裸鼠肿瘤接种

裸⿏成瘤实验⽅法肿瘤细胞有良性和恶性之分；癌细胞则是恶性，是会扩散的细胞。

肿瘤细胞包含癌细胞，它们共同特点是从基因⽔平上失控的、能⽆限增殖的细胞。

癌细胞有三个显著的基本特征即：不死性、迁移性和失去接触抑制。

常规较容易成瘤的细胞Hep-G2（肝癌），Hep2（喉癌），NCI-H460(⼤细胞肺癌)， SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌）SKBR3， A375/B16-F10（⼈⿊⾊素瘤细胞），SGC7901 ⼈胃肿瘤细胞，CNE（⿐咽癌），H1299（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29/HCT116（结肠癌），BEL-7402（肝癌），MDA-MB-231 乳腺癌， CT26 （⼩⿏结肠癌细胞），U87 （⼈胶质瘤细胞）， MGC-803（⼈胃癌细胞），PC-3 （⼈前列腺癌细胞）。

裸⿏的选择实验室常⽤的是BALB/c-nu裸⼩⿏ ,随着裸⼩⿏年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸⿏体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验⼀般采⽤4--6周龄的裸⿏。

裸⿏成瘤实验技巧1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞⽣长状态⼀定要好，取处于对数⽣长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。

收集细胞前⼀天晚上更换新鲜培养基。

2、胰酶消化细胞后⽤预冷的PBS洗两遍，⽬的为去除细胞中残余的⾎清。

3、⽤PBS或者⽆⾎清培养基吹打细胞沉淀⾄合适的浓度，⼀般⽪下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/⽀，接种体积为0.1-0.2ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml，如若有条件的实验室，也可以加基质胶以加速瘤块的⽣成，基质胶与PBS或⽆⾎清的⽐列为1:1。

4、细胞消化后应尽快接种到裸⿏⽪下，⼀般尽量在半⼩时内完成（如果接种量⼤，可以分批接种），途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以保持细胞的活性。

5、选择的裸⿏⼀般在4-6周龄，体重16-18g左右，种植部位选择⾎供丰富区域，如腋窝中后部。

T淋巴细胞功能缺陷的动物有裸小鼠(基因符号nu)和裸大鼠(基因符号rnu)利用育种技术已将裸基因nu或rnu导入其它品系动物，作为背景品系可以是近交系也可以是封闭群，目前nu基因已导入的近交系有数个以上。

rnu基因导入的大鼠品系也有10余种。

我国使用较多的裸鼠品系BALB/c-nu、NC-nu、Swiss-nu、NIH-nu。

1980年和1982年中国药品生物制品检定所分别从瑞士和日本引进裸小鼠，上海中山医院肝癌研究所1983年从美国引进了裸大鼠Rowett。

一、裸小鼠(一)概念及命名：1962年英国格拉斯医院Grist 在非近交的小鼠中偶然发现有个别无毛小鼠，后来证实是由于基因突变造成的并伴有先天性胸腺发育不良，称为裸小鼠(nude mice)，用“nu”表示裸基因符号。

裸小鼠是由于染色体上等位基因(第11对染色体上)突变引起的，已失去正常胸腺，原胸腺残留结构部分上皮样细胞呈巢状排列而部分呈外分泌腺结构。

裸鼠淋巴结胸腺依赖区的淋巴细胞消失，外周血中淋巴细胞数目减少。

1969年丹麦Rygaard首先将人类结肠腺癌移植裸小鼠成功，为免疫缺陷动物研究和应用开创了新局面。

(二)特性：裸小鼠的主要特征表现为无毛(hair less)和无胸腺(athymus)。

随着鼠龄增加皮肤变薄、头颈部皮皱褶、发育迟缓。

由于无胸腺,仅有胸腺残迹或异常上皮,这种上皮不能使T细胞正常分化，缺乏成熟T细胞的辅助、抑制及杀伤功能，因而细胞免疫力低下。

裸小鼠B 淋巴细胞正常，但功能欠正常，免疫球蛋白主要是IgM,只含少量IgG。

裸鼠由于T淋巴细胞缺陷，不能执行正常T淋巴细胞功能，在混合淋巴细胞反应中全无有丝分裂反应，也不产生细胞毒效应细胞，对刀豆A或植物凝集素亦无有丝分裂应答,无接触敏感性，无移植排斥，成年裸小鼠(6－8周龄)较普通鼠有较高水平的NK细胞活性，但幼鼠(3－4周龄)的NK细胞活性低下。

