最新实验一、槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
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实验一 芦丁的提取、精制与鉴定一、实验目的与要求l 、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法;2.掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷, 苷元和糖部分的鉴定方法。
R=-glu-rha 芦丁 R=H 槲皮素芦丁溶解度: 冷水1: 8000 热水1: 200冷乙醇1: 300 热乙醇1: 30难溶于乙酸乙酯、丙酮, 不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。
槲皮素溶解度: 冷乙醇1: 650 热乙醇1: 60可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶, 不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中。
二、实验原理本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质, 用热水提取和精制;芸香苷属于苷类化合物, 可被稀酸水解成槲皮素(苷元), 葡萄糖和鼠李糖。
芦丁和槲皮素通过化学反应, 色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。
三、实验内容(一)提取分离和纯化l 、芦丁的提取:2.精制(重结晶):3、芦丁的水解:OO OHOH OROH HO流程图如下:槐米(20g)研碎, 于500ml烧杯中,加350, 250ml水煮沸15min,10min棉花过滤150ml, 1%H2SO4 80倍水加热溶解, 趁热抽滤直火加热水解30min放冷抽滤, 沉淀水洗至中性不溶物(弃去)滤液放置 1-1.5h, 抽滤精品芦丁(水浴浓缩至2ml)(二)鉴定l、化学检识取芦丁和槲皮素少量, 置2支试管中分别加乙醇8ml使溶解(1)盐酸—镁粉反应: 取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加浓盐酸5滴, 再加少量镁粉, 观察颜色变化。
(2)Molish反应: 取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加10%α—萘酚0.5ml摇匀, 倾斜试管, 沿管壁缓缓滴加浓硫酸0.5ml, 静置, 观察二层溶液界面处颜色变化, 并比较芦丁和槲皮素的区别。
(3)FeCL3反应: 取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加1%三氯化铁乙醇液几滴, 观察颜色变化。
槐米中芦丁的提取与分离摘要:利用芦丁在沸水中溶解度大的性质将其在沸水中进行提取,而芦丁与其他水溶性化合物可借助聚酰胺柱色谱予以分离。
关键词:槐花米;芦丁;槲皮素;提取;分离;鉴定1 引言芦丁(Rutin )又称芸香苷,广泛存在于植物界中,现已发现含芦丁的植物至少在70种以上,如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。
尤以槐花米(为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高(含量可达12-16%),可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由槲皮素(Quercetin )3位上的羟基与芸香糖(Rutinose )〔葡萄糖(Glucose )与鼠李糖(Rhamnose )组成的双糖〕脱水形成的苷。
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含有3分子结晶水,熔点为174~178℃,不含水的芦丁熔点为188℃。
含2分子结晶,熔点为313~314℃。
水溶解度:冷水中为1:10000;沸水中1:200;冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。
不含结晶水的槲皮素熔点为316℃,它们的结构式如下:OHOHO O OHO OOH OHOH OHOH CH 2CH 3OH O O OH芦丁(Rutin )O OHO OH OHOH槲皮素(Quercetin )芦丁分子中具有较多酚羟基,显弱酸性,易溶于碱液,酸化后又可析出,因此,本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。
2 实验内容与步骤2.1仪器与试剂仪器:紫外灯 蒸馏装置一套 250mL 烧杯(一只) 500mL 烧杯(两只) 100mL 三角瓶(两只) 纱布 色谱柱(Ф1.5×30cm ) 玻璃板 硅胶G 板试剂:甲醇 70%工业乙醇 槐米 层析用聚酰胺(60-100目) 芦丁标准样2.2 芦丁的提取将粉碎好的槐米10g 倒入500mL 烧杯中,加沸水150mL ,煮沸1h(在煮沸的过程中可补加水),趁热用纱布过滤,残渣加入100mL 水,再煮沸30分钟,共进行两次,将两次滤液混合,放置,冷却,即有大量黄色沉淀生成,抽滤。
