微生物培养基适用性检查
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控制菌检查用培养基适用性检查操作规程一、引言本操作规程旨在规范采用适用性检查方法验证控制菌检查用培养基的适用性的操作过程,确保检查结果准确可靠,提高微生物控制的有效性。
二、范围本操作规程适用于生物药品、食品、化妆品等行业的微生物控制实验室。
三、设备和试剂准备1.培养皿和管子:采用符合国家标准的试剂器皿。
2.培养基:根据实际需要选择合适的培养基,确保培养基的质量符合相关标准。
3.培养基密度标准液:用于调整培养基的密度。
4.液体融化装置:用于融化固体培养基。
5.无菌纸片和无菌棒:用于为菌液接种提供无菌工具。
6.灭菌器:用于灭菌培养器皿和试剂。
7.放射源:用于灭菌工作区域。
8.荧光显微镜:用于观察菌落生长。
9.消毒液和洗涤剂:用于清洗工作台和培养器皿。
四、操作步骤1.准备工作台和操作区域,进行必要的消毒和清洁。
2.准备所需的培养基和试剂。
3.确保培养基质量合格,根据需要使用培养基密度标准液调整培养基的密度。
4.打开培养基瓶盖,将培养基倒入清洁的培养皿或管子中,尽量避免有气泡产生。
5.放入灭菌器中进行灭菌,确保培养器皿和试剂的无菌状态。
6.露肩接种法将待测菌液接种于培养皿表面,接种菌液的体积应适量,避免过多或过少。
7.使用灭菌的无菌棒均匀涂抹接种菌液,确保菌液均匀分布在培养基表面。
8.均匀涂抹后,用无菌纸将菌液多余部分吸干。
9.将接种好的培养皿密封,放入恒温培养箱中进行培养,温度和时间根据具体培养基要求确定。
10.培养箱内的培养皿应避免震动和突然变化的温度。
11.培养一定时间后,取出培养皿进行观察。
12.使用荧光显微镜观察菌落生长情况,记录菌落数量和形态特征。
13.根据培养基的功能和使用要求,进行结论判断。
14.清洗灭菌培养器皿和试剂,彻底清洗工作区域,确保无菌状态。
五、质量控制1.确保培养基和试剂的质量符合相关标准。
2.使用灭菌的无菌器皿和试剂,避免污染。
3.严格控制接种菌液的体积,避免过多或过少的接种量。
RA培养基适用性检查方案RA培养基是一种用于培养和繁殖细菌、真菌和其他微生物的培养基,其主要成分包括碳源、氮源、矿物质、维生素等。
在微生物学领域,RA培养基被广泛应用于微生物的分离、培养和鉴定工作中。
为了确保RA培养基的质量和适用性,需要进行适用性检查。
一、设备和试剂1.成分齐全的RA培养基2.不同种类的微生物菌种3.恒温培养箱4.显微镜5.消毒器具6.常规实验室设备和仪器二、检查步骤1.准备RA培养基将RA培养基按照配方准确称取所需成分,并按照要求将培养基冷冻或冷藏保存。
确保培养基的成分齐全和质量良好。
2.细菌培养选取不同种类的微生物菌种,分别接种到RA培养基上,并置于恒温培养箱中进行培养。
观察不同菌种在RA培养基上的生长情况,包括生长速度、菌落形态等。
3.细菌鉴定通过显微镜观察不同菌种在RA培养基上的形态特征,比如细胞形态、颜色、大小等,结合生物化学反应进行初步鉴定。
4.抗菌试验对RA培养基进行抗菌试验,检测其对常见抗生素的敏感性。
分别在RA培养基中加入不同浓度的抗生素,观察不同菌种的生长情况,并判断其敏感性。
5.质量控制对RA培养基制备过程进行质量控制,包括原料检验、制备过程的卫生控制、灭菌过程的有效性等。
确保培养基的质量符合标准要求。
6.结果分析对上述步骤的检查结果进行综合分析,评估RA培养基的适用性和质量。
根据不同菌种的生长情况和鉴定结果,判断RA培养基是否符合实验需求。
三、结果评估1.生长情况观察不同微生物菌种在RA培养基上的生长情况,包括生长速度、菌落形态、颜色等。
根据生长情况评估RA培养基的适用性。
2.鉴定结果通过显微镜和生物化学反应对不同菌种进行初步鉴定,判断RA培养基是否适合进行微生物鉴定工作。
对鉴定结果准确性进行评估。
3.抗菌试验结果根据抗菌试验的结果,判断RA培养基对抗生素的敏感性,评估其在抗菌试验中的适用性。
四、结论与建议通过以上适用性检查方案,对RA培养基的质量和适用性进行评估,得出结论并提出建议。
培养基适用性检查记录一、检查目的本次检查的目的是评估所使用的培养基是否适合对特定微生物进行培养和繁殖。
检查结果可为后续的微生物实验提供方向和参考。
