当前位置：文档之家 › 高效阴离子交换色谱检测双歧杆菌胞外多糖的单糖组成_旭日花

高效阴离子交换色谱检测双歧杆菌胞外多糖的单糖组成_旭日花

  • 格式：pdf
  • 大小：298.26 KB
  • 文档页数：4

下载文档原格式

  / 4

合集下载

糖及糖组学考试复习题及答案解析

糖及糖组学考试复习题及答案解析

糖及糖组学考试复习题及答案解析1、糖⽣物学：通过运⽤分析化学、合成有机化学、⽣物化学与分⼦⽣物学、遗传学和细胞⽣物学等多学科⼿段研究糖及其衍⽣物的结构、合成代谢、⽣物学功能，以及与疾病的关系的⼀门交叉科学，包括糖化学、糖链合成、糖链在⽣物系统中功能及糖链操作技术等。

2、糖组学：是从分析和破解⼀个⽣物或⼀个细胞全部糖链所含信息这⼀⾓度⼊⼿，研究糖链的分⼦结构、表达调控、功能多样性以及疾病的关系的科学。

3、糖缀合物：⼜叫糖偶联复合物，糖与蛋⽩或脂类形成的共价结合物，如糖蛋⽩、糖脂、糖胺聚糖、蛋⽩聚糖及⼩分⼦糖苷。

4、糖基化反应：核苷糖供体和受体（如单糖、寡糖、蛋⽩质、脂和DNA）在特定的糖基转移酶的催化下⽣成糖基化受体同时释放出核苷酸的过程。

5、糖基转移酶：负责催化糖苷键的合成，是膜结合蛋⽩，有跨膜区，茎区和催化域组成。

糖基转移酶对受体结构有⾼度的特异性，并且酶的底物专⼀性相互重叠。

糖基转移酶的表达是基本⽔平组成型表达，还有发育阶段依赖及组织专⼀性，有105家族。

6、核苷糖转运⼦：在真核细胞中，能够将在细胞质中合成的核苷糖转运到亚细胞器（如内质⽹/⾼尔基体）的腔内，并从亚细胞器中送出核苷⼆磷酸转化⽣成的核苷⼀磷酸的蛋⽩载体，位于膜上。

7、N-糖链：糖链连接到蛋⽩质的天冬酰胺上，核⼼结构是Asn-GlcNAc2Man3，糖链较长，结构较复杂。

8、O-糖链：糖链连接到蛋⽩质的丝氨酸或苏氨酸上，糖链短，结构简单。

9、糖苷酶：是⼀类催化糖苷键⽔解的酶。

在酸性条件下，能催化由半缩醛羟基与醇羟基反应形成的糖苷键的断裂，有内切糖苷酶和外切糖苷酶。

根据结构差异分为135个家族（GH1-GH135）。

10、凝集素：⼀类⾮免疫来源的糖结合蛋⽩，没有酶活性，蛋⽩上有糖识别域，特异识别糖链末端特定的糖结构，能引起细胞凝集。

11、植物疫苗：病原体侵染植物，细胞表⾯半纤维素类多糖降解为寡糖，寡糖作为信号分⼦诱导植物基因表达，使植物表现出多种防卫功能，这些寡糖类物质具有类似疫苗的功能，植物疫苗有壳寡糖和⼏丁寡糖、葡寡糖、寡聚半乳糖醛酸。

【北京市自然科学基金】_rh_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140729

【北京市自然科学基金】_rh_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140729

2014年 序号 1 2 3 4
2014年 科研热词 棒状体蛋白rop5 抗原性 原核重组表达 刚地弓形虫 推荐指数 1 1 1 1
推荐指数 2 2 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
2011年 科研热词 高效阴离子交换色谱 胞外多糖 双金属rhaux催化剂 双歧杆菌 单糖组成 催化化学 co吸附 co催化氧化 au表面偏析 推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2012年 序号 1 2 3 4 5
科研热词 黑碳 霾 雾 大气能见度 pm2.5
推荐指数 1 1 1 1 1
2013年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29
科研热词 推荐指数 刚地弓形虫 3 胞外多糖 2 热扩散法 2 液流密度 2 杨树人工林 2 反转录基因克隆 2 双歧杆菌 2 阴离子交换层析 1 表面蛋白 1 致密颗粒蛋白gra7 1 致密颗粒蛋白gra2 1 相对湿度 1 生物素标记 1 环境因子 1 温湿指数 1 液相色谱和两级质谱联用技术 1 河岸带的结构指标 1 气温 1 植被覆盖度 1 树形级别 1 树形因子 1 对照区 1 基因簇 1 城市河岸带 1 原核重组表达 1 原核表达 1 南北河岸带 1 分泌蛋白 1 产量 1
2008年 序号 1 2 3 4
科研热词 靶器官 血管活性物质 肾性高血压,大鼠 四逆汤来自推荐指数 1 1 1 1
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
科研热词 面团特性馒头 贵金属 细胞凋亡 电感耦合等离子体质谱 流式细胞术 弓形虫 干扰方程 坏死 品质 不同酵母 ana-1细胞

