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基因工程原理练习题及其答案一、填空题1．基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
*2．基因工程的两个基本特点是：(1)____________，(2)___________。
3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。
*4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。
*5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。
*6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。
7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。
8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。
*9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)____________；(2)________________的活性。
*10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。
*11．EGTA是____________离子螯合剂。
12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。
*13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。
大连大学2011/2012学年第一学期考试卷（A卷）2009级生物工程/生物技术专业《基因工程》参考答案及判分标准一、名词解释：共10题，每题2分,共20分。
1. 基因: 是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。
2。
定位克隆:获取基因在染色体上的位置信息，然后采用各种方法对该基因进行定位和克隆3。
融合基因: 是指应用DNA体外重组技术构建的一类具有来自两个或两个以上的不同基因核苷酸序列的新型基因。
4. 转化子:导入外源DNA后获得了新遗传标志的细菌细胞或其他受体细胞，又称重组体。
5. 人工接头：是人工合成的具有一个或数个特定限制性内切酶识别和切割序列的双股平端DNA短序列。
6. RT-PCR：是指以mRNA在反转录酶作用下合成cDNA第一链为模板进行的PCR。
7. ORF : 起始于AUG、止于UAA、UGA、UAG的连续的密码子区域，是潜在的编码区.8. MCS:指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。
9。
gene targeting : 基因工程中利用活细胞染色体DNA可与外源DNA的同源性DNA 序列发生重组的性质，来进行定点修饰改造染色体上某一目的基因的技术10. 5’RACE：是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到5'端之间未知序列的方法。
二、填空题：共11题，每空格答对给1分，共20分。
1. 不对称PCR2。
物理图谱3。
操纵子，启动子，操纵子，结构基因4。
点杂交5。
溶源6。
mRNA，16rRNA7。
2'3’双脱氧，5'端8。
polyA, OligodT9. DNA、RNA、蛋白质10。
mRNA、内含子11。
质粒不相容性三、选择题：15题，每题1分,共15分。
1．(d）2．(d）3．(d）4．（b）5．（a）6．（c）7．（b）8．（c）9．（c）10．（c）11.(d）12.（c）13。
基因工程试题一、名词解释(4 ‘*10)1.基因工程技术：按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外DNA 重组和转移等技术，有目的地改造生物种性，使现有物种在较短的时间内趋于完善，创造出新的生物类型。
