人I型原胶原N端前肽PINP酶联免疫分析ELISA
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人I型前胶原羧基端肽PICP的说明书人I型前胶原羧基端肽PICP二、注意事项1. 此试剂为体外检测试剂,效期内使用,试剂应视为传染物,不同总批号的试剂不能混用。
2.使用前应将盒内各试剂取出。
室温放置至少30分钟,3.浓缩洗涤液出现结晶后,请于37℃孵育15分钟。
4.浓缩样品稀释液出现结晶后,请于37℃孵育15分钟5.若24小时内进行实验,标本可存放于2~8℃。
不需及时实验,标本-20℃保存,避免反复冻融。
6.在反复清洗微孔板,并扣干微孔中的残余液体,否则将降低精确度,造成吸光度偏离的假像。
7.加样完毕后,应注意轻微摇动微孔反应条,以便使孔中的液体充分混匀。
8.试剂盒保存于2~8℃,请勿冷冻,有效期请见盒内标示。
三、实验前准备1.使用前应将盒内各试剂取出,室温放置至少30分钟。
2.准备各种实验仪器及材料,如微量移液器,吸头,医用蒸馏水等3.浓缩洗液与医用蒸馏水1︰19倍稀释后成为应用洗涤液4.浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1︰4倍稀释成应用样品稀释液5.用应用样品稀释液来稀释样品,按照1:100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中,充分混匀待用。
)人I型前胶原羧基端肽PICP四、操作步骤1.取出酶标板,设空白孔,依照次序对应分别加入100μl的标准品于空白微孔中(空白孔视为0号标准品,用医用蒸馏水替代)2、分别标记样品编号,加入100μl的稀释样品于空白微孔中(不同的样本采用不同的吸头)。
3、将酶标板置于37℃温育30分钟;4、将酶标板板取出,将其中的液体甩去,每个孔中全部加满应用洗涤液后,立即甩去液体;5、每个孔中加满应用洗涤液后,轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去,在吸水纸上将酶标板拍干。
6、重复第5个步骤5次,在吸水纸上将酶标板拍干。
7、在标准品孔和样品孔中加入100μl的酶标偶合溶液。
8、将96孔板置于37℃温育30分钟。
9、将酶标板取出,将其中的液体甩去,每个孔中全部加满应用洗涤液后,立即甩去液体。
pinp分子量
PINP即Ⅰ型前胶原氨基端原肽,分子量为35KD,高度磷酸化,在体内的浓度男性为20-76μg/L,女性为19-84μg/L。
PINP是一个非常灵敏的骨转化速率指标,其变化与骨密度的变化高度相关,并与抗骨吸收的疗效相关。
在用于检测抗骨吸收治疗时,短短几个月内就能对骨转化的治疗作用给予评价,而通过检测病人的骨密度来判断治疗效果则需要大约两年时间。
此外,PINP对于检测骨质疏松病人的合成代谢治疗的效果也非常有效。
因此,早期通过PINP来评定骨质疏松的治疗,不仅能帮助患者选择正确的治疗方案,而且能增强患者治疗的信心。
人I型原胶原N端前肽(PINP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中I型原胶原N端前肽(PINP)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人I型原胶原N端前肽(PINP)水平。
用纯化的人I型原胶原N端前肽(PINP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入I型原胶原N端前肽(PINP),再与HRP标记的I型原胶原N端前肽(PINP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的I型原胶原N 端前肽(PINP)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人I型原胶原N端前肽(PINP)浓度。
试剂盒组成:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。
加入一定量的PBS,PH7.4。
人Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)水平。
用纯化的人Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I),再与HRP标记的Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)浓度。
试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品:900ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存样本处理及要求:1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
血尿Ⅰ型胶原交联C端肽和Ⅰ型胶原交联N端肽在骨关节结核转移的研究蓝常贡;唐毓金;谢克恭;龙丽珍;周兰岛;农峰;廖林波;卢贤哲【摘要】目的探讨骨关节结核患者血尿Ⅰ型胶原交联C端肽(CTX)和Ⅰ型胶原交联N端肽(NTX)变化水平与结核杆菌骨关节转移程度的相关性.方法选取健康体检人群、肺结核患者和骨关节结核患者各60例,测定三组人群血尿CTX、NTX的含量及血清中骨源性碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型前胶原C-末端前肽(PICP)、Ⅰ型前胶原N-末端前肽(PINP)变化水平.对比观察三组人群血尿CTX、NTX的含量,血清BALP、PICP、PINP水平,血CTX、NTX和尿CTX、NTX与抗结核治疗效果的相关性.结果骨关节结核组的血CTX、NTX和尿NTX的含量与健康对照组比较均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),而三组间尿CTX含量差异无统计学意义(P>0.05);骨关节结核患者血清中PICP、PINP明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),三组间血清BALP差异无统计学意义(P>0.05);血CTX、NTX和尿NTX、CTX与抗结核治疗效果均呈明显正相关(P<0.05).结论骨关节结核组患者血CTX、NTX和尿NTX含量明显高于健康对照组,在排除骨质疏松症和骨肿瘤等破坏性骨相关疾病的肺结核患者早期检测血尿CTX、NTX含量可作为预测骨关节结核转移的重要参考指标.【期刊名称】《右江医学》【年(卷),期】2016(044)004【总页数】5页(P365-369)【关键词】骨关节结核;Ⅰ型胶原C端肽;Ⅰ型胶原N端肽【作者】蓝常贡;唐毓金;谢克恭;龙丽珍;周兰岛;农峰;廖林波;卢贤哲【作者单位】右江民族医学院附属医院脊柱骨病外科,百色533000;右江民族医学院附属医院脊柱骨病外科,百色533000;右江民族医学院附属医院脊柱骨病外科,百色533000;右江民族医学院附属医院肝胆外科,百色533000;右江民族医学院附属医院脊柱骨病外科,百色533000;右江民族医学院附属医院脊柱骨病外科,百色533000;右江民族医学院附属医院脊柱骨病外科,百色533000;右江民族医学院附属医院脊柱骨病外科,百色533000【正文语种】中文【中图分类】R529.2结核病仍是我国第二高负担病种,骨关节结核是主要肺外结核,致残率比较高。
ⅰ型前胶原氨基端肽(p1np) 偏高的原因一、前胶原氨基端肽(P1NP)的基本介绍前胶原氨基端肽(Procollagen type I N-terminal propeptide, P1NP)是一种在体内产生的蛋白质分子,其主要作用是参与胶原蛋白的合成和细胞外基质的重塑。
P1NP常用作评估骨代谢情况的指标,其浓度可以反映骨骼形成的水平。
二、P1NP偏高的原因1.骨骼增生和修复:P1NP是骨骼形成的标志物,在骨骼增生或修复过程中,P1NP的水平会升高。
例如,骨折、骨损伤、骨骼疾病等会引起骨骼增生和修复的过程,从而导致P1NP的升高。
