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总黄酮含量测定方法
总黄酮是一类化合物的总和，常用的测定方法有色谱法、光谱法和比色法等。
1. 色谱法：色谱法是一种常用的分离和测定化合物的方法。
常用的色谱方法包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等。
其中，HPLC是最常用的测定总黄酮含量的方法。
它可以将样品中的黄酮分离开，并通过检测器测量它们的浓度。
2. 光谱法：光谱法是利用物质对光的吸收、发射、散射等特性进行测定的方法。
常用的光谱法包括紫外-可见光谱法（UV-Vis）和荧光光谱法等。
这些方法通过测量样品在特定波长下的吸光度或荧光强度来确定总黄酮含量。
3. 比色法：比色法是通过比较样品与标准溶液的颜色差异来测定样品中的化合物含量的方法。
通常使用染色剂与样品中的黄酮发生反应，形成有色产物，并通过比色仪或分光光度计测量吸光度，进而计算总黄酮的含量。
需要注意的是，不同的测定方法可能对不同类型的总黄酮有不同的适用性和灵敏度。
因此，在选择测定方法时，需要考虑样品的特性和实验室的仪器条件，确保能够准确测定总黄酮的含量。
野艾蒿中总黄酮含量的测定
野艾蒿中总黄酮含量的测定可以按照以下步骤进行：
1.样品的制备：从野艾蒿的叶子和茎中取约2克样品，粉碎并过筛，
然后用80%的乙醇提取。
2.提取液的制备：将粉碎样品加入50毫升的80%乙醇中，超声提取
30分钟，离心10分钟，将上清液收集。
3. 准备试剂：准备显色液，取苦参碱0.5克，用乙醇溶解到10毫升，并用水稀释到100毫升；准备还原液，取硼氢化钠0.3克，加入10毫升
1mol/L氢氧化钠溶液中，加水稀释到100毫升。
4.测定总黄酮含量：取上清液5毫升，加入5毫升的还原液，振荡均匀，静置15分钟，然后加入5毫升的显色液，振荡均匀，再静置15分钟。
最后使用紫外分光光度计在360纳米处测定吸光度值，并根据标准曲线计
算总黄酮含量。
注意事项：
1.测定过程中应严格控制操作的时间和温度。
2.为避免干扰，需清洗所有用具并使其干燥。
3.测定结果的准确性受到多种影响因素，如野艾蒿样品的来源、生长
环境和时间等，因此需要进行适当的质控。
荧光分光光度法测定福建野生金线莲中总黄酮含量吴水华【摘要】目的:根据黄酮类化合物与Al3+形成稳定的荧光络合物原理,建立一种准确测定金线莲中总黄酮的方法.方法:采用超声提取法用95％乙醇提取福建野生金线莲中的总黄酮,以槲皮素为对照品,用荧光分光光度法测定总黄酮的含量,并进行回收率试验.结果:在选定的条件下,槲皮素浓度与荧光强度呈正相关,线性范围2～400 ng· mL-1,检出限为0.4 ng·mL-1,线性方程Y=2 098.1X +4.167 8,r=0.999 8,平均回收率为98.4％,RSD=1.5％.结论:本法操作简便、快速、准确,适用于金线莲中总黄酮的含量测定.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2012(014)008【总页数】4页(P10-13)【关键词】金线莲;荧光法;总黄酮【作者】吴水华【作者单位】福建生物工程职业技术学院中药系,福建福州 350002【正文语种】中文金线莲Anoectochilus roxburghii（Wall.）Lindl.，别名金蚕、金石松、树草莲、鸟人参、金线虎头蕉、金线入骨消，是兰科开唇兰属的植物［1］。
金线莲在降血糖［2］、降血压［3］、保肝护肝［4］等方面具有显著的药理作用，是闽南民间常用要药。
金线莲中含有多糖、黄酮、挥发油等多种成分，其中黄酮类化合物主要由槲皮素、异鼠李素及其糖苷组成［5-9］。
目前，有关总黄酮的含量测定国内外没有公开的标准方法，《中国药典》中收载较多的是可见－紫外分光光度法，通常选用芦丁作为对照品，此法操作简便，但杂质干扰大，测定误差较大。
