动物生理学实验课件07蛙心灌流

收缩力↓
【结果分析】
1. 任氏液：正常对照
3. 3%CaCl2（1～2滴）
[Ca2+ ]o↑ Ca2+内流↑
[Ca2+]i↑
*舒张期Ca2+与肌钙蛋 白不完全解离，产生 Ca2+强直，基线上移。
兴奋-收缩耦联↑ 收缩力↑
【结果分析】
1. 任氏液：正常对照 4. 1%KCl（1滴）
AP平台期缩短 Ca2+内流↓
自律细胞：(特殊传导系统)： 窦房结P细胞(pacemaker cell) 浦肯野细胞(Purkinje cell) 有兴奋性、传导性，自律性，收缩功能基本
丧失
(一)心室肌的静息电位和动作电位 1.静息电位(resting potential)：-90mv其形成机制与骨骼肌和
神经纤维相似。 2. 动作电位(action potential)：
与心肌M受体结合 K+外流↑, Ca2+内流↓
[Ca 2+ ]i↓ E-C耦联↓
收缩力↓
最大复极电位↑ 4期K+外流↑
自律性↓
心率 ↓
【结果分析】
1. 任氏液：正常对照
7. 3%乳酸（1滴）
乳酸 碳酸氢钠
ห้องสมุดไป่ตู้
H+与Ca 2+竞争肌钙蛋白，Ca2+不能与 肌钙蛋白结合，收缩力↓。
8. 2.5％NaHCO3 （2-4滴）
兴奋-收缩耦联↓
收缩力↓
【结果分析】
1. 任氏液：正常对照
5. 1:10000E（1～2滴）
与心肌β1受体结合
cAMP
Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑
4期 If 、I CaT通道↑ 4期自动去极速度↑

• 进行各观察项目时，作用明显后应立即用新 鲜任氏液换洗，以免心肌受损，心跳难以恢复 待心跳恢复正常频率和幅度后，方能进行下一 步实验。
• 滴加药品时，要及时标记，以方便观察分析
观察项目
1) 描记正常曲线，观察收缩与舒张相 2) 蛙心插管内的任氏液全部更换为0.65％的NaCl 3) 全部更换为新鲜任氏液，反复换洗数次，待曲线恢
• 正常蛙心收缩曲线
•
曲线幅度：代表心脏收缩的强弱。
•
曲线密度：代表心跳频率。
•
曲线的规律性：代表心跳的节律性。
•
曲线的基线：代表心室舒张的程度。
•
曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。
分析讨论
• 蛙心插管内的任氏液全部更换为0.65％的NaCl后， 曲线（观察收缩幅度，舒张程度以及心率）有什么 变化？为什么？
2. 高钙：蛙心收缩力增强，但舒张不完全，收缩基 线上移。在Ca2+ 浓度较高的情况下，心脏会停止
在收缩状态，称为钙僵。心肌的舒缩活动与肌浆 中的Ca2+ 浓度高低有关，当Ca2+ 浓度升高至105mol/l 时 ， 作 为 钙 受 体 的 肌 钙 蛋 白 结 合 了 足 够 的 Ca2+ ，这就引起肌钙蛋白分子构型的改变，从而 触发肌丝滑行，肌纤维收缩。当肌浆中的Ca2+ 浓 度降至10-7mol/l时， Ca2+ 与肌钙蛋白解离，心肌 随之舒张。当用高Ca2+ 任氏液灌注蛙心，使得肌 浆中的Ca2+ 浓度不断升高， Ca2+ 与肌钙蛋白结
复正常，滴加2%CaCl2 1-2滴 4) 任氏液反复换洗，曲线恢复正常，在任氏液中滴加
1%KCl 1-2滴 5) 任氏液反复换洗，曲线恢复正常，在任氏液中滴加

