芦丁的提取分离及鉴定

芦丁，又名芸香甙、维生、紫槲成甙，广泛存在于 植物界，如芸香、苦荞麦、槐树蕾、楸树叶、蒲公 英、番茄茎、赤豆等均含有丰富的芦丁，尤以槐花 米（Sophora japoina L.的花蕾）和荞麦叶中含量最 高。芦丁能凉血止血，清肝泻火，具有抗炎作用。 还具有抑制醛糖还原酶的作用，用于预防脑溢血， 高血压，视网膜出血，急性出血肾炎，治疗慢性气 管炎，对糖尿病型白内障也有较好的治疗，而且芦 丁对紫外线具有较强的吸收作用，在化妆品中添加 10%的芦丁，紫外线的吸收率可达98%以上[9]。 本实验主要以槐花米为原料提取芦丁，并以芦丁为 例学习黄酮类化合物的性质及部分鉴定方法。
2. 实验仪器及药品
SHZ-D循环水式真空泵（河南省巩义市英峪 仪器一厂），电热恒温水浴锅（上海医疗器 械五厂），烧杯（1000ml），圆底烧瓶，球 形冷凝管，漏斗，托盘天平，抽滤瓶，布氏 漏斗滤纸，试管，滴管，新华1号滤纸，铅笔， 铁架台，电炉，石棉网，橡皮管。 槐花米（2011年购于同仁堂大药房）， 95%乙醇，浓硫酸，浓盐酸，镁粉，醋酸铅 试剂，1-萘酚，正丁醇，醋酸，1%三氯化铝 乙醇溶液，无水乙醇，硼砂水，饱和石灰水。
致
谢
胡老师在本论文的实验设计、具体细节的 老师在本论文的实验设计、 把握以及论文的撰写等过程中给予了悉心指 导，特此致以我最忠诚的感谢！ 特此致以我最忠诚的感谢！
二、论文设计全过程
芦丁的提取 分离及鉴定
实验部分
鉴定
结果分析与 讨论
OH
一、实验部分
1.实验原理 实验原理 芦丁（Rutin） C27H30O16·3H2O，浅黄色针 状结晶，mp 174～178 ℃（含三 分子水）；188 ℃（无水物）。 难溶于冷水（1:8000～10000）， 可溶于热水（1:180～200），热 甲醇（1:10），冷甲醇 （1:100），热乙醇（1:60）， 冷乙醇（1:650）；难溶于乙醚、 三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、 丙酮，易溶于碱液。
还含有皂甙，其粗制品为白色粉末，经酸水解后得二 种皂甙元及糖部分，这两种皂甙元是白桦酯醇和槐花 米双醇，另外还含槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米 丙素等。本实验是利用芦丁为黄酮苷，分子中具有酚 羟基，显酸性，可溶于稀碱液，在酸液中沉淀析出的 性质进行提取分离。利用芦丁易溶于热水、热乙醇， 较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精 制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖， 依此可进行槲皮素的制备。通过纸色谱及紫外光谱进 行黄酮及糖的鉴定。
此实验中，水提取法制取芦丁的得率为15%，纯度高达 80%，所得产物量与张来新等[2]的研究结果基本符合，实 际产量相当。实验结果表明。芦丁是重要的黄酮类生物活 性物质，槐米中含有丰富的芦丁，通过性质试验及色谱鉴 定，能够清楚的表现处黄酮类化合物的一些性质。但与舒 晓宏等[12]采用频率20 kHz的超声法从槐米中提取芦丁成分 及黄汉昌13]，胡杰[15]等采用冷碱（Na2SO3与石灰水混 合—渗漉提取）酸沉淀法相比较则产率太低，原料浪费比 较严重。 因此，本研究认为在探索芦丁的提取方法的过程中，特别是 在医疗方面[10]，我们应尽可能采取更高效率的提取方法， 如超声辐射法，热水提大孔吸附树脂纯化法等。无论采用什 么方法,在实验的操作过程中，我们必须做到操作规范，严谨 细致，实事求是。
3、 结果与分析 、
从表3可以看出，在可见光下，芦丁和槲皮素的色 斑均呈现黄色，在253.7 nm紫外灯下，芦丁呈亮绿 色，槲皮素呈亮黄色。再加入1%三氯化铝-乙醇溶 液，荧光斑点的亮度更加明显。 主要原因是因为芦丁和槲皮素的区别在于芦丁水解 后失去了糖苷，其本身的结构发生了变化，故在紫 外灯光的照射下呈现出不同的颜色。 水提法 取20 g 槐花米按水提法的流程操作，可提 取出粗产品，收率仅为5.32 %。 碱液提取法 在加入石灰水中煮沸时, 调节不同酸 度，得酸度对产品质量的影响（见表4 ）
2 .色谱鉴定 色谱鉴定
