仁寿县北斗中心畜牧兽医站
动物防疫员免疫操作技术规
1、适用围
本标准规定了动物防疫员免疫前的准备、畜禽、免疫方法、免疫过敏反应处置、免疫档案管理及相关的技术要求。
本标准适用于动物防疫员对各类畜禽养殖场（户）的免疫操作。
2 规性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
仁寿县北斗中心畜牧站兽用生物制品冷链技术规
仁寿县北斗中心畜牧兽医站防疫物资管理制度
3、名词术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1动物防疫员为预防、控制和扑灭动物疫病，由乡（镇）、村或养殖场聘用，具有一定动物疫病防治基本知识和技能，主要负责当地畜禽养殖场（户）动物免疫等工作的人员。
3.2免疫接种利用人工制备的抗原或抗体通过适宜的途径对动物有计划的接种，使动物获得对某种疫病的特异免疫力，以提高个体或群体的免疫水平，预防和控制针对疫病的发生和流行。
3.3疫苗用于人工自动免疫的生物制品。包括用细菌、霉形体、
螺旋体制成的疫苗，用病毒、立克氏体制成的疫苗和用细菌外毒素制成的类毒素。
4、免疫接种前准备
4.1 制定免疫接种工作计划
4.1.1 调查统计所辖区域养殖场（户）、饲养动物种类与待免畜禽数量。
4.1.2 确定所需疫苗种类，统计所需疫苗用量（头份或羽份）。
4.1.3 确定接种途径和方法、接种日期等。
4.1.4 根据养殖规模制定免疫接种前采血比例。
4.2 动物及免疫标识检查
4.2.1 动物防疫员在免疫前应到畜禽养殖场（户）检查畜禽标识佩戴情况，畜禽标识如有磨损、破损、脱落的，应在免疫时重新佩戴防疫标识，防疫标识不得重复使用。
4.2.2 日常免疫，免疫前对动物健康状况应进行检查，患病畜禽、产前产后15天母猪暂缓进行免疫。
4.3 免疫器材
4.3.1 注射器
根据需要,准备金属注射器、连续注射器、皮注射器。
4.3.2 兽用接种针头
家禽选用7号、12号针头（不超过13mm长）；1月龄以下仔猪选用9号针头（15mm长），1月龄以上3月龄以下猪只选用12号针头（25mm 长），3月龄以上猪只选用16号针头（38mm长）；绵羊和山羊选用9
号或12号针头（25mm长）；牛选用12号针头（25mm长）；皮注射器专用针头。一般，对同一年龄畜禽来说，注射灭活苗选用大一号、长一点的针头，活疫苗选用小号针头。针头灭菌时应用纱布包好，以防附着水垢。
4.3.3滴鼻点眼器
可选用玻璃胶头滴管、塑料滴管或专用点眼瓶。
4.3.4饮水免疫用容器
选用洁净、没有消毒药或抗微生物药物残留的塑料容器，不得选用金属容器。
4.3.5 其它用品
疫苗冷藏箱、听诊器、体温计、镊子、剪毛剪、搪瓷盆等。
4.3.6 其他要求
所用器材数量、型号要根据免疫接种畜禽类别、数量来确定。注射器、针头、刺种针和点眼滴鼻器要经湿热高压灭菌后才能使用，灭菌后的免疫器材应放入灭菌盒。灭菌超过7天的，在免疫时应重新灭菌。
4.4 消毒器材与药品
纱布、医用脱脂棉、75%酒精、5%碘酒、消毒药品等。
4.5 防护用具
一次性医用防护口罩、一次性医用橡胶检查手套、普通工作帽、普通工作服、棉手套、医用护目镜、一次性医用防护服和高腰雨靴等。
4.6 用品及辅助人员配备
牛鼻钳、耳夹子、鼻捻子、猪鼻环套器、用麻绳等，并配备适当的辅助人员。
4.7 畜禽标识各种畜禽防疫标识（耳标、脚环）
4.8 急救药品与器材
0.1％盐酸肾上腺素、一次性注射器。
4.9 疫苗的准备
4.9.1 来源
政府采购用于强制免疫的兽用疫苗
4.9.2 领取
领取疫苗时要填写疫苗领取记录，记录疫苗名称、生产厂家、疫苗批号、领取的疫苗数量，并了解疫苗贮存条件。
4.9.3 携带与保存
携带与保存应符合《仁寿县北斗中心畜牧兽医站兽用生物制品冷链技术规》的要求。
5 免疫接种
5.1 个人防护
操作人员要按照相关规定做好个人防护工作。
5.2 畜禽
5.2.1 猪的
5.2.1.1 正提
适用于仔猪耳根部、颈部的注射免疫。辅助人员在正面用双手分别握住猪的两耳，向上提起猪头部，使猪的前肢悬空。
