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用比浊法测定大肠杆菌的生长(shēngzhǎng)曲线(一)实验(shíyàn)目的了解细菌生长曲线的持点及测定(cèdìng)原理，学会用比浊法测定细菌的生长曲线。
(二)实验(shíyàn)原理将一定数量的细菌，接种于适宜的液体培养基中，在适温下培养，定时取样测数，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，作出的曲线称为生长曲线。
该曲线表明细菌在一定的环境条件(tiáojiàn)下群体生长与繁殖的规律。
一般分为延缓期、对数期、稳定期及衰亡期四个时期，各时期的长短同菌种本身特征、培养基成分和培养条件不同而异。
比浊法是根据细菌悬液细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比关系，利用光电比色计测定细胞悬液的光密度(即OD值)，用于表示该菌在本实验条件下的相对生长量。
实验设正常生长、加酸抑制和加富培养等三种处理，以了解细菌在不同生长条件下的生长情况。
（三）实验器材(1)活材料：大肠杆菌(E.coli)。
(2)培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支(每支10mL)，浓缩5 倍的牛肉膏蛋白胨培养基1支。
无菌酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。
(3)器材：1mL无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、标签等。
（四）实验方法方法(1)1)接种(jiēzhòng)：取13支装有牛肉(niú ròu)膏蛋白胨培养液的试管，贴上标签(注明(zhù mínɡ)菌名、培养处理、培养时间、组号)。
按无菌操作法用吸管向每管准确(zhǔnquè)加入0.2mL的大肠杆菌培养液，接种(jiēzhòng)后，轻轻摇荡，使菌体混匀。
另一支不接种的培养管注明CK(对照)。
2)培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下振荡培养。
其中9支培养管分别于培养的0、1．5、3、4、6、8、10、12和14h后取山，放冰箱中贮存，待测定。
大肠杆菌生长曲线实验报告抗生素能破坏细菌细胞壁的结构，使细菌的繁殖和生长受到抑制。
但某些细菌对抗生素表现出抗性，原因是其基因发生了改变，产生能抵抗抗生素的性状。
在自然情况下，细菌的基因突变率很低，而且突变是不定向的，因此在自然条件下，想要获得有抗性的细菌是很困难的。
当给与适当的物理条件时，其突变率会大大增加。
如当用α射线、β射线、γ射线、Χ射线、中子和其他粒子、紫外线、微波等物理因素辐射时，能够促进遗传物质突变。
DNA对紫外线（UV）有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。
紫外线引起DNA 结构变化的形式有DNA链断裂、碱基破坏、胸腺嘧啶二聚体等。
因此，紫外线通常作为诱变剂，用于微生物菌种选育。
一般细胞分裂越旺盛，诱变剂量越大，突变率高，诱变最有效的波长253~265 nm。
选择合适的诱变剂量对于获得较高突变率十分关键，过高或过低的辐射剂量会导致菌株死亡或诱变不充分而降低诱变效果。
在紫外线诱变下，菌株发生不定向的突变，想要得到需要的特向变异必须对诱变后的菌株做筛选。
本实验想要得到的是能够抵抗抗生素的菌株，因此可以用抗生素培养基作为筛选培养基对菌种进行筛选。
若菌株没有发生定向突变，则该菌株不能在抗性培养基上正常生长，只有发生了定向突变才可能在筛选培养基上正常生长。
紫外线对于菌株有诱变作用外，对菌株还有较强的致死作用，因为紫外线改变了菌株的基因结构导致菌株无法正常生长繁殖。
因此，通过本实验的操作，在合适的照射剂量的设置下，比较不同不同照射剂量下的致死效果和突变率，并初步分析两者的相关性。
在分析死亡曲线和诱变率曲线的基础上，能了解诱变育种的机理和方法，为做进一步的诱变实验做准备。
2.材料和方法2.1实验材料、仪器和试剂菌种：大肠杆菌仪器：超净台、离心机、高压灭菌锅、培养箱、磁力搅拌器、培养皿、涂布器、移液管、移液器试剂：牛肉膏蛋白胨培养基相关试剂、硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）、生理盐水2.2实验方法2.2.1制备培养基普通培养基——牛肉膏蛋白胨培养基（400ml）：牛肉膏5g蛋白胨10g Nacl 5g琼脂20g蒸馏水1000ml Ph7.0 按配方配制好培养基后置于灭菌锅中115℃15min，倒平板，4皿*15ml*5组+2皿*15ml=22皿*15ml=330ml筛选培养基(200ml)：含抗生素50mg/L。
大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验报告思
考题
在大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验报告中，以下是一些可能的思考题：