实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定(一)实验目的要求1.制备芦丁,供药用。
2.通过芦丁的制备,掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。
3.熟悉重结晶技巧。
4.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
(二)实验的基本原理1.芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基,呈酚酸性,能在碱水中溶解的性质,可用碱性溶剂进行提取,提取液加酸后可沉淀析出(碱溶酸沉法)。
也可利用芦丁在冷水中溶解度小,在热水中溶解度大的性质进行提取。
2. 芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小,在热乙醇中溶解度大,以及在热水中溶解度大,在冷水中溶解度小的性质分离。
芦丁用溶剂加热溶解后,趁热抽滤,滤液放冷后能析出而达到分离的目的(如不纯可再重复操作进行分离)。
也可采用醇溶水沉法进行精制。
3. 芦丁的鉴定原理(1)利用吸附薄层色谱的分离原理,芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开,显色,以达到鉴定芦丁的目的。
(2)通过专属的化学显色反应(如三氯化铝显色反应),确定芦丁的成分类型(黄酮类)。
(三) 实验内容1. 用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。
2. 用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。
3. 溶剂重结晶精制芦丁。
4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁(四) 实验药材仪器与试剂1. 实验药材槐米20g。
2. 仪器:磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯,1000ml烧杯,50ml烧杯,250ml 园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置,布氏漏斗,抽滤瓶、层析缸等。
3. 试剂:硼砂、氧化钙、HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。
(五)实验步骤1.提取(水提取法)称取槐米粗粉20g,在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中,加水200ml,用磁力加热搅拌器加热煮沸30min,趁热过滤。
残渣同法操作一次,合并两次滤液,放置冰箱中析晶,待全部析出后,减压抽滤,用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶,抽干,得粗制芦丁,干燥,称重,计算得率。
槐米中芦丁的提取、提纯和鉴定一、实验目的1.掌握芦丁提取和提纯的基本原理和方法。
2.掌握重结晶及过滤等基本操作。
3.学习芦丁及槲(hū)皮素的鉴定方法。
二、实验原理芦丁(Rutin)亦称芸香苷,广泛存在于植物组织中,其中以槐花米和荞麦叶含量较高,槐米中含量高达12~16%,是提取芦丁的最佳原料。
芦丁有减少毛细血管通透性的作用,临床上用作毛细血管止血药和高血压病的辅助治疗药物。
近年来,芦丁及槲皮素作为抗癌药物的研究,取得了大量成果。
芦丁属黄酮苷,其结构如下:芦丁为淡黄色针状结晶,含有三分子结晶水(C27H36O16· 3 H2O),熔点为177~178 ℃,无水物熔点为190~192 ℃,难溶于冷水,微溶于冷乙醇,可溶于热水和热乙醇中。
此外,还难溶于乙酸乙酯、丙酮,不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。
易溶于碱性溶液中呈黄色,酸化后又析出。
本实验利用芦丁在冷热水和冷热乙醇中溶解度的差异进行提取与精制。
芦丁在不同溶剂中的溶液度:水CH3OH CH3CH2OH 吡啶冷0.0013 l.0 0.36 8.5热0.55 11.2 3.5 易溶芦丁的紫外吸收波长(CH3OH溶液):λmax = 259mm,266nm sh,299nm sh,359nm。
槲皮素(Quercetin)是芦丁水解得到的黄酮苷元,是芦丁药用功能的主要部分,大多数黄酮类物质都具有较高的药用价值。
槲皮素为黄色结晶,含两分子结晶水(C15H10O7·2 H2O),熔点313~314 ℃,无水物熔点为316 ℃。
可溶于甲醇、乙酸、吡啶、丙酮、乙酸乙酯等溶剂,不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。