点样：取新华一号滤纸，距下端3厘米处用铅 笔划线，为起始线，隔1.5厘米处点样品。将 点好样品的滤纸挂在层析缸中饱和半小时， 在上行展开。 芦丁乙醇溶液 b. 精制槲皮素乙醇溶液 展开剂：正丁醇-醋酸-水（4:1:5，上层） 2.2.2 显色：a. 可见光下观察色斑，紫外灯 下观察荧光斑。 1%三氯化铝-乙醇溶液，在观察荧光斑点。
由表4可知，最佳提取酸度为pH= 8～9。pH＜9，煮沸时间 稍长，可使芦丁水解；pH＜8，芦丁溶解不完全。 有机溶
剂回流法百度文库
适宜的回流时间为5 h～6 h，结果见表5 结果见表6。
三种方法的收率
三种方法产品纯度结果见表7
三、结果分析与讨论
1.水提法装置简单，操作方便，也是平常中药的煎 服方法该法不足之处在于产率太低, 原料浪费严重。 2.用碱水提取可得粗产品，提取效率较水提法有明 显提高，但该提取液通常因含有大量粘稠的杂质而 难以过滤，而且整个过程对酸度控制要求较高。 3.从提高芦丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流法 要优于以上两种方法，且乙醇可以回收再利用，其 回收率达到92.3%。通过实验可得该方法最佳操作 条件为：槐花米尽可能研细，加0.8%碳酸氢钠，20 倍乙醇，回流4 h～5 h，浓缩回收溶剂。浓缩液加 等量蒸馏水和2%的活性炭，调节使pH=7，冷却、 结晶、过滤、烘干，产品收率可达10.1%。
2011届本科毕业论文 届本科毕业论文
芦丁的提取分离及鉴定
作者姓名：张娜娜 指导老师：胡浩斌 学 院：化学化工学院 班 级：07化教（2）班 日 期：2011年4月
综
述
本实验以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取 方法，掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮甙， 甙元和糖的部分鉴定方法。采用了水提法、 碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流 法对芦丁进行了提取分离，并对其进行定性 分析及色谱鉴定。水提法、碱水(石灰水) 提 取法、有机溶剂(乙醇) 回流法，三种方法均 可制的芦丁，且质量合格。从提高芦丁产率 和纯度的角度出发，乙醇回流是较理想的提 取方法。制得芦丁产率高，且测定方法简单、 迅速、灵敏度高。
OH
HO
O
O
OH
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CH2O
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O OH
O
OH OH OH OH
OH
OH
OH
O
OH OH O
槲皮素（Quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶， mp313～314 ℃（2分子结晶水），316 ℃（无水物）。能溶 于冷乙醇（1:290），易溶于沸乙醇（1:23），可溶于甲醇、 乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等 溶剂。
3. 芦丁的提取
A. 水提法 B.碱水(石灰水) 提取法 C.有机溶剂(乙醇) 回流法
4 . 芦丁的精制
重结晶 将粗制芦丁研细，加95%乙醇回流溶解（每2 g芦 丁需加70 ml左右乙醇）趁热过滤，取1/2滤液浓缩 至原体积的1/3-1/4，放置，析出结晶，抽滤，干燥 称重，得精制芦丁，计算得率。 芦丁的水解 取另1/2量芦丁滤液，加入1 mol硫酸（80 ml）水 浴回流一小时（用聚酰胺薄层检查水解是否完全） 待全部水解后，蒸去乙醇，冷却、析出槲皮素、抽 滤、滤液内含糖。槲皮素沉淀经水洗、抽干、干燥 称重，计算得。再用乙醇重结晶一次，得黄色针晶， 为槲皮素精品。
二、鉴定
1 性质实验 盐酸-镁粉反应：取芦丁少量，加乙醇数滴溶解， 再加浓盐酸5滴，最后加少量镁粉，观察颜色变化。 醋酸铅沉淀反应：取芦丁少许溶于热水，加醋酸 铅试剂数滴，观察结果。 Molish反应：分别取芦丁和槲皮素少量，分别置 于两支试管中各加乙醇数滴，加1-萘酚几滴摇匀， 倾斜试管，沿管壁滴加浓硫酸5滴，静置，观察二 层溶液界面处的颜色变化