抑菌圈实验知识点

实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法一、实验目的掌握抑菌圈法测定杀菌剂的生物活性的方法及步骤。

二、实验原理本实验主要采用抑菌圈法来测定杀菌剂的生物活性。

抑菌圈法是利用杀菌剂在琼脂平板上产生的抑菌效果来对其生物活性进行测定的一种方法。

通常，将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，使其均匀地分布在琼脂上。

然后，将含有细菌培养物的琼脂平板放入恒温箱中进行培养。

在培养一段时间后，观察平板上是否出现了抑菌圈，并测量抑菌圈的直径来评估杀菌剂的生物活性。

三、实验仪器和材料1.显微镜2.恒温箱3.滴定管或移液管4.琼脂平板5.细菌培养物6.杀菌剂溶液四、实验步骤1.准备琼脂平板。

将琼脂平板置于恒温箱中，加热至溶化状态后取出，待其稍微冷却后均匀地倒入培养皿中。

2.滴加杀菌剂溶液。

将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，并用移液管在平板上转动，使杀菌剂均匀地分布在琼脂上。

3.检验杀菌剂效果。

取一定量的细菌培养物，将其在琼脂平板上均匀涂布。

4.培养细菌。

将含有细菌培养物的琼脂平板放入预先恒温箱中，设置合适的温度和培养时间。

5.观察抑菌圈。

在培养一段时间后，取出琼脂平板，用显微镜观察平板上是否出现了抑菌圈。

6.测量抑菌圈直径。

使用直尺或量角器等工具测量抑菌圈的直径，并记录结果。

五、实验注意事项1.操作时要注意无菌技术，以避免细菌污染。

2.滴加杀菌剂溶液时要均匀并轻柔，以保证杀菌剂能充分分散在琼脂平板上。

3.培养细菌时要控制好温度和培养时间，以确保细菌能够充分生长。

4.观察抑菌圈时要注意使用合适的放大倍数，以免错过细小的抑菌圈。

5.测量抑菌圈直径时要使用准确的测量工具，以获得准确的结果。

六、实验结果处理根据实验所得的抑菌圈直径数据，可以通过计算其平均值、标准差等统计指标来评估杀菌剂的生物活性。

较大的抑菌圈直径通常表示杀菌剂具有较强的抑菌效果，反之则表示其抑菌效果较弱。

可以将实验结果与已有的标准值进行比较，以判断杀菌剂的生物活性。

七、实验结果分析根据测得的抑菌圈直径结果，可以对杀菌剂的生物活性进行分析。

如何使用牛津杯测定抗生素的抑菌圈
目的：观察抗生素的抑菌效果，测定抗生素的抑菌圈大小，掌握牛津杯体外测定抗生素的抗菌性。

原理：抗生素从孔洞向琼脂培养基扩散渗透，通过对试验菌的抑杀作用而影响细菌生长繁殖，使菌落形成抑菌圈，依抑菌圈的大小确定抗生素抗菌能力的强弱。

材料
1.菌种：金黄色葡萄球菌，用营养肉汤培养16~18h得到的菌液。

2.药品：氨苄青霉素，肉汤培养基。

3.器材：牛津杯、涂布棒、生化培养箱、高压蒸汽灭菌锅、水浴锅、灭菌肉汤琼脂培养基、酒精灯、平皿、吸管、0.5cm纸片、镊子、记号笔、尺子等。

实验步骤
1.按照培养基的配制方法步骤配制好肉汤培养基，并在121℃，灭菌20min后，放在60℃水浴锅中保温，注意温度恒定，不要让培养基凝固。

2.将用于试验的防腐剂（抑菌物质）配制成2个所需的浓度（10ug/ml,30ug/ml）。

3.将已经培养好的菌制成一定浓度（106cfu/mL）的悬浮液，用移液管移取1mL该菌悬液至灭过菌的（121℃，20分钟）培养皿中，倒入15mL已灭菌的培养基（温度约45℃，用手摸瓶壁不感觉烫手即可），轻轻转动培养皿，使培养基与菌液混匀，静置凝成平板。