(色谱)高效液相色谱法分析生漆多糖中的单糖组成

(色谱)高效液相色谱法分析生漆多糖中的单糖组成

Xylos e 1. 59 2. 56 4. 12 98. 8 3. 93
0 0
G l ucuronic aci d / / / /
18. 22 16. 50 32. 70
3. 5 讨论 本文 采用氨 基色谱 柱, 漆 多糖中 的葡萄 糖醛酸
因在固定相 上产生吸附作用而不 出峰。而图 1-b 上
的峰 1 经实验证 明为葡 萄糖醛 酸内酯 的峰, 这是漆 多糖 在三氟乙酸 水解时, 葡萄 糖醛酸 极易发 生内酯 化[ 7, 8] 的缘故。湖北毛坝大木漆多糖中的鼠李糖含量
容至 1. 0mL 。( 2) 漆多糖完 全酸水解产物制备: 取漆 多 糖 50mg , 酸 处 理过 程同 ( 1) , 干 燥 后加 水 定 容至 1. 0mL 。
回收率测 定 准确 称取上 述标准单 糖配成
1. 0mL 溶 液, 依次量 取 0. 1, 0. 2, 0. 5mL 分别 加入 3
3. 4 回收率与定量分析 对 2. 3 项 所得 的样 品溶 液进 行回 收实 验, 单糖
加入量折 算成 0. 1mL 标准溶 液的单糖 量, 测 定结果 取平均值( 见表 2) 。
Damu Lacquer Polysaccharide( L PS) ( b)
不同 品种 和来源 的漆 多糖 中单糖 含量 ( 摩 尔百
份毛 坝大 木漆 多 糖样 品 50mg 中, 干 燥, 按“样 品配
制”方法处理后, 加水定容至 1. 0mL 。
样品测定 用
-B on dap akLeabharlann NHTM 2
色谱
柱
和示差
折光检测器 ( 25℃水浴 恒温) , 以乙腈 ∶水∶甲 醇( 70
∶25∶5, V / V ) 作流 动相, 流 速 1. 6mL / min, 进 样量

糖的高效阴离子交换色谱 脉冲安培检测法分析

糖的高效阴离子交换色谱 脉冲安培检测法分析

铵功能基的乳胶颗粒。这种有机高聚物在 !$ ( $ #% 的溶液和与水互溶的有机溶剂中稳定， 可以强酸或者 强碱性溶液做流动相， 可用有机溶剂清洗疏水性有机 化合物以消除其对色谱柱的污染。这 种固定 相主要 其 分为 %& 与 ’& 两 种 类 型。 %& 型 亦 称 为 薄 壳 型， 树脂的基核没有孔， 离子交换功能基团附聚于基核的 。而 ’& 型 是 大 孔 的 基 核， 具有大的 表面 （ 见图 # " ） 表面积， 因此具有高的交换 容量 （ 见图 # ( ） 。几 种典 型的色谱柱的特性与应用列于表 # 。 )"*(+%", %&#( 和 )"*(+%", %&!( 色谱柱主要用于单糖和双糖的分 离； )"*(+%", %&!( 色谱柱的填料与 )"*(+%", %&#( 相似， 但树脂 基核及 外面 的胶乳 的颗粒 较 )"*(+%", %&#( 小， 因 此 速 度 快， 柱 效 高。 )"*(+%", %&#(( 和 )"*(+%", %&!(( 色谱柱主要用于寡糖、 多糖的分离。 )"*(+%", %&!(( 色谱柱与 )"*(+%", %&#(( 柱的 差 异和 )"*(+%", %&#( 与 )"*(+%", %&!( 的 差 异 相 似。对酸性很弱的糖醇以及糖与糖醇的同时分离， 宜 选用高交换容量的色谱柱 )"*(+%", ’&# 。

