AFA固定液

faa固定液配制方法FAA固定液是一种用于固定组织标本的液体。

它主要由甲醛和其他添加剂组成，能够防止组织变性、脱落和腐烂，保持组织的原始形态和结构。

FAA固定液的配制方法可以分为以下几个步骤。

准备所需的原料和器材。

配制FAA固定液需要甲醛、醋酸和乙醇等化学品，以及称量器、容器和搅拌棒等实验器材。

按照一定比例将甲醛、醋酸和乙醇等化学品加入容器中。

一般来说，FAA固定液的配制比例为40%甲醛、5%醋酸和50%乙醇。

在加入这些化学品时，需要注意安全操作，避免接触到皮肤和吸入有害气体。

然后，将容器中的化学品充分混合。

可以使用搅拌棒等工具进行搅拌，直到化学品完全溶解并均匀混合为止。

混合过程中需要注意避免溅出，以免对身体和环境造成伤害。

接下来，检查配制好的FAA固定液。

可以通过观察其颜色和澄清度来判断是否配制成功。

正常情况下，FAA固定液呈无色或微黄色，并且澄清透明。

如果出现明显的颜色变化或浑浊不清的情况，可能是配制比例不准确或化学品有问题，需要重新配制。

将配制好的FAA固定液存储在适当的容器中。

通常建议使用密封的玻璃瓶或塑料瓶进行存储，以防止挥发和泄露。

同时，需要将瓶子标记清楚，注明FAA固定液的成分和配制日期，方便使用和管理。

需要注意的是，FAA固定液是一种有毒化学品，使用时要注意安全。

在配制和使用过程中，应佩戴防护手套、口罩和护目镜等个人防护装备，避免接触到皮肤和吸入有害气体。

同时，配制和存储FAA固定液的场所应通风良好，避免有害气体积聚。

FAA固定液是一种重要的实验试剂，配制方法的正确与否直接影响到组织标本的质量。

通过按照一定比例混合甲醛、醋酸和乙醇等化学品，可以得到质量合格的FAA固定液。

在配制和使用过程中，要注意安全操作，保护好自己和实验环境。

肾移植穿刺标本冰冻切片制作方法及体会余鑫鑫;陈阳;阎红琳;袁静萍【摘要】目的介绍一种肾移植穿刺标本冰冻切片的制作方法并分享制片过程中的体会.方法选取2017年武汉大学人民医院手术室提供的肾移植供体穿刺标本10例,分别记录每例冰冻切片的制作方法,切片质量,制片时间.收到标本后,首先在样本托上均匀涂抹一层普通胶水,于冷冻锤下压平成型30s,取出样本托,将标本铺展成一条直线于样品托上之后,在放置好的标本上均匀涂抹一层普通胶水覆盖标本,并用冷冻锤轻轻压平1min,取出进行切片.切片经改良AFA固定液固定,苏木素-伊红(hematoxylin-esin staining,HE)染色制片后,显微镜下观察.结果切片完整平坦,无褶皱、卷缩、刀痕;染色核质分明,红蓝适度,对比度好;制片时间在13min左右.结论肾移植穿刺标本经两步法包埋再切片,联合改良AFA固定液固定及HE染色,大大缩短了制片时间,提高了制片质量,易于观察,且重复性好,可以推广.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2018(027)004【总页数】4页(P364-367)【关键词】肾移植穿刺标本;冰冻切片;改良AFA固定液【作者】余鑫鑫;陈阳;阎红琳;袁静萍【作者单位】武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院麻醉科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060【正文语种】中文【中图分类】R446.8冰冻切片是病理科的急诊工作，要求病理医师在很短的时间内做出正确的诊断，为手术医生下一步的手术方案提供指导。

在肾移植手术中，影响肾移植效果的因素有很多，如排斥反应、各种并发症导致的损伤等[1]，这就要求临床医生对供肾功能状态进行评估，除临床评分及肉眼评估外，病理活检是评估移植肾功能，预测器官分配或远期存活的金标准[2]。

临床将供肾穿刺标本取出送病理科进行快速病理活检，而冰冻切片质量的好坏直接决定诊断的快速、客观、准确、合理，因此，一张快速优质的供肾穿刺标本冰冻切片显得尤为关键。

常用固定液的配制1. 福尔马林-醋酸-酒精固定液(FAA)50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml可用作固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类,也不适宜作细胞学研究。

幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。

若材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林。

若材料易收缩，可稍增加冰醋酸。

久置时另加入5ml甘油以防蒸发和材料变硬。

此液又可作保存液。

固定时间最多10h。

如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果较好：50%酒精89ml + 冰醋酸6ml + 福尔马林5ml2. 福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA）福尔马林5ml + 丙酸5ml + 70%酒精90ml固定一般的植物组织，通常固定8~24h，可长久保存。

3. 酒精-醋酸-氯仿固定液（卡诺固定液，Carnoy fixative）配方Ⅰ：纯酒精3份+ 乙酸1份配方Ⅱ：纯酒精6份+乙酸1份+ 氯仿3份配方Ⅲ：甲醇6份+乙酸1份+ 氯仿3份适用于植物组织和细胞学材料，为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。

固定时间不宜过久。

4. 酒精-福尔马林固定液福尔马林2~6（6~10）ml + 70%酒精100ml固定植物一般组织，尤其适用于萌发的花粉管的固定。

通常固定24h，亦可长久保存。

5. 酒精-福尔马林-甘油固定液95%酒精150ml + 5%福尔马林100ml + 甘油50ml此液也可长期储存材料。

6. 铬酸-醋酸固定液根据固定对象的不同，可分为强、中、弱3种配方：（1）弱液配方：10%铬酸2.5ml + 10%醋酸5ml + 蒸馏水92.5ml（2）中液配方：10%铬酸7ml + 10%醋酸10ml + 蒸馏水83ml（3）强液配方：10%铬酸10ml + 10%醋酸30ml + 蒸馏水60ml弱液配方用在固定较柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。

固定时间较短，一般为。

1h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至12~24h数小时，最长可固定中液配方用于固定根尖、茎尖、未成熟子房和胚珠等。

Gluta固定液(4%)
货号：P1130
规格：100ml/500ml
保存：避光保存4℃，12个月
产品介绍：
固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。

Gluta固定液会引起蛋白质α-螺旋结构变形，不利于过氧化物酶染色，速速度快，渗透力差。

Gluta固定液(4%)主要由Gluta、磷酸盐等组成，pH7.2～7.4，该固定液对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，是最常用的标准Gluta固定液，经常用于电镜标本的固定。

操作步骤(仅供参考)：
1、按实验具体要求操作。

2、取新鲜标本，立即入Gluta固定液(4%)中，4℃固定1～4h，稍大标本应适当延长固定时间。

3、送检或4℃保存。

注意事项：
1、Gluta固定液(4%)有一定腐蚀性，请在通风较好的环境下小心操作，避免吸入。

2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。

常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm，一般不超过6mm。

对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。

3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。

如果容积不够大，可以在固定期
间更换1～3次固定液。

4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，单本固定液最好不要提高温度。

5、取出新鲜组织后，应及时固定。

无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。

原位杂交(In situ hybridization)一、目的掌握核酸探针原位杂交操作技术，并利用该技术对单细胞的靶目标进行定位，用于细胞生物学基础研究。

二、原理原位杂交技术（in situ hybridization）是分子生物学和组织化学成功结合的产物，是特定标记的已知序列核酸作为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交并对其实行检测的方法。

其基本原理是含互补序列的标记DNA或RNA片段，即探针，在适宜的条件下与细胞内特定的DNA或RNA形成稳定的杂交体。

原位杂交能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其它成分的影响，因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内DNA或RNA研究更为方便；由于原位杂交不需要从组织中提取核酸，对于组织中含量极低的靶序列有极高的敏感性，并可完整地保持组织与细胞的形态，更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。