在沸腾的无水乙醇中溶解度为4.4 ,在室温下乙醇中的溶解度为0.35 。
可利用槲皮素在冷热乙醇中的溶解度差进行提纯。
槲皮素的结构式如下:槲皮素的紫外吸收波长(CH3OH溶液):λmax = 259nm,266nm,299nm ,359nm。
实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定一、概述槐米系豆科植物槐树(Sophora japonica L.)的花蕾(槐米)。
具有清热、凉血、止血的功效,用于治疗便血、痔血,尿血、血淋,崩漏,赤血痢下,风热目赤,痛疽疮毒,还可用于预防中风。
近年来被用作治疗高血压的辅助药物。
药理实验证明,槐花米具有调节毛细血管的渗透作用,抗炎作用,解痉、抗渍疡作用,影响脂质代谢,抗菌等多种生物活性。
槐花米中主要含有黄酮苷,皂苷、甾醇和鞣质等成分,其中芦丁(Rutin)含量最高,达12~20%。
主要化学成分的结构及理化性质:芦丁(rutin):C27H30O16·3H2O,浅黄色针状结晶,mp174~178℃(含三分子水);188℃(无水物)。
难溶于冷水(1:8000~10000),可溶于热水(1:180~200),热甲醇(1:10),冷甲醇(1:100),热乙醇(1:60),冷乙醇(1:650);难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等,易溶于碱液。
槲皮素(quercetin):C15H10O7·2H2O,黄色结晶,mp313~314℃(2分子结晶水),316℃(无水物)。
能溶于冷乙醇(1:290),易溶于沸乙醇(1:23),可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等;难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
二、实验部分(一)实验目的1、通过芦丁的制备,掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。
2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。
3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法,聚酰胺薄膜的操作方法,电子天平的使用方法。
(二)实验原理1、芦丁的提取原理:芦丁中含有多个酚羟基,具有酸性,故用碱提酸沉法。
2、芦丁的分离原理:芦丁在沸水中溶解,在冷水中析出。
3、芦丁的鉴定原理:芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元,用Molish反应可以进行鉴别,也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析,Rf值也应不同。
(三)实验药材、仪器与试剂1、药材:槐米50g(每组)。
槐米中芦丁的实验报告槐米中芦丁的实验报告槐米是一种常见的食材,被广泛应用于中餐和糕点中。
近年来,人们开始对槐米中的营养成分进行深入研究。
其中,槐米中的芦丁引起了科学家们的兴趣。
芦丁是一种天然的黄酮类化合物,具有多种保健功效。
本实验旨在探究槐米中芦丁的含量及其对人体的潜在益处。
实验一:槐米中芦丁的提取首先,我们收集了新鲜的槐米样本,并将其研磨成粉末状。
然后,我们使用乙醇作为溶剂,将槐米粉末浸泡在其中。
经过搅拌和过滤,我们得到了槐米乙醇提取物。
接下来,我们使用高效液相色谱法(HPLC)对槐米乙醇提取物中的芦丁进行定量分析。
结果显示,槐米中的芦丁含量为每克10毫克。
这一发现表明,槐米是一种富含芦丁的食材。
实验二:芦丁的抗氧化性质芦丁被广泛认为具有抗氧化作用,能够帮助人体对抗自由基的侵害。
为了验证这一假设,我们进行了一系列的实验。
首先,我们使用2,2-联氨基二苯基-1-苦肼(DPPH)自由基清除实验来评估芦丁的抗氧化能力。
结果显示,芦丁能够有效清除DPPH自由基,表明其具有明显的抗氧化活性。
其次,我们进行了DNA损伤实验。
通过将DNA暴露在过氧化氢的作用下,我们模拟了细胞内自由基对DNA的损伤。
然后,我们添加不同浓度的芦丁溶液,并观察DNA的损伤程度。
结果显示,芦丁能够显著减轻DNA的损伤,说明其具有保护细胞核酸免受自由基攻击的能力。
实验三:芦丁的抗炎作用芦丁还被认为具有抗炎作用,能够减轻炎症反应。
为了验证这一假设,我们进行了一系列的实验。
首先,我们使用细胞培养技术,将人类巨噬细胞暴露在炎症刺激物(如细菌脂多糖)的作用下。
然后,我们添加不同浓度的芦丁溶液,并观察细胞的炎症反应。
结果显示,芦丁能够显著抑制炎症反应,并减少炎性细胞因子的释放。
其次,我们使用小鼠模型进行了体内实验。
我们给小鼠注射炎症刺激物,并同时给予不同剂量的芦丁。
结果显示,芦丁能够显著减轻小鼠的炎症反应,表明其具有抗炎作用。
结论通过本实验,我们发现槐米中富含芦丁,并且芦丁具有抗氧化和抗炎作用。
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定实验一预试;苷的碱提取,酸沉淀;薄层层析铺板。