5.2.1.2 猪鼻环套器
适用于育肥猪和成年母猪注射免疫。先将猪鼻环套器鼻捻环套调整适当大小，套取猪的上颌，立即将鼻捻环套收紧，同时顺势向后拉紧手柄杆。
5.2.2牛的
5.2.2.1 牛鼻钳
适用于牛的颈部注射免疫。将牛鼻钳两钳嘴抵住牛两鼻孔，并迅速夹紧鼻中隔，用一手或双手握持，亦可用绳系紧钳柄将其固定。辅助人员要戴上棉手套。
5.2.3.2 牛饲栏
适用于规模奶牛场牛的颈部注射免疫。可用一端有绳套的麻绳一根，将绳套套于牛一角根部，另一端交扭成圈套于鼻梁和下颌间，立即拉紧麻绳，并将牛头拉向一侧，将麻绳系于饲栏立柱上使牛头不能左右摆动。
5.2.4 羊的
适用于羊的各种注射免疫。两手握住羊的两角或两耳，骑跨羊身，以大腿侧夹持羊两侧胸壁即可。
5.2.5 禽的
家禽一般采用徒手，用左手的大拇指和食指握住翅膀，小拇指勾住一只腿。此法适用于没有辅助人员的胸肌免疫接种。或辅助人员一手握住禽双腿，另一手握住一翅，同时托住背部，使其仰卧，操作者左手握住另一翅尖进行免疫接种。此法适用于翼膜刺种免疫和胸肌部
注射免疫。也可左手握住雏禽身体，并用大拇指和食指捻住劲中线的皮肤并向上提起，使其形成一个囊。此法适用于颈部皮下注射免疫。还可左手握住雏禽身体，用拇指和食指夹住其头部。此法适用于雏禽的滴鼻点眼免疫。
5.3 疫苗使用前的检查与准备
5.3.1 疫苗使用前，应检查疫苗包装盒外标签名称与瓶签是否相符，包括疫苗名称、免疫剂量、生产批号、批准文号、保存期、失效期和生产厂家等，并仔细阅读使用说明书。疫苗超过有效期的，或在有效期疫苗变色、变质的不得使用。疫苗瓶签不完整而分辨不清疫苗种类的不得使用。
5.3.2 疫苗瓶有裂纹，瓶塞松动，油乳剂破乳，瓶有异物、气味，受过冻结的液体疫苗及失真空的冻干疫苗不得使用。
5.3.3 油乳剂灭活苗在使用前应恢复至室温后使用。
5.4 疫苗稀释
5.4.1 疫苗要用专用稀释液稀释，并按照产品说明书稀释。
5.4.2 注射器针头在刺入疫苗瓶前，应用75%的酒精棉球消毒瓶塞。
5.4.3 液体疫苗使用前应充分摇匀，冻干疫苗稀释后应全部溶解摇匀后使用。
5.4.4 饮水免疫所用的稀释液宜用深井水或经脱氯后的自来水。可在饮水中添加0.1%～0.3%的脱脂奶粉。
5.4.5 稀释后的疫苗应在2h 用完，开瓶的油乳剂灭活疫苗应在
6h用完。
5.5 注射器排除空气
5.5.1 注射器排气时用灭菌棉球包裹针头，以防疫苗溢出，污染环境。
5.5.2 连续注射器排气时，应在专用容器进行。
5.6 免疫方法的选择
5.6.1 生产中采用哪一种免疫方法，应根据疫苗、动物种类及本场的具体情况决定。
5.6.2 弱（活）毒疫（菌）苗可以通过多种方式接种，如冻干疫苗可采用滴鼻、点眼、气雾、饮水和注射等免疫方法；灭活疫苗只能通过注射途径免疫，如油乳剂灭活疫苗一般采用深层肌肉注射等免疫方法。
5.7 免疫方法
5.7.1 注射免疫
5.7.1.1 注射部位消毒
按照疫苗说明规定选择注射部位，将注射部位先剪毛（禽类除外），再用5%碘酊棉球由向外螺旋式消毒接种部位，然后用挤干的酒精棉球脱碘，最后按规定剂量注射。如某疫苗有特殊要求的按其要求操作。
5.7.1.2 肌肉注射
5.7.1.2.1 注射时进针方向
猪、牛、羊颈部手持注射器进针注射时，针头与皮肤表面保持45°
角进针。
5.7.1.2.2 注射部位
猪选择在左右耳根后颈部的上1/3处、颈部或臀部；牛选择颈侧部或后臀部肌肉较厚的部位，羊、兔宜在颈部；禽类宜在翅膀基部或胸部肌肉。（禽禁用腿部深层肌肉注射）
5.7.1.2.3 对中、小家畜注射方法
可左手固定注射部位皮肤，右手持注射器，用食指护住针头尾部刺入肌肉后，改用左手夹住注射器和针头尾部，右手回抽一下针芯，如无回血，即可慢慢注入药液。
5.7.1.2.4 对大家畜注射方法
对于大家畜，为防止损坏注射器或折断针头，可分解动作进行注射。即把注射针头取下，以右手拇指、食指紧持针尾，中指标定刺入深度，对准注射部位用腕力将针头垂直刺入肌肉，然后接上注射器，回抽针芯，如无回血，即可慢慢注入药液。
