放线菌抗生素的发酵及目的产物的提取实验报告

放线菌抗生素的发酵及目的产物的提取一、实验目的1、熟悉掌握土壤中分离抗生素及培养方法2、了解和掌握种子制备和摇瓶发酵技术和方法3、了解抗生素发酵的一般规律和代谢调控理论4、了解小型发酵罐的基本结构5、熟悉掌握小型发酵罐的使用方法和保养6.掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；7. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。

8.掌握放线菌次级代谢物的初步纯化及牛津杯实验的基本原理和操作技术二、实验原理①发酵罐是进行液体发酵的特殊设备。

生产上使用的发酵罐容积大，均用钢板或不锈钢板制成；供实验室使用的小型发酵罐，其容积可从约lL至数百升或稍大些。

一般来说，5L以下是用耐压玻璃制作罐体，5L以上用不锈钢板或钢板制作罐体。

发酵罐配备有控制器和各种电极，可以自动地调控试验所需要的培养条件，是微生物学、遗传工程、医药工业等科学研究所必需的设备。

②抗生素（antibiotics）是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。

现临床常用的抗生素有转基因工程菌培养液液中提取物以及用化学方法合成或半合成的化合物。

③放线菌发酵结束后，次级代谢物可能与菌体结合，工业上常采用草酸或磷酸等酸化剂处理，释放与菌体结合的次级代谢物，并采用加热发酵液70 ℃，2 min使蛋白凝固，所得酸性滤液，在经碱处理，进一步去除蛋白。

抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。

管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。

管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。

管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。

放线菌抗生素得发酵及目得产物得提取一、实验目得1、熟悉掌握土壤中分离抗生素及培养方法2、了解与掌握种子制备与摇瓶发酵技术与方法3、了解抗生素发酵得一般规律与代谢调控理论４、了解小型发酵罐得基本结构５、熟悉掌握小型发酵罐得使用方法与保养6。

掌握抗生素生物效价测定得原理与方法;7. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关得操作方法、8、掌握放线菌次级代谢物得初步纯化及牛津杯实验得基本原理与操作技术二、实验原理①发酵罐就是进行液体发酵得特殊设备。

生产上使用得发酵罐容积大,均用钢板或不锈钢板制成;供实验室使用得小型发酵罐,其容积可从约lＬ至数百升或稍大些。

一般来说,5L以下就是用耐压玻璃制作罐体,5L以上用不锈钢板或钢板制作罐体。

发酵罐配备有控制器与各种电极,可以自动地调控试验所需要得培养条件,就是微生物学、遗传工程、医药工业等科学研究所必需得设备、②抗生素(antibｉotics)就是由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生得具有抗病原体或其它活性得一类次级代谢产物,能干扰其她生活细胞发育功能得化学物质。

现临床常用得抗生素有转基因工程菌培养液液中提取物以及用化学方法合成或半合成得化合物。

③放线菌发酵结束后,次级代谢物可能与菌体结合,工业上常采用草酸或磷酸等酸化剂处理,释放与菌体结合得次级代谢物,并采用加热发酵液７0 ℃,2 min使蛋白凝固,所得酸性滤液,在经碱处理,进一步去除蛋白、抗生素得效价常采用微生物学方法测定,它就是利用抗生素对特定得微生物具有抗菌活性得原理来测定抗生素效价得方法,如管碟法。

管碟法就是目前抗生素效价测定得国际通用方法,我国药典也采用此法。

管碟法就是根据抗生素在琼脂平板培养基中得扩散渗透作用,比较标准品与检品两者对试验菌得抑菌圈大小来测定供试品得效价。

管碟法得基本原理就是在含有高度敏感性试验菌得琼脂平板上放置小钢管(内径6。

０±0、ｌ mm,外径8、0±０。

土壤中放线菌的采集、分离、培养、发酵及提取实验目的：1、从土壤中分离产抗生素的放线菌2、放线菌的培养3、放线菌的发酵产生活性物质4、放线菌产生的活性物质提取。

实验原理：放线菌是一类呈菌丝状生长，主要以孢子繁殖。

放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约80%是各种放线菌所产生的。

许多临床应用的抗生素均由土壤中分离的放线菌产生。

采用选择培养基可分离土壤中的放线菌。

产抗生素的放线菌经液体培养后，其分泌的抗生素存在于离心所得的上清液中，可采用微生物的抑菌试验进行检测，从而筛选到所需的抗生素产生菌，并对其进一步培养，繁殖，发酵，最终提取我们所需的抗生素。

实验器材：1、土壤2、培养基：高氏一号培养基、种子培养基、发酵培养基3、其他：重铬酸钾、培养皿、牛津杯、接种环、酒精灯，无菌涂棒、三角锥瓶、高压蒸汽灭菌锅、天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、试管、牛皮纸、线绳等。

