基因工程试题

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基因工程

一、判断题

(1)迄今发现的质粒DNA都是环状的。 (╳)

(2)用同一种酶切割载体和外源DNA得到粘性末端后，为防止它自身环化，要用CIP将它脱磷酸。(╳)

(3)完整的总RNA样品电泳应呈现三条带-28S、18S和5S。 (√)

(4)由同尾酶产生的粘性末端序列很容易重新连接，但是两种同尾酶消化产生的粘性末端重新连接形成的新片段将不能被该两种酶的任何一种所识别。 (√)

(5)Mg2+浓度对PCR扩增效率影响极大，浓度过高可能降低PCR扩增的特异性；浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败。 (√)

(6)DNA连接子是一段人工合成的只有平头末端的长度一般为8bp~12bp双链核苷酸片段，其主要作用是在DNA末端添加一个限制性核酸内切酶识别位点，产生粘性末端便于连接。 (√)

(7)在外源DNA导入细菌的方法中，CaCl2转化法的转化率比电转化转化率高。 (╳)

(8)基因文库构建的材料来源可以是染色体DNA也可以是mRNA。 (√)

(9)T-DNA区左右边界各为25bp的重复序列，是完全保守的，左边界缺失突变仍能致癌；但右边界缺失则不能致癌。 (√)

(10)T4DNA连接酶和E.coil连接酶作用时都需要ATP和NAD-作为辅助因子。 (╳)

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二、选择题

1．在切口位移标记DNA探针时只能使用 (B)

A.Klenow酶 B.DNA聚合酶 C.DNA聚合酶Ⅱ D.DNA聚合酶Ⅲ

2．在利用lcaZ失活的显色反应筛选法中，X-gal的作用是 (Ｄ)

A.作为酶的作用底物 B.诱导宿主的ω肽的合成

C.诱导宿主α肽的合成 D.作为显色反应的指示剂

3.现在关于多克隆位点(ＭＣＳ)的描述，不正确的一句是 (Ａ)

A.仅位于质粒载体中 B.具有多种酶的识别序列

C.不同酶的识别序列可以有重叠 D.一般是人工合成后添加到载体中

4.下列那种克隆载体对外源ＤＮＡ的容灾量最大 (Ｃ)

A.质粒 B.黏粒 C.酵母人工染色体 D.λ噬菌体

5.同一种质粒ＤＮＡ，以三种不同形式存在，电流时它们的迁移率是

(Ｂ)

A.OC DNA>SC DNA>L DNA B.SC DNA>L DNA>OC DNA

C.L DNA>OC DNA>SC DNA D.SC DNA>OC DNA>L DNA

6.下列关于cＤＮＡ文库的特点说法不正确的是 (Ｃ)

A.不含内含子序列 B.可以在细菌中直接表达

C.包含了所有基因 D.比ＤＮＡ文库小的多，容易构建

7.噬菌体的核酸主要存在形式 (Ａ)

A.双链线型ＤＮＡ B.双链环型ＤＮＡ C.单链环型ＤＮＡ

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D.单链线型ＤＮＡ

8.下列载体和外源ＤＮＡ插入片段的连接结果导入受体细胞后，哪种早受体细胞中不能存活 (Ｂ)

A.载体之间相互连接 B.插入片段互相连接 C.一个载体与几个插入片段重组

D.几个载体与一个插入片段重组 Ｅ.载体自身环化连接

9.在ＰＣＲ引物设计时，下列说法错误的是 (Ｄ)

A.一般在引物的５’端可加入限制酶位点序列，以便进行克隆 B.防止引物自身形成二级结构

C.若３’端最末的碱基不肯定，可以次黄嘌呤核苷取代的引物

D.５’端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格配对

三.填空题

1.只要知道基因组中某一特定核苷酸组成，用（PCR）技术可以将这段DNA进行百倍的扩增。

2.就克隆一个基因来说，最简单的质粒必须包括三部分，（复制起始位点）（多克隆位点）（筛选标记），另外，理想的质粒具有低分子量。

3.植物受体细胞最突出的优点是其（全能性），即一个分离的活细胞在合适的培养条件下，较容易再分化成（植株）。

4.基因工程诞生的三大理论基础是（证实了DNA是遗传物质）（揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制）（遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定）

5.可以根据需要进行体外转录、克隆、测序及基因表达方面的基因操作的载体是（多功能载体）

6.表达载体和克隆载体的主要区别是，表达载体具有（强启动子）（核苷酸结合位点序列）（转录终止序列），克隆载体没有。

7.根据已知基因序列或同源基因序列从基因组文库分离目的基因最直接的方法是（核酸探针进行杂交筛选）

8.向真核细胞转移基因的方法有两大类，一类（需借助载体），另一类（无

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需借助载体）

在合成cDNA时，先以mRNA为模板用（反转录酶）合成cDNA第一链，后用到s1核酸酶，作用是（除去mRNA）

9进行双酶切时，若两酶的最适缓冲液不同，则对缓冲液一般先用（低）盐缓冲液的酶进行酶切，然后用（高）盐缓冲液。

10.目前，基因工程研究的最深入，使用的最多的载体是经过构建的（质粒载体）（噬菌体载体）

11.基因工程诞生的三大技术发明是（限制性核酸内切酶的发现与DNA的切割）（DNA连接酶的发现与DNA片段的连接）（基因工程载体的研究与应用）

四.写出下列英文缩写的中文名称

MCS:多克隆位点 BAC:细菌人工染色体 PAC:P１派生人工染色体 MAC:哺乳动物人工染色体 SDS:十二烷基磺酸钠 EDTA:乙二胺四乙酸

RT-PCR:逆转录PCR IPCR:反向PCR COP-PCR:竞争PCR SAGE:基因表达 EST：序列表达标签 RDA:代表性类别分析法 TPTG：异丙基β-D-硫代半乳糖苷 YAC：酵母人工染色体 DEPC：焦碳酸二乙酯 CTAB：十六烷基三甲基溴化铵