2.感受态细胞：受体细胞经一些特殊方法(如CaC12、RbCl (KC1) 等化学试剂)处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性改变，成为能允许外源DNA 分子进入的细胞状态。
3.cDNA文库：从组织细胞中分离得到纯化的mRNA,然后以mRNA为模板，利用逆转录酶合成其互补DNA,再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后导入受体菌内，扩增，构建cDNA文库。
4.鸟枪法：指将某种生物体的全基因组或单一染色体切成大小适宜的 DNA 片段，分别连接到载体DNA上，转化受体细胞，形成一套重组兑隆，从中筛选出含有目的基因的期望重组子。
5.SD序列(Shine-Dalgarno):位于翻译起始密码了•上游的6-8个核苷酸序列(5’ UAAGGAGG 3’)，它通过识别大肠杆菌核糖体小亚基中的16S rRNA 3’端区域3’ AUUCCUCC 5’并与之专一性结合，将mRNA定位于核糖体上，从而启动翻译。
6.包涵体：胞内高效表达时，工程菌因大景合成异源蛋白质所形成的水不溶性积聚物。
7.复合转座子：是由两个重复序列夹着一个或多个结构基因如某些抗药性基因和其它基因组成。
存在于R因子及其它质粒中。
复合转座子两端的组件由IS和类IS组成。
8.菌落原位杂交：是将菌落或噬菌斑转到固相膜上，原位裂解细胞后使核酸固定在膜上，然后与探针杂交。
用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。
9.RACE：是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA 为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3, 或5，端之间未知序列的方法。
10.连续式发酵：即在连续发酵反应器中，细胞的总数和培养液总体积同时维持恒定，前提是由培养液流出所造成的细胞损失正好为细菌分裂所产生的新细胞弥补。
---------------精品文档---------------答案仅供参考一、名词解释：1、DNA 变性： DNA 份子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。
变性时维持双螺旋稳定性的氢键断裂，碱基间的堆积力遭到破坏，但不涉及到其一级结构的改变。
2、DNA 复性：变性DNA 在适当条件下,二条互补链全部或者部份恢复到天然双螺旋结构的现象,它是变性的一种逆转过程。
3、退火：指模板双链 DNA 经热变性，螺旋解开成单链后，通过缓慢冷却到55℃摆布，使引物(即具有互补碱基的 RNA 片段)与该模板 DNA 单链重新配对，形成新的双链份子的过程。
4、DNA 芯片：是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可获得样品的遗传信息。
由于常用计算机硅芯片作为固相支持物，所以称为 DNA 芯片。
仅供参考学习第 1 页---------------精品文档--------------- 5、基因诊断：又称 DNA 诊断或者份子诊断，通过份子生物学和份子遗传学的技术，直接检测出分子结构水平和表达水平是否异常，从而对疾病做出判断。
6、酶活性单位： 1 单位限制性内切酶(1 U)通常定义：在建议使用的 Buffer 及温度下，在 20ml (50ml)反应体系中反应 1 小时，使 1g 入DNA 彻底消化所需的酶量。
7、星活性：在非最适的反应条件下，酶的识别特异性降低，产生非特异性带，这种酶切特异性降低的现象，称为星活性。
8、平台效应：反应初期，靶序列 DNA 片段的增加呈指数形式，随着PCR 产物的逐渐积累，被扩增的 DNA 片段再也不呈指数增加，而进入线性增长期或者静止期，这种现象称为平台效应。
二、简答题1、影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？1)连接所用的目的片段的状态：¹效率：粘性末端>平端(100 倍)；¹ 5，突出>3，突出；¹平端： HaeIII>AluI>HinCII>SmaI2)连接温度仅供参考学习第 2 页¹连接效果最好在37 ℃，但形成的互补不稳定;¹最佳连接温度： 12-16 ℃，较好的连接效果，互补又较稳定;3)反应液中的成份：¹ ATP：反复冻熔， ATP 活性降低， ATP 溶解度不高，连接缓冲液宜分装；¹单价离子： 150-200mM NaCl，提高连接效果；¹ PEG：5%以下可以提高连接效率4)插入片段与载体的浓度比例¹载体 DNA 与外源 DNA 的份子摩尔比通常为 1 ﹕ 3 摆布，甚至 1 ﹕ 10 或者更高。