5.7.1.2.5 对禽类注射方法
调试好连续注射器，确保剂量准确。选用胸部肌肉注射时，一般应将疫苗注射到胸骨外侧2cm～3cm处的肌肉，进针方向应与胸肌所在平面保持30°角。注意针头与胸部肌肉不要超过30°角，以免刺伤胸腔，伤及脏。2月龄以上的鸡可以用翅根肌肉注射的方法，要选择在翅根部肌肉多的地方注射。注射过程中要经常摇晃疫苗瓶，使其混匀。每注射500只家禽要校对一次连续注射器剂量，确保注射剂量准确。
5.7.1.3 皮下注射
创伤急救—固定技术操作规程 【评估】 1、评估环境是否安全，伤员复苏、止血及包扎是否有效、是否存在休克等情况。 2、评估伤员伤情、确认固定方法，正确选择固定用物，避免神经、血管、骨骼及软组织的再损伤，便于伤员的搬运。 3、了解伤员心里状况，做好伤员隐私保护。 【准备】 护士：具有争分夺秒的急救意识，具备组织急救和指导伤员自救、互救能力。物品：1、制式材料：各型号夹板、三角巾宽带和窄带数条、衬垫、绷带、颈托、腰部固定带等。 2、就便材料：布条、毛巾、雨伞、木棍、木板、纸板等。 环境：安全。 体位：根据骨折固定部位选择适宜体位 【方法】 1、锁骨骨折固定技术操作流程： 确认损伤部位给予有效止血、包扎处理→取适宜体位→垫衬垫于两腋前上方→将三角巾折叠成窄带状→两端分别绕两肩呈“8”字形固定（将窄带一端由肩部绕过腋下，另一端由腋下绕过肩部）→拉紧三角巾的两端于背部打结→打结处加垫衬垫→尽量使两肩后张以达到锁骨固定效果→松紧适度→观察记录血液循环→尽量避免不必要搬动。 2、上臂闭合性骨折固定技术操作流程： 确认损伤部位给予有效止血、包扎处理→取适宜体位→在将要放置夹板部位垫衬垫（环绕上臂）→选择适宜长短不一的夹板两块（长夹板长度：超过肩关节与肘关节距离；短夹板长度：不超过肩关节与肘关节距离）或夹板一块→将长夹板置于上臂后外侧→将短夹板置于上臂前内侧（一块夹板时置于外侧）→取绷带或带状物在上臂骨折部位上、下两端进行打结固定→再在适宜位置加一条固定带，使夹板固定牢靠→将肘关节屈曲90°→用三角巾将上肢悬吊固定于胸前→（若无夹板，也可用两块三角巾或绷带，一块将上臂呈90°悬吊于胸前→另一块叠成宽带状→将伤肢上臂与胸部固定在一起→松紧适宜→观察记录血液循环→尽量避免不必要搬动。 3、大腿骨折固定技术操作流程： 确认损伤部位给予有效止血、包扎处理→取适宜体位→用长、短两块夹板分别置于大腿的外侧和内侧（长夹板的长度自腋下至脚跟，短夹板的长度自大腿根部至脚跟）→在骨隆突处、关节处和空隙处加衬垫→固定带分别置于在骨折上下端、腋下或腰部及关节上下处→再由远心端向近心端将固定带分别打结固定（足踝用“8”字形固定，脚与小腿部呈直角功能位）→若无夹板，也可将伤员两下肢并紧→中间加衬垫→将健侧肢体与伤肢分段固定在一起→固定带松紧适宜→观察并记录伤肢血液循环情况→尽量避免不必要搬动。 4、颈、腰椎损伤固定技术操作流程： 确认环境安全可进行施救→呼叫伤员→确认伤情（伤员诉颈、腰部疼痛）→呼叫助手→准备用物（颈托、腰部固定带）→运用五拳法（头锁，胸锁，肩锁，改良肩锁，胸背锁）按步骤分别稳定及固定伤员头颈部→首先术者用“头锁”法，稳定伤员头部→助手检查伤员伤情（检查部位：头顶、额部、眼眶、鼻梁部、下
文件编号：TP-AR-L7817 In Terms Of Organization Management, It Is Necessary To Form A Certain Guiding And Planning Executable Plan, So As To Help Decision-Makers To Carry Out Better Production And Management From Multiple Perspectives. （示范文本） 编制：_______________ 审核：_______________ 单位：_______________ 触电急救的基本原则和 注意事项正式样本