2.高钙血症:高钙血症是指血液中钙离子浓度升高,多见于甲状旁腺功能亢进症、骨骼转移性疾病等,钙离子的释放会刺激骨骼的活性,从而增加P1NP的合成。
3.骨骼代谢紊乱:某些代谢性骨病,如骨质疏松症、特发性高钙尿症等,会导致骨骼代谢紊乱,进而引发P1NP的升高。
4.激素变化:某些激素变化,如雌激素水平的下降、甲状旁腺激素的增加等,会导致骨松的发生,从而引起P1NP的升高。
5.肝功能异常:肝脏是P1NP的代谢器官之一,患有肝功能异常的人群中,P1NP会升高。
6.慢性炎症和感染:某些慢性炎症和感染性疾病,如类风湿关节炎、慢性肾脏疾病等,会导致炎症反应的增加,从而增加骨骼的代谢水平,引发P1NP的升高。
7.肿瘤:某些肿瘤,如骨肉瘤、乳腺癌骨转移等,会导致骨骼代谢的改变,从而导致P1NP的升高。
8.某些药物的使用:某些药物,如可卡因、巴比妥类药物、类固醇类药物等,可能会干扰骨骼的代谢过程,引起P1NP的升高。
9.年龄:随着年龄的增长,骨质疏松的发生率也会增加,P1NP的水平也可能会升高。
10.其他因素:还有一些其他的因素,如营养不良、慢性肾脏病、甲状腺功能亢进等,都可能与P1NP的偏高有关。
三、结论前胶原氨基端肽(P1NP)偏高的原因是多方面的,包括骨骼增生和修复、高钙血症、骨骼代谢紊乱、激素变化、肝功能异常、慢性炎症和感染、肿瘤、某些药物的使用、年龄等。
大鼠Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围:0.78ng/ml-50ng/ml最低检测限:0.195ng/ml特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠PⅠNP,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月预期应用:ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中PⅠNP 含量。
说明1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗PⅠNP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗PⅠNP抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的PⅠNP呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate):一块(96孔)。
2.标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)8.底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
骨转换标志物PINP和β-CTX的测定在预测骨质疏松性骨折中的价值唐颂军;宋力轶;朱文峰;郑良军【摘要】目的探讨血清Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)和β-胶原降解产物(β-CTX)的测定在预测骨质疏松性骨折中的价值.方法 110例骨质疏松患者分为骨质疏松组和骨质疏松伴骨折组.另选取55例健康体检者作为正常对照组.用双能X线骨密度仪对患者进行BMD测定,采用酶联免疫法测定骨转换标志物PINP和β-CTX水平.对比3组受试者BMD、PINP和β-CTX水平的变化,并分析骨质疏松伴骨折组PINP、β-CTX和BMD的相关性.结果骨质疏松伴骨折组的BMD显著低于骨质疏松组(P<0.05),骨质疏松组的BMD显著低于对照组(P<0.05).骨质疏松伴骨折组的PINP和β-CTX水平显著高于骨质疏松组(P<0.05),骨质疏松组的PINP和β-CTX 水平显著高于对照组(P<0.05).骨质疏松伴骨折组BMD与PINP、β-CTX均呈显著负相关关系(r=-0.627,-0.593,P<0.05).结论骨质疏松症伴骨折患者的骨折发生与骨转换标志物PINP和β-CTX的升高具有一定相关性.【期刊名称】《实用临床医药杂志》【年(卷),期】2015(019)021【总页数】3页(P17-19)【关键词】骨质疏松;骨折;骨转换标志物;PINP;β-CTX【作者】唐颂军;宋力轶;朱文峰;郑良军【作者单位】上海邮电医院,上海,200040;上海邮电医院,上海,200040;上海邮电医院,上海,200040;上海邮电医院,上海,200040【正文语种】中文【中图分类】R683骨质疏松症会引起骨质丢失,增大骨折的发生率,严重影响患者的生活质量。
骨质疏松患者体内骨代谢水平可能出现紊乱。
近年来,骨转换标志物作为新兴指标,在骨质疏松症的诊疗中的重要作用日益凸显。
骨转换标志物是骨组织本身的代谢产物,包括骨形成标志物和骨重吸收标志物。
人I型原胶原N端前肽(PINP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中I型原胶原N端前肽(PINP)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人I型原胶原N端前肽(PINP)水平。
用纯化的人I型原胶原N端前肽(PINP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入I型原胶原N端前肽(PINP),再与HRP标记的I型原胶原N端前肽(PINP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的I型原胶原N 端前肽(PINP)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人I型原胶原N端前肽(PINP)浓度。
样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。
加入一定量的PBS,PH7.4。
人I型原胶原N端前肽(PINP)酶联免疫分析(ELISA )试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中I型原胶原N端前肽(PINP的含量实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人I型原胶原N端前肽(PINP)水平。
用纯化的人I型原胶原N端前肽(PINP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入I型原胶原N端前肽(PINP),再与HRP标记的I型原胶原N端前肽(PINP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的I型原胶原N端前肽(PINP)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人I型原胶原N端前肽(PINP)浓度。
样本处理及要求:1•血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转份)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转份)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4 )稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000 转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。
加入一定量的PBS,PH7.4 。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8C的温度。
加入一定量的PBS (PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。
仔细收集上清。