09级基因工程期末复习材料2021.6基因工程复习题绪论基因工程：按照人们的的心愿，展开严格的设计，通过体外dna重组和转基因等技术，存有目的地改建生物种性，并使现有的物种在较短时间内趋向健全，缔造出以合乎人们市场需求的心的生物类型，这就是基因工程。
又称重组dna技术或遗传工程基因工程的操作步骤可简单概括为：分、切、接、转、筛、增基因工程特点：在分子水平表达和细胞水平操作表达构建克隆载体是基因工程技术路线中的核心环节基因工程工具酶指体外展开dna制备、研磨、润色和相连接等系列过程中所须要的酶，包含dna聚合酶、限制性核酸内乌酶、润色酶和连接酶。
限制性核酸内乌酶和连接酶就是基因工程关键的工具酶。
现在常用的dna连接酶只有2种，即为大肠杆菌dna连接酶和t4dna连接酶现代分子生物学领域理论上三大发现和三大发明对基因工程的诞生起决定作用：三大发现：（1）dna是遗传物质（2）揭示了dna分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理（3）遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定三小发明者：（1）限制性核酸内乌酶的辨认出与dna研磨（2）dna连接酶的辨认出与dna片段的相连接（3）dna重组基因工程载体的研究与应用领域实验中为什幺要筛选白斑，即原理是什么？存有外源dna片段填入至坐落于lacz’的多克隆位点后，就可以毁坏α肽链的读码框，从而无法构成存有功能活性的β半乳糖苷酶，因此所含重组质粒的克隆往往就是白色菌落dna重组试验中为什么用iptg不用乳糖？因为培养基中的乳糖可以被诱导制备的β―半乳糖苷酶所催化剂水解，从而并使其浓度不断发生变化。
常用异丙基硫代半乳糖苷（iptg）、硫甲基半乳糖苷(tmg)第一章核酸的制取知识点：生物体内的dna绝大部分是b-dna形式存在，（a、b、z-dna）如何赢得完备的dna分子或小的dna片段，就是dna制取中的一项关键技术。
每一种生物dna的复制总是从特定位点起始，这个位点具有一点的核苷酸序列。
基因工程试卷及答案(1)(总4页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--一、名词解释1、基因治疗：是将目的基因放进特定载体中导入靶细胞或组织，通过替换或补偿引起疾病的基因，或者关闭或抑制异常表达的基因来克服疾病的治疗方法。
2、反义核酸：是指能与特定mRNA精确互补、特异阻断其翻译的RNA或DNA分子。
3、反义DNA：也称反义寡核苷酸或反义脱氧寡核苷酸，是一种人工合成的、能与mRNA互补的、用于抑制翻译的短小反义核酸分子。
4、同尾酶：指切割DNA可产生相同的黏性末端的限制酶5、转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA的过程。
6、ａ-互补：指半乳糖苷酶的两个无活性片段组合而成为功能完整的酶的过程。
7、转化：指将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主细胞，并使其获得新的表型的过程。
8、基因克隆：通过体外重组技术，将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体，并导入受体细胞，扩增形成大量子代分子的过程。
9、核酶：是一类具有催化活性的RNA分子，具有核苷酸水解活性，可特异性剪切RNA分子，相当于RNA酶。
10、位点偏爱：某些限制酶对同一底物中的有些位点表现出偏爱性切割，即对不同位置的同一识别序列表现出不同的切割效率，这种现象称作为位点偏爱。
二、选择1.在( B )诱导下，目的蛋白与lacZ就会以融合蛋白的形式表达出来。
A. dNTP C. DMSO2.（ A ）可使表达蛋白避免被细胞内蛋白降解，或使表达的蛋白正确折叠，从而达到维护目的蛋白的目的。