裸小鼠粒细胞比普通小鼠数量少。

裸鼠皮下成瘤抑制实验原理
裸鼠皮下成瘤抑制实验的原理基于肿瘤细胞的恶性增殖特性。

肿瘤细胞具有无限增殖的能力，并通过信号转导途径、细胞周期调控等机制实现自我增殖。

由于大部分肿瘤研究使用到的是人类来源的细胞，种植到免疫正常的动物体内会发生免疫排斥反应，所以需要用免疫缺陷型小鼠作为成瘤模型的动物。

在实验中，将肿瘤细胞悬液注射到裸鼠的皮下，模拟肿瘤在人体内的生长过程。

然后，可以施加某种干预（例如药物治疗或基因编辑）来观察其对肿瘤生长的影响。

如果干预有效，则肿瘤的生长应受到抑制。

这种实验方法有助于研究肿瘤的生长机制，以及探索新的治疗策略。

以上内容仅供参考，建议查阅关于裸鼠皮下成瘤抑制实验的文献，获取更准确的信息。

一、实验背景近年来，炎症与肿瘤之间的关系逐渐成为研究热点。

越来越多的研究表明，慢性炎症与多种癌症的发生发展密切相关。

本实验旨在探讨炎症在肿瘤发生发展中的作用，以及通过抑制炎症反应是否能够减缓肿瘤的生长。

二、实验目的1. 观察炎症因子在肿瘤细胞生长过程中的作用；2. 探讨抑制炎症反应对肿瘤生长的影响；3. 为预防和治疗肿瘤提供新的思路和方法。

三、实验材料与方法1. 实验材料：小鼠肿瘤细胞系、炎症因子（如白介素-1）、炎症抑制剂（如阿那白质素）、培养皿、细胞培养液等。

2. 实验方法：（1）细胞培养：将小鼠肿瘤细胞系在含有10%胎牛血清的DMEM培养液中培养，置于37℃、5%CO2的培养箱中；（2）炎症因子处理：将培养好的肿瘤细胞分为实验组和对照组，实验组加入适量炎症因子，对照组加入等量生理盐水；（3）炎症抑制剂处理：在炎症因子处理的基础上，对实验组加入阿那白质素，对照组加入等量生理盐水；（4）细胞增殖实验：采用CCK-8法检测细胞增殖情况；（5）细胞凋亡实验：采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况；（6）肿瘤生长抑制实验：将小鼠肿瘤细胞接种于裸鼠体内，观察肿瘤生长情况。

四、实验结果1. 炎症因子处理组肿瘤细胞增殖能力显著高于对照组，提示炎症因子可促进肿瘤细胞生长；2. 在炎症因子处理组中加入阿那白质素，可显著抑制肿瘤细胞增殖，提示抑制炎症反应可减缓肿瘤生长；3. 炎症抑制剂处理组细胞凋亡率显著高于对照组，提示抑制炎症反应可促进细胞凋亡；4. 肿瘤生长抑制实验结果显示，与裸鼠肿瘤生长对照组相比，抑制炎症反应组肿瘤生长速度明显减慢。

五、实验结论1. 炎症因子在肿瘤细胞生长过程中发挥促进作用；2. 抑制炎症反应可减缓肿瘤生长，为预防和治疗肿瘤提供新的思路和方法；3. 本实验为后续研究炎症与肿瘤的关系提供了实验依据。

六、实验讨论1. 本实验结果表明，炎症因子在肿瘤细胞生长过程中发挥重要作用，提示炎症与肿瘤的发生发展密切相关；2. 抑制炎症反应可减缓肿瘤生长，为预防和治疗肿瘤提供了新的思路和方法；3. 本实验结果与已有文献报道一致，进一步证实了炎症与肿瘤之间的密切关系。