三、仪器设备烘箱，切片机，展片机，染色缸，湿盒，原位PCR仪，显微镜、镊子、量筒、烧杯、吸水纸、枪与枪头、载玻片、盖玻片、冰盒等。

四、材料和试剂1．材料：带有病原体的水生动物，如感染WSSV病毒的对虾、感染虹彩病毒的水生动物等。

2．试剂：Davidson’s AFA固定液:330 ml 95％乙醇220 ml 福尔马林（37～39％甲醛水溶液）115 ml 冰醋酸335 ml H2O混匀后封口，室温放置；DIG标记与检测试剂盒（Roche公司）；TNE：50 mmol/L Tris-HCl 6.57 g Tris Base10 mmol/L NaCl 0.58 g NaCl1 mmol/L EDTA 0.37 g EDTAddH2O 900 ml （定容至1L）用HCl调pH至7.4，高压灭菌，4℃保存；0.4% 甲醛：37～39％% 甲醛 5.4 mlddH2O 495 ml；蛋白酶K溶液(Pr.K，10 mg/ml)：10 mg Pr.K 溶于1 ml TNE中（用时现配）；20×SSC：3 mol/L NaCl 175.32 g NaCl0.3 mol/L柠檬酸钠88.23 g 柠檬酸钠ddH2O 900 ml （定容至1L）调pH至7.0，高压灭菌，4℃保存；2×SSC：20×SSC 100 mlddH2O 900 ml0.45 µm 滤膜过滤，4℃保存；20×Denhardt’s溶液：0.4％牛清血蛋白0.4 g牛清血蛋白0.4％聚蔗糖0.4 g聚蔗糖0.4％聚乙烯吡咯烷酮0.4 g聚乙烯吡咯烷酮ddH2O 100 ml0.45 µm 滤膜过滤，4℃保存；25％硫酸葡聚糖：25 g硫酸葡聚糖溶于80 ml ddH2O（定容至100 ml），-20℃保存；杂交液：4×SSC50% 甲酰胺1×Denhardt’s5% 硫酸葡聚糖0.5 mg/ml鲑精DNA4℃保存；BufferI：100 mmol/L Tris-HCl 12.11 g Tris Base150 mmol/L NaCl 8.77 g NaCl用HCl调pH至7.5，定容至1L，高压灭菌，4℃保存，；BufferII：0.5% Blocking agent 0.5 g Blocking agentBufferI 100 ml低温加热溶解，4℃保存一星期；BufferIII：100 mmol/L Tris-HCl 12.11 g Tris Base100 mmol/L NaCl 5.84 g NaCl50 mmol/L MgCl2 10.16 g MgCl2•6H2OddH2O 990 ml（定容至1L）用HCl调pH至9.5，0.45 µm 滤膜过滤，4℃保存；BufferIV：10 mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 1 mmol/LEDTA；显色液（NBT/BCIP使用液）：20 µl NBT/BCIP + 1ml BufferIII。

北京雷根生物技术有限公司 多聚甲醛溶液(4% PFA,RNase free)简介：固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。

固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。

Leagene 多聚甲醛溶液(4% PFA,RNase free)主要由优质多聚甲醛、磷酸盐、DEPC 处理水组成，pH 为7.4，适合于绝大多数组织和细胞的固定，尤其适用于与RNA 有关实验，它能较好的保护组织和细胞的形态结构以及RNA 。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 一般组织固定时间控制在4～12h ，大标本应适当延长固定时间，培养细胞或细胞爬片固定时间控制在10～15min ，特殊情况除外。

注意事项：1、 该固定液无法高压灭菌，所以无法做到彻底的RNase free ，操作时请注意该细节。

2、 多聚甲醛溶液(4% PFA,RNase free)有一定刺激性和腐蚀性。

一经开启，储存过久固定效果易下降。

3、 避免过度延长固定时间，否则引起生物大分子过度交联。

取材厚度不同，固定时间也不同。

4、 固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。

5、 温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。

6、 取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。

有效期： 12个月有效。

编号 名称 DF0133 DF0133 Storage 多聚甲醛溶液(4% PFA,RNase free) 100ml 500ml 4℃ 避光 使用说明书 1份。

常用固定液及其配制固定液分单纯固定液和混合固定液。

1 甲醛（formaldehyde ）是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。

易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37%〜40%得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin ）。

用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4%。

10 %福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。

对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。

经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。

2 乙醇无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。

固定用一般是80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水，因此核的着色不良。

3 中性甲醛液（混合固定液）甲醛（浓）120ml，加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠（NaH2P04?H2O 4g,磷酸氢二纳（Na2HPO4 13g。

