《观察酵母菌和霉菌》教案
封丘县曹岗乡第一初中 张立柱
一．教学目标
1.让学生利用显微镜和放大镜，观察酵母菌和霉菌
2.让学生掌握酵母菌、霉菌的结构以及显着的区别，让学生熟练的操作酵母菌的染色，看到细胞核及突起物。
3.学生看到霉菌的结构会说出孢子的颜色，菌丝的表现，总结出霉菌的结构特点。
二．教学重点难点
1.教学重点：让学生自己总结出酵母菌、霉菌的结构，霉菌、蘑菇等真菌的细胞里都有细胞核，是真核生物。
2. 教学难点：在显微镜下观察酵母菌和霉菌后写出实验报告以及小组合作的效果。
三．教学过程
1.导语
同学们，我们已经知道了细菌的结构、特点和作用，但是你们知道不知道真菌的结构呢我们都吃过蘑菇，蘑菇的种类很多，最有代表性的蘑菇是黑木耳、白木耳，又叫做银耳、香菇、牛肝菌，还有我们叫不出名字的野蘑菇，我们这里下过雨以后在路边、树林都会发现默默无闻的可爱的蘑菇，他们有的像把雨伞，有的像个蒙古房，它们都是真菌长出来的，它们没有叶绿素，没有根茎叶的分化，他们由菌盖、菌柄、菌丝，菌褶构成，菌褶处存在有孢子，孢子是蘑菇的后代，靠风传播。有的蘑菇能吃，有的有毒，但能提取兴奋剂，真菌种类多，但不外乎几大类，正如人一样，有黑人、白人、黄种人。有人从霉菌培养皿中提取一种药物，他把它叫做青霉素，并获得了诺贝尔奖，青霉素的药效是抑制病菌的生长和发育，可以治疗咳嗽、发热，还可以治疗淋病。真菌也有坏处，如让人手长手癣、脚气。
真菌又小又可爱，我们用肉眼直接看不到它们，今天我们上实验课，借助显微镜来观察，我为大家配置好的酵母菌、霉菌，大家分小组一起观察，最后写出实验报告
2.目的要求
认识酵母菌和霉菌的结构，并且知道它们属真菌。
3.材料用具
酵母菌的培养液，橘子皮上的霉菌，吸管，镊子，显微镜，解剖针，载玻片，盖玻片，放大镜，碘液，吸水纸。
4.实验步骤
（1）观察酵母菌
a.取一滴酵母菌的培养液，滴在载玻片上，盖上盖玻片，用显微镜观察。
霉菌和酵母菌计数的注意事项
1. 在进行霉菌和酵母菌计数时，确保实验室环境干净整洁，避免外部细菌的污染。
2. 使用适当的培养基进行霉菌和酵母菌计数，以确保得到准确的结果。
3. 对于悬浮在液体中的霉菌和酵母菌，必须充分混合样品以保证样品的均匀性。
4. 采用适当的离心机参数对悬浮在液体中的霉菌和酵母菌进行沉淀，以便于后续的计数和分析。
5. 在进行霉菌和酵母菌计数时，需要对悬液进行适当的稀释以避免高浓度下产生过多的交叉效应。
6. 霉菌和酵母菌计数前要进行质量控制，确保培养基和其他实验条件符合标准。
7. 在进行霉菌和酵母菌计数时，要遵循标准的微生物计数方法和技术，如平板计数法或膜过滤法等。
8. 经常进行实验室设备的维护和保养，确保设备的准确性和可靠性。
9. 实验人员需要接受相关的培训和教育，熟悉霉菌和酵母菌计数的方法和技术，以确保实验的准确性。
10. 实验室中应有标准操作程序（SOP）来规范霉菌和酵母菌计数的步骤，确保每个实验的一致性和准确性。
11. 霉菌和酵母菌计数应该在合适的温度和湿度条件下进行，以模拟真实环境中的生长条件。
12. 在进行霉菌和酵母菌计数前，对样品进行适当的处理和制备，以确保样品的完整性和可测性。
13. 霉菌和酵母菌计数要注意避免阳光直射，避免对微生物产生影响。
14. 在进行霉菌和酵母菌计数时，及时记录实验数据并进行数据分析，以便对结果进行验证和解释。
15. 实验过程中要小心操作，避免对实验人员和环境造成交叉污染。
16. 采用适当的培养基和生长条件来促进霉菌和酵母菌的生长，以便进行可靠的计数。 17. 霉菌和酵母菌计数时，注意样品的来源和保存条件，避免因为样品质量问题造成误差。
18. 在霉菌和酵母菌计数前进行适当的预处理，如破碎细胞壁、杀菌等，以确保样品中微生物的完整性。
食品中霉菌及酵母菌计数测定方法操作规程
一、范围
本规程规定了食品中霉菌和酵母菌（moulds and yeasts）的计数方法。
本规程适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数。