二、检查方法本次检查采用以下方法:1.选择微生物选择符合实验要求的微生物进行检查,包括菌株、菌液或真菌等。
2.选择培养基根据微生物的特性和需要,选择适合该微生物的常用或特殊培养基。
3.参数标准对所选定的培养基进行相关参数测定,如pH值、温度、光照、含量等,以衡量该培养基的性质和适用性。
4.培养实验设计将所选的微生物分别培养于不同的培养基下,设置对照组和实验组,观察每个样本在不同培养基下的生长情况和特性。
5.结果分析对各个实验组和对照组进行结果统计和分析,比较培养基对微生物生长情况的影响,初步评估其适用性。
三、检查结果根据以上检查方法所得实验结果,如下:1.培养基A该培养基对微生物生长效果显著,能够促进菌种生长,细菌数量有明显增加。
但对真菌等其他微生物适应性较差。
2.培养基B该培养基对某些细菌有富集效应,能够分离出比较难培养的菌种。
但对其他微生物适应性较差。
3.培养基C该培养基综合适用性较好,对各类微生物均有一定的培养效果。
同时,培养基的含量和温度等因素需进行相关调整。
四、根据以上实验结果,我们初步评估出所使用培养基C是该微生物的最佳选择,具有较好的适应性和稳定性。
但还需对其调整不同参数指标,以获得更好的培养效果。
同时,在实验中仍需注意控制其他因素的干扰,以保证结果的准确性和可信度。
五、备注本次检查结果仅供参考,实际实验中需根据具体微生物特性和实验条件进行相应调整和改进。
微生物限度检查方法适用性试验方案一、试验目的本试验旨在验证微生物限度检查方法的适用性,并评估其在实际样品中的准确性、精密度和灵敏度,以确保检测结果的可靠性。
二、试验范围本试验适用于各类药品、食品、环境以及生物制品等样品的微生物限度检查。
三、试验设备与试剂1. 培养基:本试验需使用适当的培养基,如大肠杆菌培养基、沙门氏菌培养基等,以满足特定微生物的培养需求。
2. 灭菌设备:试验中的培养基、工具及试剂需经过灭菌处理,以保证试验环境的无菌状态。
3. 微量移液器:用于准确取样和移液,确保实验的精确性。
4. 微生物培养箱:用于提供适宜的温度和湿度条件来培养微生物样品。
四、试验步骤1. 样品制备:按照相关规定和标准采集样品,并根据不同样品的特性进行适当处理,以便得到具有代表性的样品。
2. 培养基接种:将样品按照试验要求接种到相应的培养基中,并在一定条件下进行培养,以促使微生物生长。
3. 培养基培养:将接种过样品的培养基置于微生物培养箱中,根据微生物的生长特性进行培养,通常包括温度、湿度和培养时间等方面的控制。
4. 结果观察与记录:根据实验要求,观察培养基上是否有微生物的生长,并记录对应的观察结果。
5. 试验数据处理与分析:根据试验结果进行数据处理与分析,并评估微生物限度检查方法的适用性、准确性和灵敏度。
五、试验评价指标1. 准确性:通过与参考方法的比对,评估限度检查方法的准确程度。
2. 精密度:利用不同实验者、设备和试剂的重复试验,评估方法的可重复性和稳定性。
3. 确定度:评估方法的灵敏度和特异性,以确定方法对微生物的检测能力。
4. 可靠性:综合以上评价指标,评估方法在实际应用中的可靠性和适用性。
六、试验结果与分析根据试验评价指标,通过一系列试验和数据分析,我们可以得出以下结论:1. 限度检查方法在各类样品中的准确性良好,能够准确反映样品中微生物的含量。
2. 试验结果表明,方法具有较好的重复性和稳定性,不同实验者、设备和试剂的试验结果相对一致。
R2A琼脂培养基适用性检查方案清晨的阳光透过窗帘,洒在了我的书桌上,一股莫名的动力涌上心头。
十年的方案写作经验告诉我,此刻正是沉浸在创意的海洋中,挥洒文字的最佳时刻。
那么,就让我们来谈谈R2A琼脂培养基适用性检查方案吧。
一、方案背景近年来,微生物实验室在科研和生产中的应用越来越广泛,培养基作为微生物生长繁殖的基础物质,其质量直接关系到实验结果的准确性。
R2A琼脂培养基作为一种常用的培养基,其适用性检查显得尤为重要。
二、方案目标1.评估R2A琼脂培养基的质量,确保其适用于微生物实验室的各项实验。
2.为实验室人员提供一套完整的R2A琼脂培养基适用性检查方案。
三、方案内容1.培养基的外观检查我们要对R2A琼脂培养基的外观进行检查。
观察其颜色、透明度、有无杂质等。
合格的R2A琼脂培养基应为淡黄色,透明度好,无杂质。