A.分泌表达载体融合表达载体 C.组氨酸标签表达载体 D.内含肽表达载体的琼脂糖凝胶电泳方向为（ B ）A. 正极向负极B. 负极向正极C浓度高向浓度低. D. 浓度低向浓度高4.影响脉冲场凝胶电泳电泳分辨率的最关键因素是（D ）A.电场强度B. 缓冲液浓度C. 温度D.脉冲时间5.控制潜在RNA酶活性最重要的是（C）A.使用RNA酶抑制剂B.实验用具C.细致谨慎的操作D.温度控制6.酵母基因表达系统的宿主不具有以下哪一条件(B )A.安全无毒B.载体DNA转化频率低C. 发酵周期短D.蛋白质分泌能力好7. 酿酒酵母的附加体形表达载体有（D）的缺点A.蛋白分泌能力差B.无终止子C.不能独立复制D.无选择压力时不稳定8.（C）不能用大肠杆菌表达系统来生产。
基因工程课后习题答案基因工程，也称为遗传工程，是一种通过直接操作生物体的基因来改变其遗传特性的技术。
这项技术在医学、农业、工业和环境科学等领域有着广泛的应用。
以下是一些基因工程课后习题的答案：1. 基因工程的定义：基因工程是利用分子生物学技术，将外源基因插入到宿主生物体的基因组中，使其表达出新的或改变的遗传特性。
2. 基因工程的基本步骤：- 目标基因的获取：通过PCR扩增、基因克隆等方法获得目标基因。
- 基因载体的构建：将目标基因插入到合适的载体中，如质粒、病毒等。
- 转化：将构建好的载体导入到宿主细胞中。
- 筛选：通过抗生素抗性标记等方法筛选成功转化的细胞。
- 表达：在宿主细胞中表达目标基因，产生所需的蛋白质或性状。
3. 基因工程在农业中的应用：基因工程可以用于培育抗虫、抗病、抗旱、耐盐碱等性状的作物品种，提高作物的产量和质量。
4. 基因工程在医学中的应用：- 生产药物：利用基因工程技术生产胰岛素、干扰素等生物药物。
- 基因治疗：通过修复或替换缺陷基因来治疗遗传性疾病。
5. 基因工程可能带来的伦理问题：基因工程可能引发生物安全、生物多样性丧失、基因歧视等伦理问题，需要在实施过程中进行严格的伦理审查和监管。
6. 基因工程的安全性问题：基因工程产品可能存在潜在的食品安全和环境安全问题，如转基因作物可能对非目标生物产生影响，需要进行长期的环境影响评估。
7. 基因工程的未来发展趋势：随着基因编辑技术如CRISPR-Cas9的发展，基因工程将更加精准和高效，有望在治疗遗传病、提高作物产量等方面发挥更大的作用。
8. 基因工程的法律和政策：不同国家和地区对基因工程的法律和政策不同，需要遵守当地的法律法规，确保基因工程的安全和合法性。
通过这些习题答案，学生可以更好地理解基因工程的基本概念、技术流程、应用领域以及面临的挑战和未来发展。
《基因工程技术》题库第一章概论一、名词解释题基因，基因工程技术，内含子，外显子%1.简答题1.基因具有什么功能？2.基因工程技术的主要操作内容是什么？3.用图示筒要说明基因工程技术的技术路线。
4 .简述基因工程技术的巨大意义有我国在该领域取得的成就?5.生物制药专业的学生为什么要学习基因工程技术？第二章DNA重组一、名词解释题遗传密码，变性，复性，复制子，翻译与转录，基因突变与突变基因，表达二、简答题1.DNA的组成单位是什么？组成元素有哪些？组成成分是什么？2.基因突变的生物学效应是什么？3.D NA的复制与转录有何异同点？如何利用基因突变为制药服务？4 .简述生物物种的遗传稳定性和进化原理与DNA的性质与功能的关系第三章植物基因工程技术一、名词解释题转基因植物，植物细胞反应器，抗逆性，叶盘法二、简答题1.从用途出发，转基因植物FI前可以分为儿类？2.图示植物遗传转化基本过程3.简述农杆菌介导法生产转基因植物的注意事项。
4.植物基因工程技术研究应用在医药上的优势是什么？5.什么是抗虫转基因植物？第四章动物基因工程技术一、名词解释题动物乳腺生物反应器，转基因动物，显微注射法，胚胎干细胞1.简述转基因动物技术路线2.显微注射法制备转基因动物的主要过程及注意事项是什么？3.简述动物基因工程技术与医药领域的应用。
一、名词解释题细胞因子，基风工程技术抗体，基风工程技术疫苗，基因治疗二、简答题1.举例说明细胞因子的种类、功能及其临床应用2.简述基因工程技术抗体种类及结构特点3.举例说明基因工程技术激素类药物及其临床应用4.简述基因诊断和治疗的原理第六章基因工程技术工具酶一、名词解释题限制性内切酶，平末端与粘性末端，酶活性单位，回文序列二、简答题1.限制性内切酶的特点与使用注意事项有哪些？2.影响限制性内切酶反应的因素有哪些？3.简述限制性内切核酸酣在基|大I工程技术中的作用。
4.举例说明不同类型DNA片段是如何连接的。
基因工程、生物技术的安全和伦理问题（09安徽卷）4．2008年诺贝尔化学奖授予了“发现和发展了水母绿色荧光蛋白“的三位科学家。
