二 细胞计数 1 血球计数板计数 2 自动细胞计数器计数 3 结晶紫染色细胞核计数法 4 MTT染色计数法
三 细胞传代 1 悬浮细胞的传代
加入一倍或几倍的生长液，然后分种两只或 多只培养瓶即可。
2 贴壁细胞的传代
① 消化前需用肉眼或镜下观察需消化的细胞，确认细 胞有无污染； ② 加入消化液量要适当，以摇动时能盖满单层细胞为 度； ③ 消化时间不宜过久，一般在室温下静置2～5min, 当见细胞层出现麻布样网孔时，即可倒去消化液。 ④ 终止消化要先倒去消化液，然后加入有血清的培养 基。
缺点：细胞体积小，且处于悬浮状态，难采 用灌流培养，细胞密度低。
2、贴壁培养
必须让细胞贴附在某种基质上生长繁殖的培 养方法。
适用细胞类型：贴壁依赖型细胞，兼性贴壁 细胞。 基质要求：具有净阳电荷和高度表面活性。 对微载体而言还要求具有一定电荷密度。
优点：
a容易更换培养液，细胞紧密黏附于固相表面， 可直接倾去旧培养液，清洗后直接加入新培养 液。 b容易采用灌流培养，从而达到提高细胞密度 的目的，因细胞被固定，不需过滤系统。 c当细胞贴壁于生长基质时，很多细胞将更有效 的表达一种产品。
一般适用于非贴壁依赖性细胞的固定。 常用的载体：琼脂糖；海藻酸钙凝胶
微囊法：
用一层亲水的半透膜将细胞包围在珠状的微 囊内，细胞不能溢出，但小分子物质及营 养物质可自由出入半透膜。
囊内是微小培养环境，与液体培养相似，能 保护细胞少受损伤，故细胞生长好、密度 高。
③结团培养：
利用细胞本身形成结团的特点，相互结团后 再用悬浮的方法培养，操作简便，节省了 用于微载体的成本。
缺点：
a操作比较麻烦，需要合适的贴附材料和足够 的面积。 b培养条件不易均一，传质和传氧效果差。