2.培养基的溶解性检查将R2A琼脂培养基加入蒸馏水中,观察其溶解性。
合格的R2A琼脂培养基应在短时间内完全溶解,无沉淀。
3.培养基的PH值检查使用PH计对R2A琼脂培养基的PH值进行测定。
合格的R2A琼脂培养基的PH值应在6.8-7.2之间。
4.培养基的微生物生长情况检查将R2A琼脂培养基接种到已知微生物菌种中,观察其在培养基上的生长情况。
合格的R2A琼脂培养基应能支持目标微生物的生长。
5.培养基的稳定性检查将R2A琼脂培养基在室温下放置一定时间,观察其是否发生变质。
合格的R2A琼脂培养基应在一定时间内保持稳定,不发生变质。
6.培养基的保存期检查对R2A琼脂培养基的保存期进行测定,确保其在有效期内使用。
合格的R2A琼脂培养基的保存期一般不应低于6个月。
四、方案实施1.准备实验材料实验所需材料包括:R2A琼脂培养基、蒸馏水、PH计、微生物菌种、培养皿等。
2.实施检查按照方案内容逐项进行检查,详细记录实验数据。
3.数据分析对实验数据进行分析,评估R2A琼脂培养基的适用性。
4.结果报告将实验结果整理成报告,提交给实验室负责人。
微生物计数培养基适用性检查验证方案
1、验证目的:
细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行培养基的适应性检查,本次验证的目的是为了确证营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌测定。
2、参照标准:《2010年版中国药典》
3、验证项目:营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基
4、验证所用培养基:
5、菌液制备
接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基斜面上。
培养24小时;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面,培养24小时,上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液逐级稀释制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。
6、适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50~100cfu,分别注入无菌平皿中,立即倾注营养琼脂培养基,混匀,凝固,每株实验菌平行制备2个平皿,另1平皿不接种菌作为空白对照,置35℃培养48小时,计数;
取白色念珠菌50~100cfu,立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基,混匀,凝固,每株实验菌平行制备2个平皿,另1平皿不接种菌作为空白对照,置25℃培养72小时,计数。
同时,用相应对照培养基替代被检培养基同步进行上述试验。
7、结果记录
备注:空白皿均未长菌
8、结果判定:若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平
均数的70%,且菌落形态大小与对照培养基上的一致,判该培养基实用性检查符合规定。
9、结论:本次所检培养基上的菌落平均数对照培养基上的菌落平均数的70%,且菌落形态大小与对照培养基上的一致,该培养基适用性检查规定。
试验人复核者。
微生物计数培养基适用性验证报告
微生物计数培养基是一种用于定量分离和培养微生物的培养基。
在微
生物学研究和实验室中,微生物计数是非常重要的,因为它可以帮助我们
了解微生物的存在数量和分布。
因此,对微生物计数培养基的适用性进行
验证是非常必要的。
本报告旨在验证一种特定的微生物计数培养基的适用
性并评估其准确性和可靠性。
在实验过程中,我们遵循了国际标准方法来进行微生物计数。
我们首
先制备了适当的稀释液,并将样本依次进行稀释。
然后,我们将稀释后的
样本分别在微生物计数培养基上平面涂布。
接下来,我们将培养皿放在恒
温培养箱中,并进行恒温孵育。
最后,我们对培养皿上生长的菌落进行了
计数。
此外,我们还进行了对照实验,使用了其他常用的微生物计数培养基。