219316071_常温酸奶发酵剂产胞外多糖对DSS诱导肠炎的改善作用

219316071_常温酸奶发酵剂产胞外多糖对DSS诱导肠炎的改善作用

户行宇，姚梦柯，孙婷，等. 常温酸奶发酵剂产胞外多糖对DSS 诱导肠炎的改善作用[J]. 食品工业科技，2023，44（12）：378−387.doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022080243HU Hangyu, YAO Mengke, SUN Ting, et al. Improvement Effect of the EPS Produced by Long Shelf-life Yogurt Culture on DSS-Induced Enteritis[J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(12): 378−387. (in Chinese with English abstract). doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022080243· 营养与保健 ·常温酸奶发酵剂产胞外多糖对DSS 诱导肠炎的改善作用户行宇1，姚梦柯1，孙　婷2，马　霞2，孙　倩2，洪维鍊2, *，杨贞耐1,*（1.北京工商大学食品与健康学院，北京 100048；2.内蒙古伊利实业集团股份有限公司，内蒙古呼和浩特 010080）摘　要：为探究常温酸奶发酵剂发酵过程中分泌的胞外多糖（EPS ）对小鼠结肠炎的缓解作用，本研究在常温酸奶发酵剂A 和发酵剂B 分别发酵后的常温酸奶中提取纯化胞外多糖，测定其分子特性、结构形貌和单糖组成，同时通过葡聚糖硫酸钠（DSS ）诱导小鼠结肠炎，分析了两种胞外多糖对小鼠体重、结肠组织病理学、小鼠炎症因子、髓过氧化物酶（MPO ）和紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin ）表达量的影响。

结果表明，EPS-A 和EPS-B 在分子形貌和单糖组成上均有明显差异。

EPS-A 结构略疏松，由盐酸氨基半乳糖、半乳糖和葡萄糖3种单糖构成，其摩尔比为0.345:0.21:0.435；EPS-B 结构致密，由盐酸氨基半乳糖、盐酸氨基葡萄糖、半乳糖和葡萄糖4种单糖构成，其摩尔比为0.421:0.05:0.207:0.322。

【北京市自然科学基金】_食品安全_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140729

【北京市自然科学基金】_食品安全_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140729

推荐指数 3 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
53 54 55 56 57 58
傅里叶变换红外光谱 亮绿 乙醇中毒 乙醇 主题模型 bp神经网络
ห้องสมุดไป่ตู้
1 1 1 1 1 1
2013年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48
科研热词 食品安全 关键控制点 食品质量安全 诱变 菌种选育 细胞边缘检测 纳他霉素 管理 第1高变区 研究进展 监管 生鲜肉 无损检测 数学形态学 支持向量机 抗体 快速检测 工作流模型 工作流技术 安全输血 安全性再评价 基因工程 品质安全 原生质体 危害分析关键控制点 危害分析与关键点控制 北京市 决策树 农产品批发市场 光谱技术 信息系统 信息化 中药注射剂 丙型肝炎病毒 不良反应 haccp canny算子
2014年 科研热词 食品安全 近红外光谱 高效液相色谱 高光谱图像 食品污染物 镉 酚类物质 过量表达 计算机视觉 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 芝麻油 脂肪酸 聚碳酸酯 红曲霉 红曲色素 粗饲料组合 真伪鉴别 溶解沉淀 溴系阻燃剂 次级代谢产物 桔霉素 木糖醇 暴露评估 掺伪分析 原料奶 十溴联苯醚 化学计量学 动物源性食品 六溴环十二烷 γ -氨基丁酸 monacolin k g6pd基因 candida tropicalis 推荐指数 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