4.将凝固后的平板用灭菌后的打孔器在平板上打孔（4个孔洞），并挑出培养基。

（或将已灭菌的牛津杯依次轻轻放置在平板上）
5.按照顺时针方向依次在每个孔洞（或牛津杯）中加入抑菌剂，以无菌水做空白对照，每种抑菌剂的浓度做三个平行样。

6.在37℃下培养24h观察，用尺子测量抑菌圈的大小。

注意事项
1.应在无菌条件下操作，试验完毕后及时灭菌处理。

2.添加抑菌剂的时候注意滴到其他地方，以免影响观察。

植物真菌类病害组织病原菌的分离及抑菌圈实验1、病原菌的分离培养及保存1.1材料：（1）病害组织（2）分离培养基（PDA培养基）：20%土豆煮汁，2%琼脂条，1%葡萄糖，蒸馏水，121℃高温灭菌（3）次氯酸钠（4）试管斜面培养基：成分为PDA培养基，121℃高温灭菌1.2方法：剪取作物病害部位，将病害部位用次氯酸钠表面消毒后，置于分离培养基上，然后放置于28℃恒温培养箱内培养。

7天后取出，通过菌落形态和孢子镜检挑选出所要分离的病原菌转接试管斜面，然后将斜面放置于28℃恒温培养箱内培养。

7天后取出，包好放于4℃冰箱内低温保存。

2、病原菌摇瓶菌丝体的培养及菌液的制备2.1材料：（1）试管斜面孢子（2）摇瓶培养基：20%土豆煮汁，1%葡萄糖，蒸馏水，121℃高温灭菌。

2.2方法：将试管斜面孢子转接到摇瓶培养基，然后将摇瓶放到220转/分的摇床上培养，2—3天后，摇瓶菌丝体长到一定的成熟状态（不同真菌菌丝体不同）后，取下摇瓶，放于4℃冰箱内低温保存，待需要做抑菌圈实验时，将摇瓶从冰箱内取出，用组织捣碎机将摇瓶菌丝体高速捣碎2分钟左右，至菌液状态。

3、供试药剂的抑菌圈实验3.1材料：（1）打碎的病原菌菌液（2）底层培养基：2%琼脂粉、蒸馏水，121℃高温灭菌。

（3）上层培养基：成分同PDA培养基，121℃高温灭菌。

（4）链霉素溶液：2400U/mL3.2方法：（1）融化底层培养基，待温度降至70℃，倒入测定木盘，放平至凝固。

（2）融化上层培养基，待温度降至54℃，用无菌移液管加入1mL链霉素溶液以防杂菌干扰；继续降温至48℃，用无菌移液管加入6—12mL的病原菌菌液后迅速晃匀后，倒入测定木盘，放平，待凝固后，即做成抑菌圈实验所用的测定盘。

（3）稀释供试药剂到制定浓度。

（4）在测定盘内摆放牛津杯。

（5）用P型移液器将稀释好的药剂滴入牛津杯内，滴液量为0.26mL/杯，然后盖上玻璃板，放置于28℃恒温培养箱内培养，培养时间为16—18小时。

一、实验目的本实验旨在通过抑菌圈实验，观察不同抗生素对特定细菌的抑菌效果，了解抗生素的抗菌活性，并学习如何通过抑菌圈的大小判断细菌对抗生素的敏感性。

二、实验原理抑菌圈实验是微生物学中常用的方法之一，用于检测抗生素对细菌的抑制作用。

实验原理基于抗生素对细菌生长的抑制作用，当抗生素与细菌接触时，细菌的生长会受到抑制，从而在含有抗生素的培养基上形成一个无细菌生长的区域，即抑菌圈。

抑菌圈的大小可以反映抗生素的抗菌活性，通常抑菌圈越大，说明抗生素的抗菌活性越强。

三、实验材料与仪器1. 材料：- 细菌菌株：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）- 抗生素：青霉素、红霉素、庆大霉素、链霉素- 琼脂培养基- 牛肉膏蛋白胨培养基- 水浴箱- 滴管- 铅笔- 玻璃板2. 仪器：- 培养箱- 电子天平- 灭菌器四、实验步骤1. 制备培养基：- 称取牛肉膏蛋白胨培养基，加入适量的蒸馏水，溶解后用电子天平称量，使培养基浓度为10g/L。