将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光。
绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用是A．追踪目的基因在细胞内的复制过程B．追踪目的基因插入到染色体上的位置C．追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布D．追踪目的基因编码的蛋白质的空间结构答案：C解析：将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质带有绿色荧光，从而可以追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布。
故C正确。
（09浙江卷）3．下列关于基因工程的叙述，错误．．的是A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达答案：D解析：基因工程中目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物；常用的工具酶是限制性核酸内切酶和DNA连接酶；人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性，只有经过一定的物质激活以后，才有生物活性。
载体上的抗性基因主要是有利于筛选含重组DNA 的细胞，不能促进目的基因的表达。
所以D错误。
（09广东理基）45．钱永健先生因在研究绿色荧光蛋白方面的杰出成就而获2008年诺贝尔奖。
在某种生物中检测不到绿色荧光，将水母绿色荧光蛋白基因转入该生物体内后，结果可以检测到绿色荧光。
由此可知A．该生物的基因型是杂合的B．该生物与水母有很近的亲缘关系C．绿色荧光蛋白基因在该生物体内得到了表达D．改变绿色荧光蛋白基因的1个核苷酸对，就不能检测到绿色荧光答案：C解析：某种生物中检测不到绿色荧光，将水母绿色荧光蛋白基因转入该生物体内后，结果可以检测到绿色荧光，说明绿色荧光蛋白基因在该生物体内得到了表达。
《基因工程》习题及参考答案一、习题：1. What are biotechnology and genetic engineering?2. What is a gene?3. What are genetically engineered medicines?4. What do genome research and human genetics deal with?5. What potentials are held out by genetic diagnosis?6. What options are given by gene therapy?7. What is an embryo - and what is a fetus?8 What is a genetic fingerprint?9 What does the term "therapeutic cloning" mean?10 What are stem cells?11 What is a transgenic organism?12 What does xenotransplantation mean?13 How will genetic engineering be used in agriculture?14 How are genetically modified organisms assessed?15 What does the German Embryo Protection Act regulate?16. What is a genome?17. Is there a risk of bioterrorism?18. How does genetic engineering affect the environment?19. Are genetically engineered crops good for farmers?20.What is the difference between restriction digestion and restriction mapping?21.Can you combine two different restriction