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耐热菌的检测方法
耐热菌的检测方法包括以下几种：
1. 常规培养方法：通过将样品接种到含有特定培养基的琼脂平板上进行培养，利用耐热菌在高温下能够生长的特性检测其存在。
2. 腹腔注射法：将样品与小鼠混合注射到小鼠的腹腔内，通过观察小鼠的死亡与否来判断样品中是否存在耐热菌。
3. PCR法：使用聚合酶链反应（PCR）扩增样品中的特定基因片段，通过检测扩增产物来确认耐热菌的存在。
4. 培养基过滤法：将样品过滤并收集滤液，将滤液接种到含有特定培养基的琼脂平板上进行培养，通过观察生长的菌落来确定耐热菌的存在。
5. 免疫学检测法：使用特异性抗原与样品中的耐热菌结合，再加入特异性抗体与抗原结合，通过检测抗原-抗体结合的信号来确定耐热菌的存在。
根据具体的需要和实验条件，可以选择适合的检测方法来判断样品中是否存在耐热菌。
可乐耐热耐酸菌的检测方法1 介绍浓缩果汁中有时含有导致腐败的芽孢菌，耐酸耐热菌，也叫TAB，它们的特点是：1）能耐热的孢子；2）能耐果汁中的酸；3）能在含有很少量的氧中生长；这个程序描述了检验浓缩苹果清汁（比如苹果）的TAB的检验方法。
2 设备和试剂2.1 设备2.1.1 三角瓶：1000ml。
2.1.2 灭菌的99ml的去离子水的稀释空白。
2.1.3 磁力搅拌棒。
2.1.4 带有搅拌器的加热盘。
2.1.5 塑料注射器：10ml。
2.1.6 注射用的滤膜装置（0.45um）。
2.1.7 灭菌培养皿：90mm。
2.1.8 恒温水浴锅：74-76°C。
2.1.9 恒温培养箱：43±1℃。
2.1.10 广口灭菌吸管：25ml。
2.1.11 一次性的带有螺旋盖子的试管。
2.1.12 可以无菌过滤0.45um的过滤装置。
2.1.13 异丙基酒精。
2.2 试剂2.2.1 酵母粉（VWR DF0127-15）2.2.2 蛋白胨（VWR DF0118-15）2.2.3 琼脂粉（VWR DF0145-17）2.2.4 葡萄糖（VWR EM-DX0145-11）2.2.5 吐温80（VWR JTX 257-7）2.2.6 苹果酸（VWR JTP494-7）3 操作步骤3.1 配制K氏培养基，在一个1升的烧瓶中，加入：3.1.1 去离子水：500-mL3.1.2 酵母粉： 1.25-g3.1.3 蛋白胨： 2.50-g3.1.4 琼脂粉： 7.50-g3.1.5 葡萄糖： 0.50-g3.1.6 吐温80：0.50-mL3.1.7 磁力搅拌装置或者直接购买K氏培养基，按照厂家的说明配制。
3.2 加热使药品充分溶解。
3.3 轻轻的盖上烧瓶的塞子，将培养基在15磅下高压灭菌25分钟。
3.4 在一个小烧杯中加入1.0克的苹果酸和10 ml去离子水，搅拌使其溶解。
3.5 将苹果酸的溶液抽入10ml的一次性塑料注射器中。
Ｌ个世纪九十年代后期，随着我国果汁工Ｉ．业的发展，特别是浓缩果汁出口量的日益增长，国际市场对中国果汁的质量要求愈加严格，不断设置技术壁垒，果汁中嗜酸耐热菌便是其中之一。
最初，各果汁企业、研究检测机构对这类微生物污染都缺乏认识，难以在生产环节上对其控制。
随后的几年中，我们通过加强与外商、国外研究机构的联系沟通，接合果汁企业生产工艺，对果汁中这类微生物的来源及其对果汁质量会产生怎样的影响，如何检测、控制这类微生物等问题进行了深入地研究探索，协助众多果汁企业改进生产工艺条件，使其产品中嗜酸耐热菌得到了很好的控制。
目前，绝大多数浓缩果汁企业的产品已能满足外商对此项指标的要求。