2．仪器线路连接 ． 将张力换能器插头连接至BL系统第 通道 系统第2 将张力换能器插头连接至 系统第1通道（或MS系统第 系统第 通道（ 系统第 插座） 道的插座） 3. 软件操作 开机并启动相关实验系统。 开机并启动相关实验系统。 （1）BL系统 ） 系统 ①“实验项目” 蛙心灌流” ①“实验项目”→“循环实验” →“蛙心灌流”。 实验项目 循环实验” 可适当调节， ②G、T、F可适当调节，让波形幅度大小适宜。 、 、 可适当调节 让波形幅度大小适宜。 ③扫描速度可根据波形进行调节，让波形分开易辩。 扫描速度可根据波形进行调节，让波形分开易辩。
（3）在左主动脉下穿一根线，靠近动脉 ）在左主动脉下穿一根线， 分叉处结扎左主动脉， 分叉处结扎左主动脉，另一线置主动脉 圆锥下备用。提起左主动脉结扎线， 圆锥下备用。提起左主动脉结扎线，用 眼科剪在左主动脉靠近动脉圆锥处剪一 小斜口， 小斜口，将盛有少量任氏液的蛙心插管 由此口插入主动脉，插至动脉圆锥时略 由此口插入主动脉， 向后退，在心室收缩时， 向后退，在心室收缩时，向心室后壁方 向下插，经主动脉瓣插入心室腔内， 向下插，经主动脉瓣插入心室腔内，一 次不成可反复多次稍退后插， 次不成可反复多次稍退后插，但不可过 深顶室壁以免堵住管口。 深顶室壁以免堵住管口。插管若成功进 入心室，管内液面会随着心室跳动而上 入心室， 下移动或看到血如喷泉涌入插管。 下移动或看到血如喷泉涌入插管。用动 脉圆锥下的备用线结扎插管， 脉圆锥下的备用线结扎插管，并将结扎 线固定于插管侧面的小突起上防止滑脱。 线固定于插管侧面的小突起上防止滑脱。
Байду номын сангаас原理】 原理】
心脏的正常节律性活动必须在适宜的理化环境里 才能维持，一旦适宜的理化环境(内环境 内环境)被干扰或破坏 才能维持，一旦适宜的理化环境 内环境 被干扰或破坏 心脏活动就会受到影响。 ，心脏活动就会受到影响。 心脏受自主性神经的双重支配， 心脏受自主性神经的双重支配 ， 交感神经兴奋时 其末梢释放去甲肾上腺素， 作用于心脏β ， 其末梢释放去甲肾上腺素 ， 作用于心脏 1 受体使心 肌收缩力加强， 传导增快， 心率加快； 肌收缩力加强 ， 传导增快 ， 心率加快 ； 而迷走神经兴 奋时， 其末梢释放乙酰胆碱， 作用于心脏M受体使心 奋时 ， 其末梢释放乙酰胆碱 ， 作用于心脏 受体使心 肌收缩力减弱，心率减慢。 肌收缩力减弱，心率减慢。 蛙心离体后， 蛙心离体后 ， 用理化性质近似于血浆的任氏液灌 在一定时间内， 可保持节律性收缩和舒张。 流 ， 在一定时间内 ， 可保持节律性收缩和舒张 。 改变 任氏液的组成成分， 心脏跳动的节律、 任氏液的组成成分 ， 心脏跳动的节律 、 频率和幅度都 可随之发生改变。 可随之发生改变。

兴奋-收缩耦联↑
收缩力↑
结果分析与讨论
3. 1%KCl灌流：
[K+ ]o↑ AP平台期缩短 Ca2+内流↓
兴奋-收缩耦联↓ 收缩力↓
结果分析与讨论
4. 1:10000 E灌流 与心肌β 1受体结合 cAMP Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑ 兴奋-收缩耦联↑ 收缩力↑
4期 If 、I CaT通道↑
观察项目
一、描记正常心搏曲线
曲线幅度 —— 收缩的程度 曲线疏密 —— 心率 曲线基线 —— 舒张的程度
观察项目
二、观察离子、药物和酸碱的影响 1)更换任氏液为3%氯化钙溶液1～2滴，记录心率 和收缩幅度，冲洗（下同） 2)滴加1～2滴1%氯化钾溶液 3)滴加1～2滴1：10000去甲肾上腺素溶液 4)滴加1～2滴1：10000肾上腺素溶液 5)滴加1～2滴1：10000 乙酰胆碱溶液 6)滴加1～2滴 2.5%碳酸氢钠溶液 7)滴加1～2滴3%乳酸溶液
实验对象 蟾蜍
实验仪器设备
RM6240生物采集系统 张力换能器 蛙类手术器械 蛙心插管 试管夹 缝合线 蛙心夹 铁支架 滴管
实验药品
任氏液 l％KCl 3％CaC12 l：10,000 E l：10,000 ACh 3％乳酸 2.5％NaHCO3
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.破坏脑和脊髓 2.暴露心脏
相关理论知识
心肌细胞的生理特性表现为：自动节律性、兴奋 性、传导性和收缩性。 心肌细胞外离子浓度的变化和因体内生物活性物 质（如激素）引起的细胞膜离子通透性的改变，对 心肌细胞的生物电活动和生理特性必然会产生明显 的影响。
相关理论知识
影响心肌细胞电生理特性的原因 1.心肌的自动节律性