结果显示,验证的微生物计数培养基的结果与其他培养基的结果一致。
这
进一步证明了所验证的培养基的准确性和可靠性。
总的来说,通过本次适用性验证实验,我们证明了所验证的微生物计
数培养基的适用性。
该培养基可以用于各种微生物样本的计数和培养。
然而,需要注意的是,由于不同微生物在不同培养基上的生长特性存在差异,所以在使用该培养基前,需要对特定的微生物进行培养条件的优化。
培养基适用性检查操作规程编制人:日期:部门:微生物室审核人:日期:替代:批准人:日期:执行日期:1、目的建立一个培养基适用性检查操作规程。
2、适用范围微生物限度及无菌检查的成品培养基,由脱水培养基或按处方配置的培养基均应进行培养基适用性检查。
3、检验依据按2010年版《中国药典(一、二部)》附录无菌方法进行测试检查。
4、试验所需菌种大肠埃希菌;金黄色葡萄球菌;枯草芽孢杆菌;生孢梭菌;白色念珠菌;黑曲霉。
5、标准规定5.1 无菌培养基使用性检查5.1.1 无菌性:每批培养基随机取不少于5支(瓶),经培养14天应无菌生长。
5.1.2 灵敏度:经培养对照管应无菌生长,试验管接菌小于100cfu均应生长良好。
5.2 微生物限度使用性检查5.2.1 细菌、霉菌和酵母菌计数检查取标准菌株大肠、金葡、枯草、白念、黑曲霉菌50~100cfu,分别接入于测试与对照培养基,经规定温度、时间培养,测试结果测试与对照培养基平均菌落数比不应小于70%。
5.2.2 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌检查取新鲜标准菌株大肠、金葡、铜绿假单胞菌制备使成10~100cfu菌悬液,分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试,结果被测培养试验菌的生长反应情况与对照培养基一致。
(液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长;固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征)。
5.2.3 大肠埃希菌、大肠菌群检查取新鲜标准菌株大肠、金葡球菌制备使成10~100cfu菌悬液,分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力即指示能力测试,结果被测培养基试验菌的的生长反应情况应与对照培养基一致。
(液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长;固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征)。
5.2.4白色念珠菌、梭菌检查取新鲜标准菌株大肠、白念、生孢梭制备使成10~100cfu菌悬液,分别对测试与对照培养进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试,结果被测培养基试验菌的生长反应情况应与对照培养基一致。
微生物计数培养基适用性检查验证方案微生物计数是一种重要的质量控制方法,用于评估和监控产品或环境中微生物的数量。
微生物计数培养基适用性检查验证方案,是为了确认所使用的培养基是否适合特定的样品类型和目标微生物,并确保结果准确可靠。
本文将详细介绍微生物计数培养基适用性检查验证方案的内容和步骤。
一、背景和目的:在进行微生物计数之前,必须先选择合适的培养基。
不同的微生物对培养基的成分和条件有不同的要求,选择不当的培养基可能导致微生物无法生长或生长受限,从而影响计数结果的准确性。
因此,验证培养基的适用性是确保测试结果可靠的关键步骤。
二、验证方案步骤:1.确定实验目的和验证对象:明确要验证的培养基和目标微生物的种类和数量。
2.设计验证实验方案:选取一批合适的培养基和标准菌株进行验证实验。
可以选择常用的微生物计数培养基,如营养琼脂培养基和肉汤葡萄糖琼脂培养基。
3.校验培养基成分:检查所选培养基是否符合国家或行业标准的要求,包括pH值、含水量、蛋白质含量等。
4.检查培养基适宜性:将所选培养基分别接种种菌株,在适宜的培养条件下观察菌落的生长情况,并与预期结果进行比较。
5.验证培养基选择性:将所选培养基分别接种多种目标微生物和一种非目标微生物,观察是否能明确区分出目标微生物。