实验二产品的精制:重结晶;苷的水解。
实验三苷、苷元的定性鉴定;甙、甙元的TLC 鉴定;糖的纸层析鉴定。
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定(一)预试;苷的碱提取,酸沉淀;薄层层析铺板。
(二)产品的精制:重结晶;苷的水解。
(三)苷、苷元的定性鉴定;甙、甙元的TLC鉴定;糖的纸层析鉴定。
教学目的:1 •掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法。
2 •掌握化学鉴别试验、苷水解、薄层层检查等手段在苷类结构鉴定上的作用。
已知重要成分及其性质1. 芦丁(芸香苷,rutin )淡黄色针晶,水中结晶者含3分结晶水,C27H30O16 3H2O lOOmmHg和11O C 加热12小时后,变为无水物,无水物于25C变棕,115〜7C软化,214〜5C发泡分解,1g芦丁溶于约300ml冷水,200ml沸水,7ml沸甲醇,溶吡啶,甲酰胺和碱液,微溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯,不溶于氯仿,二硫化碳、乙醚、苯和石油醚。
2. 槲皮素(Guereetin )为芦丁的苷元,C15H10O7,MW302.23 ;含二分子结晶水为黄色针晶,(稀乙醇),5〜7C失水,314C解,1g溶于290ml无水乙醇、23ml沸乙醇,溶于冰醋般在碱水中溶解显黄色,几不溶于水R=一glu—rha 芦丁R= — 0H 槲皮素3. 皂苷(Saponin)粗品为白色粉末,mp 210C〜20C(dec)。
易溶于吡啶。
能溶于200倍的甲醇,酸水解得下列两种苷元及糖。
糖为葡萄糖,葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。
(1)白桦酯醇(Betulin)无色针晶,mp215〜2C,能溶于醋酸,丙酮、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯等;难溶于石油醚和水(2)槐花二醇(Sophoradiol)无色针晶, 醚、苯、丙酮、甲醇、难溶于水。
整套实验的过程:预试一一提取分离一一鉴定实验一预试;甙的碱提取,酸沉淀实验目的通过系统预试,了解检品中含有哪些类型的成分,可能含有哪些化学类型的成分,为进一步提取分离有效成分提供线索。
实验名称:槐米中芦丁的提取与鉴定实验目的:1. 掌握槐米中芦丁的提取方法。
2. 了解芦丁的分离和纯化过程。
3. 学会使用薄层色谱法和显色反应对芦丁进行鉴定。
实验原理:芦丁是一种黄酮类化合物,广泛存在于槐米中。
芦丁具有多种生物活性,如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
本实验采用碱提法、酸沉法、冷却过饱和法等方法提取槐米中的芦丁,并通过薄层色谱法和显色反应对其进行鉴定。
实验材料与仪器:1. 实验材料:槐米(干燥)、芦丁标准品、无水乙醇、氢氧化钠、盐酸、乙酸乙酯、氯仿、硅胶G、显色剂等。
2. 实验仪器:电热套、磁力搅拌器、抽滤装置、分析天平、薄层色谱仪、紫外灯等。
实验步骤:1. 槐米粗提液的制备:将槐米粉末用无水乙醇进行提取,提取液在磁力搅拌器上搅拌,静置过夜。
将提取液过滤,收集滤液。
2. 芦丁的分离和纯化:将滤液用氢氧化钠溶液调节pH值至碱性,静置使芦丁沉淀。
将沉淀物过滤,用无水乙醇洗涤沉淀,收集沉淀物。
将沉淀物用盐酸溶液溶解,调节pH值至中性。
将溶液通过活性炭脱色,过滤收集滤液。
将滤液通过酸沉法使芦丁沉淀,收集沉淀物。
3. 芦丁的鉴定:将芦丁标准品和提取的芦丁样品分别点样于同一块薄层板上。
将薄层板放入展开剂中展开,取出晾干。
在紫外灯下观察,芦丁样品与标准品在同一位置上有相同颜色的斑点。
实验结果与分析:1. 通过碱提法、酸沉法、冷却过饱和法等方法,成功提取了槐米中的芦丁。
2. 通过薄层色谱法和显色反应,鉴定出提取的芦丁样品与标准品在同一位置上有相同颜色的斑点,证明提取的样品中含有芦丁。
结论:1. 本实验成功提取了槐米中的芦丁,并通过薄层色谱法和显色反应对其进行了鉴定。
2. 槐米是一种富含芦丁的植物资源,具有一定的药用价值。
注意事项:1. 在实验过程中,注意安全操作,防止化学品溅入眼睛或皮肤。
2. 在提取过程中,严格控制pH值,以确保芦丁的稳定性和提取效率。
3. 在鉴定过程中,注意观察斑点颜色和位置,以确保鉴定结果的准确性。
槐花米中芦丁的提取与鉴定背景知识芦丁(Rutin)又称芸香苷,普遍存在于植物界中,现已发觉含芦丁的植物至少在70种以上,如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。
尤以槐花米(为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高(含量可达12-16%),可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由斛皮素(Quercetin)3位上的羟基与芸香糖(Rutinose)〔葡萄糖(Glucose)与鼠李糖(Rhamnose)组成的双糖〕脱水形成的苷。