裸鼠皮下成瘤及原位瘤动物实验方案分组:正常细胞组、EGFR1转染无关siRNA组、EGFR1转染目的基因（每组6只）。

细胞准备及注射裸鼠方法：到动物室准备实验。

取出未作处理的小鼠和处理后小鼠用鼠笼，顺序摆放在超净台中。

选体形较大的小鼠称重，以3μl/g剂量，腹腔注射10％水合氯醛麻醉小鼠。

约5分钟，小鼠开始进入安静状态，将其仰卧固定。

切忌麻醉剂过量使用。

(1)铺白布于鼠板上，仰卧位固定小鼠四爪，碘伏棉球消毒腹侧面上至颈部、下至腹股沟、后至腋后线。

消毒两次。

铺手术巾于小鼠上，在其左侧剪口（4*4cm），暴露其左侧腹部, 用碘伏消毒一次。

在左侧肋弓下缘1cm处向下剪开2cm皮肤，暴露腹壁肌肉，镊子牵拉腹壁肌肉，避开腹腔内脾脏，剪开腹壁肌肉，暴露内脏。

用棉签蘸PBS，拨出脾脏下极，切忌牵拉，以免损伤脾脏和胰腺。

(2)找到脾脏同时，用25微升Matrigel混合于细胞管中，打悬细胞沉淀，使细胞分散均匀成单细胞悬液。

用BD针吸净EP管中的单细胞悬液，稍退针芯，打出气泡，在脾脏下极内侧（凹面）进针向脾门方向约2mm开始注射细胞，注射完毕停留约30秒钟，缓慢退出针，以防细胞渗出。

同时用蘸PBS的棉球压迫周围出血点止血。

(3)用注射器吸取庆大霉素注射液（用生理盐水250：1稀释）约400微升，注入腹腔，棉球蘸干皮缘渗出的抗生素。

开始缝合腹壁肌肉（连续缝合4针）。

再次用注射器吸取庆大霉素注射液约400微升冲洗缝合口，棉球蘸干。

缝合皮肤（间断缝合4针）。

碘伏棉球消毒缝合口。

撤除固定，使小鼠处于自然体位，放于鼠笼中。

(4)所有细胞注射完毕，剪耳标记，记录剪耳标记及分组情况。

Day5-7：注意小鼠的状态，及时发现小鼠是否有因手术刺激、胰腺损伤、感染等死亡的情况。

Day42：颈椎离断，处死小鼠，解剖尸体，观察脾脏肿瘤生长状况，肝脏、肺脏及其他器官是否有转移瘤形成。

所有可疑组织均做好标记，拍照，若有表面结节，计数后，冻于液氮中。

关于肿瘤细胞株的选择，确实是一个很麻烦的问题，各类文献中提到过的细胞株有很多，但是一般而言，我觉得，对于我们做裸鼠肿瘤模型，细胞株的选择应该考虑一下几个方面：1. 国际公认度，虽然SFDA的指导原则上表示只要是建株细胞株均可以，但是一般来说，还是应该尽量考虑国际上比较公认的细胞株。

2. 体内生长情况，很多细胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名，所以很多人就硬生生的往体内套，结果就是吃力不讨好，比如楼主提到的A549，还有MCF-7，都是很有名气的细胞株，但是在体内却不是一个好的试验对象，成瘤率低，生长慢，均一度差。

现在国内的很多研发单位，特别是一些公司的领导们，缺乏这方面的认识，动不动就把这些著名的细胞株挂在嘴边，硬压着一线的研究人员去花功夫做这些细胞株，作的不好，就怀疑大家的水平如何如何的，奶奶的，对此非常生气！3. 药物的敏感性，这一点常常被大家忽视，大部分的裸鼠肿瘤模型都是为抗肿瘤药物的筛选以及研究服务的，但是常常大家只考虑了这个细胞株是不是好做，但是没有考虑到细胞株本身对于药物的敏感性，比如Lovo细胞，国际公认度也还可以，体内生长情况也很棒，但是对于药物的敏感性不佳，大部分的常规化疗药物到了它这里，抑瘤率都会下降，显而易见，对于抗肿瘤药物的筛选来说，它不是一个好的选择。

另外说一点，体内与体外的关系，现在做体内的人，常常被体外的人牵着鼻子走，体外做出来什么什么细胞株敏感，体内的人就得吭哧吭哧的去做这个，但是却死活做不好，其实，现在我和一些老前辈们的观点是，体内和体外应该协调好细胞株的选择问题，体外的人手上有大把的细胞株可以选择，如果，体内的人不去和他们协调，那么将永远被牵着鼻子走，受累还不讨好，应该大家坐下来，一起选择20~30种细胞株作为常规的筛选细胞株，这就足够了，细胞株选择的时候考虑好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么的）、靶点（EGF、vEGF等等），不能漫无边际的抓着哪个体内就的做哪个，谁也没有这个本事啊。

