溶血性链球菌检验

中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。

本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球的检验。

2 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3．1 温箱：36±1℃。

3．2 水浴：36±1℃。

3．3 显微镜。

3．4 离心机。

3．5 试管架。

3．6 灭菌平皿。

3．7 灭菌小试管。

3．8 载玻片。

3．9 灭菌吸管：1 mL、10 mL。

3．10 灭菌镊子。

3．11 均质器。

3．12 酒精灯。

3．13 接种环。

4 培养基和试剂4．1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。

4．2 肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定。

4．3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28 中4.62 规定。

4．4 血琼脂平板：按GB 4789.28 中4.6 规定。

4．5 人血浆。

4．6 0.25%氯化钙。

4．7 灭菌生理盐水。

4．8 杆菌肽药敏纸片（含 0.04 单位）。

5 检验程序6 操作步骤6．1 样品处理称取 25 g 固体检样；称取25 mL 液体检样，加入 225 mL 灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。

6．2 一般培养将上述混悬液吸取 5 mL，接种于 50 mL 葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经 36±1℃培养 24 h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。

6．3 形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径 0.5～1 μm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者 20～30 个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。

1.溶血性链球菌
①GB4789.11-2014 《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》于
2015年05月01日实施，代替GB/T 4789.11-2003 《食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验》。

注：根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血及其溶血性质分为三类，α-溶血性链球菌，也称甲型溶血，此类细菌致病力不强，多为条件致病菌。

在人类呼吸道及肠道中有α型溶血链球菌正常寄生，但有时也可引起亚急性心内膜炎等症。

β-溶血性链球菌，这类菌亦称为溶血性链球菌，该菌的致病力强，常引起人类和动物的多种疾病。

具体用途是用于研究和质量控制。

γ-溶血链球菌也称为丙型或不溶血性链球菌，该菌无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔也引起感染。

②选作项目：链激酶试验：搜索了广东环凯/青岛海博/北京陆桥均没有发现“草酸钾血浆”或者链激酶实验套装在售。

③生化鉴定：搜索了广东环凯/青岛海博/北京陆桥仅在北京陆桥发现“溶血性链球菌荧光定量PCR检测试剂盒“
2.根据GB4789.35-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》可进行双歧杆菌计数嗜热链球菌鉴别乳杆菌鉴别如果对标准理解没有错误的情况下，应该问题不大。

3.若根据GB4789.34-2012 进行双歧杆菌的鉴定，需要气相色谱，这个仪器是微生物检验科所不具备的。

4.总之，从实验条件上，药品检验实验室是否可以用于保健食品的检测，尚不明确；从人员看，微生物检验科实验人员均没有上述检验项目的检验经验。

从检测标准看，除自学外，微生物检验科检验人员均没有相关标准的学习经历。

从仪器设备材料看，溶血性链球菌检验缺少相关试剂及仪器。

溶血性链球菌检验操作规程溶血性链球菌（英文简称：S. pyogenes）是一种常见的革兰氏阳性球菌，通常引起咽峡炎、皮肤感染和淋巴结炎等疾病。

准确的检测和鉴定溶血性链球菌对于诊断和治疗这些疾病至关重要。

下面是关于溶血性链球菌检验的操作规程。

一、检验前准备1. 检验人员需佩戴好防护用具，如实验手套、隔离眼镜和口罩。

2. 准备好所需的检验试剂和材料，包括培养基、琼脂培养基、草莓牛血琼脂、货架刀等。

3. 仔细核对标本的标签和信息，确保和病人信息一致。

二、标本采集和处理1. 从患者口咽部或其他可疑感染部位采集标本，如咽拭子或分泌物样本。

2. 将标本稀释或切碎，使其与培养基充分混合。

3. 使用棉签或货架刀，将混合好的标本涂抹在琼脂培养基上。

三、培养和鉴定1. 将含有标本的琼脂培养基置于37℃恒温箱中培养18-24小时。

2. 观察培养基上是否有溶血环形形成，表明有溶血性链球菌的存在。

3. 将溶血环形的菌落或单个菌落划取到草莓牛血琼脂上。

4. 再次置于37℃恒温箱中培养18-24小时。

5. 观察草莓牛血琼脂上生长的菌落形态和特征。

6. 进一步进行革兰染色，观察菌形和细胞特征。

四、药敏试验对已鉴定的溶血性链球菌，可以进行药敏试验以确定对何种抗生素敏感。

1. 用细菌悬浮液调整到0.5～0.6麦克法尔兰（McFarland）标准。

2. 使用含有不同抗生素的纸片置于琼脂平板上。

3. 用择菌钳将纸片粘贴于琼脂平板上。

4. 将准备的溶血性链球菌悬液均匀涂抹在琼脂平板上。

5. 将琼脂平板置于37℃恒温箱中培养18-24小时。

6. 观察菌落的生长和抗生素纸片周围的抑制圈，根据直径大小判断菌株的抗药性。

五、结果判定和记录根据溶血环形、菌落形态、革兰染色和药敏试验的结果，判定溶血性链球菌的存在和鉴定结果，并将结果准确记录在检验报告中。

操作规程中的注意事项：1. 检验过程中应严格遵守无菌操作，避免交叉感染。

2. 确保检验室设备和培养基的质量，以及培养温度和时间的准确控制。