为了能使大家更好地认识、解决果汁中嗜酸耐热们生长的ｐＨ范固为２．０—６．Ｏ，生长温度范围为ＢｓｓＡ培养基的主要成分为：菌这一技术难题，我们认为有必要对嗜酸耐热菌４０一７０℃，该属菌需氧或兼性厌氧，当环境和营Ｃａｃｌ，・２Ｈ，Ｏ０．２５９Ｍｇｓ０。
・７Ｈ，Ｏ０．５０９的特征、检测方法和工艺控制等方面的工作进行养条件不利时可形成内生孢子。
（ＮＨ。
），Ｓｏ，Ｏ．２瞻ＫＨ，ＰＯ．３．０９总结，以便进一步统一认识，改进产品质量。
ＡⅡｃｙｃｌｏｂａｃｉｕｕｓａｃｅｄｏｃ棚ａｒｉｕＳ为需氧的革兰酵母提取物２．０９葡萄糖１．０９一、嗜酸耐热菌的种类和特征氏阳性杆菌，可形成内尘孢子，长２—３ｍ，宽可溶性淀粉２．０９微量矿物质元素适量浓缩果汁一般具有较低的ｐＨ值、水分活性Ｏ．７—０．８ｒｒｍ，形成５—６个细胞的短链。
该种菌将各组分溶解于１０００ｍｌ蒸馏水中，将培养低、糖度高等特点，在果汁加工、浓缩过程中还的孢子囊不膨胀，对热的耐受能力较弱。
该种菌基ｐＨ值调至３．７—４。
０后，高压灭菌。
应注意的要经过加热处理，因此绝大多数的微生物都无的生长ｐＨ范围为２．Ｏ一６．Ｏ，最适生长温度为４５一是，因为在较低的ｐＨ条件下，培养基中琼脂的法生存，只有很少的细菌、霉菌和酵母可以在浓７０℃，不需要生长因子。
库克氏菌鉴定方法及临床感染分析作者：郭玉荣等来源：《现代养生·下半月版》 2016年第1期郭玉荣1 杨锐21 甘肃省民乐县人民医院甘肃省民乐县 7345002 甘肃省甘州区人民医院甘肃省甘州区734000【摘要】库克氏菌(Kocuria) 是需氧生长的革兰氏阳性球菌，广泛分布于自然界的空气、水、土壤中，是人体的皮肤及呼吸道黏膜表面的正常菌群。
通常情况下不致病，当机体免疫力低下时引起各种机会感染，如脑膜炎、心内膜炎、菌血症、败血症、脓肿、关节炎、呼吸道感染等症。
近些年来库克氏菌引起的感染报道日渐增多，已是人体重要的机会致病菌，应引起临床和微生物室的重视。
【关键词】库克氏菌；鉴定；临床感染1 库克氏菌的分类自然环境和临床常见的库克氏菌是玫瑰库克菌(K.roesus)、变异库克菌(K.varians)、克氏库克菌(K.kristinas)。
《伯杰系统细菌学手册》将这3 个菌规属于细菌域，放线菌门，放线菌纲，放线菌亚纲，放线菌目，微球菌亚目，微球菌科(Micrococcaceae)，微球菌属(Micrococcus)，也称玫瑰微球菌、变异微球菌、克氏微球菌。
1995 年根据16S rRNA 序列同源性和化学分析[1]，重新分类将其划归库克菌属，和微球菌属同属微球菌科。
2 库克氏菌的生物学特性2.1 培养特性库克氏菌专性需氧，营养要求不高，生长速度慢于葡萄球菌，在血琼脂平板或营养琼脂平板35℃孵育24h，形成略小于葡萄球菌的圆形、突起、表面光滑、边缘整齐、不透明、白色、黄色、橙色或桔红色菌落，可出现α 溶血，延长孵育时间菌落色素加深，在液体培养基呈浑浊生长。
菌落有粘性，不易混悬于盐水中。
2.1 形态染色库克氏菌直径为1~1.8μm，略大于葡萄球菌，多成对、四联、成簇排列，因生长繁殖时呈两个垂直平面分裂，故成四个联在一起呈方块状，立体感强；无鞭毛、无芽胞，在脓液及体液等原始标本中可形成荚膜，体外培养即消失。
耐热菌的检测与控制摘要：主要对香辛料进行了耐热菌数量的检测。
试验原理主要参照菌落总数测定法，分别对在常温、70℃、80℃、90℃、100℃水浴1h处理条件下的香辛料进行了耐热菌的测定。
得出的结论为香辛料中存在耐热菌，并根据试验结果分析了如何控制香辛料中的耐热菌。
