抑菌圈实验知识点

实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法一、实验目的掌握抑菌圈法测定杀菌剂的生物活性的方法及步骤。

二、实验原理本实验主要采用抑菌圈法来测定杀菌剂的生物活性。

抑菌圈法是利用杀菌剂在琼脂平板上产生的抑菌效果来对其生物活性进行测定的一种方法。

通常，将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，使其均匀地分布在琼脂上。

然后，将含有细菌培养物的琼脂平板放入恒温箱中进行培养。

在培养一段时间后，观察平板上是否出现了抑菌圈，并测量抑菌圈的直径来评估杀菌剂的生物活性。

三、实验仪器和材料1.显微镜2.恒温箱3.滴定管或移液管4.琼脂平板5.细菌培养物6.杀菌剂溶液四、实验步骤1.准备琼脂平板。

将琼脂平板置于恒温箱中，加热至溶化状态后取出，待其稍微冷却后均匀地倒入培养皿中。

2.滴加杀菌剂溶液。

将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，并用移液管在平板上转动，使杀菌剂均匀地分布在琼脂上。

3.检验杀菌剂效果。

取一定量的细菌培养物，将其在琼脂平板上均匀涂布。

4.培养细菌。

将含有细菌培养物的琼脂平板放入预先恒温箱中，设置合适的温度和培养时间。

5.观察抑菌圈。

在培养一段时间后，取出琼脂平板，用显微镜观察平板上是否出现了抑菌圈。

6.测量抑菌圈直径。

使用直尺或量角器等工具测量抑菌圈的直径，并记录结果。

五、实验注意事项1.操作时要注意无菌技术，以避免细菌污染。

2.滴加杀菌剂溶液时要均匀并轻柔，以保证杀菌剂能充分分散在琼脂平板上。

3.培养细菌时要控制好温度和培养时间，以确保细菌能够充分生长。

4.观察抑菌圈时要注意使用合适的放大倍数，以免错过细小的抑菌圈。

5.测量抑菌圈直径时要使用准确的测量工具，以获得准确的结果。

六、实验结果处理根据实验所得的抑菌圈直径数据，可以通过计算其平均值、标准差等统计指标来评估杀菌剂的生物活性。

较大的抑菌圈直径通常表示杀菌剂具有较强的抑菌效果，反之则表示其抑菌效果较弱。

可以将实验结果与已有的标准值进行比较，以判断杀菌剂的生物活性。

七、实验结果分析根据测得的抑菌圈直径结果，可以对杀菌剂的生物活性进行分析。

如何使用牛津杯测定抗生素的抑菌圈
目的：观察抗生素的抑菌效果，测定抗生素的抑菌圈大小，掌握牛津杯体外测定抗生素的抗菌性。

原理：抗生素从孔洞向琼脂培养基扩散渗透，通过对试验菌的抑杀作用而影响细菌生长繁殖，使菌落形成抑菌圈，依抑菌圈的大小确定抗生素抗菌能力的强弱。

材料
1.菌种：金黄色葡萄球菌，用营养肉汤培养16~18h得到的菌液。

2.药品：氨苄青霉素，肉汤培养基。

3.器材：牛津杯、涂布棒、生化培养箱、高压蒸汽灭菌锅、水浴锅、灭菌肉汤琼脂培养基、酒精灯、平皿、吸管、0.5cm纸片、镊子、记号笔、尺子等。

实验步骤
1.按照培养基的配制方法步骤配制好肉汤培养基，并在121℃，灭菌20min后，放在60℃水浴锅中保温，注意温度恒定，不要让培养基凝固。

2.将用于试验的防腐剂（抑菌物质）配制成2个所需的浓度（10ug/ml,30ug/ml）。

3.将已经培养好的菌制成一定浓度（106cfu/mL）的悬浮液，用移液管移取1mL该菌悬液至灭过菌的（121℃，20分钟）培养皿中，倒入15mL已灭菌的培养基（温度约45℃，用手摸瓶壁不感觉烫手即可），轻轻转动培养皿，使培养基与菌液混匀，静置凝成平板。

4.将凝固后的平板用灭菌后的打孔器在平板上打孔（4个孔洞），并挑出培养基。

（或将已灭菌的牛津杯依次轻轻放置在平板上）
5.按照顺时针方向依次在每个孔洞（或牛津杯）中加入抑菌剂，以无菌水做空白对照，每种抑菌剂的浓度做三个平行样。

6.在37℃下培养24h观察，用尺子测量抑菌圈的大小。

注意事项
1.应在无菌条件下操作，试验完毕后及时灭菌处理。

2.添加抑菌剂的时候注意滴到其他地方，以免影响观察。

植物真菌类病害组织病原菌的分离及抑菌圈实验1、病原菌的分离培养及保存1.1材料：（1）病害组织（2）分离培养基（PDA培养基）：20%土豆煮汁，2%琼脂条，1%葡萄糖，蒸馏水，121℃高温灭菌（3）次氯酸钠（4）试管斜面培养基：成分为PDA培养基，121℃高温灭菌1.2方法：剪取作物病害部位，将病害部位用次氯酸钠表面消毒后，置于分离培养基上，然后放置于28℃恒温培养箱内培养。