- 将溶解后的培养基分装至锥形瓶中，每瓶100mL，121℃高压灭菌15分钟。

- 待培养基冷却至50℃左右，加入琼脂粉，充分搅拌均匀。

- 将琼脂培养基倒入培养皿中，待其凝固。

2. 接种细菌：- 将金黄色葡萄球菌接种至牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃培养24小时。

3. 制备抗生素纸片：- 将抗生素粉末用生理盐水溶解，配制成一定浓度的溶液。

- 用滴管将溶液滴加到无菌滤纸上，使滤纸充分浸润。

- 将滤纸晾干，制成抗生素纸片。

4. 抑菌圈实验：- 将制备好的琼脂培养基上的细菌菌落刮去，并用无菌镊子将抗生素纸片贴在培养基表面。

- 将培养皿倒置放入培养箱中，37℃培养24小时。

5. 观察与记录：- 观察培养皿中抗生素纸片周围是否形成抑菌圈，并记录抑菌圈的大小。

五、实验结果与分析1. 实验结果：- 青霉素：抑菌圈直径为15mm- 红霉素：抑菌圈直径为10mm- 庆大霉素：抑菌圈直径为20mm- 链霉素：抑菌圈直径为8mm2. 结果分析：- 根据抑菌圈的大小，可以判断金黄色葡萄球菌对不同抗生素的敏感性。

2.1.1制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。

取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。

经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。

2.1.2抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。

同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。

切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。

一、实验目的1. 了解抑菌圈实验的基本原理和操作步骤。

2. 通过抑菌圈实验，探究不同抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。

3. 掌握抑菌圈直径的测量方法，并分析抗生素的抑菌活性。

二、实验原理抑菌圈实验是微生物学中常用的一种实验方法，用于测定抗生素对细菌的抑菌效果。

实验原理是：将含有抗生素的纸片放置在已接种有细菌的琼脂平板上，抗生素会通过扩散作用渗透到琼脂中，抑制细菌的生长，形成透明圈，即抑菌圈。

抑菌圈的大小可以反映抗生素的抑菌活性。

三、实验材料与仪器1. 材料：金黄色葡萄球菌、青霉素、链霉素、头孢噻肟钠、肉汤培养基、琼脂、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌镊子、无菌培养皿、无菌滤纸、酒精灯、放大镜等。

2. 仪器：恒温培养箱、天平、电子显微镜、显微镜等。

四、实验方法1. 制备菌悬液：将金黄色葡萄球菌接种于肉汤培养基中，37℃恒温培养24小时，用无菌生理盐水调整菌悬液浓度为1×10^8 CFU/mL。

2. 准备平板：将熔化的琼脂倒入培养皿中，待凝固后，用无菌棉签将菌悬液均匀涂布于平板表面。

3. 制备抑菌圈：将含有不同抗生素的纸片分别放置于平板表面，用无菌镊子轻轻按压使其与琼脂表面紧密接触。

4. 培养平板：将平板倒置放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。

5. 测量抑菌圈直径：用放大镜观察平板，用尺子测量抑菌圈的直径，取平均值。

五、实验结果与分析1. 实验结果：实验结果显示，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用，抑菌圈直径分别为15mm、12mm、10mm；而其他抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较差。

2. 结果分析：抑菌圈直径越大，说明抗生素的抑菌活性越强。

根据实验结果，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强，可作为治疗金黄色葡萄球菌感染的首选抗生素。