近年来，荧光分光光度法测定总黄酮含量具有简便、快速、专属性好等特点，得到了众多学者的关注。
目前，对金线莲中的总黄酮的测定，尚未见有应用荧光法的文献报道。
本文根据文献［10］选用槲皮素作为对照品，采用荧光法对福建野生金线莲中的总黄酮含量进行测定。
Cary Eclipse型荧光分光光度计（美国瓦里安）；AL204型万分之一分析电子天平［梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司］；AKRY-UP-Ⅲ-10艾柯超纯水机（成都康宁实验专用纯水设备厂）；KQ-100B超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）。
中药总黄酮的含量测定方法
中药总黄酮的含量测定方法常用的有以下几种：
1. 酸碱比色法：先将中药样品提取，然后加入酸性试剂，使黄酮化合物转化为黄色络合物，再通过比色法测定黄色染色的强度，从而计算出黄酮的含量。
2. 高效液相色谱法（HPLC）：中药样品经过适当溶剂提取后，利用高效液相色谱仪对黄酮进行分离和检测，通过峰面积或峰高与标准品进行比较计算黄酮的含量。
3. 紫外分光光度法：根据黄酮化合物在紫外可见光区域的吸收特性，在一定波长范围内测定样品的吸光度，通过比较吸光度与标准曲线计算黄酮的含量。
4. 荧光法：将黄酮溶液与适当溶剂混合后，在特定波长下激发，并测定荧光强度，通过标准曲线计算黄酮的含量。
以上方法可根据实际研究需求和条件选择适合的方案进行测定。
值得注意的是，不同的中药样品可能有不同的成分和浓度，因此在具体测定过程中需根据样品特点进行方法优化和验证。
营养学报 2009年第 31卷第 2期 191高效液相色谱-荧光法测定蔬菜中的黄酮Quantitative Determination of Flavonoids in vegetable by HPLC withfluorescence detector吴波,张寒俊,胡志雄(武汉工业学院分析测试中心 WU Bo, ZHANG Han-jun, HU Zi-xiong(Center of Analysis and Measurement, Wuhan Polytechnic University, Wuhan 430023, China在日常膳食中,黄酮类物质通常表现为具有抗氧化性的羟基衍生物形态,天然来源的生物黄酮分子量小,能被人体迅速吸收,具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖等生物活性。
本研究旨在建立用高效液相-荧光法对蔬菜中黄酮进行测定[1,2]。
1 对象与方法1.1 仪器VARIAN ProStar 210泵;7725I 型手动进样器;VARIAN363荧光检测器;ProStar335PDA(二级管阵列检测器;Waters 柱后衍生系统。
1.2 试剂槲皮素(quercetin QU (含量≥98%国药集团化学试剂公司 ,桑色素(morin hydtate MO(含量≥98%购于 Fluka ,山奈酚(kaempferolKA (含量≥98%上海友思 ; 异鼠李素 (isorhamne- tin ISO (含量≥99%中国药品生物制品检定所 ; 甲醇(色谱纯 ;水(自制双重蒸馏水 ;其它试剂为分析纯。
所有样品购于武汉商储市场。
1.3 方法 1.3.1样品处理 [4,5]:称取捣碎的豆角、青椒、四季豆、汤菜、苋菜、小白菜、油麦菜、韭菜花、小葱湿样约 30 g于 250 ml碘量瓶中,准确加入 100 ml无水乙醇,称重,50℃振荡浸取2 h后,补足乙醇,摇匀。
取 5.00 ml浸取液,加入 1 ml浓 HCl(含 0.2 g/ml苯酚通 N 2、封口,在 80℃下水解 2 h后,用无水乙醇定容于 10 ml量瓶中,置于冰箱中(-20℃冷冻1 h,取出超声波振荡 5 min,后(10 000 r/min, 40s离心,待测。