实验步骤：一、土壤放线菌株的采集采集样品：选定取样点（最好是有机质含量高的菜地），按对角交叉（五点法）取样。

先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。

将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等。

样品（土壤）处理：室温风干二、土壤中放线菌的分离、培养1、配制淀粉培养基淀粉琼脂培养基（高氏培养基）可溶性淀粉2g；硝酸钾0.1g；磷酸氢二钾0.05g；氯化钠0.05g；硫酸镁0.05g；硫酸亚铁0.001g；琼脂2g；水100ml.先把淀粉放在烧杯里，用5ml水调成糊状后，倒入95ml水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。

加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。

调整PH到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。

2、土壤悬液梯度稀释①将5.0g土壤加入到50ml灭菌的生理盐水中，震荡10min制备土壤悬液。

②用无菌吸管吸取1ml土壤悬液，加入到9ml灭菌的生理盐水中10倍稀释。

③按1：:1稀释至10-3、10-4、10-5，将3块灭菌平板分别标记10-3、10-4、10-5 ，稀释过程应在无菌条件下进行。

放线菌发酵实验报告放线菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有很高的代谢活性和生物合成能力。

通过放线菌的发酵作用，可以生产出多种有益的代谢产物，具有很大的应用潜力。

本实验旨在探究放线菌的发酵特性，并通过实验结果对其发酵过程进行分析与评价。

实验中，我们选择了某一株放线菌作为研究对象，通过培养基的制备和培养条件的控制，搭建了适合放线菌生长的环境。

在实验过程中，我们对放线菌的生长情况、代谢产物的生成情况进行了观察和记录。

我们利用琼脂培养基制备了适合放线菌生长的培养基。

通过加热溶解琼脂，加入所需的营养物质，并进行无菌过滤，得到了无菌的培养基。

然后，将放线菌接种于培养基中，并在适宜的温度和湿度条件下进行培养。

在培养过程中，我们定期观察放线菌的生长情况，记录放线菌的菌落形态、颜色和生长速度等指标。

在放线菌的发酵过程中，我们特别关注了代谢产物的生成情况。

通过对培养基中代谢产物的提取和分离，我们得到了放线菌发酵产物的混合物。

然后，利用色谱等分析方法对产物进行分析和鉴定，确定了其中的主要成分和含量。

通过对不同发酵条件下产物的比较，我们评估了不同因素对放线菌发酵产物的影响，为优化发酵条件提供了依据。

在实验过程中，我们还对放线菌的生理特性进行了初步研究。

通过测定放线菌在不同pH、温度和营养物质浓度条件下的生长情况，我们评估了放线菌对环境因素的适应能力。

同时，我们还对放线菌的代谢途径和代谢产物的生物合成机制进行了探索，为进一步发掘放线菌的潜力提供了理论基础。

本实验通过对放线菌的发酵特性进行研究，揭示了放线菌的代谢活性和生物合成能力。

通过对发酵产物的分析和鉴定，我们还评估了不同因素对放线菌发酵产物的影响。

通过对放线菌的生理特性的研究，我们初步了解了放线菌对环境因素的适应能力和代谢途径。

这些研究结果为进一步开发利用放线菌的潜力提供了基础，并对相关领域的研究和应用具有重要意义。

放线菌发酵实验报告完整呈现了实验的目的、方法、结果和结论，通过清晰的段落和标题使文章结构清晰，易于阅读。

放线菌实验报告放线菌实验报告一、引言放线菌是一类广泛存在于土壤和水体中的微生物，其具有重要的生物学意义和应用价值。

本次实验旨在通过对放线菌的培养、鉴定和抗菌活性测试，了解放线菌的特性和应用前景。

二、材料与方法1. 放线菌培养基的制备：将葡萄糖、酵母粉、肉膏粉、胰蛋白胨等按一定比例溶解于蒸馏水中，加热煮沸，倒入培养瓶中，待冷却后加入抗生素。

2. 放线菌的采集：在适宜的环境中采集土壤或水样，并将样品分装于离心管中。

3. 放线菌的分离：取适量样品并加入适量的生理盐水，摇匀后进行稀释，取适量稀释液分别均匀涂布于放线菌培养基上。

4. 放线菌的纯化：从培养基上挑选出单菌落，进行连续传代，直至获得纯种放线菌。

5. 放线菌的鉴定：通过形态特征、生理生化特性和分子生物学方法对放线菌进行鉴定。

6. 抗菌活性测试：采用平板扩散法或孔隙扩散法，将放线菌菌液或提取物涂布于琼脂平板上，观察抑菌圈的形成情况。

