实验六叶绿素的提取、分离

一、实验目的1. 学习叶绿素的提取方法，掌握叶绿素提取纯化的基本原理和操作步骤。

2. 了解叶绿素在植物光合作用中的重要作用，以及叶绿素提取纯化在科研、食品、医药等领域的应用。

二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，存在于叶绿体的类囊体薄膜上。

叶绿素主要分为叶绿素a和叶绿素b，两者结构相似，仅分子中的镁离子被铁离子取代。

叶绿素提取纯化主要通过以下步骤：1. 提取：利用有机溶剂（如丙酮、乙醇等）溶解叶绿素，使叶绿素从植物组织中分离出来。

2. 离心：通过离心分离叶绿素提取液中的杂质，得到较纯的叶绿素。

3. 分离：采用层析技术（如纸层析、薄层层析等）将叶绿素与其他色素分离。

4. 纯化：通过重结晶、吸附等方法进一步纯化叶绿素。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜、丙酮、无水乙醇、碳酸钙、滤纸、层析板、滤液、层析溶剂等。

2. 实验仪器：研钵、剪刀、离心机、层析缸、紫外灯、比色计等。

四、实验步骤1. 叶绿素提取（1）取新鲜菠菜叶片，洗净、擦干，去掉中脉剪碎。

（2）将剪碎的菠菜叶片放入研钵中，加入少量碳酸钙粉和丙酮，研磨至糊状。

（3）将研磨后的混合物转入离心管中，以3000r/min离心5分钟，取上清液。

2. 离心分离（1）将离心后的上清液转入另一离心管中，以4000r/min离心10分钟。

（2）取上清液，即为叶绿素提取液。

3. 叶绿素分离（1）取层析板，用铅笔标记起始线。

（2）用毛细管将叶绿素提取液点在起始线上，重复点样2-3次，待溶剂挥发后，再点样。

（3）将层析板放入层析缸中，加入适量层析溶剂，使溶剂面低于起始线。

（4）待层析溶剂上行至距离起始线约1cm时，取出层析板，晾干。

（5）用紫外灯照射层析板，观察叶绿素a和叶绿素b的分离情况。

4. 叶绿素纯化（1）将分离出的叶绿素a和叶绿素b分别用无水乙醇溶解。

（2）将溶液置于冰浴中，缓慢加入无水乙醇，使叶绿素沉淀。

（3）过滤沉淀，用无水乙醇洗涤沉淀，晾干。

第1篇一、实验目的1. 了解叶绿素的结构和性质。

2. 掌握叶绿素的提取和提纯方法。

3. 学习利用有机溶剂提取叶绿素，并通过色谱法进行分离和纯化。

二、实验原理叶绿素是绿色植物中进行光合作用的重要色素，主要由叶绿素a和叶绿素b组成。

叶绿素不溶于水，但可溶于有机溶剂，如乙醇、丙酮等。

通过提取和提纯，可以得到高纯度的叶绿素，为进一步研究其性质和作用提供条件。

实验过程中，首先将植物叶片用有机溶剂提取叶绿素，然后通过层析法分离叶绿素和其他色素，最后收集纯化的叶绿素。

三、实验器材1. 新鲜植物叶片（如菠菜、青菜等）2. 研钵、研杵3. 乙醇、丙酮（分析纯）4. 层析柱、层析板5. 滤纸、脱脂棉6. 移液管、滴管7. 恒温水浴锅8. 显微镜9. 紫外-可见分光光度计四、实验步骤1. 提取叶绿素（1）取新鲜植物叶片，用剪刀剪碎，放入研钵中。