enzymes in the same reaction tubes todigest the DNA molecules?22.Why should we need to generate restriction mapping data?23.How many restriction enzymes available now on the market?24.Why do you consider mutagenesis in vitro as one of the most critical techniquesfor us to understand in genetic engineering class?25.How do we choose the methods for DNA modification?26.How do we choose a gene expression system?27.How can we express eukaryotic gene in E.coli?28.What should we consider before we start the recombinant protein expressionexperiment?29.What is the advantage of yeast expression system?30.What is the advantage of insect expression system?31.Why there are so many different types of vectors available for cloning?32.What is the difference between cloning vector and expression vector?33.What is a genetic fingerprint?34. 基因具体分成多少种类？35. 什么叫印记基因？36．什么叫遗传漂变？37．人类基因组图谱和初步分析结果是在哪一年公布的？38．人类基因组共有多少基因?39. 克隆羊成功的技术关键是什么？40. 有人计划将两个不同物种的动植物体细胞进行融合，然后将融合体的核移植到其中一种生物的未受精卵细胞中，进行体细胞克隆。
高考专题09基因工程（选修三）•不会的作上标记过后查书和资料。
•查阅后请把答错的或不会的题再答一遍，最终要做到所有题目的答案脱口而出！•此练习最终需要能够在15分钟内完成。
基因工程的原理、操作、应用1. 什么是基因工程？基因工程导致的生物变异属于哪种变异类型？昱因工程是指按照人们的愿望，进行严格的段计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生场以斯的直传特性，创童出更符■合人们需要的新的生杨类型和生扬产醃。
基因工程是衣DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组.技术。
基因工程导致的生杨变异属于基因重组。
2. 与其它基因重组相比，基因工程的最大优点是什么？能定向改造.生扬性状。
3. 基因工程诞生的理论基础有哪些？⑦美国科学家艾弗里等证朗DNA是生扬的遗传扬质。
②沃森和克里克提出DNA的玖螺淡结构。
③中心法则提出和遗传密码子的破译4. 基因操作的工具有哪些，分别在基因操作屮起什么作用？限制酶切封我体和目的基因；DNA连接酶------- 连接DNA片段；我体------ 运戟目的基因进入受体细胞O5. 限制酶一•般来自什么生物，主要特点是什么，其作用的键是什么键，作用结果是什么？来源：主要来自原核生扬。
特点：能够识别玖链DNA分子的芷种特定的核苜酸序列，并能将每一条链上特定部住的两个核苜酸之问的确酸二酯钦切开，体现了酶的专一性。
作用键：璘酸二酯键作用结果：DNA分子断裂形成黏性耒端或平末端。
6. 链状DNA和环状DNA上酶切位点种类和数量与酶切后DNA片段数之间有什么关系？Q）单酶切环状DNA分子：酶切片段数=卩艮制酶识别序列教线形DNA分子：酶切片段数=限制酶识别序列教+1②玖酶切环状DNA分子：酶切片段数=两种限制酶积别序列数之和线形DNA分子：酶切片段数=两种限制酶识别序列数之和+17. 什么是目的基因？目的基因一般是什么类型的基因？目的基因就是基因工程中彼操作的外源基因。
q的基因一般都是為码蛋自质的基因。