关键词：耐热菌；香辛料；控制1 前言耐热菌是指在实验型巴氏杀菌温度下可以存活的菌体，乳微细菌、芽孢菌通常可100 ％存活，一些微球菌的耐热性差，产碱杆菌仅有1％～10％存活，链球菌（即粪肠球菌）、乳杆菌和一些棒状杆菌是耐热菌，可在60 ℃下耐受20min ，但仅有1 ％左右的菌株可耐受到63 ℃ 30min ，常见的耐热菌有芽孢菌属芽孢菌，芽孢菌属芽孢菌属是乳中污染的主要的耐热菌种，蜡样芽孢杆菌是许多食品的污染菌种，可引起人的食物中毒，当人体摄入含有大量活菌的食品时即可能引起呕吐、腹泻、肠绞痛等为主要症状的食物中毒，一般在食品中含有105～108 个／g 活菌时就可能引起食物中毒。
耐热菌的检测国际上普遍采用的是美国 KFL (Krueger Food Laboratories，库格食品实验室)或澳大利亚 Berri公司的方法[1-2]，苹果浓缩汁中耐热菌的间接 ELISA（酶联免疫吸附法）快速检测方法[3],傅里叶变换红外光谱(FT-IR)[4]，常规检测培养法，其基本原理是将待检果汁中的微生物富集到无菌滤膜上，然后富集菌的滤膜在选择性培养基上培养4—5d 后菌落计数例[5]。
目前，食品行业中开展耐热菌检测项目的企业为之不多，主要是奶制品、果汁、饼干烘烤类食品企业。
国标中没有耐热菌检测方法，而且国标肉制品里也未限制检测耐热菌。
为进一步保证公司产品质量，保障食品安全，检测中心对易超出菌落总数内控标准的部分产品进行了分析，主要是凉拌产品细菌总数超标，凉拌产品在生产过程中较难控制微生物，工艺较为复杂，综合判断可能是拌制时的香辛料菌落总数不合格，导致产品不合格，所以对香辛料进行了耐热菌的检测。
蓝莓，又称越桔，淡蓝色，果肉细软，多浆汁[1]。
蓝莓果实营养丰富，除含有常规的矿质元素外，还富含熊果苷、花青苷和SOD[2]，被誉为“浆果之王”[3]，很受消费者欢迎[4]。
根据耐酸耐热菌的特性研究[5-9]，采用不同的培养基培养，从蓝莓果浆中分离出耐酸、耐高温的纯菌并对耐酸耐高温菌的生长条件进行分析，确定耐酸耐高温菌的加热条件及pH值范围，并运用传统的微生物鉴定方法和分子生物学鉴定方法以及微生物生化反应鉴定对耐酸耐高温菌进行鉴定。
1 材料与方法1.1 材料蓝莓果磨成果浆，市售。
1.2 主要试剂1.2.1 试剂0.85%无菌生理盐水、革兰氏染色试剂、pH计校正液、1 mol/L稀盐酸溶液。
1.2.2 培养基平板计数琼脂（PCA）：青岛高科园海博生物技术有限公司；MRS培养基：北京陆桥技术有限责任公司；马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）：北京陆桥技术有限责任公司。
酸化K氏培养基：酵母浸膏：2.5 g，蛋白胨：5.0 g，琼脂粉：15 g，葡萄糖：1.0 g，吐温80：1.0 mL。
1.3 仪器与设备本实验所用仪器与设备见表1。
1.4 方法1.4.1 蓝莓果浆中微生物的检测参考GB 4789.2—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验 菌落总数测定》[10]。
取健康、无损伤、成熟度好的新鲜蓝莓果实，将其磨成果浆然后进行梯度稀释，通过平板培养计数法计数菌落总数，以此检验蓝莓中是否存在微生物，以及菌落总数是否超标。
1.4.2 菌株的分离纯化1.4.2.1 微生物的分离纯化用PCA、PDA和MRS 3种培养基，对蓝莓果浆中的菌落进行培养，在36 ℃下培养48 h，观察菌落生长情况，根据菌落形态学特征挑取菌落，经多蓝莓果浆中耐酸耐高温微生物的分离与鉴定□ 李 新 卜 菁 沈静雯 国家轻工业食品质量监督检测南京站摘 要：为了解和控制蓝莓果浆中的耐酸耐菌，采用酸化的凯氏培养基对蓝莓果浆中的耐酸耐热菌进行分离、培养和鉴定。
耐酸耐热菌的测定(企业内控法)(总4页)页内文档均可自由编辑，此页仅为封面耐酸耐热菌的测定（企业内控法）1、适用范围本方法仅适用于浓缩苹果清汁中耐酸耐热菌的测定。
2、设备和材料2．1、广口三角瓶，250mL、1000mL。