三、结果与分析经过培养和分离，我们成功获得了多个放线菌菌株。

在鉴定过程中，我们观察到这些放线菌菌株形态各异，有的呈现棕黄色，有的呈现淡黄色，有的呈现灰白色。

此外，通过生理生化特性的检测，我们发现这些放线菌菌株对某些碳源和氮源具有不同的利用能力。

进一步的分子生物学分析结果显示，这些放线菌菌株属于不同的物种。

在抗菌活性测试中，我们选取了几个放线菌菌株进行了评估。

结果显示，这些放线菌菌株对多种细菌具有一定的抑制作用。

其中，某一放线菌菌株对金黄色葡萄球菌表现出了较强的抗菌活性，形成了较大的抑菌圈。

这表明该放线菌菌株可能具有潜在的抗生素生产能力。

四、讨论与展望通过本次实验，我们成功地获得了多个放线菌菌株，并对其进行了鉴定和抗菌活性测试。

然而，由于时间和设备的限制，我们并未对放线菌的抗生素产物进行深入研究。

因此，未来可以进一步探索这些放线菌菌株的抗生素产物，并对其进行分离、纯化和结构鉴定，以期发现新的抗生素。

此外，放线菌不仅具有抗菌活性，还具有其他生物活性物质的合成能力，如抗肿瘤物质、抗病毒物质等。

放线菌的实验报告放线菌的实验报告一、引言放线菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，以其独特的形态和生物学特性而备受研究者的关注。

本实验旨在通过对放线菌的分离培养、形态观察和抗生素产生能力的检测，进一步了解放线菌的特点和应用潜力。

二、材料与方法1. 放线菌分离培养：将土壤样品取自自然环境中，加入到含有适宜培养基的培养皿中，进行稀释均匀。

然后将培养皿密封，置于恒温培养箱中，在适宜的温度下培养一段时间，直至观察到单个菌落的形成。

2. 放线菌形态观察：取一颗单个菌落，用显微镜观察其形态特征，包括菌丝的形状、颜色、分枝情况等。

3. 抗生素产生能力检测：将分离得到的放线菌菌株接种到含有抗生素敏感菌株的琼脂平板上，观察菌落周围是否出现抑制圈。

三、结果与讨论1. 放线菌的分离培养：经过一段时间的培养，观察到培养皿中出现了单个菌落。

将这些菌落通过传代培养，得到纯种的放线菌菌株。

2. 放线菌的形态观察：在显微镜下观察到放线菌菌丝呈分枝状，颜色多样，有的呈白色、黄色或橙色。

菌丝通常呈直线状，但也有少数呈弯曲或环状。

3. 抗生素产生能力检测：将分离得到的放线菌菌株接种到含有抗生素敏感菌株的琼脂平板上，观察到菌落周围出现了抑制圈。

这表明放线菌具有抗生素产生的能力，可以对其他细菌产生抑制作用。

放线菌作为一类重要的微生物资源，具有广泛的应用前景。

其产生的抗生素被广泛应用于医药领域，用于治疗各种感染性疾病。

此外，放线菌还具有其他生物活性物质的合成能力，如抗肿瘤物质、抗氧化物质等。

因此，对放线菌的深入研究具有重要意义。

在本次实验中，我们成功地从自然环境中分离出了放线菌，并观察到了其形态特征和抗生素产生能力。

然而，实验中仍存在一些不足之处。

首先，由于实验时间有限，我们只对放线菌的形态进行了简单的观察，没有进行更深入的分类和鉴定。

其次，我们只检测了放线菌的抗生素产生能力，而未对其产生的抗生素进行具体的鉴定和分析。

为了更好地发掘和利用放线菌的潜力，今后的研究可以从以下几个方面展开：1. 对分离得到的放线菌菌株进行进一步的形态学和生理学研究，以了解其多样性和适应能力；2. 对放线菌产生的抗生素进行鉴定和分析，以寻找新的抗生素种类和开发新的药物；3. 利用基因工程技术改造放线菌，提高其抗生素产量和质量。

一、实验目的1. 掌握土壤中放线菌的采集、分离和纯化方法。

2. 学习放线菌的培养技术，观察其生长特征。

3. 提取放线菌产生的活性物质，并对其活性进行初步鉴定。

二、实验原理放线菌是一类呈菌丝状生长的微生物，广泛分布于土壤、空气和水中。

放线菌与人类的生产和生活关系密切，许多临床应用的抗生素均由放线菌产生。

本实验通过土壤中放线菌的分离、培养和活性物质提取，旨在了解放线菌的生长特征及其产生的活性物质。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 土壤样品- 高氏一号培养基- 种子培养基- 发酵培养基- 试剂：重铬酸钾、无菌水、酒精等2. 实验仪器：- 培养皿- 牛津杯- 接种环- 酒精灯- 无菌涂棒- 三角锥瓶- 高压蒸汽灭菌锅- 天平- 药匙- 烧杯- 量筒- 玻璃棒- 试管- 牛皮纸- 线绳四、实验步骤1. 土壤放线菌株的采集（1）选择取样点：选择有机质含量高的土壤，如菜地、林地等。