6.验证培养基的灵敏度:在适宜的培养条件下,使用一系列稀释液接种目标微生物,观察在各个浓度下生长的情况,确定培养基的最小检出浓度。
7.比对验证实验结果:将验证实验结果与已有的参考数据进行比较,评估培养基的适用性和准确性。
8.结果分析和报告编写:根据实验结果进行统计分析,并编写验证报告,包括验证实验的步骤、结果和结论等。
三、验证结果的解释和处理:验证实验结果可能出现以下情况:-培养基能够支持目标微生物的生长,并与预期结果一致,表明培养基适用性良好;-培养基不能支持目标微生物的生长,可能是培养基成分不合适或有特定成分的抑制作用。
此时,需要进行进一步检查和优化;-培养基能够分辨目标微生物和非目标微生物,表明培养基具有选择性;-培养基的灵敏度和检出限满足要求,表明培养基可以准确检测目标微生物的数量。
培养基适用性检查▪计数实验的培养基适用性该部分内容均为新增规定了该内容的应用范围采用标准菌种计数,回收率以及形态比较的判定方法标准菌种为:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉;规定了稀释后的工作菌液的保存条件和保存期限引入了对照培养基的概念判定的依据:回收率大于70%,且形态一致▪控制菌检查的培养基适用性该部分内容均为新增规定了该部分内容的应用范围以及检查的项目采用标准菌种比较的判定方法根据培养基的用途不同,分为增菌培养基的促生长能力、固体培养基的促生长能力、培养基的抑制能力、固体培养基的指示能力、液体培养基的指示能力等5种检查方法在检查中引入了涂布接种的概念1.概述培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。
计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素,控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异,从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异,影响结果判断的客观性。
培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较,以阳性菌的生长状态或特征来评价拍段检验用培养基是否符合检验要求。
微生物限度检查用培养基主要分为细菌、霉菌及酵母菌计数测定用培养基和控制菌检查用培养基两部分。
2010《版中国药典》微生物限度检查法中收载了“适用性检查”对培养基质量进行控制。
2、培养基适用性检查实验的一般要求2.1培养基适用性检查适用范围2010版《中国药典》规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
培养基使用性检查试验可用于确定实验室所用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基干粉、按处方自行配制培养基不同批次的原材料等)、制备程序(包括水质控制、配制方法、灭菌程序等)、保存条件(温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等)等是否满足微生物限度检查用要求。
即上述影响培养基质量的各关键控制点应通过培养基使用性检查试验确定,如果任一控制点发生变化应重新进行培养基适用性检查。
但是影响培养基质量的关键控制点的变化应掌握在微生物实验室质量控制的一般原则内(见2.2),超过一般原则的培养及是否还能满足微生物限度检查用,无法通过培养基适用性检查确定。
当检查结果出现异常,或实验室质量控制需要,也可通过培养基适用性检查提供一定依据。
总之,培养基适用性检查是在正常条件下关于培养基质量的实验室控制措施,并不一定在每次具体的微生物限度检查样品检测试验活动中都必须同时进行培养基使用性检查试验,但每次微生物检查所用培养基均应经过适用性检查。
2.2微生物限度检查用培养基质量控制的一般原则2.2.1不同处方培养基的替代使用不能通过培养基使用性检查试验简单确定。
2.2.2.培养基适用性检查不能取代供应商或其他法定标准对培养基的有效期、保存条件、制备方法等的更严格等的规定。