2．2水浴箱：80℃水浴。
2．3、冰箱。
2．4、量筒：50mL。
2．5、灭菌镊子。
2．6、酒精灯。
2．7、培养箱： 50±1℃。
2．8、玻璃铅笔。
2．9、溶剂过滤器。
2. 10、µm滤膜：Ø50mm。
2．11、真空泵。
2．12、温度计。
2．13、培养皿。
2．14、高压蒸汽灭菌锅。
3、培养基和试剂3．1、K氏培养基3．1．1、组成A：酵母浸膏 1.25g蛋白胨 2.50g葡萄糖 0.5g琼脂 7.5g吐温80将上述各种试剂放入1L的三角瓶中,加入500mL的蒸馏水,在电炉上加热溶解后,在121℃高压灭菌20分钟。
3．1．2、组成B：苹果酸 1.25g将苹果酸用10mL的蒸馏水溶解,通过一次性无菌注射器和针头式过滤器连接,将苹果酸溶液过滤到已灭菌的培养基中,混匀。
3．1．3、平板制作当已酸化的K氏培养基温度降至50℃左右时，将其分装倒入已灭菌的培养皿中，待培养基凝固后，用牛皮纸包扎好，放入冰箱中保存，一般可保存60天。
3．2、蒸馏水。
4、检验程序：检样适当稀释80℃水浴13分钟无菌水膜过滤检样膜过滤膜放入平板培养基培养50±1℃ 4天菌落计数报告5、操作步骤5．1、将装有150mL蒸馏水的三角瓶、µm的滤膜、50mL量筒、过滤装置于121℃灭菌15min。
5．2、用已灭菌的50mL量筒取待检浓缩果汁50mL，加入已灭菌的盛有150mL灭菌蒸馏水的三角瓶中，混匀。
5．3将稀释的样品放入80℃的水浴中，同时放置一个带有温度计的控制样，做为温度控制。
观察温度计，待温度升至80℃时开始计时，维持13min，将样品取出并迅速用自来水冷却。
5．4、用已灭菌的µm的滤膜及真空抽滤装置过滤热处理后的果汁,移取抽滤装置的上部,将镊子在酒精灯上灭菌后,用镊子将滤膜移置于预先准备好的K氏培养基上,轻敲滤膜几次,使其与滤膜充分接触。
PCA平板计数琼脂培养基平板计数琼脂培养基即PCA，是在08GB中用于菌落总数测定的配方：1、成分胰蛋白胨 5.0g酵母浸粉 2.5g葡萄糖 1.0g琼脂 15.0g蒸馏水1000mlpH 7.0士0.22、制法：将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。
分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。
LST 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤简称LST，在08GB中是用于大肠菌群的检测，大肠杆菌的计数，金黄色葡萄球菌的检测。
配方：1、成分：胰蛋白胨或胰酪胨 20.0g氯化钠 5.0g乳糖 5.0g磷酸氢二钾 2.75g磷酸二氢钾 2.75g月桂基磺酸钠0.1g蒸馏水1000mlpH 6.8士0.22、制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH ，分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml。
121℃高压灭菌15min。
煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB煌绿乳糖胆盐肉汤简称BGLB，在08国标中是用于大肠菌群的检测配方：1、成分：蛋白胨10.0g乳糖 10.0g牛胆粉溶液 200.0ml0.1%煌绿水溶液 13.3ml蒸馏水1000mlpH 7.2士0.12、制法：将蛋白胨、乳糖溶解于500ml蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200.0ml（将20.0g脱水牛胆粉溶于200ml的蒸馏水中，pH7.0-7.5）用蒸馏水稀释到975ml，调节pH至7.4，再加入0.1%煌绿水溶液13.3ml，用蒸馏水补足到1000ml，用棉花过滤后，分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml。