荧光分析法在黄酮检测中的应用荧光指物质分子因吸收外来辐射的光子能量而从基态激发至激发态，再由第一电子激发单重态所产生的辐射跃迁返回到基态而伴随的发光现象。
利用物质的荧光特性对物质样品进行定性和定量分析的方法称为荧光分析法。
荧光分析法具有高灵敏度、高选择性、信息量丰富、检测限低等众多优点。
在20世纪70年代之后，有很多高灵敏度的荧光分析法相继出现，在各个领域都有了很大应用。
下面对荧光分析法在黄酮的检测中的应用进行简要的综述。
1 荧光分析法测定叶类植物中的总黄酮含量葎草全草入药，具有清热解毒的功效，黄酮类化合物是葎草的主要有效成分。
冯俊霞等建立了荧光分光光度法测定葎草叶中总黄酮含量的方法，使用F-4500型荧光分光光度计，考察了实验中的影响因素，确定了最佳条件为10%硝酸铝溶液的加入量为4ml，pH值为4的醋酸-醋酸钠缓冲液与60%乙醇混合液为溶剂，静置时间为25分钟，以芦丁为标样，选择410nm和534nm为激发波长和发射波长。
用此法检出的野生葎草叶中的总黄酮含量达52.98mg/g。
香椿叶提取物中的活性成分为黄酮类化合物，常永芳等选择436nm和505nm 为激发波长和发射波长，95%乙醇为溶剂，加入pH7的三酸缓冲液，采用超声提取，芦丁为标样，测定香椿叶中总黄酮，方法的检测限为2.62×10-7mol/L。
沙棘叶因其活性成分为黄酮类化合物而被广泛应用于制药、保健食品和化妆品行业。
曹叶霞等研究了用荧光分光光度法测定沙棘叶中的总黄酮，以芦丁为标准样品，研究了溶剂、pH值、表面活性剂及放置时间对荧光强度的影响。
选择437nm和516nm为激发波长和发射波长。
检测限达到3.2×10-6mol/L。
实验采用了超声提取的方法，以95%乙醇为溶剂提取3小时，加入pH值为7的三酸缓冲液。
桑叶具有疏风清热的功效，为常用中药，黄酮类成分是主要有效成分之一。
王艳研究了用荧光光度法测定桑叶中的总黄酮含量，以芦丁为标样，在436nm 和483nm为激发波长和发射波长下测定，检出限达到1.36×10-9 mol/L。
紫外分光光度法测定葎草中总黄酮含量赵若晗;石秀梅【期刊名称】《中医学报》【年(卷),期】2013(28)3【摘要】目的:探讨葎草中总黄酮含量的测定方法。
方法:以芦丁为对照品,采用超声提取法提取总黄酮,用亚硝酸钠-氯化铝-氢氧化钠显色法,最佳显色条件:亚硝酸钠质量浓度5%、氯化铝质量浓度10%、氢氧化钠质量浓度4%。
通过紫外可见分光光度计测定律草中总黄酮的含量。
结果:检测波长为510 nm,芦丁在浓度0.024 1～0.064 0 g·L-1范围内呈良好的线性关系,回归方程:y=0.081 7x-0.0018(R2=0.999 5),1 h内基本稳定(RSD=0.364%),重复性较好(RSD=0.600%),加样回收率为99.46%(RSD=1.685%)。
结论:紫外可见分光光度计测定葎草中总黄酮的含量,方法简便、快捷,结果准确、可靠。
【总页数】3页(P390-391)【关键词】葎草;总黄酮;超声提取法;紫外可见分光光度法【作者】赵若晗;石秀梅【作者单位】牡丹江医学院【正文语种】中文【中图分类】R285【相关文献】1.荧光分析法测定野生葎草叶中总黄酮的含量 [J], 冯俊霞;常永芳;武戈;戚秀菊2.紫外分光光度法测定黄瓜籽中总多糖、总黄酮、总皂苷的含量 [J], 张蕾;陈丽艳;孙银玲;綦菲;王伟明3.紫外分光光度法测定黄蜀葵花总黄酮片中总黄酮的含量△ [J], 邾枝花;黄平4.紫外分光光度法测定葎草总黄酮含量的不确定度评定 [J], 才志阳;郭伟英5.紫外分光光度法测定葎草总黄酮含量的不确定度评定 [J], 才志阳;郭伟英;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