高效阴离子交换色谱法检测酱油中的单糖及双糖

高效阴离子交换色谱法检测酱油中的单糖及双糖朱松;戴军;陈尚卫;虞锐鹏;李玥【摘要】建立了高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定酱油中阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、木糖、甘露糖和果糖的方法.采用70％乙醇作为蛋白沉淀剂处理酱油样品,以Dionex CarboPac PA20阴离子交换柱为色谱柱,0.25 mol/L NaOH-水为流动相进行梯度洗脱,考察了色谱柱温度和NaOH浓度对各种糖分离的影响,确定最佳柱温为20℃,NaOH浓度为5.0 mmol/L,7种糖可在20 min内实现基线分离.7种糖的检出限(25 μL进样,S/N=3)为2.0～8.0 μg/L,线性范围为0.1～80 mg/L,r2大于0.999.酱油样品测定的相对标准偏差为1.4％～4.0％,加标回收率为92％～104％.该方法简便易行,灵敏度高,重现性好,适用于酱油样品中糖组分的分析.%A chromatographic method was developed for the determination of arabinose, galactose, glucose, sucrose, xylose, mannose and fructose in soy sauce sample using high-performance anion-ex-change chromatography coupled with pulsed amperometricdetection(HPAEC -PAD). The removal efficiency of the proteins in the soy sauce was evaluated by using 20% lead acetate, 5% trichloroacetic acid, 15% potassium ferrocyanide or 70% ethanol, respectively. The results indicated that the best sugar recovery was achieved when 70% ethanol was selected as the protein precipitation agent. Effects of column types, column temperature and NaOH concentrations on separation efficiencies of the saccharides were investigated. The optimal conditions were carried out ona Dionex CarboPac PA20 anion-exchange chromatographic column with 0.25 mol/L NaOH - water by gradient eluent at 20 ℃. The detect ion limits(25 μL injection, S/N = 3) ranged from 2.0 μg/L to 8.0 μg/L, with a wide linear range of 0.1 - 80 mg/L. The relative standard deviations for the soy sauce sample were between 1. 4% and 4. 0% , and the recoveries of standard addition of the saccharides were in the range of 92% - 104% .The method is suitable for the determination of common saccharides insoy sauce samples for with its simplicity, high sensitivity and good reproducibility.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2012(031)011【总页数】5页(P1411-1415)【关键词】离子色谱法;脉冲安培检测;酱油;糖【作者】朱松;戴军;陈尚卫;虞锐鹏;李玥【作者单位】江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品学院,江苏无锡214122【正文语种】中文【中图分类】O657.75;Q53酱油主要由大豆、淀粉、小麦、食盐经过制油、发酵等程序酿制而成，其成分较为复杂，除食盐外，还含有多种氨基酸、糖类、有机酸、色素及香料［1－2］成分。

应用PCR法检测高产胞外多糖双歧杆菌

应用PCR法检测高产胞外多糖双歧杆菌
石莹;呼鑫荣;李静;郭颖;李阳;旭日花
【期刊名称】《生物技术世界》
【年(卷),期】2015(000)008
【摘要】胞外多糖（exopolysaccharide, EPS）是细菌分泌到胞外的一种重要的次级代谢产物,筛选高产EPS的菌株对以后其EPS的理论与应用研究具有重要意义.本文采用传统法对分离自婴儿肠道的若干双歧杆菌是否产EPS进行了检测,并探索了高产EPS双歧杆菌的PCR检测法.PCR法中,引物选择双歧杆菌糖基转移酶（Glycosyltransferase family group 2）基因,结果显示这段序列可能与多糖重复单元的合成与装载有关.另外结果还发现,PCR法能检测出产EPS双歧杆菌,扩增片段为1000 bp左右,序列相似度比对结果与各菌株EPS的产量有着明显的相关性,这种方法比传统的测糖产量的方法更省时省力,而且对检测结果的影响因素比较少,结果较准确,是一种值得进行深入研究探讨的新方法.
【总页数】3页(P1-3)
【作者】石莹;呼鑫荣;李静;郭颖;李阳;旭日花
【作者单位】内蒙古大学生命科学学院,内蒙古呼和浩特010021
【正文语种】中文
【中图分类】TQ929
【相关文献】
1.新疆维吾尔族肠道中高产胞外多糖双歧杆菌的筛选及其抗氧化活性
2.一株高产胞外多糖乳酸菌的分离鉴定及其产胞外多糖的研究
3.益生菌干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌V9发酵乳胞外多糖含量对流变学特性、质构和稳定性的影响
4.高产胞外多糖嗜热链球菌的筛选及胞外多糖的结构分析
5.动物双歧杆菌乳亚种M8胞外多糖的分离纯化和分子特征
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