121℃高压灭菌15min。
V-P试剂 Voges-Proskauer试剂V-P试剂是V oges-Proskauer试剂的简称，用于副溶血性弧菌的V-P试验。
配方：1、成分甲液α-萘酚 5.0g无水乙醇100.0ml乙液氢氧化钾40.0g用蒸馏水加至1000ml2、试验方法将3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂生长物接种3%氯化钠MR-VP培养基，36℃士1℃培养48h。
耐酸耐热菌（库克）的检测方法1 适用范围本方法适用于清汁、浊汁、水和浓缩果汁中的耐酸耐热菌的检测。
2 仪器和试剂2.1 恒温水浴：80±1℃。
2.2 恒温培养箱：40±1℃。
2.3 灭菌培养皿：直径为90mm。
2.4 灭菌试管：18×180mm。
2.5 滤膜：0.45um水系一次性滤膜。
2.6 酵母粉。
2.7 蛋白胨。
2.8 琼脂粉。
2.9 葡萄糖。
2.10 吐温80。
2.11 12.5%苹果酸。
2.12 灭菌蒸馏水。
2.13 K氏培养基平板：在1000ml的三角瓶中放入500ml蒸馏水，加入1.25g酵母粉、2.50g 蛋白胨、6.50g琼脂粉、0.5g 葡萄糖和0.5ml吐温80，使其溶解，轻轻盖上三角瓶的盖子，在121℃灭菌25分钟；在一个小烧杯中加入10ml蒸馏水和1.25克的苹果酸，搅拌直至溶解，将苹果酸的水溶液用0.45um的滤膜过滤，将处理过的苹果酸水溶液加入到灭菌的K氏培养基中，搅拌均匀，使其pH值达到3.7±0.1。
当冷却到大约50℃时，将K氏培养基倾注到培养皿中，凝固后在0-5℃的冰箱中储存，有效期60天，并记录配制日期。
3 操作步骤3.1 样品处理3.1.1 浓缩清汁：打开水浴锅，调整温度到80±1℃。
以无菌操作，取10ml浓缩清汁于15ml灭菌的试管中，再移取10ml浓缩清汁于另一带有温度计的15mL的试管中，作为温度控制用，盖上样品试管的盖子。
将上述样品试管和温度控制试管放在水浴锅中，当温度达到80±1℃，开始计时，维持13分钟（用计时器计时）。
冷却至室温，用90-100ml的灭菌蒸馏水将热处理过的样品转入灭菌容器中，摇匀。
将稀释后的样品溶液用0.45um的滤膜真空过滤。
3.1.2 清汁、水：打开水浴锅，调整温度到80±1℃。
以无菌操作，取150ml清汁（或水）于已灭过菌的玻璃样品瓶中，再移取150ml清汁（或水）于另一带有温度计的玻璃样品瓶中，作为温度控制用，盖上样品瓶的盖子。
将上述样品试管和温度控制试管放在水浴锅中，当温度达到80±1℃，开始计时，维持13分钟（用计时器计时）。
将热处理过的样品冷却至室温，用0.45um 的滤膜真空过滤。
3.1.3浊汁：打开水浴锅，调整温度到80±1℃。
以无菌操作,取20ml浊汁于已灭过菌的试管中,再移取20ml浊汁于另一带有温度计的20mL的试管中，作为温度控制用，盖上样品试管的盖子。
将上述样品试管和温度控制试管放在水浴锅中,当温度达到80±1℃时,开始计时，维持13分钟（用计时器计时）。
冷却至室温，将热处理的样品用0.45um的滤膜真空过滤。
3.2 培养及计数取掉过滤器的上部装置，用灭菌的镊子，将过滤膜从过滤器上取下放在K氏培养基上，轻敲数次，以保证滤膜与培养基接触。
倒置于40-41℃恒温培养箱中，在恒温培养箱底部放置一个有水的盘子，以调整恒温培养箱的湿度，培养5天。