7天后取出，通过菌落形态和孢子镜检挑选出所要分离的病原菌转接试管斜面，然后将斜面放置于28℃恒温培养箱内培养。

7天后取出，包好放于4℃冰箱内低温保存。

2、病原菌摇瓶菌丝体的培养及菌液的制备2.1材料：（1）试管斜面孢子（2）摇瓶培养基：20%土豆煮汁，1%葡萄糖，蒸馏水，121℃高温灭菌。

2.2方法：将试管斜面孢子转接到摇瓶培养基，然后将摇瓶放到220转/分的摇床上培养，2—3天后，摇瓶菌丝体长到一定的成熟状态（不同真菌菌丝体不同）后，取下摇瓶，放于4℃冰箱内低温保存，待需要做抑菌圈实验时，将摇瓶从冰箱内取出，用组织捣碎机将摇瓶菌丝体高速捣碎2分钟左右，至菌液状态。

3、供试药剂的抑菌圈实验3.1材料：（1）打碎的病原菌菌液（2）底层培养基：2%琼脂粉、蒸馏水，121℃高温灭菌。

（3）上层培养基：成分同PDA培养基，121℃高温灭菌。

（4）链霉素溶液：2400U/mL3.2方法：（1）融化底层培养基，待温度降至70℃，倒入测定木盘，放平至凝固。

（2）融化上层培养基，待温度降至54℃，用无菌移液管加入1mL链霉素溶液以防杂菌干扰；继续降温至48℃，用无菌移液管加入6—12mL的病原菌菌液后迅速晃匀后，倒入测定木盘，放平，待凝固后，即做成抑菌圈实验所用的测定盘。

（3）稀释供试药剂到制定浓度。

（4）在测定盘内摆放牛津杯。

（5）用P型移液器将稀释好的药剂滴入牛津杯内，滴液量为0.26mL/杯，然后盖上玻璃板，放置于28℃恒温培养箱内培养，培养时间为16—18小时。

一、实验目的本实验旨在通过抑菌圈实验，观察不同抗生素对特定细菌的抑菌效果，了解抗生素的抗菌活性，并学习如何通过抑菌圈的大小判断细菌对抗生素的敏感性。

二、实验原理抑菌圈实验是微生物学中常用的方法之一，用于检测抗生素对细菌的抑制作用。

实验原理基于抗生素对细菌生长的抑制作用，当抗生素与细菌接触时，细菌的生长会受到抑制，从而在含有抗生素的培养基上形成一个无细菌生长的区域，即抑菌圈。

抑菌圈的大小可以反映抗生素的抗菌活性，通常抑菌圈越大，说明抗生素的抗菌活性越强。

三、实验材料与仪器1. 材料：- 细菌菌株：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）- 抗生素：青霉素、红霉素、庆大霉素、链霉素- 琼脂培养基- 牛肉膏蛋白胨培养基- 水浴箱- 滴管- 铅笔- 玻璃板2. 仪器：- 培养箱- 电子天平- 灭菌器四、实验步骤1. 制备培养基：- 称取牛肉膏蛋白胨培养基，加入适量的蒸馏水，溶解后用电子天平称量，使培养基浓度为10g/L。

- 将溶解后的培养基分装至锥形瓶中，每瓶100mL，121℃高压灭菌15分钟。

- 待培养基冷却至50℃左右，加入琼脂粉，充分搅拌均匀。

- 将琼脂培养基倒入培养皿中，待其凝固。

2. 接种细菌：- 将金黄色葡萄球菌接种至牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃培养24小时。

3. 制备抗生素纸片：- 将抗生素粉末用生理盐水溶解，配制成一定浓度的溶液。

- 用滴管将溶液滴加到无菌滤纸上，使滤纸充分浸润。

- 将滤纸晾干，制成抗生素纸片。

4. 抑菌圈实验：- 将制备好的琼脂培养基上的细菌菌落刮去，并用无菌镊子将抗生素纸片贴在培养基表面。

- 将培养皿倒置放入培养箱中，37℃培养24小时。

5. 观察与记录：- 观察培养皿中抗生素纸片周围是否形成抑菌圈，并记录抑菌圈的大小。

五、实验结果与分析1. 实验结果：- 青霉素：抑菌圈直径为15mm- 红霉素：抑菌圈直径为10mm- 庆大霉素：抑菌圈直径为20mm- 链霉素：抑菌圈直径为8mm2. 结果分析：- 根据抑菌圈的大小，可以判断金黄色葡萄球菌对不同抗生素的敏感性。