六、实验结论通过抑菌圈实验，我们成功探究了不同抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。

实验结果表明，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用，可作为治疗金黄色葡萄球菌感染的首选抗生素。

生物制药工艺实验,抑菌圈的大小
抑菌圈和抑菌物质浓度的对数是成正比的，也就是抑菌物质浓度越高，抑菌圈越大。

抑菌物质浓度一直稀释下去，则抑菌圈直径逐渐变小，直到没有抑菌圈出现，这个临界浓度就是MIC。

如果你的实验没有出现抑菌圈，说明抑菌物质浓度不高。

说明你做的抑菌物质浓度在临界浓度范围内，如果你做的是梯度抑制实验，则说明你的结果有意义，如果是固定浓度，那么久很难说明原因了。

抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式丰要用于测定杀菌
防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。

通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌
防霉剂品种。

实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法work Information Technology Company.2020YEAR实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法一、实验目的学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。

二、实验原理抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。

在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。

其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。

但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。

根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。

三、实验材料供试药剂：速克灵或扑海因。

供试病原菌：番茄灰霉病菌。

实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。

四、实验方法采用管碟法。

将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。

1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。

灭菌蒸馏水为对照。

2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。

在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。

用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。

抑菌圈实验说明抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式，主要用于测定杀菌防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。

通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌防霉剂品种。

用具和材料霉菌培养皿，无菌吸管（或针筒），圆片滤纸（直径2cm），带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针（环），熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右水浴中），一定浓度的药剂，供试验用的菌种。

试验过程1.用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。

2.用无菌吸管（或针筒）向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL。

3.向各培养皿内注入15Ml~20ml的熔化状琼脂培养基（约45℃），将菌液与培养基混合均匀，待其冷却。

4.用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，盖上盖子5.置适宜温度下，培养2~3d，观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。

注意事项1.所有的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。

2.霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配置混合菌液，即这里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等诸种菌的分别混合液，并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。

3.混合菌液的浓度一般为106~108cfu/mL.4.倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为45℃左右），否则会引起微生物死亡。

也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。

5.各种微生物的最适生长温度不同（例如霉菌一般为25~30℃，细菌一般为32~37℃等），恒温培养时宜分开放置。

结果评判由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈（加入该防霉剂对供试菌有抑制效果）。

抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。

在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。

此法同样适合于测定单个菌的抗菌效果。

抑菌圈实验说明抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式，主要用于测定杀菌防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。

通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌防霉剂品种。

用具和材料精品文档，你值得期待霉菌培养皿，无菌吸管（或针筒），圆片滤纸（直径2cm），带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针（环），熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右水浴中），一定浓度的药剂，供试验用的菌种。

试验过程1.用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。

2.用无菌吸管（或针筒）向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL。

3.向各培养皿内注入15Ml~20ml的熔化状琼脂培养基（约45℃），将菌液与培养基混合均匀，待其冷却。

4.用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，盖上盖子5.置适宜温度下，培养2~3d，观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。

注意事项1.所有的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。

2.霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配置混合菌液，即这里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等诸种菌的分别混合液，并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。

3.混合菌液的浓度一般为106~108cfu/mL.4.倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为45℃左右），否则会引起微生物死亡。