培养结束后，记录该培养温度下滤膜上的菌落数。
根据对样品的污染情况，可选择稀释度。
用灭菌吸管吸取25ml样品，加入到225ml灭菌蒸馏水中，做成1：10的稀释度；用灭菌吸管吸取1：10的稀释液25ml，加入到225ml 灭菌蒸馏水中，做成1：100的稀释度，稀释后的样品的检测方法同上。
培养结束后，记录滤膜上的菌落数，并按相应的稀释度进行计算。
4 数据处理结果报告10ml的浓缩清汁样品中含有的菌落数,报告单位为cfu/10ml。
结果报告150ml的清汁（或水）样品中含有的菌落数，报告单位为cfu/150ml。
结果报告20ml的浊汁样品中含有的菌落数，报告单位为cfu/20ml。
参考资料：库克实验室耐热耐酸菌的检测方法。
NDM耐酸耐热菌检验1 适用范围本方法适用于清汁、浊汁、水和浓缩果汁中的耐酸耐热菌的检测。
2 仪器和试剂2.1 恒温水浴锅：70±1℃2.2 恒温培养箱：45±1℃。
2.3 灭菌培养皿：直径为90mm。
2.4 滤膜：0.45um水系一次性滤膜。
2.5 灭菌三角瓶：500ml。
2.6 灭菌蒸馏水。
2.7 YSG培养基的配制：A组：酵母粉（MERCK）： 2.0g葡萄糖： 1.0g可溶性淀粉(MERCK)： 2.0g蒸馏水：500ml把A组用1-2N硫酸或盐酸调至PH为3.7±0.1；B组：琼脂（MERCK）：15.0g蒸馏水：500ml把A组和B组分别在121℃15分钟条件下灭菌，冷却至50—60℃，把两者混合。
3 操作步骤3.1 取样品50ml于一个无菌瓶中，另取同样品同体积于一个相同的瓶中做温度控制用，在温度控制瓶中插入温度计。
3.2 把两个瓶都放入到70℃的水浴中。
(水浴锅中的水面应高于瓶中的样品)，当温度控制瓶中的温度计达到70℃时，开始计时20分钟。
3.3 20分钟后，迅速将样品放入冰浴。
3.4 将经过热处理的样品加灭菌水稀释，稀释倍数约10倍左右。
用真空泵将此样品全部通过0.45 µm的滤膜。
用灭菌蒸馏水冲洗这个瓶子和过滤器。
确信这张膜被真空抽干。
将这张滤膜放到YSG培养基上。
为了防止气泡，小心的使滤膜滚贴到YSG培养基上，并且用无菌的镊子轻敲滤膜，使滤膜的边缘紧贴在培养基上。
3.5 将此培养基在45℃培养3-5天。
3.6 计数平板上所有的菌落4 数据处理检出的耐酸耐热菌以cfu/50ml报告。
参考资料：日本NDM公司耐热耐酸菌的检测。
纯品耐热耐酸菌的检测方法1目的检测浓缩汁中环脂芽孢杆菌和其它的耐酸耐热菌。
这个程序含有经过改进的检测方法和NFPA的建议。
2 原理/概述这个程序描述了果汁和浓缩汁中环脂芽孢杆菌和其它的耐酸耐热菌的检测方法。
它是以抗热芽孢的生长为基础进行检测的。
抗热芽孢在较高温度和酸性环境中萌发生长。
通过ribotyping和2-甲氧基酚（俞创木粉）的化学测试来检定环脂芽孢杆菌，俞创木粉是通过气相色谱分析的方法（固相微提取）来进行检测。
3 范围和应用检测浓缩汁中的环脂芽孢杆菌，从不同种类的果汁和浓缩汁中分离耐酸耐热菌，例如橙汁、白葡萄汁、酸果蔓的果实、悬钩子、梨和西红柿。
4 仪器和化学药品2.1 恒温培养箱：43±1℃。
2.2 高压灭菌锅。
2.3 恒温水浴锅：80±1℃。
2.4 K氏培养基。
2.5 25%无菌苹果酸。
2.6 灭菌吸管：1ml 和10 ml。
2.7 灭菌培养皿。
2.8 无菌20×50mm螺旋盖的盖子。
5 培养基的制备（酸化K氏培养基）酵母浸膏：2.5g蛋白胨： 5.0-g琼脂粉：15.0-g葡萄糖： 1.0-g吐温80： 1.0-ml3.1将上述试剂加入到990ml蒸馏水中，溶解后混匀，煮沸，然后在121℃灭菌15分钟。
3.2 在烧杯中，将25克苹果酸加入到100ml去离子水中，混匀。
