应用建议 (21)六、结论与展望 (22)6.1 研究成果总结 (23)6.2 存在问题与不足 (24)6.3 未来研究方向与应用前景 (25)一、内容简述本试验旨在研究波棱瓜子总木脂素(total oleanolic acid,TOA)的急性和亚慢性毒性。

通过观察不同剂量下波棱瓜子提取物对实验小鼠的生长、行为、器官功能以及血液生化指标的影响，评价TOA的毒性水平。

本试验采用3种不同剂量和200 mgkg)的波棱瓜子提取物，分别进行急性和亚慢性毒性试验。

在试验过程中，对各组小鼠进行定期观察，记录生长情况、活动能力、食欲、体重变化等指标，并对主要器官如肝脏、肾脏、心脏、肺等进行病理学检查。

测定血液生化指标如血清谷丙转氨酶(ALT)、血清谷草转氨酶(AST)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)等，以评估TOA对小鼠的肝肾功能的影响。

麻竹叶黄酮的毒理学实验1. 研究目的本次实验旨在了解麻竹叶黄酮的毒理学特点以及对生物体的毒性反应。

2. 实验方法2.1 实验材料•麻竹叶黄酮•小鼠（雄性，体重20-25g）•氯化钠生理盐水2.2 实验步骤2.2.1 麻竹叶黄酮的制备将麻竹叶晾干，研磨成粉末，用95%乙醇冷提并过滤，过滤液使用旋蒸器浓缩至干燥，得到麻竹叶黄酮。

2.2.2 实验设计将实验小鼠按照体重随机分为3组，分别为：低剂量组（2.5mg/kg）、中剂量组（5mg/kg）、高剂量组（10mg/kg）和对照组（生理盐水），每组10只。

实验前将小鼠饮食禁食12小时，并随机分组。

2.2.3 实验操作将制备好的麻竹叶黄酮溶解于氯化钠生理盐水中，得到不同浓度的实验液。

实验小鼠分别于凌晨6点30分、正午12点和晚上6点定点灌胃不同浓度的麻竹叶黄酮溶液或生理盐水。

每只小鼠每天灌胃一次，连续灌胃14天。

2.2.4 数据分析14天后，观察实验小鼠的一般情况、体重变化、行为习惯和躯体状况。

收集血液样本，进行生化分析以及血脂、肝脏等相关指标的检测。

3. 实验结果经过14天的实验，观察小鼠的一般情况、体重变化、行为习惯和躯体状况，未发现明显异常症状。

生化分析结果显示，与对照组比较，麻竹叶黄酮组小鼠的丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平相对较高，但仍在生理正常范围内。

同时，麻竹叶黄酮组小鼠的血脂、肝脏等相关指标并未出现明显异常。

4. 结论经过本次实验的结果分析，可得出麻竹叶黄酮对小鼠的毒性较小，在实验剂量下未发现明显的生理异常和症状，麻竹叶黄酮具备一定安全性。

但实验结果仅限于小鼠，对人体的毒性和安全性仍待更多深入研究验证。

毒理实验常用细胞
在毒理学研究中，常用的细胞包括：
1. 人类肺上皮细胞（A549）
2. 小鼠肺上皮细胞（MLE-12）
3. 人类肝细胞（HepG2）
4. 小鼠肝细胞（Hepa1-6）
5. 人类肾细胞（HEK-293）
6. 小鼠淋巴细胞（L929）
7. 小鼠纤维母细胞（NIH/3T3）
8. 小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）
9. 人类皮肤成纤维细胞（HDF）
10. 小鼠骨髓质干细胞（BMMSCs）
这些细胞常被用于体外实验，研究不同化学物质或药物对细胞的毒性及损伤效应。

在实验过程中，常通过细胞存活率、细胞周期、DNA 损伤、细胞凋亡等指标来评估化合物对细胞的影响。

细胞毒理实验有助于评估可能的毒性机制、寻找潜在的药物靶点、筛选药物安全性，以及了解细胞对化合物的敏感性和耐受性。