也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。

5.各种微生物的最适生长温度不同（例如霉菌一般为25~30℃，细菌一般为32~37℃等），恒温培养时宜分开放置。

结果评判由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈（加入该防霉剂对供试菌有抑制效果）。

抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。

在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。

抑菌圈实验知识点(一)抑菌圈实验什么是抑菌圈实验？抑菌圈实验是一种常用的微生物学实验方法，用于测定不同物质对细菌生长的抑制能力。

通过在寒天培养基上均匀涂敷已经培养好的细菌，并在上面滴加待测物质溶液，观察并测量细菌生长受到抑制的范围。

实验步骤1.准备培养基：将寒天粉加入蒸馏水中溶解，并煮沸消毒，冷却至约50℃时均匀分装到培养皿中。

2.培养细菌：将待测的细菌涂布在寒天培养基表面，使其均匀生长。

3.添加抑制物：在涂布好细菌的寒天培养基上滴加待测物质溶液，通常是药物或化合物。

4.孵育：将培养皿倒置放在恒温培养箱中，经过一段时间后细菌会在寒天培养基上形成菌落。

5.观察与测量：观察并测量细菌生长抑制的范围，即抑菌圈的直径。

实验结果解读•抑菌圈直径的大小可以反映待测物质对细菌的抑制能力，直径越大表示抑制能力越强。

•如果抑菌圈的直径接近或超过寒天培养基的直径，说明待测物质具有较强的杀菌或抑菌作用。

•如果没有出现抑菌圈，说明待测物质对所选细菌无抑制作用，或者浓度过低。

实验注意事项•实验操作要严格遵守无菌技术，避免细菌的外源性污染。

•涂布细菌时要均匀、细心，避免形成片状或丛状生长。

•添加待测物质时要注意均匀滴加，避免产生溢出和扩散。

•移动培养皿时要轻拿轻放，尽量不晃动，以避免菌落的移位或扩散。

•实验后要妥善处理寒天培养基和培养皿，避免细菌的传播。

应用领域抑菌圈实验广泛应用于药物研发、食品安全检测、环境污染监测等领域。

通过该实验可以初步评估化合物或药物的抗菌能力，并为后续进一步研究提供参考依据。

结语抑菌圈实验是一种简单、直观的实验方法，对于评估物质的抗菌能力有着重要的意义。

通过了解抑菌圈实验的基本原理和操作步骤，我们可以更好地理解该实验在微生物学研究中的应用和意义。

四、抑菌试验1．Optochin敏感试验(1)原理：Optochin(奥普托欣)是盐酸乙基氢化羟基奎宁的商品名。

对肺炎链球菌有特异抑制作用，其作用机制可能是干扰叶酸生物合成作用，而对其它链球菌则无此作用。

(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，贴上一张含5μg奥普托欣纸片，置烛缸或二氧化碳孵箱，35℃孵育18~24h，观察结果。

(3)结果：抑菌圈直径大于14mm为敏感，小于或等于14mm为阴性。

(4)应用：主要用于肺炎链球菌（敏感）与其它链球菌（耐药）的鉴别。

2．杆菌肽敏感试验(1)原理：A群链球菌对杆菌肽几乎是100%敏感，而其它群链球菌对杆菌肽通常耐药。

故此试验可对链球菌进行鉴别。

(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴一张含0.04U 的杆菌肽纸片，置35℃孵育18~24h，观察结果。

(3) 结果：抑菌圈直径大于10mm为敏感，小于10mm为耐药。

(4)应用：主要用于A群与非A群链球菌的鉴别。

从临床分离的菌株中有5%~15%非A群链球菌也对杆菌肽敏感，如6%的B群链球菌、7.5%的C群链球菌和G群链球菌等。

3．O/129试验(1)原理：O/129（2，4二氨基-6，7-二异丙基喋啶）能抑制弧菌属、发光杆菌属和邻单胞菌属细菌生长，而气单胞菌属和假单胞菌属细菌则耐药。

(2)方法：用棉拭子将待检菌菌悬液均匀涂布于碱性琼脂平板上，将10μg/片及150μg/片的O/129诊断纸片贴于平板上，置35℃孵育18~24h，观察结果。

(3)结果：出现抑菌圈者表示敏感，无抑菌圈者为耐药。

(4)应用：主要用于弧菌属、邻单胞菌属与气单胞菌属的鉴别，弧菌属和邻单胞菌属菌为敏感，气单胞菌属菌为耐药。

其它菌属有发光杆菌属为敏感，假单胞菌属为耐药。

细菌药敏试验2010-12-09 15:40:52| 分类：专业文章 | 标签：高校公共卫生 |字号订阅各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床，对控制细菌性传染病的流行至关重要。