4.加入肾上腺后，曲线幅度明显加大，可见蛙心收 缩增强，基线下降，说明心脏舒张完全，从而提 高心输出量。肾上腺具有正性变力，正性变时， 正性变传导作用。
机理为：肾上腺与心肌细胞上的β受体相结合， 激活腺甘酸环化酶，使胞内cAMP浓度增加，通过 下游的信号转导机制使得钙通道开放的概率增加， 平台期钙内流增加，心肌收缩能力增强。 另外，肾上腺还有促使肌钙蛋白与Ca2+的释放， 提高肌浆网膜对Ca2+的回收，使心肌舒张速度增 快，舒张完全。
正常蛙心收缩曲线
• 曲线幅度：代表心脏收缩的强弱。 • 曲线密度：代表心跳频率。 • 曲线的规律性：代表心跳的节律性。 • 曲线的基线：代表心室舒张的程度。 • 曲1. 心肌的收缩活动是由钙离子触发的，由于心肌细胞 的肌浆网不发达，故心肌收缩的强弱与细胞外钙离 子的浓度成正比。任氏液中含有0.65%的NaCl，也 含有Ca离子，但全部换成0.65%NaCl，没有Ca离 子，造成灌流液中缺少钙离子，以致心肌细胞动作 电位2期内流的钙离子减少，胞浆内Ca离子浓度减 少，所以心肌的收缩活动减弱。如果长时间用0.65 ％的NaCl溶液灌注蛙心，心脏最终会停止收缩，但 心肌仍能产生动作电位，这种现象称为兴奋－收缩 脱耦联，是心肌细胞内缺少Ca离子的表现。
目的
学习离体蛙心的灌流方法
观察钠、钾、钙三种离子、肾上腺素、乙 酰胆碱等因素对心脏活动的影响。
操作步骤：
• 破坏脑和脊髓 • 开胸，暴露心脏 • 穿两根线，一线在两根主动脉下方，另外一
根线穿在左主动脉下方，接扎左主动脉
• 左主动脉根部剪口，插管：先入主动脉圆锥， 插管稍稍后退，旋转90度，在心室收缩期 将插管插入心室，此时瓣膜打开，容易进入。 如插好，插管内的任氏液面会随心室的舒缩 而上下波动。还会喷到插管内血液

ATP [cAMP]
促肌钙蛋白对Ca2+的释放
心肌膜上Ca通道开放概率增加
提高肌浆网膜摄取Ca2+的速度
肌浆中Ca2+浓度升高 慢反应细胞0期动
心肌舒张速度增快，舒张完全。
作电位的上升幅 度增大，去极化
心肌收缩增强
加快，房室传导 时缩短
5.任氏液中滴加1:10000 乙酰胆碱
乙酰胆碱使得蛙心收缩减弱，收缩曲线基线下移，心率减慢。 ACh作用于心肌细胞M型胆碱能受体，导致心率减慢，收缩力减弱，不应 期缩短，房室传导减慢，具有负性变时、变力和变传导作用。其机制： ACh作用于心肌细胞M胆碱能受体后抑制AC，细胞内cAMP浓度降低，肌质 网释放Ca2+减少。对于窦房结细胞，ACh与细胞膜上的M受体结合后，能通 过一种Gk蛋白激活细胞膜上的一种钾通道(Ikach),使细胞内的K＋外流，于 是最大复极化电位变得更负，自动去极化到达阈电位所需时间变长，窦 房结的自律性降低，心率减慢。此外ACh能抑制4期的内向电流If，也可 导致心率减慢。 ACh能抑制钙通道，减少内向钙流，使房室交界处的慢 反应细胞动作电位0期的上升幅度减少，上升速度减慢，故房室传导速度 减慢。
正常蛙心收缩曲线
曲线幅度：代表心脏收缩的强弱。 曲线密度：代表心跳频率。 曲线的规律性：代表心跳的节律性。 曲线的基线：代表心室舒张的程度。 曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。
1.用0.65％ NaCl替换任氏液
心肌的收缩活动是由钙离子触发的，由于心肌细胞的肌质网不发达， 故心肌收缩的强弱与细胞外钙离子的浓度呈正变关系。它的机制是钙 触发钙释放(CICR):肌膜去极化激活L型钙通道和Ca2+内流，Ca2+结合于 肌质网Ca2+结合位点引起钙释放通道开放。