2.2.3.如果没有特殊规定,培养基配制采用蒸馏水或纯化水均可,但应采用一定措施加以检测控制,如蒸馏水应核实PH是否为5~7;采用离子交换法制备的纯化水,电阻值应不小于2MΩ等。
2.2.4尽量临用现配。
培养基灭菌后在能取出的前提下,尽快取出,切忌在高压锅内过夜存留;固体培养基灭菌或融化后,融化状态放置不得超过8h;一般预制培养基可置洁净环境2~25℃保存,但不应超过20天;固体琼脂培养基熔化再使用应不超过一次。
2.2.5干粉培养基或培养基原料变质不应再用;预制培养基储存过程中发现浑浊、变色、长菌、严重脱水等变化不应再用。
2.3对照培养基对照培养基应通过严格的质量研究和控制,具备性能稳定、质量优异的特点。
对照培养基作为一种标准试剂,应具备可靠的来源和保障。
2.4培养基适用性检查指标及常用方法2.4.1检测指标:促生长能力、指示能力、抑制能力。
2.4.2常用方法:直接接种法、浇碟法、表面接种法(涂布法)。
2.4.3液体培养基通常采用直接接种法测定上述3种指标,接种时应注意接种量不得超过培养基体积的10%。
固体培养基采用浇碟法和表面接种法测定上述指标。
采用浇碟法考察固体培养基时,为了保证取样的平行性,平行测定两皿求平均数;采用表面接种法考察固体培养基时,表面接种菌液不多于0.2ml/皿,尽量控制在0.1 ml/皿,保证取样的平行性,平行测定两皿观察结果。
3.计数培养基的适用性检查微生物限度检查中计数用培养基3种,营养琼脂、玫瑰红钠营养琼脂和酵母浸出粉葡萄糖琼脂。
3.1计数培养基适用性检查试验菌株。
大肠埃希菌[CMCC(B)44102]金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]白色念珠菌[CMCC(F)98001]黑曲霉菌[CMCC(F)98003]菌株培养基菌液制备同微生物限度检查方法验证。
3.2实验操作3.2.1培养基制备按规定程序新鲜配置营养琼脂(被检培养基和对照培养基)、玫瑰红钠营养琼脂(被检培养基和对照培养基)以及酵母浸出粉葡萄糖琼脂(被检培养基和对照培养基),灭菌后备用。
3.2.2营养琼培养基取7个无菌平皿,分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2皿,每皿接种1ml菌液(含菌50~100cfu),另一平皿不接种菌作为空白对照,倾注对照营养琼培养基,混匀,凝固后于30~35℃倒置培养48h,计数;被检培养基同法操作。
3.2.3玫瑰红钠营养琼脂取5个无菌平皿,分别接种白色念球菌、黑曲霉菌各2皿,每皿接种1ml菌液(含菌50~100cfu),另一平皿不接种菌作为空白对照,倾注对照玫瑰红钠营养琼脂,混匀,凝固后倒置培养72h,计数;被检培养基同法操作。
3.2.4酵母浸出粉葡萄糖琼脂取3个无菌平皿,分别接种白色念球菌2皿,每皿接种1ml 菌液(含菌50~100cfu),另一平皿不接种菌作为空白对照,倾注对照酵母浸出粉葡萄糖琼脂,混匀,凝固后倒置培养72h,计数;被检培养基同法操作。
3.3结果判断若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%,且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致,则判断该培养基的适用性检查符合规定。
4.控制菌检查用培养基适用性检查控制菌检查用成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配置的培养基均应检查。
检查项目包括培养基的促生长能力、指示和抑制特性能力。
4.1计数培养基适用性检查试验菌株。
大肠埃希菌[CMCC(B)44102]金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]乙型副伤寒沙门菌[CMCC(B)50094]白色念珠菌[CMCC(F)98001]枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]菌株培养基菌液制备同微生物限度检查方法验证。
4.2各种培养基需要测试的能力及判断指标液体培养基促生长能力检查:取不大于100cfu的试验菌株分别接种于被检培养基和对照培养基中,在相应控制菌检查规定的培养基温度(30~35℃)及最短培养基时间下培养。