（2）采集样品：按对角交叉（五点法）取样，先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。

（3）将5点样品混合均匀，用无菌水稀释至10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍。

2. 放线菌的分离与纯化（1）制备高氏一号培养基平板：将高氏一号培养基加热溶解后，倒入培养皿中，待凝固后备用。

（2）将稀释后的土壤样品涂布于高氏一号培养基平板上。

（3）将平板置于37℃恒温培养箱中培养3～5天，观察菌落生长情况。

（4）挑取单菌落进行纯化，重复上述步骤，直至获得纯放线菌。

3. 放线菌的培养（1）将纯化后的放线菌接种于种子培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。

（2）将种子液按一定比例接种于发酵培养基中，置于37℃恒温培养箱中发酵。

4. 活性物质提取（1）将发酵液离心分离，收集上清液。

（2）用重铬酸钾对上清液进行氧化反应，观察颜色变化，以初步鉴定活性物质。

五、实验结果与分析1. 放线菌分离与纯化：成功分离纯化出放线菌，菌落呈菌丝状，颜色多样。

中文摘要天然产物的作用越来越大，天然产物的来源主要是植物和微生物。

现在微生物的研究发展迅速，而放线菌作用尤为突出。

本文的实验材料为放线菌，放线菌数量巨大种类繁多，在众多领域发挥着新颖独特不可取代的地位，长久以来在药学、化学、生物学等领域占有及其重要的研究价值，放线菌的应用潜力是我们无法想象到的，至今为止从放线菌中提取出的生物活性物质多于13700种，应用于各个领域发挥作用。

本文通过一系列的分离技术对发酵液进行分离纯化，最终对得到的活性物质进行结构鉴定。

分离纯化得到的化合物样品的结构鉴定主要运用氢谱（1H-NMR）技术与质谱（EI-MS）技术。

最后经过质谱和核磁共振波谱鉴定出了两种化合物的结构和分子量，经过数据分析和文献比对，最终确定了这两种化合物的名称分别是：1-Hydroxyphenazine和Resistomycin。

关键词：放线菌发酵分离纯化结构鉴定ABSTRACTThe natural products in modern society have an increasingly important role.The source of natural products is plants and microorganisms.Microbiological research and development is particularly rapid development.Actinomycetes contribute very much to natural products.The experimental material of this paper is actinomycetes.The large number of actinomycetes in a wide range of areas play a unique and irreplaceable position in many fields and have long been in the field of pharmacy, chemistry, biology and other important research value.The potential of application of actinomycetes is something we can not imagine.So far more than 13,700 species bio-active substances extracted from the actinomycetes are applied to play a role in various fields.The theoretical basis of this paper is natural product chemistry.The related technical methods are microbial fermentation technology, organic solvent extraction technology and column chromatography separation technology.Firstly,the ctinomycetes are expanded to ferment.Then,The fermentation broth is separated and purified.At last,the structure of the obtained active substance is identified.The step of separation of extracts and the completion of the purification was carried out primarily by reverse phase chromatography, Seghadex LH-20, and thin layer chromatography.Finally, the structure and molecular weight of the two compounds were identified by mass spectrometry and nuclear magnetic resonance spectroscopy. The final definition of these two compounds were 1-Hydroxyphenazine and Resistomycin according to the data analysis and literature comparison.Keywords:Actinomycetes;ferment;isolation and purification; structure identification目录第1章前言 (1)第1节放线菌的研究概括 (1)第2节分离纯化技术 (2)第3节结构研究主要技术 (3)第4节研究背景、目的和意义、方法和路线 (5)第2章放线菌种扩大培养 (7)第1节实验材料、试剂、仪器 (7)第2节放线菌的扩大发酵 (7)第3章放线菌次生代谢产物的提取 (9)第1节实验材料、试剂、仪器 (9)第2节发酵液的提取分离 (9)第4章放线菌次生代谢产物的分离纯化 (10)第1节实验材料、试剂、仪器 (10)第5章放线菌种的化合物鉴定 (13)第1节实验材料、样品、仪器 (13)第6章讨论 (14)结论 (16)致谢 (17)参考文献 (18)第1章前言第1节放线菌的研究概括放线菌在科学研究的方面是一类极其重要发挥着巨大作用的微生物资源，同时也是一类G+C含量极高的革兰氏阳性细菌。

放线菌WT1抗真菌活性物质的发酵和提取的开题报告
一、选题背景
真菌在人类和动植物的生活中扮演着重要角色，既有益于人类，如人类食品的制作、生物制药的开发等，也有害于人类，如食品腐败、疾病传播等。

因此，对真菌进
行有效控制，特别是抗真菌活性物质的开发具有重要意义。

放线菌是一类产生特殊生理活性物质的细菌，具有广泛的生态分布和多样的代谢途径。

放线菌WT1是一株来自土壤中的放线菌，被发现具有良好的抗菌和抗真菌活性，因此被认为是一种有潜力的生物控制制剂。

二、研究内容
本研究旨在研究放线菌WT1发酵和提取抗真菌活性物质的方法。

1. 发酵条件的优化
通过初步实验，确定放线菌WT1的最适发酵条件，包括菌种的培养基、培养温度、培养时间、培养pH等因素，从而得到最高的抗真菌活性物质产量。

2. 抗真菌活性物质的提取
采用多种方法对放线菌WT1进行抗真菌活性物质的提取，包括有机溶剂法、离
子交换树脂法、超滤法等，通过比较不同提取方案的提取效率和抗真菌活性物质的纯度，确定最优的提取方法。