离体蛙心灌流及些离子课件
相关理论知识
离子对心脏活动的影响
钾离子
K+参与心肌细胞的复极化和自律细胞的4期自动 去极化过程，其改变不仅取决于细胞内外K+浓 度梯度，还与细胞膜对K+通透性有关，因此其 影响是多方面的
离体蛙心灌流及些离子课件
相关理论知识
离子对心脏活动的影响
钙离子 Ca2+对Na+内流存在竞争抑制作用，称膜屏障作
自律性↓
心率↓
结果分析与讨论
6. 2.5％NaHCO3 灌流 中和H+，Ca2+与肌钙蛋白
结
碳酸氢钠 乳酸
合，心肌收缩力恢复。
7. 3%乳酸灌流
H+与Ca2+竞争肌钙蛋白， Ca2+不能与肌钙蛋白结
合，心肌收缩力↓。
离体蛙心灌流及些离子课件
思考题
通过本次实验结果，分析离子、药物和递对 心搏曲线有什么影响？为什么？
主要内容
相关理论知识 实验部分
实验目的 实验对象 实验仪器与药品 实验步骤
结果分析与讨论
离体蛙心灌流及些离子课件
相关理论知识
正常的蛙心能按静脉窦的节律性自动产生兴奋， 心脏的自动节律性活动，需要有一个合适的理化 环境。
蟾蜍心脏离体后，用任氏液灌流，在一定时间 内仍能保持节律性兴奋和收缩活动。由于心脏的 正常活动还有赖于内环境因素的相对稳定，改变 灌流液的成分可引起心脏活动的改变。
4期 If 、I CaT通道↑ 4期自动去极速度↑
自律性↑
兴奋-收缩耦联↑
收缩力↑
离体蛙心灌流及些离子课件
心率↑
结果分析与讨论
5. 1:10000 Ach灌流 与心肌M受体结合 K+外流↑, Ca2+内流↓

滴加1:10000乙酰胆碱
结果分析——ACh的作用
ACh与心肌细胞膜M受体结合 K+通透性↑，Ca2+通透性↓ K+外流↑
3期K+外流↑、最大复极电位↑ 最大复极电位与阈电位差距↑ 自律性↓→心率 ↓
Ca2+内流↓ [Ca2+]i↓
兴奋-收缩耦联↓
收缩力↓
滴加2%氯化钙
结果分析——CaCl2的作用
曲线的疏密 —— 心率的快慢
曲线的规律性 —— 心跳的节律性 曲线的基线 —— 心室舒张的程度
滴加1:10000肾上腺素
结果分析——Adr的作用
Adr与心肌1受体结合 cAMP↑ 激活心肌膜上的钙通道 Ca2+内流↑、肌浆网释放Ca2+↑
心率加快、房室交界传导加快、 心房肌心室肌收缩能力加强 心肌收缩收缩力↑
[Ca2+]o ↑ → Ca2+内流↑ → [Ca2+]i↑ → 兴奋—收缩耦联↑ →收缩力↑ 舒张期Ca2+与肌钙蛋白不完全解离，基线 上移，产生Ca2+强直
滴加1%氯化钾
结果分析——KCl的作用
[K+]o ↑
K+与Ca2+在心肌细胞膜上有 膜内外K+浓度梯度减小 竞争性抑制作用 工作细胞静息电位绝对值减少
识别静脉窦、心房和心室
观察心脏结构
（腹面）
（背面）
两栖类动物的心脏为两心房、一心室。
心脏的起搏点是静脉窦。静脉窦的自动 节律最高，心房次之，心室最低。 正常情况下，心脏的活动节律服从静脉 窦的节律，其活动顺序为：静脉窦、心 房、心室。
4、主动脉干的后方备线
（腹面）
5、左动脉干根部向心方向剪一斜口