2.1.1制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。

取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。

经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。

2.1.2抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。

同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。

切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。

一、实验目的1. 了解抑菌圈实验的基本原理和操作步骤。

2. 通过抑菌圈实验，探究不同抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。

3. 掌握抑菌圈直径的测量方法，并分析抗生素的抑菌活性。

二、实验原理抑菌圈实验是微生物学中常用的一种实验方法，用于测定抗生素对细菌的抑菌效果。

实验原理是：将含有抗生素的纸片放置在已接种有细菌的琼脂平板上，抗生素会通过扩散作用渗透到琼脂中，抑制细菌的生长，形成透明圈，即抑菌圈。

抑菌圈的大小可以反映抗生素的抑菌活性。

三、实验材料与仪器1. 材料：金黄色葡萄球菌、青霉素、链霉素、头孢噻肟钠、肉汤培养基、琼脂、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌镊子、无菌培养皿、无菌滤纸、酒精灯、放大镜等。

2. 仪器：恒温培养箱、天平、电子显微镜、显微镜等。

四、实验方法1. 制备菌悬液：将金黄色葡萄球菌接种于肉汤培养基中，37℃恒温培养24小时，用无菌生理盐水调整菌悬液浓度为1×10^8 CFU/mL。

2. 准备平板：将熔化的琼脂倒入培养皿中，待凝固后，用无菌棉签将菌悬液均匀涂布于平板表面。

3. 制备抑菌圈：将含有不同抗生素的纸片分别放置于平板表面，用无菌镊子轻轻按压使其与琼脂表面紧密接触。

4. 培养平板：将平板倒置放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。

5. 测量抑菌圈直径：用放大镜观察平板，用尺子测量抑菌圈的直径，取平均值。

五、实验结果与分析1. 实验结果：实验结果显示，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用，抑菌圈直径分别为15mm、12mm、10mm；而其他抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较差。

2. 结果分析：抑菌圈直径越大，说明抗生素的抑菌活性越强。

根据实验结果，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强，可作为治疗金黄色葡萄球菌感染的首选抗生素。

六、实验结论通过抑菌圈实验，我们成功探究了不同抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。

实验结果表明，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用，可作为治疗金黄色葡萄球菌感染的首选抗生素。

生物制药工艺实验,抑菌圈的大小
抑菌圈和抑菌物质浓度的对数是成正比的，也就是抑菌物质浓度越高，抑菌圈越大。

抑菌物质浓度一直稀释下去，则抑菌圈直径逐渐变小，直到没有抑菌圈出现，这个临界浓度就是MIC。

如果你的实验没有出现抑菌圈，说明抑菌物质浓度不高。

说明你做的抑菌物质浓度在临界浓度范围内，如果你做的是梯度抑制实验，则说明你的结果有意义，如果是固定浓度，那么久很难说明原因了。

抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式丰要用于测定杀菌
防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。

通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌
防霉剂品种。

实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法work Information Technology Company.2020YEAR实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法一、实验目的学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。

二、实验原理抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。

在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。

其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。

但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。

根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。

三、实验材料供试药剂：速克灵或扑海因。

供试病原菌：番茄灰霉病菌。

实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。

四、实验方法采用管碟法。

将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。

1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。

灭菌蒸馏水为对照。

2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。

在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。

用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。

抑菌圈实验说明抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式，主要用于测定杀菌防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。

通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌防霉剂品种。

用具和材料霉菌培养皿，无菌吸管（或针筒），圆片滤纸（直径2cm），带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针（环），熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右水浴中），一定浓度的药剂，供试验用的菌种。

试验过程1.用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。

2.用无菌吸管（或针筒）向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL。

3.向各培养皿内注入15Ml~20ml的熔化状琼脂培养基（约45℃），将菌液与培养基混合均匀，待其冷却。

4.用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，盖上盖子5.置适宜温度下，培养2~3d，观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。

注意事项1.所有的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。

2.霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配置混合菌液，即这里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等诸种菌的分别混合液，并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。

3.混合菌液的浓度一般为106~108cfu/mL.4.倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为45℃左右），否则会引起微生物死亡。

也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。

5.各种微生物的最适生长温度不同（例如霉菌一般为25~30℃，细菌一般为32~37℃等），恒温培养时宜分开放置。

结果评判由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈（加入该防霉剂对供试菌有抑制效果）。

抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。

在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。

此法同样适合于测定单个菌的抗菌效果。