（2）加入适量乙醇和丙酮（体积比1:1），研磨至匀浆。

（3）将匀浆倒入分液漏斗，静置分层。

（4）收集有机层，用无水硫酸钠干燥。

（5）过滤，得到叶绿素提取液。

2. 分离叶绿素（1）将层析板放入层析柱中，在底部铺一层脱脂棉。

（2）取适量叶绿素提取液，用移液管滴加于层析板上，确保液面低于层析板边缘。

（3）选择合适的溶剂系统，如正己烷-乙酸乙酯（体积比4:1）。

（4）将溶剂滴加于层析板上，观察层析过程，直至溶剂前沿到达预定位置。

（5）取出层析板，用铅笔标记层析结果。

3. 收集纯化叶绿素（1）用移液管收集叶绿素层，倒入小烧杯中。

（2）加入少量乙醇，搅拌均匀。

（3）用滤纸过滤，收集滤液。

（4）将滤液倒入蒸发皿中，用恒温水浴锅蒸干。

（5）用少量乙醇溶解残留物，得到纯化叶绿素。

五、实验结果与分析1. 叶绿素提取：通过有机溶剂提取，可以得到绿色叶片提取物，表明叶绿素已从植物叶片中提取出来。

2. 叶绿素分离：通过层析法，可以将叶绿素与其他色素分离，证明叶绿素具有独特的性质。

3. 叶绿素纯化：通过蒸发和溶解，可以得到纯化的叶绿素，说明实验过程中叶绿素得到了有效的纯化。

叶绿素提取的实验报告
《叶绿素提取的实验报告》
叶绿素是植物细胞中的重要色素，它在光合作用中起着至关重要的作用。

为了
研究叶绿素的性质和应用，我们进行了一系列的叶绿素提取实验。

首先，我们收集了新鲜的植物叶片，并将其切碎成细小的碎片。

接着，我们使
用乙醇作为提取剂，将叶片碎片置于乙醇中进行浸泡。

乙醇能够溶解叶绿素并
将其提取出来，同时保持其稳定性。

随后，我们将浸泡过的叶片碎片进行离心，将乙醇溶液和叶绿素分离出来。

在接下来的步骤中，我们使用色谱法对提取出的叶绿素进行分离和纯化。

通过
色谱柱的分离作用，我们成功地将叶绿素与其他杂质分离开来，得到了纯净的
叶绿素溶液。

最后，我们对提取出的叶绿素进行了光谱分析。

光谱分析可以帮助我们了解叶
绿素的吸收特性和光合作用中的作用机制。

通过光谱分析，我们得到了叶绿素
在不同波长下的吸收峰值和吸光度，为我们进一步研究叶绿素的应用提供了重
要的数据支持。

通过这一系列的实验，我们成功地提取出了叶绿素，并对其进行了分离、纯化
和光谱分析。

这为我们进一步研究叶绿素的性质和应用打下了坚实的基础，也
为植物生物学和生物化学领域的研究提供了重要的实验数据和方法参考。

希望
我们的实验成果能够为相关领域的研究和应用带来新的启发和突破。

实验八叶绿体中色素的提取和分离教学目的1．初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。

2．探索叶绿体中有几种色素。

实验原理1．叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂，酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。

2．色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。

实验程序1）称取5g绿色叶片并剪碎提取色素2）加入少量sio2、caco3和5ml丙酮收集到试管内并塞紧管口1）将干燥的滤纸剪成6cm长，1cm宽的纸条，剪去一端两角（使层析液同时到达滤液细线）制滤纸条2）在距剪角一端1cm处用铅笔画线1）用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线滤液划线2）干燥后重复划2-3次1）向烧杯中倒入3ml层析液（以层析液不没及滤液细线为准）纸上层析（2）将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液中3）用培养皿盖盖上烧杯观察结果：滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带（如下图）最宽：叶绿素a；最窄：叶绿素b；相邻色素带最近：叶绿素a和叶绿素b；相邻色素带最远：胡萝卜素和叶黄素。

实验关键1．选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。

如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。

2．画滤液细线时，应以细、直、颜色浓绿为标准，重复画线时必须等上次画线干燥衙再进行，重复2-3次。

3．层析时不要让滤液细线触及层析液。

注意事项1．因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。

2．在研磨时要加少许二氧化硅，目的是为了研磨充分，有利于色素的提取；加少许碳酸钙的目的是为了防止研磨过程中，叶绿体中的色素受到破坏。

3．分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解在层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。