细胞悬液接种法血管瘤裸鼠动物模型的建立目的：探索人毛细血管瘤裸鼠移植瘤模型建立的条件。

方法：将体外培养的血管瘤内皮细胞通过注射的方式植入裸鼠(BALB/c nude mice)皮下，测量不同生长时期瘤体体积变化，观察至60天后进行病理学光镜检查，并通过血管内皮细胞单克隆抗体CD31、细胞增殖标记抗体Ki-67免疫组化染色研究所成瘤体的同源性及增殖活性。

结果：通过皮下植入血管瘤内皮细胞的方法成功建立了人血管瘤裸鼠动物模型，所成瘤体与原血管瘤生物学特点相似。

结论：皮下植入人血管瘤内皮细胞的裸鼠动物模型建模方法可靠，能较真实地反映人血管瘤的发展过程，是研究血管瘤的较理想的平台。

Abstract:ObjectiveTo establish the human hemangioma model in nude mice.Methods Human hemangioma endothelial cells cultured in vitro were injected hypodermically into nude mice(BALB/c nude mice). The volume of in the transplanted tumor was measured in 60 days. Samples were taken from survival tumor and stained immunohistochemically by CD31 and Ki-67 before subjected to histopathological examination.ResultsHemangioma model were successfully established in nude mice and the original tumor histological characters were retained in the transplanted tumor.ConclusionHemangioma model established in nude mice by hypodermically injection with human hemangioma endothelial cells retains all the biological characteristics of the human hemangioma and can be a good model for research on hemangioma.Key words: hemangioma;nude mice;disease model血管瘤是婴幼儿常见的良性肿瘤，在新生儿的发病率为1.1％～2.6％，1岁时的发病率高达10％。

裸鼠肿瘤接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。

做体外培养的细胞的裸鼠接种，一般用带6号针头的注射器取适量细胞悬液注射于裸鼠的皮下，部位看试验要求而定，一般在腋下或背部皮下，每个接种部位注射0.1-0.2ml。

就是将培养的细胞收集起来调整到适宜浓度重悬于不含血清的培养液或PBS中，放于冰盒中携至动物房，直接注射即可。

是牵涉到细胞株的成瘤性问题，可以通过增大细胞悬液浓度的办法来解决。

一般细胞浓度可在1×106到5×107之间，浓度再大就可能打不进去了。

具体浓度需要查相关文献。

如果成瘤率太低，可以通过把瘤块在裸鼠身上传2—3代的方法提高成瘤率，即将已成瘤鼠的瘤块取出接种于新鼠身上，成瘤后再取出接种新鼠，如此传几代，肿瘤性质稳定后，再将肿瘤取出，剪碎、研磨、匀浆成为细胞悬液后再接种。

一、可移植性肿瘤的建立方法1．腹水瘤的建立将动物实体瘤细胞注入受体动物腹腔内，或将实体疤移植于受体动物的腹壁内，肿瘤生长后引起腹水，腹水内含高大量瘤细胞可移植传代．即为腹水瘤。

建议腹水瘤初期、腹水往往是血性，多次传代后逐渐变为乳白色的瘤性腹水。

腹水如培养基一样供给瘤细胞生长所需的营养。

若将腹水瘤细胞注入皮下，又可形成实体瘤。

由于瘤细胞游离在腹水内，因此总呈圆形，体积可有大、中、小之分c：r．在一些细胞边缘偶见大小不等的泡状突起，称之为“鼓泡”。

一般在接种后第5天时核分裂相达高峰。

偶见三极或四极分裂。

二、肿癌移植方法1．常规保种传代方法(1)腹水瘤移植方法：瘤源一般用接种后第5～6天的腹水，抽出的腹水以乳白色为佳。

接种应从下腹部注入受体动物腹腔，一般接种0.1- 0.2m1。

可在腹水内加适量的抗凝药物。

(2)实体型肿瘤接种法：1)小块接种法：将瘤取出后，切开，选出生长良好而无变性坏死、呈谈红色、鱼肉状的瘤组织，切成小块(约5×5×5mm)；在受体动物腹部外例剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下。

动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型一、嘉美实验裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建方法采用腋窝皮下接种PC-9人肺癌细胞，建立PC-9人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型并给与药物进行干预，观察药物对肿瘤的作用。

二、裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建及后续实验操作1、25只BALB c裸鼠，适应性饲养一周后，调整制备好的PC-9人肺腺癌细胞单细胞悬液浓度，用1m 1l无菌注射器吸取细胞悬液，于每裸鼠右侧腋下皮下注射0.2mL细胞悬液(接种细丹包量约为1×x102/ml)，细胞悬液接种于裸鼠的右侧腋下7-10d后，观察成瘤情况，肿瘤仁本积大于100m3后，选取肿瘤大小相近的小鼠按肿瘤体积随机分为4组:(1)对照组，5只；(2)高剂量组，7只:(3)中剂量组，7 )顺铂组，6只。