三、预期成果
1. 确定放线菌WT1的最适发酵条件，得到最高的抗真菌活性物质产量。

2. 确定最优的抗真菌活性物质提取方法，得到高纯度的抗真菌活性物质。

四、研究意义
本研究对进一步研究放线菌WT1抗真菌活性物质的结构和特性具有重要意义，
同时也有助于推广放线菌作为一种生物控制制剂的应用。

放线菌发酵实验报告一、引言放线菌发酵是一种常见的微生物实验方法，通过培养放线菌并利用其代谢产物进行发酵，可以得到各种有用的化合物，如抗生素、酶和有机酸等。

本实验旨在通过放线菌发酵实验，了解放线菌的发酵过程及其应用。

二、实验材料与方法1. 实验材料：- 放线菌培养基：包括碳源、氮源、矿物质盐等；- 放线菌菌种：选择常见的放线菌菌种，如链霉菌、链霉菌属、真菌等；- 培养基培养基：用于接种放线菌菌种的培养基；- 发酵罐：用于进行放线菌发酵的装置；- 发酵液收集瓶：用于收集发酵产物。

2. 实验方法：- 准备放线菌培养基：按照配方将碳源、氮源、矿物质盐等按一定比例混合均匀；- 接种放线菌菌种：将放线菌菌种接种到培养基中，放入恒温培养箱中进行孵育；- 准备发酵罐：将培养基倒入发酵罐中，控制好温度、湿度和通气等条件；- 进行发酵：将已经孵育好的放线菌菌种接种到发酵罐中，进行发酵；- 收集发酵产物：在适当的时间点，将发酵液收集瓶放入发酵罐中收集发酵产物。

三、实验结果通过放线菌发酵实验，我们观察到以下结果：1. 发酵过程中，发酵液的颜色逐渐变化，由初始的无色逐渐变为黄色或其他颜色；2. 发酵液的酸碱度随着发酵时间的延长而发生变化，有些发酵产物会使发酵液呈酸性，而有些则呈碱性；3. 发酵液中可能会有一些气泡产生，这是由于发酵过程中产生的气体的释放；4. 在一定的发酵时间后，可以收集到发酵产物，可以通过化学分析等方法对其进行进一步研究和应用。

四、实验讨论通过放线菌发酵实验，我们可以得到各种有用的化合物，如抗生素、酶和有机酸等。

放线菌产生的抗生素广泛应用于临床医学，能够有效抑制或杀死一些病原微生物，对治疗感染性疾病具有重要意义。

放线菌产生的酶可以用于工业生产中，如纺织、食品、制药等领域，具有广阔的应用前景。

有机酸是一类重要的有机化合物，可用于食品添加剂、化妆品等领域。

然而，放线菌发酵也存在一些问题和挑战。

首先，放线菌发酵过程需要严格的温度、湿度和通气等条件控制，否则会对发酵产物的产量和质量产生影响。

一、实验目的1. 掌握放线菌的分离、纯化技术；2. 了解放线菌的形态和生理特征；3. 学习放线菌的培养方法及抗生素的提取；4. 掌握放线菌的生物学特性及应用。

二、实验原理放线菌是一类以菌丝生长为主的微生物，广泛分布于土壤、水体、空气等环境中。

放线菌具有产生抗生素、酶、维生素等多种次级代谢产物，在医药、农业、食品等领域具有广泛的应用。

本实验通过分离、纯化放线菌，观察其形态和生理特征，学习放线菌的培养方法及抗生素的提取，了解放线菌的生物学特性及应用。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、高氏一号培养基、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物、琼脂、无菌水、无菌棉塞、接种环、培养皿、三角锥瓶、酒精灯、显微镜、离心机、抽滤器、无菌操作台等。

2. 实验仪器：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、培养箱、恒温振荡器、显微镜等。

四、实验方法与步骤1. 土壤放线菌的分离（1）取土壤样品10g，加入90mL无菌水中，振荡混匀；（2）用无菌棉塞封口，置于培养箱中，37℃培养24h；（3）取培养后的土壤悬液，稀释至10-3；（4）取适量稀释液，涂布于高氏一号培养基平板上，37℃培养48h；（5）挑取单菌落，重复纯化，得到纯放线菌。

2. 放线菌的形态观察（1）将纯化后的放线菌接种于高氏一号培养基平板上，37℃培养48h；（2）取少量菌丝，制成临时装片；（3）在显微镜下观察放线菌的菌丝形态、颜色、孢子等特征。

3. 放线菌的培养（1）将纯化后的放线菌接种于种子培养基中，37℃、180r/min振荡培养24h；（2）将种子液按1:10的比例接种于发酵培养基中，37℃、180r/min振荡培养48h。