【同类题库】．下列哪一种液体不能作为叶绿体中色素提取液？（c）a．丙酮溶液b．酒精溶液c．水溶液 d．汽油．在叶绿体中色素的提取与分离实验中，扩散速度最快的色素是（d）a．叶绿素ab．叶绿素b c．叶黄素 d．胡萝卜素．将菠菜叶表皮细胞和人的口腔上皮细胞制成装片，从盖玻片一侧滴入30%的蔗糖溶液，另一侧用吸水纸重复吸收几次，分别放在显微镜下观察，其结果是（d）a．前者发质壁分离，后者也发生质壁分离b．前者发生质壁分离，后者破裂c．前者发质壁分离，后者质壁分离复原 d．前者发生质壁分离，后者皱缩．如果没有丙酮和菠菜叶，要保证分离后色素带清晰，可以用来替代的最佳实验材料是（a）a．酒精和麦苗 b．酒精和大白菜 c．蒸馏水和大白菜d．蒸馏水和麦苗．用韭菜做“叶绿体色素的提取和分离实验”，下列不能用作提取剂的是（a）a．水 b．丙酮 c．酒精 d．ccl4．为了提取绿色植物叶绿体中的色素，在研磨绿叶时加入少许碳酸钙，其作用是（b）a．调节ph，加速色素溶解 b．调节ph，防止叶绿素被破坏c．使绿叶研磨充分 d．有利于四种色素的分开．在研磨绿叶时，下列哪种物质不需要加入（b）a．丙酮b．层析液 c．碳酸钙 d．二氧化硅．（多选）某学生在做“叶绿体色素的提取和分离实验”时，收集到的滤液呈淡绿色，其原因可能是（ac）a．叶片较老较黄 b．加入的二氧化硅多了些c．研磨不充分d．漏斗基部塞的脱脂棉多了些．做色素提取和分离实验的正确装置是图中（d）．在进行叶绿素提取和分离实验时，不能让层析液没及滤液细线的原因是（c）a．滤纸条上几种色素会扩散不均匀而影响实验结果b．滤纸条上滤液细线会变粗而使色素太分散c．色素会溶解在层析液中而使结果不明显d．滤纸条上几种色素会混合起来．某人做叶绿体中色素分离实验时，使用的是圆形滤纸，装置如下图。

“叶绿体中色素的提取和分离”实验中容易出现的问题和解决方式在高中生物实验中，“叶绿体中色素的提取和分离”是一个重要的实验,学生在做那个实验时容易出现以下几个问题：一是研磨植物叶片的时刻太长，掌握不好加入二氧化硅的用量，往往是二氧化硅过量，致使滤液含有较多的二氧化硅，滤液颜色变浅，影响实验效果；二是毛细吸管易堵塞，色素线画得不够细、平、齐，使色素带重叠；三是层析液中含有苯，苯是一种毒性很强的有机物；四是在分离色素时，滤纸条上的滤液细线容易没及到层析液，使色素溶于层析液中，致使色素不清楚。

做那个实验，主如果让学生通过实验操作，学会提取分离叶绿体中色素的方式和技术，在探索、试探和主动实践中，吸取知识、应用知识、分析问题、解决问题，从而培育学生的科学素养、创新精神和实践能力。

一、实验前的知识预备一、证明叶绿体中存在色素。

取一支干燥的白色粉笔，将其一端（约）竖直浸入预做好的叶绿体色素提取液中，充分吸液后，使其略微干燥，接着将该端竖于95%的乙醇中，片刻后，粉笔会出现四条不同颜色的色带。

二、实验原理：由于光合作用色素位于叶绿体中的类囊体膜上，要把它提掏出来就必需破坏叶表皮、细胞壁和细胞膜、叶绿体的双层膜，所以要剪碎叶片后加入二氧化硅进行研磨，以便使色素被充分提取，又因为叶绿体中色素不溶于水，但可溶于有机溶剂，如酒精或丙酮，形成色素液，所以要加入丙酮使色素溶解来提取各类色素。

另外要加碳酸钙以保护叶绿体中的色素，原因是碳酸钙可调节色素液中的酸碱度，避免叶绿素被破坏。

分离叶绿体色素常常利用的纸层析法是一种分派层析，即利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶液中的分派系数不同将它们分离。

在纸层析中的流动相是指层析液，在毛细拉力作用下，层析液可不断地由下向上流动。

由于滤纸纤维素上的羟基亲水性，因此水分子被吸附在纤维之间不易扩散而成为固定相。

在层析进程中，当层析液在毛细拉力作用下，上升流经色素滤液细线时，滤液细线的色素就接踵融入层析液，随层析液上升并发生再分派，即有一部份色素从层析液分派溶解到固定相中直到平衡。