3.3 用0.20um的滤膜过滤除菌，然后将过滤液10ml加入到990ml在121℃灭菌15min且冷却到45℃±1℃的培养基中。
3.4 检测PH，如果需要，用无菌苹果酸或1N NaOH调整PH到3.7±0.1。
3.5 也可以从International Bioproducts购买脱水K氏培养基。
按照厂家的说明，将培养基冷却到48℃，用6ml的25%的过滤除菌的苹果酸调整PH为3.7±0.1。
6 样品采集用无菌容器采集样品。
采集样品时要小心，防止交叉污染。
7 样品制备5.1 浓缩果汁5.1.1将10ml样品加入到无菌瓶中或无菌的带有螺旋盖的20×50mm的试管中。
5.1.2将样品放在80℃的水浴锅中，用一样的试管或瓶子，合适的温度计检测温度，当样品温度达到80℃时开始计时10分钟。
5.1.3确保果汁的上液位应在水面下面。
5.1.4热冲击结束后，将样品放在冷水或冰水中迅速冷却。
5.2 原汁5.2.1取10 ml样品加入到无菌瓶中或无菌的带有螺旋盖的20×50mm的试管中。
5.2.2不进行热冲击。
6 平板制备6.1 向每个Petri dishes 平板上倾注1ml样品，平行三份。
6.2 在每个平板上倾注23ml PH 3.7的温度为45℃±1℃的K氏培养基。
6.3 倾注时，培养基应厚一些，防止在43℃变干。
6.4 将培养基已经凝固的平板在43℃±1℃培养3天。
为了观察到好的菌落形态，如果必要，培养时间可以延长1-2天，也可将平板放在袋中进行培养以防止变干。
8 数据分析浓缩汁/原汁：对三个平行平板上的菌落计数，结果以cfu/3ml报出。
9 讨论9.1 分离的菌落是不透明的、奶油色、微凸。
在显微镜下，中间成杆状，末端有芽孢。
对于腐败的微经过热处理的果汁，必须进一步确认以验证这种微生物时代有芽孢的。
分离的菌落也可以用PH为3.5的土豆右旋葡萄糖琼脂培养基在43℃±1℃培养5天以使孢子形成。
在无菌水中的悬浮孢子，也可用这种方法进行检测。
经过热处理存活的孢子通过酸化的K氏培养基进行验证检测。
9.2 通过ribotyping和/或气相色谱分析测试俞创木粉来鉴定环脂芽孢杆菌。
9.3 用5890 seriesⅡ气相色谱和5970型质谱仪（Hewlett-Packard）在70电子伏特离子能量下进行分析。
用分流和无分流注射器。
9.4 最低检测限是1.5ppb的2-甲氧基酚，在腐败的果汁（耐酸孢子生长）中，2-甲氧基酚的含量等于或大于1.5ppb，2-甲氧基酚的限量为5.0ppb。
参考资料：Evancho,G.M. and I. Walls . 2001.Aciduric flat sour sporeformers,p. 245-24。
雀巢耐热耐酸菌的检测方法1 应用的范围和领域这个方法是用来测定果汁中的TAB，脂肪酸结合到环脂芽孢杆菌的细胞膜中，使它更能够抵抗食品中的低酸和商业无菌食品加工中的高温。
环脂芽孢杆菌，一种革兰氏阳性芽孢杆菌，通常能够在土壤中发现。
水果罐头中不合适的清洗引起加工设备的污染以及最终引起成品的污染。
环脂芽孢杆菌的芽孢能够在一些食品的低酸和商业无菌食品加工中的高温中生存，而这个高温是经常用来在加工中破坏食品中的芽孢的。
当这种生物体在加工中幸存而引起不知名的危害食品事件的发生时，会给生产厂家带来巨大的经济损失。
2 原理一个果汁样品进行热冲击和用0.45µm的滤膜进行无菌的过滤。
此过滤膜贴在K氏培养基上。
在培养皿上培养后进行计数并用显微镜来检查芽孢。
3 设备3.1 恒温水浴锅：80±1︒C3.2 温度计：0-100︒C3.3 灭菌移液管：10ml。
3.4 带盖子的灭菌试管和试管架：20 x 150 mm。
3.5 培养箱：43±1︒C。