4. 抗生素的提取（1）将发酵液离心（3000r/min，10min），取上清液；（2）将上清液用无水乙醇沉淀，离心（3000r/min，10min）；（3）将沉淀用少量无水乙醇洗涤，干燥；（4）将干燥的抗生素样品溶解于适量无菌水中，即得抗生素粗品。

中文摘要天然产物的作用越来越大，天然产物的来源主要是植物和微生物。

现在微生物的研究发展迅速，而放线菌作用尤为突出。

本文的实验材料为放线菌，放线菌数量巨大种类繁多，在众多领域发挥着新颖独特不可取代的地位，长久以来在药学、化学、生物学等领域占有及其重要的研究价值，放线菌的应用潜力是我们无法想象到的，至今为止从放线菌中提取出的生物活性物质多于13700种，应用于各个领域发挥作用。

本文通过一系列的分离技术对发酵液进行分离纯化，最终对得到的活性物质进行结构鉴定。

分离纯化得到的化合物样品的结构鉴定主要运用氢谱（1H-NMR）技术与质谱（EI-MS）技术。

最后经过质谱和核磁共振波谱鉴定出了两种化合物的结构和分子量，经过数据分析和文献比对，最终确定了这两种化合物的名称分别是：1-Hydroxyphenazine和Resistomycin。

关键词：放线菌发酵分离纯化结构鉴定ABSTRACTThe natural products in modern society have an increasingly important role.The source of natural products is plants and microorganisms.Microbiological research and development is particularly rapid development.Actinomycetes contribute very much to natural products.The experimental material of this paper is actinomycetes.The large number of actinomycetes in a wide range of areas play a unique and irreplaceable position in many fields and have long been in the field of pharmacy, chemistry, biology and other important research value.The potential of application of actinomycetes is something we can not imagine.So far more than 13,700 species bio-active substances extracted from the actinomycetes are applied to play a role in various fields.The theoretical basis of this paper is natural product chemistry.The related technical methods are microbial fermentation technology, organic solvent extraction technology and column chromatography separation technology.Firstly,the ctinomycetes are expanded to ferment.Then,The fermentation broth is separated and purified.At last,the structure of the obtained active substance is identified.The step of separation of extracts and the completion of the purification was carried out primarily by reverse phase chromatography, Seghadex LH-20, and thin layer chromatography.Finally, the structure and molecular weight of the two compounds were identified by mass spectrometry and nuclear magnetic resonance spectroscopy. The final definition of these two compounds were 1-Hydroxyphenazine and Resistomycin according to the data analysis and literature comparison.Keywords:Actinomycetes;ferment;isolation and purification; structure identification目录第1章前言 (1)第1节放线菌的研究概括 (1)第2节分离纯化技术 (2)第3节结构研究主要技术 (3)第4节研究背景、目的和意义、方法和路线 (5)第2章放线菌种扩大培养 (7)第1节实验材料、试剂、仪器 (7)第2节放线菌的扩大发酵 (7)第3章放线菌次生代谢产物的提取 (9)第1节实验材料、试剂、仪器 (9)第2节发酵液的提取分离 (9)第4章放线菌次生代谢产物的分离纯化 (10)第1节实验材料、试剂、仪器 (10)第5章放线菌种的化合物鉴定 (13)第1节实验材料、样品、仪器 (13)第6章讨论 (14)结论 (16)致谢 (17)参考文献 (18)第1章前言第1节放线菌的研究概括放线菌在科学研究的方面是一类极其重要发挥着巨大作用的微生物资源，同时也是一类G+C含量极高的革兰氏阳性细菌。

实验一放线菌的抑菌试验一、实验目的1、学习掌握放线菌所产抗生素抗菌谱的测定方法2、掌握牛津杯法检测抗生素的原理及基本操作3、掌握微生物实验的基本生物技术，无菌操作技术，培养基无菌化处理（高温灭菌）、菌种纯化分离技术及纯种培养技术等。

4、熟悉掌握高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、离心机等器材的使用方法。

5、熟悉各种合成培养基的制备方法，熟练掌握涂平板、在培养基接种等基本操作步骤。

二、实验原理放线菌是重要的抗生素产生菌，放线菌所产生得抗生素，能抑制多种细菌的生长，故可用金黄色葡萄球菌（G+）和大肠杆菌（G-）作指示菌鉴别放线菌，采用牛津杯法检测其所产抗生素的抑菌活性大小。

三、实验材料及用具1、菌种：A 放线菌，实验室老师给提供菌种B指示菌，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌2、用具：试管，平皿，涂棒，牛津杯，玻璃棒，高压蒸汽锅，恒温摇床，恒温培养箱，镊子，移液器，超净工作台四、培养基1、高氏一号培养基：K2HPO4﹒3H2O 0.5g，可溶性淀粉20g，KNO4 1g, MgSO4﹒7H2O 0.5g，FeSO4﹒7H2O 0.1g，NaCl 0.5g，H2O 1000ml。