二、编写依据
GB 4789.15-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验霉菌和酵母菌计数》
三、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
3.1 冰箱：2℃～5℃。
3.2 恒温培养箱： 28℃±1℃。
3.3 均质器。
3.4 恒温振荡器。
3.5 显微镜：10×～100×。
3.6 电子天平：感量 0.1g。
3.7 无菌锥形瓶:容量 500mL、250mL。
3.8 无菌广口瓶：500mL。
3.9 无菌吸管：1mL(具 0.01 mL 刻度)、10mL(具 0.1mL 刻度)。
3.10 无菌平皿：直径 90mm。
3.11 无菌试管: 10mm×75mm。
3.12 无菌牛皮纸袋、塑料袋。
四、培养基和试剂
4.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基：同GB 4789.15项下制法。
4.2 孟加拉红培养基：同GB 4789.15项下制法。
4.3 氢氧化钠1mol/L：8g配200ml蒸馏水。
4.4 HCL 1mol/L：7.3g配200ml蒸馏水。
五、检验程序
5.1 样品的稀释
5.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品至盛有225 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10 的样品匀液。
5.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品至盛有225 mL 无菌蒸馏水的锥形（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
5.1.3 取1 mL 1:10 稀释液注入含有9 mL 无菌水的试管中, 另换一支1 mL 无菌吸管反复吹吸,此液为1:100 稀释液。
- 1 - 对酵母菌计数的方法
酵母菌是一种微生物，可以利用细胞代谢产物进行繁殖。由于它们被广泛应用于烘焙、葡萄酒酿造、生物制药和分子生物学等应用中，因此能够准确地对酵母菌进行计数是获得最佳结果的关键所在。目前使用的最常用的计数方法是限制隐秘试验（LSC）法。
限制隐秘试验(LSC)是最常用的测定酵母菌数量的方法，它依赖于酵母菌的繁殖能力来估算菌数的大小。酵母菌被隔离在实验室的培养基中，其中培养基中有一系列的特定因子，这些因子有助于酵母菌在短时间内繁殖，而没有增殖率。它检测的是酵母菌的繁殖率，即每一种菌株在特定条件下每一次繁殖所产生的菌量。
首先，将酵母菌与培养基混合，然后将混合液分装到各个容器中，置于增温器中保温培养。在给定的时间内，室温应保持在规定的温度范围内，各种特定的因子也要保证恒定的水平，这种恒定的环境可促使酵母菌在短时间内快速繁殖。在一定的规定时间内，每个容器中的菌量会按一定的比例增长，经过一定的次数后，逐一收集每种菌株的繁殖液，并对收集液进行测试。
在进行实验前，需要准备一些检测材料，如检测液、微量称量瓶、重量分秤、荧光显微镜等，以及一些培养基材料，如培养基、海藻酸钠、无机盐和抗生素等，以及一些必要的操作工具，如增温器、小刀刨子、瓶子等。按照实验说明，将培养基材料按比例放入实验室常温器中，将用于酵母菌计数的检测液放入微量称量瓶中，用重量分秤精确测量检测液，并将检测液和培养基按比例混合，最后在增温器中保 - 2 - 温培养，直至酵母菌达到规定的繁殖增幅度。
在培养完毕后，实验室中的每种菌株的收集液都需要经过荧光显微镜的观察，以确定每种菌株的总数。此外，还需要用酵母菌计数仪将培养液中的每一种菌株进行计数，以此来反映出酵母菌的总量。
最后，可以根据相关技术文献来确定酵母菌的平均繁殖率。根据实验结果，可以准确计算出本次实验中酵母菌总计数。该方法既简单，又可以精确地测定酵母菌的计数，对于任何涉及到酵母菌的实验都有一定的参考价值。
