食品生物化学实验
FOOD BIOCHEMISTRY EXPERIMENT
实验十九
牛乳中酪蛋白的制备
一、实验目的
(1)学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
(2)掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
二、实验原理
牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质。其中酪蛋白大约占了牛乳蛋
白质的80%。酪蛋白为白色、无味、无臭的粒状固体。不溶于水、乙醇及有 机溶剂,但溶于碱溶液,等电点为4.7。牛乳在pH4.7时酪蛋白等电聚沉
后剩余的蛋白质统称乳清蛋白。乳清蛋白不同于酪蛋白,其粒子的水合能力强、 分散性高,可溶解分散在乳清中。
本实验利用蛋白质溶液处于等电点时蛋白质分子净电荷为零,失去同种电荷
的排斥作用,很容易聚集而发生沉淀的原理,将牛乳的pH调至4.7时,酪
蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物,除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。牛 乳乙醇,无水乙醚,乙醇-乙醚混合液,冰乙酸 乳清蛋白不同于酪蛋白,其粒子的水合能力强、 酪蛋白为白色、无味、无臭的粒状固体。 25mL牛乳加热至40℃。 低速离心机,酸度计(或精密pH试纸),水浴锅,烧杯,天平,温度
F酪O蛋O白D 为B白IO色C1、H无E.器M味IS材、T无RY臭的E粒XP状E固RI体ME。NT
LpH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液A液:称取Na
Ac·3H2O
54.44g,溶于少量水中,定容至2000mL;B液:称
取优级纯醋酸(含量大于99.8%)12.0g,定容至1000mL。
取A液1770mL、B液1230mL混合,即得pH4.7的醋酸
-醋酸钠缓冲液3000mL。
(2)其他试剂
,纯净水。
95%乙醇,无水乙醚,乙醇-乙醚混合液,冰乙酸
去上清液。在沉淀中加入30mL95%乙醇,搅拌片刻,将全部悬浊液 转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇-乙醚混合液洗沉淀2次。最后用无水乙