2、种子培养基：葡萄糖5g，淀粉1.5g，酵母粉2.5g，CaC l20.1g，KNO3 1g，K2HPO4 0.5g，MgSO4﹒7H2O 0.5g，NaCl0.5g，FeSO4﹒7H2O 0.01g，H2O 1000ml，pH 7.2-7.43、发酵培养基：黄豆饼粉 10.0g，淀粉30g，葡萄糖 50g，酵母粉5g，玉米浆 15g，CaCl2 3.0g，H2O 1000ml，pH 7.04、LB培养基（液体）：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，H2O 1000ml，pH 7.05、LB培养基（固体）：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，琼脂 16g，H2O 1000ml，pH 7.0五、实验步骤1、配制培养基：按培养基配方比例依次精确地称取各种药品放入烧杯中，在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀。

放线菌发酵实验报告1.实验目的本实验旨在通过对放线菌进行发酵实验，了解放线菌的生长规律、代谢产物及其应用。

2.实验原理放线菌是一种土壤中常见的革兰氏阳性细菌，具有放射状的菌丝和球状的孢子。

放线菌通过分泌抗生素、激素和类胺物质等代谢产物来抵御周围环境中的竞争者。

通过发酵实验，可以观察到放线菌在不同条件下的生物学特性和产物的形成。

3.实验材料-放线菌培养物-发酵培养基-培养基补充物（如葡萄糖、琼脂等）-反应器、培养皿等实验器材-空气消毒器4.实验步骤4.1放线菌的预处理首先，取出保存在冰箱中的放线菌培养物，将其接种到含有发酵培养基的培养皿中，并在恒温培养箱中以适当的温度（如30℃）和湿度条件下培养一段时间，使放线菌处于活跃状态。

4.2发酵培养基的制备按照实验需求，准备含有所需补充物（如葡萄糖、琼脂等）的发酵培养基。

将培养基倒入反应器中，并经过高温高压灭菌处理，以消除外源细菌的干扰。

4.3放线菌的发酵培养将培养好的放线菌接种到含有发酵培养基的反应器中，并进行适当的搅拌和通气处理，以提供放线菌生长所需的氧气和营养物质。

4.4实验观察和数据记录在放线菌发酵的过程中，及时观察和记录菌体形态、生长速度、颜色变化等指标，并记录在实验笔记中。

同时，通过采集发酵液中的样品，利用适当的方法进行测定，以获取放线菌产生的代谢产物的相关数据。

5.实验结果与讨论在实验观察和数据记录的基础上，分析放线菌的生物学特性和产物的形成规律。

通过比较不同实验条件下的实验结果，进一步讨论放线菌的发酵行为和产物的差异变化，为后续本领域的相关研究提供参考和启示。

6.实验结论通过本次发酵实验，我们可以初步了解放线菌的生长规律、代谢产物及其应用。

进一步研究放线菌的代谢途径和产物的分离纯化等工作，将有助于放线菌在医学、农业等领域的应用发展。

7.实验总结通过本次实验，我们对放线菌的发酵生物学有了更深入的认识。

同时，在实验操作的过程中，我们也学会了使用实验器材和技术，提高了实验操作的熟练度。

一、实验目的1. 了解发酵培养的基本原理和操作方法。

2. 掌握菌株发酵过程中培养基的配制、接种、培养和提取等关键技术。

3. 研究不同发酵条件对菌株生长和产物的生成的影响。

二、实验原理发酵培养是一种利用微生物的代谢活动，将有机物转化为所需产物的生物化学过程。

在发酵过程中，微生物通过代谢活动将原料转化为有价值的产物，如抗生素、酶、有机酸等。

本实验选取一株产抗生素的菌株，通过优化发酵条件，提高产物的产量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：菌株（产抗生素菌株）、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物、琼脂、pH试纸、NaOH、HCl、无菌水等。

2. 实验仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、振荡器、天平、烧杯、移液管、锥形瓶、玻璃棒、培养皿、无菌操作台等。

四、实验步骤1. 培养基配制（1）将葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物按比例称量，加入适量的无菌水溶解。

（2）调节pH至7.0，加入琼脂，煮沸至琼脂完全溶解。

（3）分装至锥形瓶，封口，高压蒸汽灭菌15分钟。

（4）冷却后倒平板，备用。

2. 接种（1）从保藏菌株中挑取一环菌落，接种至培养基平板上。

（2）将平板放入恒温培养箱中，培养24小时。

3. 发酵培养（1）将接种好的平板取出，挑取一环菌落，接种至发酵培养基中。

（2）将发酵培养基放入振荡器中，设定温度、转速等发酵条件。

（3）每隔一定时间取样，测定产物含量。

4. 提取（1）发酵结束后，将发酵液离心，取上清液。

（2）加入适量的有机溶剂，如氯仿，进行萃取。

（3）静置分层，取下层有机相，减压蒸馏去除溶剂，得到粗产物。

五、结果与分析1. 不同发酵条件对菌株生长和产物生成的影响通过调整发酵温度、pH、接种量、发酵时间等条件，发现最佳发酵条件为：温度30℃，pH 7.0，接种量5%，发酵时间48小时。