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含有3分子的结晶水,熔点为174~178℃,无水物188~190℃。
溶解度:冷水中为1:10 000;沸水中1:200;冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。
芦丁分子中具有较多酚羟基,显弱酸性,易溶于碱液,酸化后又可析出,因此,本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。
芦丁具有维生素P样作用。
能维持血管的正常通透性,减低血管的脆性,缩短流血时刻,可作为高血压病的辅助医治剂。
亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。
一、实验目的通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作;熟悉芦丁、槲皮素的结构性质和检识方式。
二、实验要求独立完成实验,从槐花米中提掏出芦丁并进行鉴定。
三、实验原理芦丁属黄酮类化合物,分子中有较多酚羟基,具弱酸性,易溶于热碱中,酸化后又析出,因此能够用碱溶酸沉的方式提取芦丁,又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。
四、实验材料和器皿【器皿】烧杯(500ml)2个,试管2个,布氏漏斗1个,玻璃棒1根,抽滤瓶1个,滴管,移液管(10ml)1根,洗耳球1个,滤纸,pH试纸,电热炉,真空抽滤机。
【材料】槐米花30 g,饱和石灰水,%硼砂水溶液,镁粉,pH试纸,浓盐酸,95%乙醇,10% α萘酚乙醇溶液,浓硫酸,蒸馏水。
※实验三槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定芦丁(Rutin)广泛存在于植物界中,现已发现含芦丁的植物至少在70种以上,如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。
尤以槐花米(为植物Sophora japonica的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。
槐花米为豆科植物槐花的未开放花蕾。
味苦性凉,具清热、凉血、止血之功。
槐花的主要化学成分为芦丁,又名芸香甙,含量可达12-16%。
芦丁是由槲皮素(Quercetin)3位上的羟基与芸香糖(Rutinose)〔为葡萄糖(Glucose)与鼠李糖(Rhamnose)组成的双糖〕脱水合成的苷。
为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含有三分子的结晶水,熔点为174~178℃,无水物188~190℃。
溶解度:冷水中为1:10000;热水中1:200;冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。
芦丁具有维生素P样作用。
可降低毛细管前壁的脆性和调节渗透性,有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性,临床上用作毛细管脆性引起的出血症,并常用作防治高血压病的辅助治疗剂。
现在国处也常用芦丁作食品及饮料的染色剂。
一、实验目的1.通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2.掌握芦丁的一种提取、精制方法及提制过程中防止甙水解的方法。
3. 掌握黄酮甙水解生成甙元的方法及二者之间的分离。
4.熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方法。
二、实验原理本实验主要是利用芸香苷中含有较多的酚羟基,可溶于碱中,加酸酸化后又可析出芸香苷结晶的性质,采用碱溶酸沉法提取,并用芸香苷对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
芦丁可被稀酸水解,生成槲皮素及葡萄糖、李糖,并能通过纸层析鉴定。
芦丁及槲皮素还可通过化学反应及紫外光谱鉴定。
三、实验材料槐米、石灰乳、0.4%硼砂水溶液、2%的硫酸溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、1%的氢氧化钠溶液、1%的三氯化铝乙醇溶液、1%的葡萄糖溶液、1%的鼠李糖溶液、1%芸香苷乙醇溶液、1%槲皮素乙醇溶液、95%乙醇、碳酸钡、广泛pH试纸、中速层析滤纸等。
实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
一、概述
槐米系豆科植物槐树(Sophora japonicaL.)的花蕾(槐米)。
具有清热、凉血、止血的功效,用于治疗便血、痔血,尿血、血淋,崩漏,赤血痢下,风热目赤,痛疽疮毒,还可用于预防中风。
近年来被用作治疗高血压的辅助药物。