• 2)加1～2滴2%CaCl2于灌流液中，观察收缩曲线 的改变。效应明显后，用新鲜任氏液冲洗至曲线 恢复正常。
• 3)加1～2滴1%KCl于灌流液中，观察曲线改变。 效应明显后，用任氏液冲洗至曲线恢复正常。
• （3）递质对心脏收缩的影响 • 1)加1～2滴1：10000去甲上腺素于灌流液中，观
察收缩曲线改变。效应明显后，用新鲜任氏液冲 洗至曲线恢复正常。 • 2)加1滴1：100000乙酰胆碱于灌流液中，观察收 缩曲线改变。效应明显后，用新鲜任氏液冲洗至 曲线恢复正常。
• 2.实验装置
• 用试管夹将蛙心插 管固定于铁支架上。 将蛙心夹上的线连 至机械-电换能器的 着力点上（切勿让 心脏受到过度牵 拉）。将机械电换 能器连至BL-410微 机生理实验系统。
• 3.观察项目
• (1)描记心脏的正常收缩曲线
• (2)离子对心脏收缩的影响
• 1)吸出插管内全部灌流液，加入0.65%NaCl,观察 心脏收缩曲线改变。效应明显后，吸出灌流液， 用新鲜任氏液冲洗至收缩曲线恢复正常。
• 实验对象 蟾蜍
• 实验器材和药品
BL-420微机生理实验系统，机械-电换能器 （量程25克）。铁支架、双凹夹、试管夹、 蛙心插管、蛙心夹、蛙手术器械、滴管2支、 大烧杯2只、温度计、恒温水浴、棉线。任 氏液、0.65%NaCl2、1%KCL、3%乳酸、 2.5%NaHCO3、1：10000去甲肾上腺素、 1：100000乙酰胆碱等溶液。
有效不应期:心肌收缩的有效不应期 较长,整个收缩期和舒张早期都是 不应期.在此期给予任何刺激,心室 都不发生反应.
相对不应期（-60～-80mV）:在心室 相对不应期给单个阈上刺激,则产 生一次正常的节律以外的收缩反应, 称为期前收缩，或早搏.

3次，以免心肌受损，而且必须待心脏恢复正常后方能进行下一
步实验，以形成前后对照。
滴加药品和换取新鲜林格溶液时，须及时标记，以便观 察分析。
化学药物作用不明显时，可再适量滴加，密切观察药物剂 量添加后的实验结果。
随时用林格溶液润湿蛙心表面。
第18页，共20页。
◆ 思考与探索
设计一个新的、更简单的离体心脏插管方法。 设计一个兔心离体灌流的方法。 设计一个实验，用于了解某种药物对心房肌收缩力与
林格溶液， 4％CaCl2，4％KCl，0.01％肾上腺素，0.01％乙酰 胆碱（Ach），0.1%普萘洛尔， 0.1%阿托品
八木氏套管
万能滑轮
第6页，共20页。
◆ 实验步骤
离体蛙心的制备 暴露心脏：
取一只蟾蜍，双毁髓后背位固定于蛙板上。剪开 胸腹部皮肤、肌肉，剪断左右乌喙骨和锁骨。将 整个胸腔暴露。
第10页，共20页。
◆ 实验步骤
* 标本与仪器连接：
用蛙心夹在心脏舒张期夹住心尖部 ，蛙心夹上的棉线通过万能滑轮转 换后与张力换能器相连。
第11页，共20页。
斯氏插管法
斯氏插管法 仪器连接
第12页，共20页。
◆ 实验步骤
观察离子对心脏活动的影响： 打开软件→选择实验（实验→循环→蛙心灌流）→开始示 波 →开始记录 →记录正常心搏曲线。 向静脉插管内林格溶液中滴加4％CaCl2 2滴，观察心搏出现 变化后立即将灌流液全部吸出，用新鲜林格溶液换洗2－3
↓
正常心搏曲线
↓
4％CaCl2， 6滴 ↓一旦出现现象
立即换洗，2-3次
↓ 正常心搏曲线
↓
4％KCl， 1-2滴
↓一旦出现现象
立即换洗，2-3次

