美牛生物的微球使用说明书(300nm)

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时间分辨荧光微球说明书
一、产品简介
本产品是针对免疫层析检测(lateral flow immunoassay)试剂设计,采用时间分辨荧光染料与苯乙烯共聚而成。

具有stokes位移大、聚集时不会发生内淬灭效应、检测信号强、荧光染料包在微球里面,不易受外界环境影响、荧光稳定等特点,是免疫荧光定量层析理想的标记物。

二、微球参数
1、成分:稀土元素铕的荧光配合物修饰的改性聚苯乙烯微球
2、固含:1%(1ml悬浮液中含有10mg微球)
3、平均粒径:300nm
4、粒径均一性:CV<5%
5、官能团:羧基、硫酸基等
6、羧基含量:300±20μmol/g
7、荧光性能:激发波长365nm,发射波长:610nm
8、荧光寿命:720μs
9、密度:1.05g/cm3
10、折射率:1.59(589nm,25℃)
11、外观:白色乳液
三:微球保存
保存条件:2-8℃避光、密封保存,不能反复冻融。

四、使用方法
(一)活化步骤:
1、超声分散微球,约2min,然后手工摇匀;
2、在2mL的EP管中,加入100μL微球(固含1%),再加超纯水(或MES缓冲液)900
μL,待用;
3、配制:
10mg/ml N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)乙醇溶液A液10mg/ml 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)乙醇溶液B液注意:NHS、EDC均易吸潮,称量前这两种试剂需复温30min以上。

4、在微球悬液中加入5μl的A液、混匀,再加入5μl的B液、再次混匀,室温反应15~
30min;
5、12000r/min,离心15min,去上清,加入1ml超纯水(或抗体偶连缓冲液),然后超声分
散均匀。

注意:一定要彻底分散,否则交联抗体后的微球极易团聚,跑条带很差。

(二)抗体交联
特别注意交联所用的抗体是否产生沉淀,如果产生沉淀则需对抗体进行离心或者过滤处理,否则将导致交联后的微球发生团聚。

过滤处理或者离心处理的抗体需要重新测定抗体浓度。

微球表面交联抗体的量为:抗体/微球=10~50μg/mg,最佳标记量一般为20μg/mg。

抗体交联步骤:
1、取上述1ml活化后的微球悬液,超声分散,边搅拌边滴加抗体,优选的抗体用量为20ug;
注意:抗体交联缓冲液推荐是硼酸缓冲液,0.02mol/L,pH=8.0。

每株抗体都有其最佳的交联缓冲液(种类、浓度、pH),需自行摸索。

2、在室温下混匀1小时,然后检测偶联抗体后微球的性能;
注意:可用羊抗鼠IgG包被的试条检测抗体交联后微球的流动性、抗体识别性能等。

3、加BSA( 终浓度在0.5%)进行封闭1小时;
4、10000r/min离心15min;
5、取1ml保存液加入到离心后的微球中,混匀,冷藏避光保存,待用。

注意:因各项目的抗体不同,最佳保存液需自行摸索。

基础保存液配方为:10%蔗糖(w/v)、0.01mol/L PB pH=7.4。