叶绿素的提取和分离
叶绿素是一种含有镁离子的绿色色素，广泛存在于植物、藻类和一些细菌中，是光合作用过程中吸收光能的重要物质。

叶绿素的提取和分离通常可以通过以下步骤实现：
1. 采集样品：首先需要采集含有叶绿素的植物、藻类或细菌样品，较好的样品应该是新鲜的、健康的、并且没有被过度受损。

2. 破碎细胞壁：将采集到的样品经过冷冻破碎或高速离心等处理，将细胞壁破碎并释放出细胞内的叶绿素。

3. 溶解蛋白质：用生理盐水或其他适当的缓冲液将样品中的细胞膜、蛋白质等溶解掉，并且使叶绿素以游离形式存在于溶液中。

4. 溶剂萃取：利用溶剂（如乙醇、甲醇、乙酸乙酯等）对上述溶液中的叶绿素进行萃取，以分离出含有叶绿素的有机相。

5. 色谱分离：将通过溶剂萃取得到的含有叶绿素的色素混合物进行色谱分离，以分离出不同类型的叶绿素，并且去除杂质，获得纯度较高的叶绿素。

总之，叶绿素的提取和分离需要依次实施多个步骤，选择适当的解剖技术和实验方案可提高叶绿素的分离纯度和产量。

陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目叶绿素的提取和分离姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心叶绿素的提取和分离一、实验目的1. 学习叶绿体色素的提取、分离方法。

2. 通过叶绿体色素提取、分离方法的学习了解叶绿体色素的相关理化性质。

3. 为进一步研究各叶绿体色素性质、功能等奠定基础。

二、原理叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。

它们与类囊体膜蛋白相结合成为色素蛋白复合体。

它们的化学结构不同，所以它们的物化性质（如极性、吸收光谱）和在光合作用中的地位和作用也不一样。

这两类色素是酯类化合物，都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙醇等有机溶剂提取。

提取液可用色谱分析的原理加以分离。

因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。

三、材料、仪器设备和试剂1. 绿色植物如菠菜等的叶片。

2. 研钵、漏斗、三角瓶、剪刀、滴管、康维皿、圆形滤纸（直径11cm）。

3. 试剂：95%乙醇，石英砂，碳酸钙粉，推动剂:按石油醚:丙酮:苯=10:2:1比例配制（v/v）四、试验步骤1. 叶绿体色素的提取（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片4-5片（4g左右），洗净，擦干，去掉中脉剪碎，放入研钵中。

（2）研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，加2-3ml 95%乙醇，研磨至糊状，再加10ml95%乙醇，然后以漏斗过滤之，残渣用10ml 95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。

2. 叶绿体色素的分离(1)将11cm的滤纸的一端剪去二侧，中间留一长约1.5cm、宽约0.5cm窄条。

(2)用毛细管取叶绿体色素浓溶液点于窄条上端，用电吹风吹干，如一次点样量不足可反复在色点处点样数次，使色点上有较多的叶绿体色素。

(3)在大试管中加入四氯化碳3-5ml及少许无水硫酸钠。

植物叶中色素的提取和柱色谱分离实验报告一．实验目的1、学习从植物中提取色素的方法。

2、学习柱色谱(层析)的原理及其操作方法。

3、掌握天然药物化学实验报告的一般写法。

二．实验原理1、绿色植物叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。

各种色素能溶解在有机溶剂（无水乙醇等）中形成溶液，使色素从生物组织中脱离出来。

2、柱色谱是通过色谱柱来实现分离的。

在色谱柱内装有固体吸附剂(固定相)如氧化铝或硅胶。

液体样品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时，由于吸附剂表面对液体中各组分吸附能力不同而按一定的顺序吸附。

然后从柱顶加入洗脱剂(流动相)，样品中的各组分随洗脱剂按一定的顺序从色谱柱下端流出，根据不同颜色分段收集。

吸附剂，常用吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁等。

吸附剂对化合物的吸附能力与分子的极性有关，极性越强，吸附能力越大，分子中含有极性较大的基团，其吸附能力也越强。

溶剂，溶剂分为溶解样品的溶剂和洗脱剂。

选择溶剂时还要考虑到被分离物各组分的极性和溶解度。

通常是先将要分离的样品溶于非极性溶剂中，从柱顶加入柱中。

然后用稍大极性的溶剂使各组分在柱中形成若干谱带。

再用极性更大的溶剂洗脱被吸附的物质。

为了提高洗脱效果，有时也使用混合溶剂。

在本实验中色素成分在不同比例混合洗脱剂的作用下可以分离出来。

三．实验仪器及试剂仪器：烧杯、量筒、色谱柱、分液漏斗、玻璃棒、干燥的锥形瓶、滤纸、旋转蒸发仪、酸式滴定管、布氏漏斗、研钵、胶头滴管、剪刀、天平试剂：50g新鲜植物叶、中性氧化铝、甲醇 ( 9 5 ％，分析纯 ) 、乙醇、石油醚 ( 6 0～ 9 0 ％ ) 、丙酮、无水硫酸钠、正丁醇、50g新鲜植物叶、四．实验内容1. 绿叶色素的提取把新鲜绿叶洗净晾干或用滤纸吸干，称取5g绿叶，剪碎后放入研钵，再加入10mL乙醇。