直接引用
直接引用参考文献中的原文或数据，需要在文中注明出处，并在末尾列出相应的参考文献 。
THANKS
感谢观看
使用蛙心夹夹住心脏，确保心脏保持一定的张力， 便于插管。
实验方法与步骤
插管
将蛙心插管插入心脏， 确保插管与心脏紧密 连接，无漏液现象。
灌流
将灌流装置与插管连 接，打开灌流装置， 使生理盐水或其他实 验试剂流入心脏。
观察与记录
观察心脏的跳动情况， 记录相关数据，如心 率、收缩压等。
实验结束
实验结束后，断开灌 流装置与插管的连接， 取出插管，用生理盐 水冲洗心脏，取出蛙 心夹，取出心脏。
实验的局限性
我们指出了实验的局限性， 包括实验条件、样本量等 方面的问题。
04
实验结论与展望
实验结论
实验表明，蛙类离体心脏灌流实 验是一种可靠的生物学实验方法， 可用于研究心脏生理和药理机制。
在实验过程中，我们观察到了心 脏的收缩和舒张过程，以及药物 对心脏功能的影响，证明了该实
验方法的可行性和有效性。
通过深入研究蛙类心脏的生理和 药理机制，可以为人类心脏相关 疾病的防治提供更多有益的思路
和方法。
未来发展方向
我们计划进一步优化实验条件和方法， 提高实验的准确性和可靠性，为更多 的科研工作者提供更好的服务。
在未来的发展中，我们将不断更新实 验技术和方法，加强与其他科研机构 的合作与交流，共同推动相关领域的 发展和进步。
实验注意事项
实验前应仔细检查所有实 验材料是否完好，如有损 坏应及时更换。
在实验过程中要保持安静， 避免干扰到心脏的正常跳 动。
插管时要小心操作，避免 损伤心脏组织。
在灌流过程中要保持恒温， 以免影响实验结果。

2. 仰卧位固定于蛙板上。
3.翻开胸腔暴露心脏 ，察看心脏的构 [实造验。结果及实际分析]
4. 斯氏结斯氏扎结，扎记记录录表结〔果次/。分钟〕
静脉窦
心房
心室
对照
第一扎
第二扎
;
二、蟾蜍心室的期前收缩与代偿间歇
[实验目的]
1．学习在体蟾蜍心跳曲线的记录方法。
2．察看心脏在兴奋过程中兴奋性的变 化。
[实验原理]
实验四 蛙心脏灌流 蛙心起搏点的察看 期前收缩与代偿间歇
;
一、蛙心起搏点的察看
[目的要求]
1.学习暴露蛙类心脏的方法，熟 习心脏的构造。
2.察看心脏起搏点以及各部分的 自律性高低和心脏的兴奋性传导 顺序。
[实验原理]
1. 两栖类动物的心脏解剖 2. stannius结扎;
[方法步骤]
1.破坏脑脊髓 。
些受体激动剂和阻断; 剂，可以察看到心
[实验方法]
1、标本的制造：
〔1〕将毁损脑脊髓后的蟾蜍固定在蛙板 上，
从腹上部正中至两前肢剪开皮肤，翻 开胸
腔，暴露心脏。
〔2〕用眼科剪剪开心包膜。
;
〔4〕插管：在总自动脉下穿一线，打活结。在 左自动脉干根部向心脏方向剪一小切口， 将装有少量任氏液的蛙心插管从切口处插 入自动脉球。将蛙心插管与心尖部呈45度 角，并将插管外旋插入心室。见液面上下 动摇，心室部可触及插管，即插管已进心 室，用备用线结扎血管及插管。将插管中 的血液冲洗干净。游离心脏，勿伤静脉窦
;
2、仪器设备的安装衔接：
〔1〕将蛙心插管用木夹子固定在铁三脚架 上。
〔2〕在木夹子的下方，将张力传感器固定 在铁
三脚架上。
〔3〕将夹在蛙心尖上的蛙心夹上的丝线系 在张