在此条件下，菌株生长良好，产物产量最高。

2. 产物提取效果通过有机溶剂萃取法，从发酵液中成功提取出产物。

实验结果显示，产物纯度较高，含量达到0.5g/L。

放线菌发酵实验报告放线菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有很高的生物学和生物化学研究价值。

放线菌发酵实验是一种常用的研究方法，通过培养放线菌并利用其代谢产物进行分析，可以研究其生长特性、代谢途径以及产生的生物活性物质等。

本文将介绍放线菌发酵实验的步骤和应用。

一、实验步骤1. 放线菌的培养：选择适当的培养基，将放线菌接种于培养基上，培养条件包括温度、湿度和培养时间等，可根据不同放线菌的特性进行调整。

2. 培养基的制备：根据放线菌的需求，选择合适的培养基配方，包括碳源、氮源、无机盐和生长因子等。

将培养基配制好并灭菌，然后倒入培养皿或培养瓶中。

3. 接种和培养：将放线菌菌种接种于培养基上，然后进行培养。

培养条件包括温度、湿度和培养时间等，可以根据具体需要进行调整。

4. 放线菌代谢产物的提取和分析：在放线菌发酵过程中，放线菌会产生各种代谢产物，如抗生素、酶、有机酸等。

可以通过提取和分析这些代谢产物，了解放线菌的生物活性和代谢途径。

5. 结果的分析和解释：根据实验结果，对放线菌发酵过程进行分析和解释，包括代谢产物的种类、含量和生物活性等。

二、实验应用1. 放线菌发酵实验在抗生素研究中的应用：放线菌是抗生素的主要产生菌株，通过放线菌发酵实验可以筛选出具有抗菌活性的菌株，并分离纯化其产生的抗生素。

2. 放线菌发酵实验在酶研究中的应用：放线菌产生的酶具有很高的催化活性和特异性，通过放线菌发酵实验可以获得大量的酶，并对其进行酶学性质的研究。

3. 放线菌发酵实验在生物活性物质研究中的应用：放线菌产生的代谢产物中有许多具有生物活性的物质，如抗肿瘤物质、抗炎物质等。

通过放线菌发酵实验可以获得这些生物活性物质，并进行进一步的研究和开发应用。

4. 放线菌发酵实验在代谢途径研究中的应用：通过放线菌发酵实验可以研究放线菌的代谢途径和代谢产物的合成机制，对于理解放线菌的生物学过程具有重要意义。

放线菌发酵实验是一种常用的研究方法，通过培养放线菌并利用其代谢产物进行分析，可以研究其生长特性、代谢途径以及产生的生物活性物质等。

抗生素产生菌获得和初筛一：实验目的学习从土壤中分离微生物的方法学习采集样品和制备培养基学习无菌操作技术二：实验原理自然界含菌样品极其丰富，土壤、水、空气、枯枝烂叶、植物病株、烂水果等都含有众多微生物，种类数量十分可观。

但总体来讲土壤样品的含菌量最多。

土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方。

从土壤中几乎可以分离到任何所需的菌株，空气、水中的微生物也都来源于土壤，所以土壤样品往往是首选的采集目标。

一般情况下，土壤中含细菌数量最多，且每克土壤的含菌量大体有如下的递减规律：细菌（108）>放线菌（107）>霉菌（106）>酵母菌（105）>藻类（104）>原生动物（103），其中放线菌和霉菌指其孢子数同时也可以从其他微生物富集地方（医院附近，废水等）采集样品。

抗生素（antibiotics）是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。

本实验采用的抗生素为β-内酰胺类——青霉素类和）四环素类——土霉素。

青霉素属于青霉素类抗生素，干扰细菌细胞壁的合成而产生抗菌作用；土霉素属于四环素类抗生素，作用于病原微生体核糖体30S亚基，抑制肽链的增长，影响细菌或微生物的蛋白质合成。

重铬酸钾可作为比较理想的放线菌分离抑制剂。

根据目标菌落出现数量和抑制剂的价格成本, 重铬酸钾是一种理想的放线菌分离抑制剂, 它具有3 个显著特点: ①可抑制土壤中细菌和真菌的生长; ②不影响放线菌的正常生长, 有时还可刺激一些放线菌的生长;③价格低廉, 在进行土壤放线菌大量分离工作中可推广使用。

高氏一号培养基适合放线菌生长。

三：实验材料四：实验内容1.培养基配制高氏一号改良培养基：可溶性淀粉20g，硝酸钾1g,氯化钠0.5g，K2HPO4 •3H2O 0.5g，MgSO4•7H2O 0.5g，FeSO4•7H2O 0.01g，琼脂20g，水1000ml，终浓度为50×10-5重铬酸钾，pH7.2～7.4。