研磨后用布氏漏斗抽滤，弃去滤渣。

将滤液放回研钵，每次用10mL 3:2 （体积比）的石油醚 - 甲醇混合液萃取两次，每次需加以研磨并且抽滤。

普通生物学实验实验报告一、实验名称叶绿素的提取分离与理化性质二、实验目的1.学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法2.验证叶绿体色素的多种理化性质三、实验原理1.叶绿素中的叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素是色素蛋白复合体，不溶于水而易溶于有机溶剂，可以用乙醇进行提取。

2.由于硅胶板的吸附剂对不同色素的吸附能力不同，不同色素在展开剂中的溶解度不同，因而叶绿素提取液进行薄层层析时各组分移动速度不同而分开，因此可以用薄层层析法对色素进行分离，进而对色素进行观察鉴别。

3.叶绿素是由叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复合酯，能与碱性物质发生皂化反应生成甲醇和叶绿醇及能溶于水的叶绿酸盐，从而绿色素和黄色素分离。

4.叶绿素可以吸收光量子变成不稳定的激发态，当它变回基态时可发射红光量子产生荧光。

5.叶绿素的化学性质不稳定，在强光照下易被破坏，类胡萝卜素则较稳定。

6.叶绿素中的镁可被氢离子取代生成绿色的去镁叶绿素。

去镁叶绿素可与铜离子反应生成稳定的铜代叶绿素。

四、实验仪器和材料1.新鲜的菠菜叶片。

2.体积分数为95％的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂。

3.天平，研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，毛细玻璃管，层析缸，硅胶预制板，滤纸。

4.刻度试管，小试管，试管架，水浴锅，10mL移液管。

5.苯，醋酸铜粉末，质量分数为5％的稀盐酸，醋酸-醋酸铜溶液，氢氧化钾-甲醇溶液。

五、实验步骤1.叶绿素提取液的制备2.叶绿体色素的分离3．光对叶绿素的破坏作用取两只小试管，各加入2.5mL 的叶绿素提取液和2.5mL 的95％乙醇。

一支试管放在直射阳光下，另一支试管用锡箔纸包严，均静置40分钟。

4.皂化作用5.H 离子和Cu 离子对叶绿素Mg 离子的取代作用1) 取两只试管，试管1中加入5mL 叶绿素提取液作为对照。

试管2中加入5mL叶绿素提取液后再加入质量分数为5％的盐酸数滴并摇匀，当溶液变褐后再加入少量醋酸铜粉末，60℃水浴加热，观察溶液颜色变化并和试管1比较。

叶绿素的提取、分离一 、实验目的 1. 掌握从植物叶中提取叶绿素的方法。

2. 了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作和定性鉴定方法。

二、实验原理1. 叶绿素提取原理：叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a 和b 、胡萝卜素及叶黄素）等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。

故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂提取而不用水。

2. 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。

滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。

把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。

结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。

毛细管点样薄层色谱展开 三 、仪器和药品研钵、毛细管、漏斗、纱布、小烧杯、试管、培养皿等95%酒精、丙酮、石油醚碳酸钙，石英砂四、实验步骤（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片20g左右，洗净，用滤纸擦干，去掉叶柄和中脉剪碎，放入研钵。

（2）研钵中加入少量碳酸钙和石英砂，加4-5ml 无水乙醇，研磨至糊状，再加10ml 无水乙醇充分混匀以提取叶片匀浆中的色素，15-20分钟后，过滤入50ml锥形瓶中加塞待用。

分离：（1）取圆形定性滤纸一张（直径15cm），将其剪成滤纸条（15cm×2cm），将其2cm一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方用铅笔画一条直线，作为画滤液细线的基准线（注意：滤液线必须距底边1-1.5cm）。