增菌培养基多为澄清液体培养基,与对照培养基比较,被检培养基中试验菌应生长良好,表现为液体培养基变浑浊。
固体培养基促生长能力检查:取试验菌液0.1ml(含菌数50~100cfu)分别涂布于被检培养基和对照培养基上,在相应控制菌检查规定的培养基温度(30~35℃)及最短培养基时间下培养。
与对照培养基比较,被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。
液体培养基指示能力检查:取不大于100cfu的试验菌株分别接种于被检培养基和对照培养基中,在相应控制菌检查规定的培养基温度(30~35℃)及最短培养基时间下培养。
与对照培养基管比较,被检培养基中试验菌应生长情况/指示剂反应等应与对照培养基一致。
固体培养基指示能力检查:取试验菌液0.1ml(含菌数50~100cfu)分别涂布于被检培养基和对照培养基上,在相应控制菌检查规定的培养基温度(30~35℃)及最短培养基时间下培养。
被检培养基上试验菌的菌落形态特征、菌落颜色及指示剂反应情况应与对照培养基一致。
培养基抑制能力检查:取不大于100cfu的试验菌株分别接种于液体被检培养基和对照培养基,取试验菌0.1ml液(不大于100cfu)分别涂布于固体被检培养基和对照培养基,在相应控制菌检查规定的培养基温度(30~35℃)及最长培养基时间下培养。
试验菌应不得生长。
4.3 控制菌检查用培养基能力测试列表(表7)控制菌检查涉及的21种培养基,特点各异。
表格中概述培养基的具体项目,具体操作程序在其后说明。
4.4各控制菌检查用培养基适用性检查实验操作控制菌检查用培养基较多,特点各不相同。
为了避免培养基配制过程出现遗漏,此处特别提示以下几个需要特殊注意到培养基:不可高压灭菌只能加热煮沸的培养基3种:DHL琼脂、SS琼脂和念球菌显色培养基;需要添加试剂的培养基3种:TTB培养基、亚弚酸盐肉汤培养基和哥伦比亚琼脂培养基。
以下叙述各培养基适用性检查的具体操作过程:4.4.1胆盐乳糖培养基新鲜配制100ml/瓶的对照胆盐乳糖培养基4瓶,121℃灭菌15min,备用。
分别接种大肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及金黄色葡萄球菌各1瓶,接种菌液量1ml(不大于100cfu),另一瓶不接种菌作为空白对照;被检培养基同法操作,置规定温度培养。
培养18h,与对照培养基比较,被检培养基中试验菌应生长良好,表现为液体培养基变浑浊;培养48h,空白培养瓶和接种金黄色葡萄球菌的培养瓶应不得浑浊;4.4.2MUG培养基新鲜配制50ml/支的对照MUG培养基4瓶,121℃灭菌15min,备用。
取3支,接种大肠埃希菌2支,接种菌液0.2ml(不大于100cfu),另一支不接种菌作为空白对照,培养5h,在366nm 紫外光灯下观察结果;;被检培养基同法操作,置规定温度培养。
空白培养管应不得浑浊,且366nm处观察无荧光;与对照培养基比较,被检培养基中试验菌应生长良好,表现为液体培养基变浑浊,366nm处应呈荧光。
若荧光不明显,则可延长至24h观察。
4.4.3 曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)新鲜配制对照EMB琼脂培养基,121℃灭菌15min,冷却至60℃倾注平皿,35℃培养箱预培8h后备用。
取5个无菌EMB琼脂平板,分别涂布接种大肠埃希菌和乙型副伤寒沙门菌各2皿,接种菌液0.1ml(含菌50~100cfu),另一平板不接种菌作为空白对照,涂布均匀后于规定温度倒置培养;被检培养基同法操作。
培养18h,被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致;培养24h,空白平板应无菌落生长。
4.4.4 麦康凯琼脂培养基新鲜配制对照麦康凯琼脂培养基121℃灭菌15min,冷却至60℃倾注平皿,35℃培养箱预培8h后备用。
取5个无菌麦康凯琼脂平板,分别涂布接种大肠埃希菌和乙型副伤寒沙门菌各2皿,接种菌液0.1ml(含菌50~100cfu),另一平板不接种菌作为空白对照,涂布均匀后于规定温度倒置培养;被检培养基同法操作。