离体心脏灌流方法
两栖类动物： 蟾蜍、青蛙等 Straub法、八木法
哺乳类动物：大鼠、家兔、猫等
Langendroff 法
经典的离体蛙心灌流——Straub法
特点：
灌流途径与正常循环途径不同，蛙心插管
通过主动脉瓣直接插入心室腔内，灌流液通过 同一蛙心插管进入心室腔和流出，前负荷和后 负荷相等。
方
将插有蛙心插管的心脏取出与记录装置连接。
注
意
① 不能损伤或结扎静脉窦；
② 主动脉内的插管不要过深以免抵住主动脉瓣
③ 两根插管有一定相对位置，插管前要考虑好方 向，插管后应避免血管扭曲，保证灌流畅通 ④ 避免气泡进人心脏。
哺乳类动物离体心脏灌流 ——Langendorff 法
Langendorff首次描述了保持哺乳动物离体心脏存活的方法，采用恒
优缺点
优点： 1.排除在整体情况下体内各种复杂因素的干扰，直接观测离 体心脏标本的各项指标。
2.易于严格控制实验环境，方法简便精确，有利于分析作用 机制及对药物的药效作定量研究。
3.易于获得准确、精细的结果。
4.缺点和局限性：
5. 失去了机体完整统一的内环境和神经体液调控作用， 失去了体内各种组织、细胞之间的相互关系，不能完全反映 心脏在整体情况下的活动规律与正常整体情况。
滑肌灌流用的恒温浴槽或麦氏浴槽）中，浴槽内加入Ringer’s液或Krebs— Henseheit缓冲液，利用恒温水浴使这一装置保持在 37℃。经主动脉插管
灌 注 氧 饱 和 的 Ringer’s 液或 Krebs—Henseheit 缓冲液 ， 并持续保持 400
mmHg灌注压。
4. 连接记录装置：将一特制的金属小钩固定在心尖部， 利用张力传感器与多导记录仪相连并描记心脏收缩曲线和测 定收缩力等指标。 Langendorff 离体心脏灌流装置可用于测 定不同种生理学试剂和药物的直接效应，以及对这些药物的 拮抗作用。还可观察冠脉流量的变化。

离体蛙心灌流实习课件
CONTENTS
• 实验原理 • 实验材料与器具 • 实验步骤与方法 • 实验结果分析 • 实验注意事项与安全防护
01
实验原理
蛙心灌流实和生理学研究中的经典 实验，用于研究心脏的生 理功能和药物作用机制。
历史背景
该实验方法自19世纪中叶 以来一直被广泛应用于学
术研究和教学。
实验目的
通过离体蛙心灌流实验， 观察心脏的收缩活动和药 物对心脏的影响，了解心 脏的生理功能和药物作用
机制。
实验的基本原理
蛙心离体
将蛙类的心脏取出并置于适宜的灌流液中 ，保持其生理活性。
灌流系统
建立有效的灌流系统，确保心脏得到足够 的氧气和营养物质，同时排除代谢废物。
观察指标
通过心电图机或心脏张力记录仪等设备， 观察和记录心脏的收缩活动。
实验安全注意事项
01 7
实验操作前应熟悉实验步骤和
操作规程，确保实验过程的安
全性。
7
02
7
实验过程中应佩戴适当的防护
用具，如实验服、手套、护目
7
镜等，以防止意外伤害。
03
避免使用未经消毒的器具直接 接触实验对象，以免引起感染 。
04
在操作过程中，应保持安静， 避免干扰和影响实验结果。
实验废弃物处理
记录仪
用于记录蛙心活动 数据。
试剂与药品
肾上腺素
用于增强心肌收缩力，提高心 率。
CaCl2
用于提高灌流液中的Ca2+浓 度，增强心肌收缩力。
任氏液
常用的灌流液，维持蛙心离体 状态下的生理功能。
乙酰胆碱
用于降低心肌收缩力，减缓心 率。
MgSO4
用于降低灌流液中的Mg2+浓 度，增强心肌收缩力。