当天高剂量组、中剂量组、顺铂组开始给药其中，高剂量组连续21天每天灌胃给药，顺铂组每三天腹腔注射给药，齐量5m/e次。

每两天测量荷瘤裸鼠体重和冲瘤体积。

于第22天停止给药病禁食2h，第再次测量肿瘤体积，计算相对肿瘤体积(RTV)，绘制肿瘤生长曲线，毛材当天称量最后一次体重和瘤重计算肿瘤指数完整剥离瘤块，其中一半瘤块组织于 10%福尔马林中固定，备用；另半肿瘤组织存放于液氮中冻存。

血样用109 mmol/L枸櫞酸钠19抗凝，分离血浆。

2、小鼠接种PC-9人肺腺癌细胞后 9天左右，可观察到裸鼠右侧腋下均现黄豆大小瘤块，于当天开始测量肿瘤体积并称重。

于接种第11天时，测量肿瘤生长指数和体重时发现，各组荷瘤裸鼠肿瘤体积均值达到100mm3，于当天开始分组给药在给药过程中发现，顺铂组荷瘤裸鼠的体重下阳夆明显，与对照组相比具有极显著性差异루(P<0.01)高剂量组荷瘤裸鼠的体重于d7、dI 3、d19天时有显著性差异(P~0.05)，其他各组体重与对照组相比均无明显差异。

顺铂组肿瘤体积于d13、d17、dl9、d21 d23时与对照组相比明显减小，并有显著性差 :(P<0.05)，在d15天时有极显著性差쿠(P<0.01)。

裸鼠模型在肿瘤治疗研究中的应用近年来，肿瘤治疗研究一直是医学界的热门话题。

而其中一个被广泛应用的模型就是裸鼠模型。

该模型是一种没有免疫系统的小鼠，其所患种类繁多的人类癌症与人体癌症的生理和生化特征高度一致。

因此，裸鼠模型被视为一种可靠的人类癌症模型，在肿瘤治疗研究中得到越来越广泛的应用。

一、裸鼠模型有助于肿瘤药物筛选和剂量的选择裸鼠模型的特点是没有免疫系统，因此可以有效地模拟人类癌症患者对化疗药物的反应。

研究人员可以将不同类型的人类肿瘤细胞种植到裸鼠的体内，然后观察不同药物的疗效以及适应性。

这种方法可以帮助筛选出最有效的化疗药物，并确定最佳的剂量方法，以降低剂量过大或过小的患者药物副作用和治疗效果不佳的风险。

二、裸鼠模型可以用于研究免疫药物的作用机制裸鼠模型的另一个重要特点是它们缺乏免疫系统。

因此，在研究免疫药物的作用机制时，其免疫抑制作用可以被完全消除。

这些免疫药物通常用于治疗肿瘤细胞免疫逃逸的疾病。

研究人员可以在裸鼠体内种植癌细胞，并给予不同的免疫药物处理，以便研究药物在治疗肿瘤免疫逃逸方面的作用和机制，为开发更加有效的肿瘤免疫疗法提供理论基础。

三、裸鼠模型可以模拟人类癌症的药物耐受性药物耐受性是肿瘤治疗中的一个重要问题。

但是直接在人体内进行研究很难获得满意的结果，因为某些药物在实验室中表现出的耐受性可能与实际情况不同。

通过使用裸鼠模型，可以准确地模拟人类癌症的耐受性情况，并研究这些药物的各种机制。

这种方法可以帮助人们更好地了解药物耐受性的机制，促进新药物的开发，改善现有的肿瘤治疗方法。

四、裸鼠模型可以进行肿瘤的转移研究在许多情况下，治疗肿瘤并不仅仅是消灭原发肿瘤，还需要防止肿瘤进行转移。

而裸鼠模型在这个方面有很大的应用潜力，尤其是在研究转移性肿瘤时。

研究人员可以通过种植具有转移潜力的细胞系，观察肿瘤转移的过程和机制，并测试不同的治疗方案，以便开发更加有效的肿瘤转移治疗方法。

五、裸鼠模型可以用于研究基因治疗基因治疗是一种新型的肿瘤治疗方法，其作用机制涉及基因转导、表达、调控和重组等方面。