抑菌实验基本原理抑菌实验是一种常用的实验方法，用于评价物质对细菌的杀菌或抑制作用。

它可以帮助人们了解物质对细菌的作用机制，以及评估其在医药、食品、环境等领域的应用价值。

本文将详细介绍与抑菌实验原理相关的基本原理。

细菌与抗菌物质在了解抑菌实验的原理之前，我们首先需要了解一些基本概念。

细菌细菌是一类单细胞微生物，它们广泛存在于自然界中的各个环境中，包括土壤、水体、空气以及动植物体内。

有些细菌对人类和其他生物有益，如参与食品发酵和分解有机废弃物等；而另一些细菌则具有致病性，可以引起各种感染和疾病。

抗菌物质抗菌物质是指能够杀灭或抑制细菌生长和繁殖的化学物质。

它们可以通过多种途径发挥作用，如破坏细菌的细胞壁、干扰细菌的代谢过程或抑制细菌的DNA合成等。

常见的抗菌物质包括抗生素、消毒剂和防腐剂等。

抑菌实验原理抑菌实验是一种定性或定量评价物质对细菌生长和繁殖的影响的实验方法。

它可以通过观察培养基上的细菌生长情况来判断物质是否具有抗菌活性，并进一步评估其抑制效果的强弱。

实验步骤一般来说，抑菌实验包括以下几个基本步骤：1.培养基准备：将所需培养基按照一定比例配制好，并进行无菌处理，以确保试验过程中不会引入其他微生物。

2.细菌接种：从培养基上选择适当数量的细菌，进行预培养，使其达到合适的生长状态。

然后将预培养液加入到新鲜培养基中，使其浓度适宜。

3.抗菌物质添加：将要测试的抗菌物质加入到含有细菌的培养基中，使其与细菌充分接触。

4.培养：将含有细菌和抗菌物质的培养基置于适宜的环境条件下，如温度、湿度和氧气含量等。

培养一定时间后，观察细菌的生长情况。

5.结果评估：根据实验结果判断抗菌物质对细菌的抑制效果，可以通过观察培养基上是否有细菌生长、细菌数量的变化或测定抑菌圈直径等指标来评估。

抑菌机制抗菌物质对细菌的抑制作用主要通过以下几种机制发挥：1.破坏细胞壁：某些抗菌物质能够破坏细菌的细胞壁结构，导致其内容物外溢而死亡。

这类物质通常作用于革兰氏阳性细菌，因为它们具有较厚的层状结构。

2.1.8.2 抑菌環試驗2.1.8.2.1 原理利用抑菌劑不斷溶解經瓊脂擴散形成不同濃度梯度，以顯示其抑菌作用。

試驗通過抑菌環大小以判斷其是否具有抑菌能力。

本試驗適用於抑菌劑與溶出性抗（抑）菌產品の鑒定。

2.1.8.2.2 試驗器材(1)金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、大腸桿菌(8099)、白色念珠菌(A TCC 10231) 菌懸液(見2.1.1.2)及根據抑菌劑特定用途所用の其他菌懸液。