&导入目的基因时为什么需要载体？原因主要有三个：（D目的基因在猪主细胞中往往不能稳定存宼，独立复制和表达；②很难检测出独立的目的屋因是否进入受体细胞；③目的基因独自进入真核细胞后很难整合的细胞染色体上，以玫不能稳定遗传。
9. 常用载体是什么，其化学本质是什么，来自什么生物？常用我体是质耘，化学本质是小型双链环状DNA分子。
主要来自原核生物。
10. 作为基因的载体应该具备什么条件，为什么？①能蛊受体细胞中复制并稳定保存；能使目的基因稳定遗传。
②具有一至多个限制酶切劃伐点，供外源DNA片段插入；③具有标记塞因（如抗性基因和颜色反应的基因丿，供重纽DNA的检测和鉴定；11. 天然质粒能直接作基因载体吗，为什么？夭然质牡往往不能同肘满足基因戟体的全部条件，因此不能直接作戟体。
12•除质粒外，基因工程中还可用什么载体？还可以用嗤苗体和动、植扬病春等作栽体。
13. DNA连接酶与DNA聚合酶有什么异同？相同A： DNA连接酶和DNA聚合酶都是催化DNA中相邻核#酸之问形成璘酸二酯键。
不同点：DNA聚合晦的底扬是玖链DNA分子，不需要模板，作用结果是形成重组DNA； DNA 聚合酶的底扬是脱氧核#酸分子，需要DNA单链作模板，作用结果是合成辭的DNA分子CDNA 复制丿。
14. DNA中氢键的形成是否需要酶的催化，为什么?不需要，因为氮键中的相互作用力非常弱，喊基互补配对肘就能形成。
15. 基因工程的基本步骤是什么？①目的基因的获取；②重组DNA的构建（构建基因表达载体丿；③将目的基因导入受体细胞；@）目的基因的检测与表达（目的基因的检测与鉴走丿o16. 获取目的基因的途径有哪些？从基因丈库中直接获取；人工化学合成；利用PCR技术犷增。
17. 什么叫基因组?什么叫基因组文库?基因组是指细胞内决定人全部遗传性状的一组基因。
如：人的基因组由1・22号常染色体上的DNA 和X、丫染色体上的DNA共同构成，果蝇的基因组由2・4号常染色体和X、Y染色体上的DNA共同组成。
基因组丈库指将•舍有芷种生扬全部基因的所有DNA片断，利用戟体导入到受体苗的群体中，各个受体菌分别含有这种生炀的不同基因，全部受体菌群称为基因组文库。
18. 部分基因文库和完全基因文库各是如何建立的？部分基因丈库是选取禁种生物的部分基因构建的基因丈库。
完全基因文库是将•芷种生物的全部基因构建的基因丈库，也就是基因纽文库。
19. cDNA文库是如何建立的，它属于哪一类基因文库？cDNA x库建立：以舍目的基因的生物禁个肘期或禁种细胞的mRNA为模牧，柱逆转录酶的催化下反转录得到多种互补DNA （cDNA丿片段，与我体相连后导入受体菌群中，这个受体菌群就是这种生场的cDNA x库。
cDNA丈库中因为只含有该生场的部分基因，因此厲于部分尿因丈屛* O20. 构建基因文库需要哪些工具和技术？构建基因组文库需要用到限制酶、我体、DNA连接酶，构建cDNA文库要用到限制酶、戟体、DNA连接晦、逆转录酶。
常用的技术包括凝肤电泳技术、PCR技术、转基因技术、分子採针技术等。
21. 什么样的目的基因适宜从基因文库获収？减基对序列未知的基因。
22. 什么类型的目的基因适宜人工化学合成，如何合成？减基对序刊己知或基因所爲码的妥勺质氣基酸序刊己知，且减基对教目相对较少的基因。
＜者利用DNA合成仪直接合成，后者先根据蛋勺质的氣基酸序列推出可能的一种m RNA序列，再推出相应的DNA 序列，然后利用DNA合成仪合成。
23. PCR技术的基本步骤是什么，需要用到哪些试剂？PCR技术的基本步骤：一、变性：加热至90〜95T使DNA玖链鮮链成单链；二、退火：冷却到55〜60 与模板互补的特定引杨结合到互补DNA链上；三、延伸：加热至70〜75°C,TaqDNA聚合酶从引物起始他化互补链合成。
PCR需要用到的试剂：模板DNA分子（很少丿、TaqDNA聚合晦、能与棋板互补的特定引扬对（丸量丿、四种游富脱氧核苜酸（丸量丿、缓冲液24. PCR技术有哪些用途？核昔酸序列只有部分己知的基因能用PCR技术扩增吗？凡是需要卷体外丸量犷增目的基因的内彖都可用到PCR,如：昱因工程、基因诊斯、病毒分析等。
核苜酸序列只有部分己知的基因，只要能根据这部分己知的序列合成出其特岌引杨对，就可用PCR技术犷增完整基因。
25. 获取人胰岛素基因的最好方法是什么？如何获取？荻取人胰岛素基因的最好方法是人工化学合成糸，印：根据肢岛素的氮基酸序列推测出其一种mRNA 序列，再推测出其DNA序列，然后利用DNA合成仪人工化学合成。