五.名词解释

基因工程:是在分子水平上进行的遗传操作，指将一种或多种生物体（供体）的基因或基因组提取出来,或者人工合成基因，按照人们的愿望，进行严密的设计，经过体外加工重组,转移到另一种生物体（受体）的细胞内，使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的过程。

限制性内切酶:是一类能够识别双链DNA分子中某特定的核苷酸序列，并能精确特异地切割DNA分子的核酸内切酶.

基因工程载体:将外源DNA或基因携带入宿主细胞的核酸工具。

多克隆位点:是指人工构建的，紧密排列的具有单一多种限制酶识别序列的一段DNA序列，可方便用于外源DNA片段的插入。

穿梭质粒载体:指一类由人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。

克隆载体:用于承载、克隆、转移目的基因，能自主复制的DNA分子位最简单的载体。

多功能载体:可以根据需要进行体外转录、克隆、测序以及基因表达等方面的基因操作，使研究者避免不少繁琐的重复操作提高了工作效率。

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表达载体:携带DNA片段进入宿主细胞进行复制，并进行转录、翻译的载体。

插入型载体:外源DNA的插入到限制酶位点，一般由于构建cDNA文库，可容纳10kb。

Cos位点:λ噬菌体基因组是一条线性双链DNA分子，在λDNA分子的两端的5’链上各有12个碱基的单链互补粘性末端，当λDNA进入细菌细胞后便迅速地通过粘性末端配对形成双链环状的DNA的分子。

Southern bloting:将DNA片段经过电泳后，从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上，然后与探针杂交。被检测的对象为DNA，探针为DNA或RNA.

Northern bloting:将DNA片段经过电泳后，从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上，然后与探针杂交。被检测的对象为RNA，探针为DNA或RNA.

Western bloting:利用SD-PAGE电泳，将各种蛋白质分离开后，通过电泳转移印记到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上。然后利用特异抗体进行特异酶联免疫反应。被检测的对象是蛋白质，探针为特异抗体。

菌落原位杂交:指将菌落或菌落斑转移到硝酸纤维素滤膜上，原味裂解细胞后使核酸固定在膜上，然后与探针杂交。

平台效应:是指PCR循环的后期，合成的产物达到0.3 ~1.0 pmol的水平，由于产物的堆积，使原来以指数增加的速率变成平坦曲线，扩增产物不再随循环次数而明显上升。

目的基因:准备要分离、改造、扩增或表达的基因通常称之为目的基因。

基因库:特定生物体全基因组的集合。

基因文库:从特定生物个体中分离的全部基因，这些基因以克隆的形式存在一个受体菌的群体之中，这个群体即为这种生物的基因文库。

表达序列标签:是指基因序列中一段能特异地标记或表征基因的序列，通常它含有足够的结构信息以显示出该基因与其他基因的差异，长度一般为100~500bp。

差异杂交法:分别制备两种细胞群体的mRNA提取物，并以此构建减数文库的方式来进行目的基因分离克隆的。

星号活性:限制酶在一些特定条件下使用时，对于底物DNA的特异性可能降低。即可以把与原来识别的特定的DNA序列不同的碱基序列切断，这个现象叫start活性。

受体细胞:从实验技术上讲是能摄取外源DNA并能使其稳定维持的细胞或从实验目的上讲是有应用价值和理论研究价值的细胞，并不是所有细胞都可用作受体细胞。

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同尾酶:有些来源不同的限制酶，识别及切割序列各不相同，但却能产出相同的粘性末端，这类限制酶称为同尾酶。

减法杂交:该技术是通过 DNA复性动力学原理富集目的基因序列，并以此构建减数文库的方式来进行目的基因分离克隆的。

蓝-白斑筛选:含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。

六.简答题

1.简述T-DNA转移至植物细胞的过程或步骤

答:a.农杆菌对植物细胞的识别和附着 b.农杆菌对植物信号物质的感受

c.农杆菌vip基因的活化 d.T-DNA复合物的产生 e.T-DNA复合物的转运

f.T-DNA整合到植物基因组中。

2.如何利用分子杂交技术从DNA、RNA和蛋白质三个不同水平进行转基因生物的鉴定

答:a.利用southern bloting 检测外源基因是否整合到染色体上b.

利用southern bloting检测外源基因是否进行转录 c. 利用westhern

bloting检测外源基因是否表达

3.简述基因工程的基本过程

答:以微生物a.从供体生物的基因组中，分离获得带有目的基因的DNA片段b.限制性核酸内切酶分别将外源DNA和载体分子切开c.DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到载体分子上形成DNA重组分子d.将DNA重组分子导入到受体细胞e.将带有重组体的细胞培养扩增，获得大量的细胞繁殖群体f.通过筛选和鉴定，获得使外源基因高效稳定表达的基因工程