(2)抑菌劑載體(5 mm 直徑園形新華一號定性濾紙片，經壓力蒸汽滅菌處理後，置120℃烤幹2h，保存備用)。

(3)活菌培養計數所需器材(見2.1.1.3)。

(4)微量移液器(5μl～50μl，可調式)。

(5)遊標卡尺。

(6)營養瓊脂培養基、胰蛋白腖大豆瓊脂培養基與沙堡瓊脂培養基2.1.8.2.3 操作程式(1)抑菌片の製備:對液體抑菌劑，取無菌並乾燥の濾紙片。

每片滴加實際使用濃度抑菌劑溶液20μl，然後將濾紙片平放於清潔の無菌平皿內，開蓋置溫箱(37℃) 中烤幹，或置室溫下自然乾燥後備用。

溶出性抗（抑）菌產品，可直接製成直徑為5mm，厚不超過4mm圓片(塊)，每4 片(塊) 一組。

(2)陰性對照樣片の製備:取無菌乾燥濾紙片，每片滴加無菌蒸餾水20μl，乾燥後備用。

溶出性抗（抑）菌產品の陰性對照樣本，應取同種材質不含抑菌成份の樣品，製成與試驗組大小相同の樣片(塊)。

(3)試驗菌の接種:用無菌棉拭子蘸取濃度為5×105cfu/ml～5×106cfu/ml 試驗菌懸液，在營養瓊脂培養基平板表面均勻塗抹3次。

每塗抹1次，平板應轉動60°，最後將棉拭子繞平板邊緣塗抹一周。

蓋好平皿，置室溫乾燥5min。

(4)抑菌劑樣片貼放:每次試驗貼放1個染菌平板，每個平板貼放4片試驗樣片，1 片陰性對照樣片，共5 片。

用無菌鑷子取樣片貼放於平板表面。

各樣片中心之間相距25mm以上，與平板の周緣相距15mm 以上。

抑菌圈的形成原理一、引言抑菌圈是指在培养基上，细菌生长过程中，在其周围形成的一圈无菌区域。

抑菌圈的形成原理涉及到多种因素，包括细菌种类、培养基成分、温度、pH值等。

二、细菌生长与营养需求细菌是单细胞微生物，它们需要特定的营养物质才能生长繁殖。

常见的营养物质包括碳源、氮源、磷源等。

不同种类的细菌对这些营养物质的需求不同，因此在不同的培养基中，它们的生长情况也会有所不同。

三、抑菌圈形成原理1. 抗生素作用抗生素是指一类能够杀死或抑制微生物生长的药物。

它们通常是由真菌或细菌产生的代谢产物。

当某些细菌遇到特定类型的抗生素时，它们会受到杀死或抑制作用，从而在其周围形成一圈无菌区域。

2. pH值变化pH值是指溶液中氢离子的浓度。

不同种类的细菌对pH值的适应范围不同。

当培养基中的pH值发生变化时，某些细菌可能会受到影响，从而在其周围形成一圈无菌区域。

3. 温度变化温度是影响细菌生长的重要因素之一。

不同种类的细菌对温度的适应范围也不同。

当培养基中的温度发生变化时，某些细菌可能会受到影响，从而在其周围形成一圈无菌区域。

4. 营养物质消耗在培养基中，细菌需要特定的营养物质才能生长繁殖。

当这些营养物质耗尽时，某些细菌可能会停止生长或死亡，从而在其周围形成一圈无菌区域。

5. 氧气供应氧气是许多细菌所需的重要营养物质之一。

当培养基中氧气供应不足时，某些细菌可能会受到影响，从而在其周围形成一圈无菌区域。

四、总结抑菌圈的形成原理涉及到多种因素，包括细菌种类、培养基成分、温度、pH值等。

在实验室中，抑菌圈的形成可以用来检测细菌的敏感性和抗性，从而为临床治疗提供参考依据。

2.1.8.2 抑菌环试验2.1.8.2.1 原理利用抑菌剂不断溶解经琼脂扩散形成不同浓度梯度，以显示其抑菌作用。

试验通过抑菌环大小以判断其是否具有抑菌能力。

本试验适用于抑菌剂与溶出性抗（抑）菌产品的鉴定。

2.1.8.2.2 试验器材(1)金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌(A TCC 10231) 菌悬液(见2.1.1.2)及根据抑菌剂特定用途所用的其他菌悬液。

(2)抑菌剂载体(5 mm 直径园形新华一号定性滤纸片，经压力蒸汽灭菌处理后，置120℃烤干2h，保存备用)。

(3)活菌培养计数所需器材(见2.1.1.3)。

(4)微量移液器(5μl～50μl，可调式)。

(5)游标卡尺。

(6)营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基与沙堡琼脂培养基2.1.8.2.3 操作程序(1)抑菌片的制备:对液体抑菌剂，取无菌并干燥的滤纸片。