动物双歧杆菌RH胞外多糖基因簇的克隆及分析

动物双歧杆菌RH胞外多糖基因簇的克隆及分析刘丽莎;范熠;旭日花;李平兰【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2013(034)015【摘要】利用16S rRNA结合tuf基因将一株分离自广西巴马长寿老人源的产胞外多糖菌株RH鉴定为动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis ctis RH),根据GenBank中己报道动物双歧杆菌乳亚种产糖相关基因设计引物,经PCR扩增获得双歧杆菌RH的12个胞外多糖(EPS)生物合成相关基因.对各阅读框功能预测分析表明这些基因主要参与EPS合成过程多糖聚合、糖基转移、糖链长度控制以及多糖转运和输出,为解析双歧杆菌RH胞外多糖生物合成途径和调控机制提供理论基础.【总页数】7页(P136-142)【作者】刘丽莎;范熠;旭日花;李平兰【作者单位】中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083;北京市食品研究所,北京 100162;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083【正文语种】中文【中图分类】TS201.3【相关文献】1.两个溶藻弧菌胞外多糖合成基因簇的生物信息学分析 [J], 黄晓纯;陈偿;李颖颖;田雨顺;谢媚2.双歧杆菌RH胞外多糖提取纯化及体外抗凝血活性评价 [J], 李辉;宋居易;刘蕾;李平兰3.乳酸乳球菌乳酸亚种IMAU11823全基因组测序及胞外多糖基因簇分析 [J], 李敏;李伟程;刘亚华;尤利军;马腾;赵洁;孙志宏4.产胞外多糖嗜热链球菌eps基因簇的表达及生物信息学分析 [J], 田佳乐;刘洋;李嘉雯;乔少婷;胡海敏;丹彤5.动物双歧杆菌乳亚种M8胞外多糖的分离纯化和分子特征 [J], 颜准;吴朝君;张小兰;李婉麒;梁娟;陈紫颖;艾连中;张汇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