1. 实验结果显示大肠杆菌细胞在培养基中的生长呈现出典型的生长曲线，包括潜伏期、指数期、平台期和死亡期。
这种生长曲线的形成是由什么因素引起的？
2. 在实验中，为了测定大肠杆菌细胞的生长曲线，我们选择了什么样的培养基和培养条件？这些选择是否对实验结果产生了影响？
3. 在实验过程中，我们通过测量光密度或细胞数量来确定大肠杆菌细胞的生长情况。
这种测量方法可能存在的缺陷是什么？有没有更准确的测量方法可以应用于该实验？
4. 实验中，我们还讨论了大肠杆菌细胞生长的影响因素，如温度、pH值和营养成分等。
在未来的研究中，我们可以采取哪些控制变量的方法来深入探究这些影响因素对大肠杆菌细胞生长的具体影响？
5. 大肠杆菌细胞生长曲线的测定在哪些领域有广泛的应用？如何利用实验结果来研究和解决实际问题，比如食品安全、环境污染等？
这些思考题可以帮助你对实验结果进行进一步的思考和讨论，深化对大肠杆菌细胞生长曲线的理解并应用于更广泛的领域。
E.coli growth curve measurement一、目的1、瞭解細菌生長曲線特徵，測定細菌繁殖的代時；2、學習液體培養基的配製以及接種方法；3、反復練習無菌操作技術；4、瞭解不同細菌，不同接種方法在同一培養基上生長速度的不同；5、掌握利用細菌懸液混濁度間接測定細菌生長的方法6、複習光電比濁法測量細菌數量的方法7、學習平板塗布技術二、原理1、大腸桿菌生長：將一定量的細菌接種在液體培養基內，在一定條件下培養，可觀察到細菌的生長繁殖有一定的規律性，如以細菌的活菌數的對數作縱坐標，以培養時間作橫坐標，可繪成一條曲線，成為生長曲線（如圖一）。
圖一微生物生長曲線示意圖單細胞微生物的發酵具有四個階段，即Ⅰ調整期（延滯期）、Ⅱ對數期（生長旺盛期）、Ⅲ平衡期（穩定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生長曲線可表示細菌從開始生長到死亡的全過程的動態。
不同的微生物有不同的生長曲線，同一種微生物在不同的培養條件下，其生長曲線也不一樣。
因此，測定微生物的生長曲線對於瞭解和掌握微生物的生長規律是很有幫助的。
測定微生物生長曲線的方法很多，有血球計數板法、平板菌落計數法、稱重法和比濁法等。
本實驗採用比濁法測定，由於細菌懸液的濃度與混濁度成正比，因此，可利用分光光度計測定細菌懸液的光密度來推知菌液的濃度。
將所測得的光密度值（OD600）與其對應的培養時間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線。
注意，由於光密度表示的是培養液中的總菌數，包括活菌與死菌，因此所測定的生長曲線的衰亡期不明顯。
2、平板塗布技術：塗布法接種是一種常用的接種方法，不僅可以用於計算活菌數，還可以利用其在平板表面生長形成菌苔的特點用於檢測化學因素對微生物的抑殺效應。
原理:將一定濃度，一定量的待分離菌懸液加到已凝固的培養基平板上，再用塗布棒快速地將其均勻塗布，使長出單菌落或菌苔而達到分離或計數的目的。
其目的:用於目的微生物的分離；用於藥物的抑菌試驗；觀察菌苔的形狀和特點。
[精品]细菌生长曲线的测定细菌生长曲线的测定是细菌学中的一项重要实验。
它可以帮助我们了解细菌的生长繁殖规律及其影响因素，为控制细菌繁殖提供理论依据。
本次实验将介绍如何通过外观观察、菌落计数及测定细菌生物量的方法，获得细菌在液体培养基中的生长曲线。
实验步骤：一、准备实验材料和试剂1、选取一种细菌菌株，本次实验选择了大肠杆菌（Escherichia coli）；2、配置好液体培养基，一般为普通营养琼脂培养基、肉汤培养基等；3、消毒好实验室的工作台面及实验仪器；4、准备好移液管、试管、比色管和加热消毒的线圈镊子等实验用具。
二、制备不同浓度的菌液1、挑选一根菌棒，从培养基上接入一些带有细菌的菌落，将菌落均匀涂抹于培养基表面；2、将含有细菌的培养基放置在恒温摇床中，在适宜的温度下进行培养；3、当细菌生长至一定程度（一般在对数生长期）时，用无菌的移液管，在培养基中取出一定量的菌液；4、分别将不同体积的菌液加入到含有培养基的试管中，制备成不同浓度的菌液。
三、测定不同浓度菌液对应的OD600值1、将制备好的不同浓度菌液放入洗涤过的比色管中；2、由于细菌太小，肉眼观察不能得出其数量的增多或减少，因此需要使用分光光度计在600nm处测量各个浓度的菌液的吸光度（OD）值；3、重复测量3次，取平均值计算OD600；4、根据OD600值和菌液中细胞数量的线性关系，可通过OD600值推算出细胞数。
2、每隔2-3个小时，取出一定量的菌液，测量其OD600值，记录下菌液对应时间的值；3、采用计数培养法，每隔一定时间取出一定体积的菌液，进行菌落数的计数；4、利用OD600值曲线和菌落数曲线绘制出细菌生长曲线。
实验注意事项：1、实验期间需在无菌条件下操作，防止细菌的外界感染对实验结果的影响；2、实验者需佩戴适当的防护手套及实验服，以免对人体造成伤害；3、制备好菌液后需要及时放置在摇床中，防止菌落外的细菌感染进去；4、测量OD600值时比色管必须清洗干净，用甲醇或无菌去离子水。