每片滴加实际使用浓度抑菌剂溶液20μl，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置温箱(37℃) 中烤干，或置室温下自然干燥后备用。

溶出性抗（抑）菌产品，可直接制成直径为5mm，厚不超过4mm圆片(块)，每4 片(块) 一组。

(2)阴性对照样片的制备:取无菌干燥滤纸片，每片滴加无菌蒸馏水20μl，干燥后备用。

溶出性抗（抑）菌产品的阴性对照样本，应取同种材质不含抑菌成份的样品，制成与试验组大小相同的样片(块)。

(3)试验菌的接种:用无菌棉拭子蘸取浓度为5×105cfu/ml～5×106cfu/ml 试验菌悬液，在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3次。

每涂抹1次，平板应转动60°，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。

盖好平皿，置室温干燥5min。

(4)抑菌剂样片贴放:每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片，1 片阴性对照样片，共5 片。

用无菌镊子取样片贴放于平板表面。

各样片中心之间相距25mm以上，与平板的周缘相距15mm 以上。

琼脂打孔法（琼脂打孔抑菌圈实验）一、试验原理利用抑菌剂不断溶解经琼脂扩散形成不同浓度梯度，以显示其抑菌作用。

试验通过抑菌圈大小以判断其是否具有抑菌能力。

本试验适用于抑菌剂与溶出性抗（抑）菌产品的鉴定。

二、试验器材、化学试剂及菌种培养皿、试管、5uL～50uL 微量移液器，100uL～1000uL微量移液器以及配套的枪头、10mL离心管、游标卡尺、涂布棒、麦氏比浊管、电动混合器、水浴锅、超净工作台、高压灭菌锅、鼓风干燥箱、生化培养箱、电热炉营养琼脂培养基、PBS缓冲液、无菌水、95%乙醇。

菌种：溶血性链球菌、溶血性葡萄球菌、李斯特菌、结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌、吸附性绿脓杆菌、大肠杆菌三、试验步骤1、实验工器具准备及灭菌在锥形瓶中配置营养琼脂培养基，用电热炉加热煮沸至澄清状态，盖好塞子，同PBS 缓冲液、无菌水、配套枪头、涂布棒、离心管一同放入高压灭菌锅中灭菌，121℃杀菌25min。

将培养皿用牛皮纸包好和试管一起放入鼓风干燥箱中灭菌，170℃杀菌2h。

实验前超净工作台及操作室使用前需用紫外灯杀菌30min以上。

2、倒培养皿将培养基及培养皿放置到60℃后开始倒培养皿，培养基使用前摇匀，每个培养皿倒15～20mL左右，倒好后水平静置至完全凝固。

3、菌悬液的制备从冰箱取出需要测试的菌种活化0.5h 后，加入5mL 的PBS缓冲液将斜面上，在手掌上轻轻振打80次，使菌株完全冲下，倒入试管中轻轻摇匀。

吸取1mL 的菌液加入到4mL 的PBS缓冲液中，再吸取1mL稀释的菌悬液依次进行5倍梯度稀释，选择108CFU/mL左右的菌悬液或106CFU/mL左右的孢子悬浮液（对比0.5麦氏比浊管），将选好的菌悬液十倍系列稀释后选第二支试管（即浓度约为106/CFU/mL左右的菌悬液或104CFU/mL左右的孢子悬浮液）进行试验。

4、试验菌的接种用移液枪吸取浓度为 106cfu/mL 试验菌悬液0.1mL ，将其接种到已经倒好的营养琼脂培养皿内，用涂布棒涂布均匀（注意涂布棒每次使用后在酒精灯下灭菌，涂布时动作轻不要刮破培养基），盖好培养皿。