分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20 C保存,但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100 M,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50 d,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100 d分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50 d, 混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50d l 弃掉,再各取50d l 分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50 d分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50 d,混匀后从第七、第八孔中分别取50d l 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50 d,混匀后从第九第十孔中各取50 d弃掉。
(稀释后各孔加样量都为50 d,浓度分别为18 ug/L,12ug/L,6 ug/L,3 ug/L, 1.5 ug/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液50 d,然后再加待测样品10 d (样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37 C温育30分钟。
4. 配液:将30 (48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 (48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50 d l ,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50 d,再加入显色剂B50 d,轻轻震荡混匀,37 C避光显色15分钟.10. 终止:每孔加终止液50 d,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。
测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
注意事项:1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(X n X 5)O5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准&所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
计算:以标准物的浓度为横坐标,0D值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的0D值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与0D值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的0D值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
(此图仅供参考)试剂盒性能:1•样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2•批内与批见应分别小于9%和15%检测范围:0.6 ug/L -23 ug/L保存条件及有效期:1.试剂盒保存:;2-8C O2 •有效期:6个月FOR RESEARCH USE ONLYHuma n PINPDrug NamesGeneric Nam: Human PINP ELISA KitPurposeThis kit allows for the determ in atiorof PINP concen trati onSn Huma nserum, blood plasma, and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay Human PINP level in the sampl e Purified Human PINP antibody to coatmicrotiterplate wells, make solid-phasea ntibody,the n add PINP to wells, Combi nedPINP which With HRP labeled , become an tibody- an tige n - en zyme-a ntibod擊omplex,after wash ing Completely, Add TMB substrate solutio n,TMB substrate becomes blue color At HRP en zyme-catalyzed, reacti on is term in ated by the additi on of a sulphuric acid soluti on and the color change is measured spectrophotometricallyit a wavelength of 450 nm. The concentration of PINP in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the sta ndard curve.Materials provided with the kitSpecimen requirements1. serum- coagulation at room temperature 10-20 ,nCeistrifugation 20-min at the speed of 2000-3000r.p.m. remove super nata nt. If precipitati on appeared, Cen trifugal aga in.2. plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20 mins ,cen trifugatior20-min at the speed of 2000-3000r.p.m. remove super nata nt,If precipitation appeared, Centrifugal again.3. Urine collect sue a sterile container, cen trifugati on 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernata nt,If precipitati on appeared, Cen trifugalaga in. The Operatio n of Hydrothorax and cerebrosp inal fluid Refere nee to it.4. cell culture supernatan-detect secretorycomponentscollect sue a sterile container, cen trifugatior20-min at the speed of 2000-3000r.p.m. removesuper nata nt,detectie compositionof cells, Dilut cellsuspensiorwith PBS (PH7.2-7.4 , Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thawcycles, damage cells and release ofin tracellular comp onen ts, cen trifugati on 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.5. Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add(PPBHS7.2-7.4), Rapidly froze nwith liquid n itroge n, mai ntain samples at Q-8fter melt in g,add PBSPH7.4 , Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant. 6. extract as soon as possibleafter Specimencollection,andaccordingto the relevant literature,andshouldbe experimentas soon as possibleafter the extraction.If it can't, specime n can be kept in -20 to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.7. Can't detect the sample which coNnataNin3, because NaN3 inhibits HRP active.Assay procedure1. Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100 卩l to the first and the second well, then add Stand50didilUrtithe first andthe second well, mix; take out 100 卩l form the first and the second well then add it to the thiand the forth well separatelythen add Standarddilution 50 卩to the third and the forthwell ,mix ; then take out 50 卩l from the third and the forth well discard, add 50the sixth well ,then add Standard dilU50)p l to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution50 卩l to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50 卩l from the seveneighth well and add to the ninth and the tenth well, add Sta ndard50l(utionihe ninth andthe ten th well, mix , take out 50 m the nin thpahdcthe ten th wescard(add Sample 50 卩l toeach well after Diluting , (d e n s1i8ty u: g/L ,12ug/L ,6 ug/L ,3 ug/L,1.5 ug/L)2. add sample:Set blank wells separately(blank comparisonwells don'atdd sampleandHRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample diluti on50 卩to test in gsamplewel, the n add testi ng sample10 y(samplefi nal diluti onist touch the well awsaflal r as possible, and Gently mix.5-fold), add sample to welldso,n3.ln cubate: After closi ng plate with Closure plate membra ne ,in cubate for 30CBnin at 374. Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.5. washing:Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6. add enzym: Add HRP-Conjugate reag50t^ l to each well, excebtank well.7.incubate:Operation with 3.8. washing:Operation with 5.9. color:Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservati on for 15 min a t3710.Stopthe reaction Add Stop Solutio50 卩1 each well, Stop the react ion (th由lue color change to yellow color).11.assay:take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.Important notes1. The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes in the roomtemperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.2. washingbufferwill Crystallizationseparation,it can be heatedthe water helps dissolve when dilute .Washing does not affect the result.3. add Samplewith samplerEach step, And proofreadits accuracyfrequently,avoidstheexperimentalerror. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .4. if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.( >n>5).5. Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6. The substrate evade the light preserv.ation7. Pleaseaccordingto use instructionstrictly,The test result determinationmust take the microtiter platereader as a standard.8. All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective material process.9. Do not mix reagents with those from other lots.CalculateTakethe sta ndardde nsityas the horiz on tal,the ODThis charti for refere nee onlyAssay range0.6 ug/L -23 ug/LStorage and validity1. Storage 2-8°C .2. validity six mon ths.。