26•人工化学合成的人胰岛素基因与从人类基因组文库中获取的人胰阳素基因核苜酸序列一定相同吗，为什么？基本上不可能相同。
因为每一种氨屋酸有一个或多个密码子，根据胰.鳥素氨基酸序列推导出的mRNA序列就会有很多科（假设每个氨基酸平均有3个密码子，胰岛素分子有51个氣基酸，才艮据密码子表推导出的mRNA 4列就有351种之多。
）,相应的DNA序列也会一样多。
而从人类基因纽丈库种荻取的人胰岛素基因基本上是唯一确定的。
27. 从人类基因组文库屮获取的人胰岛素基因与从人类cDNA文库屮获取的人胰岛素基因的碱基对序列一样吗，为什么？基本上相同。
因为从cDNA丈库种获取的基因是利用人腹岛素基因转录出的mRNA逆转录得到的，其序列与转录出mRNA的基因相同。
28. 获取目的基因时可能用到哪些工具？从基因纽丈库中获取目的基因需要用到：限制酶、载体、DNA连接酶；从cDNA丈库中获取目的基因要用列：限制酶、我体、DNA连接酶、逆转录酶；利用PCR技术犷增目的基因需要用到：TaqDNA聚合酶；利用DNA合成仪合成貝的基因需要用到：DNA聚合酶。
29. 构建基因表达载体吋要用到哪些工具？戟体、限制酶、DNA连接酶。
30. 用来切割目的基因的限制酶和用来切割载体的限制酶有什么要求？同种限制酶31. 实际操作中，常用两种限制酶切割质粒和目的基因，这样操作与只用一种限制酚切割比较，有哪些优点？一方面可以减少目的基因和我体自决，另一方面可以使目的基因与我体定向连接。
32. 在构建基因表达载体（重组DNA）时，切割开的DNA片段一般有儿种连接类型？目的屋因自决、我体自连、目的基因与载体重组33. 基因工程屮常用的受体细胞有哪些？动植物细胞、大肠杆苗、土瘪农杆菌、枯草杆菌等34. 基因工程中为什么常用原核生物作为受体细胞？因为原核生物多为单细胞，襟作简便；繁璇快、易培养；自身遗传扬质少，基因表达产扬种类少，易分富目的基因表达产物。
35. 作为受体细胞的大肠杆菌与自然界的大肠杆菌有什么重要区别，为什么？受体大肠杆菌没有抗性基因，这样便于筛选出导入重纽DNA的转基因受体菌；另外，受体菌往往是營养缺陷性细苗，这样•的细苗只能農人工培育下繁璇，可以避免己导入外源基因的细苗後带到自然环境肘老成基因污染。
36. 培育转基因植物时常用什么方法导入重组DNA,具体过程是怎样的？除此之外还可以用什么方法？培育转基因植物肘常用“农杆苗转化法”，具体过程可表述为：目的屋因插入Ti质粒的T-DNA 上f重组Ti质粒导入农杆黄f农杆苗将T・DNA导入杭汤细胞f T・DNA整合到受体细胞的染色体上-> 目的基因往受体细胞稳定表达。
培育转基因植场还可用到“基因枪浪”和“花粉管通遒法” O37. 培育转基因植物时，还需要用到什么生物技术？还需要到植杨组织培养技术（将•转基因细胞焙育成转基因植株丿O38. 培育“工程菌”时常用什么方法导入重组DNA,具体过程是怎样的？"感受态细胞法"，具体过程是：Ca2+处理细胞f感受态细胞f表达我体与感受态细胞混合 ->感受态细胞吸收DNA分子。
39•将重组质粒导入细菌时用氯化钙处理的冃的是什么？增大细胞壁的通透性，使细茵戏于感受态。
40. 培育转基因动物时常用什么方法导入H的基因？显微注射法41. 在培育转基因动物时，为什么常用受精卵作为受体细胞？"丿受精卵体积较大，襟作方便；（2丿受精卵全能性最壽，彖易发育成完整个体。
42. 培育转基因动物时需要用到哪些生物技术？动场细胞培养、基因工程、体外受精、早期軀胎培养、甩U台移植43. 如果是对人体进行基因治疗，常用的受体细胞是什么？有塞因缺陷的成体干细胞44. 为什么需要对目的基因进行检测和筛选？(})并不是所有细胞都接纳了重纽DNA分子；(检测是否成功导入丿(2)目的基因导入受体细胞后，不一走能稳定维持和表达其遗传特性。
(检测是否复制和表达丿45. 试举2・3例说明如何利用载体的标记基因对冃的基因进行检测？请同学们参阅相应试題：利用抗生素抗性基因检测-------- 氨竿青霉素和罚环素玖抗性检测、利用颜色反应检测----- 蓝自第选.、绿色炭光妥匂检测46. 在分子水平上，如何进行检测？CU DNA分子杂交技术检测目的基因；(2丿利用标记的目的基因作探针与mRNA杂交检测mRNA；(3)利用抗原-抗体杂交检测崟自质47. 什么是分子探针？DNA分子杂交是原理是什么？分子採针是指经过放射性同住素标记或熒光分子标记的一段目的基因片段。
