《观察酵母菌和霉菌》教案
封丘县曹岗乡第一初中 张立柱
一．教学目标
1.让学生利用显微镜和放大镜，观察酵母菌和霉菌
2.让学生掌握酵母菌、霉菌的结构以及显着的区别，让学生熟练的操作酵母菌的染色，看到细胞核及突起物。
3.学生看到霉菌的结构会说出孢子的颜色，菌丝的表现，总结出霉菌的结构特点。
二．教学重点难点
1.教学重点：让学生自己总结出酵母菌、霉菌的结构，霉菌、蘑菇等真菌的细胞里都有细胞核，是真核生物。
2. 教学难点：在显微镜下观察酵母菌和霉菌后写出实验报告以及小组合作的效果。
三．教学过程
1.导语
同学们，我们已经知道了细菌的结构、特点和作用，但是你们知道不知道真菌的结构呢我们都吃过蘑菇，蘑菇的种类很多，最有代表性的蘑菇是黑木耳、白木耳，又叫做银耳、香菇、牛肝菌，还有我们叫不出名字的野蘑菇，我们这里下过雨以后在路边、树林都会发现默默无闻的可爱的蘑菇，他们有的像把雨伞，有的像个蒙古房，它们都是真菌长出来的，它们没有叶绿素，没有根茎叶的分化，他们由菌盖、菌柄、菌丝，菌褶构成，菌褶处存在有孢子，孢子是蘑菇的后代，靠风传播。有的蘑菇能吃，有的有毒，但能提取兴奋剂，真菌种类多，但不外乎几大类，正如人一样，有黑人、白人、黄种人。有人从霉菌培养皿中提取一种药物，他把它叫做青霉素，并获得了诺贝尔奖，青霉素的药效是抑制病菌的生长和发育，可以治疗咳嗽、发热，还可以治疗淋病。真菌也有坏处，如让人手长手癣、脚气。
真菌又小又可爱，我们用肉眼直接看不到它们，今天我们上实验课，借助显微镜来观察，我为大家配置好的酵母菌、霉菌，大家分小组一起观察，最后写出实验报告
2.目的要求
认识酵母菌和霉菌的结构，并且知道它们属真菌。
3.材料用具
酵母菌的培养液，橘子皮上的霉菌，吸管，镊子，显微镜，解剖针，载玻片，盖玻片，放大镜，碘液，吸水纸。
4.实验步骤
（1）观察酵母菌
a.取一滴酵母菌的培养液，滴在载玻片上，盖上盖玻片，用显微镜观察。
编写人/日期 审核人/日期 批准人/日期
修改标志 修改次数 修改人/日期
霉菌和酵母菌检验
作业指导书
1.0目的
规定了霉菌和酵母菌的检验方法，保证按标准化进行操作。
2.0适用范围
食品检测室微生物检验
3.0术语 （无）
4.0职责
微生物检验员负责按作业指导书进行检验。
5.0工作流程图（无）
6.0内容及要求
6.1 设备和材料
6.1.1 生化培养箱：25-28℃
6.1.2电子秤
6.1.3三角瓶：250ml
6.1.4 试管
6.1.6 平皿：皿底直径为90mm
6.1.7 吸管：1ml 、10ml
6.1.8 酒精灯
6.1.9 试管架
6.1.10 净化工作台
6.1.11 高压灭菌锅
6.2 培养基和试剂
6.2.1 虎红琼脂培养基
6.2.3 生理盐水（0.9%）
6.3操作步骤
6.3.1样品处理
6.3.1.1 成品、半成品、水样以无菌操作直接吸取1ml于灭菌平皿中；原材料、一些可疑样品可以视污染情况作不同的稀释处理
6.3.2样品稀释
编写人/日期 审核人/日期 批准人/日期
修改标志 修改次数 修改人/日期
霉菌和酵母菌检验
作业指导书
6.3.2.1以无菌操作称取检样25g (25ml)，放入含有225ml灭菌生理盐水的三角瓶中，振摇30min，即为1：10稀释液。
6.3.2.2 取1ml 1：10稀释液注入含有9ml灭菌水的试管中，振荡数次，此液为1：100稀释液。
6.3.3按上述操作顺序作10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1ml吸管，根据对样品污染情况的估计，选择三个合适的稀释液于无菌平皿中，每个稀释度做两个平皿，将冷却至46℃左右的培养基倾入平皿15-20ml，转动摇匀，待琼指凝固后，倒置于25-28℃生化培养箱中，3d后开始观察，共培养观察5天。
6.3.4计数方法
通常选择菌落数在10-150之间的平皿进行计数，同稀释度的两个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为1g（或1ml）检样中所含霉菌和酵母菌数。
霉菌和酵母菌检测
1 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
1.1 冰箱：2℃～5℃。
1.2 恒温培养箱：28℃±1℃。
1.3 均质器。
1.4 恒温振荡器。
1.5 显微镜：10×～100×。
1.6 电子天平：感量0.1g。
1.7 无菌锥形瓶:容量500ml、250ml。
1.8 无菌广口瓶：500ml。
1.9 无菌吸管：1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)。
1.10 无菌平皿：直径90mm。
1.11 无菌试管：10mm×75mm。
1.12 无菌牛皮纸袋、塑料袋。
2 培养基和试剂
2.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基：见附录A中A.1。
2.2 孟加拉红培养基：见附录A中A.2。
3 操作方法
3.1 试验前准备
3.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀释剂等移至操作室内。准备好足够用量，避免操作中出入操作间。
3.1.2 开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置30min。
3.1.3 操作人员用肥皂洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋，用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好无菌衣、帽、口罩、手套等。
3.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手、工作台面，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌剪刀或镊子将供试品启封。
3.2 样品稀释液的制备
根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备样品稀释液。样品稀释液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。样品稀释液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
3.2.1 固体和半固体样品
称取25g样品至盛有225ml灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225ml无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10的样品匀液。
3.2.2 液体样品
1 霉菌和酵母菌介绍及检测方法
一、霉菌和酵母菌介绍：
霉菌和酵母菌及其检验酵母菌是真菌中的一大类，通常是单细胞，呈圆形,卵圆形、腊肠形或杆状。霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。
霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。长期以来，人们利用某些霉菌和酵母加工一些食品，如用霉菌加工干酪和肉，使其味道鲜美；还可利用霉菌和酵母酿酒、制酱；食品、化学、医药等工业都少不了霉菌和酵母。但在某些情况下，霉菌和酵母也可造成中腐败变质。由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故常常在不适于细菌生长的食品中出现，这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品，含有抗菌素的食品等 。由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术，它们能转换某些不利于细菌的物质，而促进致病细菌的生长；有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒素。霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。例如，酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等 。因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准。我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。
二、检验方法：
霉菌和酵母的计数方法，与菌落总数的测定方法基本相似。主要步骤为：将样品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，计数。对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。
具体检测标准参见：
GB4789.15-94，《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物检验 霉菌和酵母计数》
三、说明：
1．样品的处理。为了准确测定霉菌和酵母数，真实反映被检食品的卫生质量，首先应注意样品的代表性。对大的固体食品样品，要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料，再混合磨碎。如样品不太大，最好把全部样品放到灭菌均质器杯内搅拌2min。液体或半固体样品可用迅速颠倒容器25次来混匀。