双歧杆菌RH胞外多糖提取纯化及体外抗凝血活性评价

双歧杆菌RH胞外多糖提取纯化及体外抗凝血活性评价李辉;宋居易;刘蕾;李平兰【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2014(035)023【摘要】为得到高纯度双歧杆菌RH胞外多糖,并探讨其抗凝血功效,采用正交试验优化酶解提取工艺.优化最佳酶解条件为:蛋白酶添加量2g/L,中性蛋白酶与胰蛋白酶质量比例为1∶2,在pH 7.5的条件下酶解120m in.再经凝胶Sepharose CL-6B 柱层析纯化,得到胞外多糖纯品.利用凝胶色谱结合多角度激光散射仪测得该胞外多糖分子质量为5.946×104D.进一步对其抗凝血活性进行评价,不同质量浓度胞外多糖可以显著延长活化部分凝血活酶时间和凝血酶时间,且具有剂量依赖效应.纯化后胞外多糖纯度可以达到97％以上,纯多糖具有较好的体外抗凝血活性,主要参与内源凝血途径.【总页数】5页(P129-133)【作者】李辉;宋居易;刘蕾;李平兰【作者单位】中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083【正文语种】中文【中图分类】Q939.99【相关文献】1.动物双歧杆菌RH胞外多糖基因簇的克隆及分析 [J], 刘丽莎;范熠;旭日花;李平兰2.蛹虫草胞外多糖的提取纯化及免疫活性研究 [J], 王永敏;祝文兴;安利国;杨桂文3.杏鲍菇菌丝体胞内与胞外多糖体外抗氧化活性研究 [J], 盛伟;方晓阳4.白灵菇菌丝体胞内与胞外多糖体外抗氧化活性研究 [J], 盛伟;吴萍;郭慧;刘瑞雪5.新疆维吾尔族肠道中高产胞外多糖双歧杆菌的筛选及其抗氧化活性 [J], 蔡静静;徐晓裕;张艳;张亚川;魏小晶;阚泽宇;倪永清因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
单糖组成分析是多糖结构鉴定中必不可少的 研究内容。目前，测定多糖中单糖比例的方法主 要有气相色谱法和高效液相色谱法[4]。利用气相色 谱法测定单糖，样品需要被衍生化为易挥发、对 热较稳定的衍生物。然而，在衍生化反应过程中 易引起样品损失，产生的衍生物异构体也会对组 成分析产生干扰。常规高效液相色谱法检测糖类 时，通常采用示差检测器或紫外、荧光检则器。 其中示差检测器灵敏度较低；紫外或荧光检测器 检测多糖时同样存在衍生化所带来的一系列问 题[5]。然而，HPAEC- PAD 法操作简单，无须进行 衍生化，便能高效、准确地进行单糖组成分析， 是近年发展起来的分析糖类的一种方法。该方法 避免了因多糖衍生化而产生的异构体，使每种糖 都能得到单一的色谱峰，无溶剂峰的“拖尾”现 象，且离子色谱法具有很高的灵敏度，能对多糖 中的痕量单糖组分进行测定[6- 8]。
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食品安全与检测
它是一种包含有分支结构的由单糖或单糖衍生物 的重复单位组成的长链多糖[1]。按照组分不同，乳 酸菌产生的 EPS 可以分为同多糖和杂多糖两大类。 乳酸菌 EPS 对人体健康的潜在益生作用的研究表 明，EPS 既可以提高乳酸菌对肠道表面的非特异 性黏附，又有抗肿瘤、抗溃疡、免疫调节、降胆 固醇和调节血压等作用，对人类的健康有着重要 的意义[2- 3]。
本文从长寿老人源动物双歧杆菌 RH 的发酵液 中分离纯化出 2 个 EPS 组分，采用 HPAEC- PAD 法分析测定该双歧杆菌 RH 所产 EPS 的单糖组成， 并对 EPS 样品的水解条件进行探索。
1 材料与方法
1.1 试验材料 1.1.1 供试菌种 本实验室分离保存的产胞外多糖 动物双歧杆菌 RH：广西巴马长寿老人区。 1.1.2 试 剂 与 仪 器 L- Rhamnose、 L- Arabinose、 D- Galactose、D- Glucose、D- Mannose 和D- Fructose： Sigma 公司(质量分数 99％以上)；NaOH：Dionex 产 品；Millipore：超纯水；其他试剂：国产分析纯。
(33.47%)和 Fru(1.03%)，而 EPSb 含有 Rha(9.41%)，Ara(7.88%)，Gal(34.82%)，Glc(17.82%)，Man
(27.83%)和 Fru(2.24%)。
关键词： 双歧杆菌；胞外多糖；单糖组成；高效阴离子交换色谱
中图分类号： TS 207.4
文献标志码： A
·247·
食品安全与检测
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2011 年 第 36 卷 第 4 期
mm×50 mm)；流动相：A 为 H2O，B 为 200 mmol/L NaOH，线性梯度洗脱；在线自动脱气 GS50 四元梯 度 泵 ； ED50A 电 化 学 检 测 器 ， Au 工 作 电 极 ， Ag/AgCI 参比电极；进样体积：25 μL；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；chromeleon 6.5 色谱工作站。
Abstract: Two fractions (EPSa and EPSb) were isolated and purified by ion -exchange chromatography on
DEAE-Sepharose Fast Flow column and gel-filtration chromatography on Sepharose CL-6B column. And then their sugar components were quantified by high -performance anion -exchange chromatography with pulsed amperometric detection (HPAEC-PAD). The results showed EPS sample could be hydrolyzed fully by adding 200 μL H2SO4 and 800 μL distilled water to hydrolyze for 2.5 h at 100 ℃. The monosacchrides analysis showed that EPSa was composed of Rha (1.00%), Ara (3.54%), Gal (18.13%), Glc (42.84%), Man (33.47%) and Fru (1.03%); then EPSb Rha(9.41%), Ara(7.88%), Gal(34.82%), Glc(17.82%), Man(27.83%) and Fru(2.24%).