此液固定效果比单纯10%福尔马林要好。

4 AF液（混合固定液）95%乙醇90ml，甲醛（浓）10ml。

也有配方是95%乙醇85ml,甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。

此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95%乙醇脱水。

以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10%福尔马林，乙醇应尽量不用。

yzbai wrote:（1）10%甲醛：对组织渗透性强，固定均匀。

对组织膨胀约5%，经酒精脱水时有较大的收缩。

能保存脂肪，不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性，不利于染色，特别是细胞核的着色。

经自来水冲洗6~24 小时后，可以使其酸碱中和，并减少结晶。

（2）4%多聚甲醛：对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好。

固定的时间不宜太长，以24 小时以内为宜，适用于免疫组织化学染色。

几种细胞固定方法选择最佳固定液标准是：（1）最好地保持细胞和组织的形态结构；（2）最大限度地保存抗原的免疫活性。

多聚甲醛固定液多聚甲醛固定液是一种含有多聚甲醛（PFA）的溶液，通常浓度为4%。

PFA是一种无色、无味、无毒的化合物，具有良好的固定性能。

在多聚甲醛固定液中，PFA可以与细胞膜和蛋白质发生共价交联反应，使细胞结构得以保持。

同时，多聚甲醛固定液还含有缓冲剂和防腐剂，可以在一定程度上延长其保存期限。

多聚甲醛固定液主要用于固定组织细胞，保护其形态结构和细胞器的完整性。

在生物医学领域，研究人员常常需要对组织样本进行染色或显微观察，而这些操作往往需要在细胞固定的基础上进行。

多聚甲醛固定液的使用可以有效地保护细胞结构，使得细胞在后续操作中不易受到破坏，从而得到更加准确和可靠的实验结果。

在组织学研究中，多聚甲醛固定液扮演着至关重要的角色。

首先，它可以固定组织样本中的细胞结构，使得细胞保持原有的形态和结构。

其次，多聚甲醛固定液还可以保护细胞膜和蛋白质，防止其在后续处理过程中发生变性或降解。

最后，多聚甲醛固定液还可以提高组织样本的透明度，有利于后续的显微观察和成像。

除了在组织学研究中的应用外，多聚甲醛固定液还可以用于其他领域。

例如，在医学诊断中，医生常常需要对组织样本进行病理学检查，以确定疾病的类型和程度。

多聚甲醛固定液的使用可以保护组织细胞的形态结构，使得医生可以更加准确地进行诊断。

此外，在生物工程领域，多聚甲醛固定液还可以用于细胞培养和细胞凋亡的研究中。

需要注意的是，多聚甲醛固定液虽然具有良好的固定性能，但在使用过程中仍需注意一些问题。

首先，多聚甲醛固定液具有一定的挥发性，使用时需在通风良好的环境下操作，以免对人体造成伤害。

其次，多聚甲醛固定液还具有一定的腐蚀性，使用时需佩戴防护手套和眼镜，以保护皮肤和眼睛不受损害。

综上所述，多聚甲醛固定液是一种常用的化学试剂，具有良好的固定性能和广泛的应用前景。

在生物医学领域的组织学研究中，多聚甲醛固定液可以有效地保护细胞结构，提高实验结果的准确性和可靠性。

随着科学技术的不断发展，相信多聚甲醛固定液在生物医学领域的应用将会更加广泛，为人类健康事业做出更大的贡献。

北京索莱宝科技有限公司Gluta固定液(4%,电镜专用)货号：P1127规格：100mL有效期：6个月产品说明：固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。

固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。

固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。

固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。

戊二醛固定液会引起蛋白质α-螺旋结构变形，不利于过氧化物酶染色。

戊二醛固定液固定速度快，渗透力差。

Gluta固定液(4%，电镜专用)由磷酸盐等配制而成，pH7.2～7.4，该固定液对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，经常用于电镜标本的固定。

操作步骤(仅供参考)：1、根据实验具体要求操作。

2、取新鲜标本，立即入Gluta固定液4℃固定1～4h，稍大标本应适当延长固定时间。

3、送检或4℃保存。

注意事项：1、Gluta固定液有一定腐蚀性，请在通风较好的环境下小心操作，避免吸入。

2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。

常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm，一般不超过6mm。

对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。

3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。

如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。

4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但本固定液最好不要提高温度。

5、取出新鲜组织后，应及时固定。

无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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