药理实验证明,槐花米具有调节毛细血管的渗透作用,抗炎作用,解痉、抗渍疡作用,影响脂质代谢,抗菌等多种生物活性。
槐花米中主要含有黄酮苷,皂苷、甾醇和鞣质等成分,其中芦丁(Rutin)含量最高,达12~20%。
主要化学成分的结构及理化性质:
xx(rutin):C
27H
30O
16·3H
2O,浅黄色针状结晶,mp174~178℃(含三分子水);188℃(无水物)。
难溶于冷水(1:8000~10000),可溶于热水(1:180~200),热甲醇(1:10),冷甲醇(1:100),热乙醇(1:60),冷乙醇(1:650);难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等,易溶于碱液。
槲皮素(quercetin):C
15H
10O
7·2H
2O,黄色结晶,mp313~314℃(2分子结晶水),316℃(无水物)。
能溶于冷乙醇(1:290),易溶于沸乙醇(1:23),可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等;难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
二、实验部分
(一)实验目的
1、通过芦丁的制备,掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。
2、掌握酸水解将芦xx生成槲皮素的方法。
3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法,聚酰胺薄膜的操作方法,电子天平的使用方法。
(二)实验原理
1、芦丁的提取原理:芦丁中含有多个酚羟基,具有酸性,故用碱提酸沉法。
2、芦丁的分离原理:芦丁在沸水中溶解,在冷水中析出。
3、芦丁的鉴定原理:芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元,用Molish反应可以进行鉴别,也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析,Rf值也应不同。
(三)实验药材、仪器与试剂
1、药材:槐米50g(每组)。
2、仪器:电炉子、不锈钢锅、量杯、1000ml烧杯、冰箱、滤纸、PH试纸、减压抽滤装置、锥形瓶、玻璃漏斗、纱布、电子天平、聚酰胺薄膜。
3、试剂:0.4%硼砂水溶液、石灰乳、2%硫酸溶液、浓盐酸、蒸馏水、镁粉、浓硫酸、甲醇、90%乙醇、1%三氯化铝醇溶液、醋酸镁乙醇液等。
(四)实验方法
1、xx的提取:(碱提酸沉法)
取槐米50g,加0.4%硼砂水溶液400ml至小锅中,加热煮沸,用石灰乳调节PH=9,加热微沸30min,随时补充失去的水分及控制PH值,四层纱布过
滤,药渣再重复处理一次(不用调PH值)。
合并两次滤液,用浓盐酸调
PH=3,放入冰箱中析晶。
2、xx的精制:(水重结晶法)
(1)抽滤:用虹吸法先除去上清液,再进行抽滤,可更换滤纸。
(2)精制:取全部芦丁粗品,加入蒸馏水800ml,煮沸至全部溶解
(15min),趁热抽滤,放入冰箱析晶。
3、xx的水解:(酸水解法)
取芦丁1g,加入2%硫酸150ml,小火加热微沸30min,注意观察现象:溶液由浑浊变澄清,逐渐析出黄色结晶,抽滤,得到槲皮素粗品。
剩下的芦丁要妥善保管,下次课还要带来。
4、鉴别反应
(1)称槲皮素重量,计算水解率。
(2)薄层色谱鉴定
样品:自制芦丁及槲皮素的1mg/ml甲醇溶液。
(每组称取20mg)
对照品:芦丁及槲皮素对照品的1mg/ml甲醇溶液。
展开剂:90%乙醇溶液
显色:喷三氯化铝溶液,紫外光(365nm)观察荧光。
实验结果记录:观察斑点颜色,记录图谱并计算Rf值。
(3)显色反应
①Molish反应:取芸香苷及槲皮素样品分别1ml,加入3%α-萘酚溶液1滴,振摇,沿壁滴加浓硫酸1ml,观察现象。
②盐酸-镁粉反应:分别取样品1ml,加入浓盐酸2-3滴,再加入少许镁粉,观察现象。
③纸片反应:取一张滤纸,分别滴加样品1滴,在上面再滴加三氯化铝溶液1滴,观察现象。
(同理,再用醋酸镁显色)
(五)注意事项
1、提取时控制小火加热,微沸即可。
2、加热完成后要放冷抽滤。
3、用石灰水调节芦丁提取溶液的PH,既可以达到碱提取芦丁的目的,还可以除去槐米中含有的大量粘液质。
但钙离子浓度及pH值均不宜过高,否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀,同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。
4、用HCl调PH时,应注意PH不要过低,因为PH过低(PH2以下)会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解,同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏,导致收率下降。
5、Molish反应中加入浓硫酸后不可振摇。
6、纸片反应待溶液干燥后观察荧光效果好,否则荧光颜色淡或没有。
(六)思考题
1、如果碱或酸加过量会对实验有何影响?。