文章编号： 1005-9989(2011)04-0246-04
Determination of monosaccharide composition of exopolysaccharides from Bifidobacteria by high performance anion exchange
DIONEX ICS- 3000 高效离子色谱仪：美国戴安 公司；DHL- A 电脑恒流泵、TH- 500 梯度混合器、 BS- 100A 自动部分收集器：上海青浦沪西仪器厂； ML54/02 电子天平：梅特勒 - 托利多仪器(上海)有限公 司 ； 玻 璃 离 子 交 换 柱 (2.6 ×20 cm)， 填 装 D EAE- SepharoseFastFlow、玻璃凝胶过滤柱(1.6 cm×80
1.8
OD490
NaCl 浓度
1.6
-2
1.4
1.2
NaCl/（mol/L）
Key words: Bห้องสมุดไป่ตู้fidobacteria; exopolysaccharides; momosaccharide; high performance anion exchange chro -
matography
胞外多糖(Exopolysaccharide, EPS)是 微生物 在 生长代谢过程中分泌到细胞外的荚膜或黏多糖，
pulsed amperometric detection，HPAEC-PAD)分别对 2 个组分的单糖组成进行了定性和定量测定。
结果表明，用 20% H2SO4 于 100 ℃水解 2.5 h，可将多糖完全水解。HPAEC-PAD 检测结果表明
EPSa 和 EPSb 均为杂多糖，EPSa 含有 Rha(1.00%)，Ara(3.54%)，Gal(18.13%)，Glc(42.84%)，Man
DOI:10.13684/ki.spkj.2011.04.066
食品安全与检测
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2011 年 第 36 卷 第 4 期
高效阴离子交换色谱检测双歧杆菌 胞外多糖的单糖组成
旭日花， 刘丽莎， 李平兰 * (中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083)
cm)； 填 装 Sepharose CL- 6B： Pharmacia 公 司 ； RE- 52AA 旋 转 蒸 发 仪 ： 上 海 亚 荣 生 化 仪 器 厂 ； FD- 1D 冷冻干燥机：北京博医康试验仪器有限公司。 1.2 试验方法 1.2.1 双歧杆菌 EPS 的提取 将双歧杆菌 RH 在产 糖培养基中 37 ℃厌氧培养 48 h，8000 r/min 离心 10 min 去除菌体，上清液减压浓缩后用 3 倍体积 无水乙醇 4 ℃沉淀 24 h。8000 r/min 离心 10 min 去 上清液，沉淀复溶于水，Sevage 法除蛋白 3 次后 于 4 ℃对水透析 48 h。透析袋内溶液减压浓缩后， 冷冻干燥得 EPS 粗品。 1.2.2 双歧杆菌 EPS 的纯化 1.2.2.1 DEAE Sepharose FF 离 子 交 换 柱 层 析 用 EPS 粗品配制成 10 mg/mL 糖溶液，0.45 μm 膜过 滤后，经 DEAE Sepharose FF 柱层析，上样量为 7 mL，依次用 0.05 mol/L Tris- HCl 缓冲液(pH7.50)和 含 1 mol/L NaCl 的 Tris- HCl 缓冲液线性梯度洗脱， 洗脱速度为 4 mL/min，每管 8 mL 部分收集，以葡 萄糖为标品采用苯酚 - 硫酸法逐管检测多糖含量 (A490 nm)[9]，按多糖含量检测值分别合并收集单一峰 组分，对去离子水透析后，冷冻干燥。 1.2.2.2 Sepharose CL- 6B 柱层析 离子交换层析得 到的多糖各组分制成 10 mg/mL 糖溶液，0.45 μm 膜过滤后，经 Sepharose CL- 6B 柱层析，上样量 5 mL，用 0.05 moL/L NaCl 恒速洗脱，洗脱速度为 35 mL/h，每管 8 mL 部分收集，以葡萄糖为标品采用 苯酚 - 硫酸法逐管检测多糖含量(A490 nm)，按多糖含 量检测值分别合并收集单一峰组分，对去离子水 透析后，冷冻干燥。 1.2.3 双歧杆菌纯多糖的单糖组成分析 1.2.3.1 单糖标准曲线的绘制 分别精确称取干燥 至恒重 的单糖标准 品，制备 不 同 浓 度 (0.2、 0.5、 1.0、4.0 μg/mL 和 10.0 μg/mL)的 L- Rha、L- Ara、 D- Gal、D- Glc、D- Man 和 D- Fru 混合 标准溶液， 以单糖浓度(μg/mL)为横坐标，以峰面积(nC×min) 为纵坐标绘制每种单糖的标准曲线。 1.2.3.2 多糖水解 准确称取 5 mg EPS 纯品，加入 200 μL 浓 H2SO4 静置，添加 800 μL 蒸馏水，100 ℃水解 1.5 h 和 2.5 h，冷却后定容到 2 mL，用固 体 BaCO3 中和，5000 r/min 离心 10 min 除去杂质， 将上清液稀释 20 倍后，0.20 μm 微孔滤膜过滤后 进行高效离子色谱检测。 1.2.3.3 色谱条件 糖分析柱(CarboPacTM PA10，4 mm ×250 mm)； 糖 保 护 柱 (CarboPacTM PA10， 4