触电急救的基本原则和注意事项正 式样本 使用注意：该解决方案资料可用在组织/机构/单位管理上，形成一定的具有指导性，规划性的可执行计划，从而实现多角度地帮助决策人员进行更好的生产与管理。材料内容可根据实际情况作相应修改，请在使用时认真阅读。 触电急救的基本原则是动作迅速、方法正确。当 通过人体的电流较小时，仅产生麻感，对机体影响不 大。当通过人体的电流增大，但小于摆脱电流时，虽 可能受到强烈打击，但尚能自己摆脱电源，伤害可能 不严重。当通过人体的电流坦步增大，至接近或达到 致命电流时，触电人会出现神经麻痹、呼吸中断、心 脏跳动停止等征象，外表上呈现昏迷不醒的状态。这 时，不应该认为是死亡，而应该看作是假死，并且迅 速而持久地进行抢救。有触电者经4小时或更长时间 的人工呼吸而得救的事例。有资料指出，从触电后三
分钟开始救治者，90％有良好效果;从触电后6分钟开始救治者，10％有良好效果;而从触电后12分钟开始救治者，救活的可能性很小。由此可知，动作迅速是非常重要的。 必须采用正确的急救方法。施行人工呼吸和胸外心脏挤压的抢救工作要坚持不断，切不可轻率停止，运送触电者去医院的途中也不能中止抢救。在抢救过程中，如果发现触电者皮肤由紫变红，瞳孔由大变小，则说明抢救收到了效果;如果发现触电者嘴唇稍有开、合，或眼皮活动，或喉嗓门有咽东西的动作，则应注意其是否有自主心脏跳动和自主呼吸。触电者能处主呼吸时，即可停止人工呼吸。如果人工呼吸停止后，触电者仍有能自主呼吸，则应立即再作人工呼吸。急救过程中，如果触电者身上出现尸斑或身体僵冷，经医生作出无法救活的诊断后方可停止抢救。
免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。 紫外光激发荧光物质放射荧光示意图 免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、抗体孵育及荧光检测等。细胞片制备（通俗的说法是细胞爬片）是免疫荧光实验的第一步，细胞片的质量对实验的成败至关重要，原因很简单，如果发生细胞掉片，一切都无从谈起。这一步关键的是玻片（Slides or Coverslips）的处理以及细胞的活力，有人根据成功经验总结出许多有益的细节或小窍门，非常值得借鉴。固定和通透步骤最重要的是根据所研究抗原的性质选择适当的固定方法，合适的固定剂和固定程序对于获得好的实验结果是非常重要的。免疫荧光中的封闭和抗体孵育与其它方法（如ELISA或Western Blot）中的相同步骤是类似的，最重要的区别在于免疫荧光实验中要用到荧光抗体，因此必须谨记避光操作，此外抗体浓度的选择可能更加关键。最后需要注意的是，标记好荧光的细胞片应尽早观察，或者用封片剂封片后在4℃或-20℃避光保存，以免因标记蛋白解离或荧光减弱而影响实验结果。 由于操作步骤比较多，同时在分析结果时无法像WB那样可以根据分子量的大小区分非特异性识别，所以要得到一个完美的免疫荧光实验结果，除了需要高质量的抗体，以及对实验条件进行反复优化外，还必须设立严谨的实验对照。总之，免疫荧光实验从细胞样品处理、固定、封闭、抗体孵育到最后的封片及观察拍照，每步都非常关键，需要严格控制实验流程中每个步骤的质量，才能最终达到你的实验目的。 基本实验步骤：
内科相关技术规范与操作规程 电除颤 [适应症]：1. 必须在患者无知觉时进行除颤。2.心室颤动是电复律的绝对指征。3.持续心房扑动。4.阵发性室上性心动过速，常规治疗无效而伴有明显血液动力学障碍或预激综合征并发室上性心动过速而用药困难者。5.呈1：1传导的心房扑动。 [禁忌症]：1.缓慢性心律失常，包括病态窦房结综合征。2.洋地黄过量引起的心律失常（除室颤外）。3.伴有高度或完全性传导阻滞的房颤、房扑、房速。 4.严重的低血钾不宜作电复律。 5.左房巨大，心房颤动持续一年以上，长期心室率不快者。 [方法]：1.打开除颤器电源，选择非同步除颤方式。2.按3J/Kg电能充电。 3.在电极板上涂满导电胶，两电极分别紧压在右胸上部锁骨下和左乳头外侧腋前线胸壁相当于心尖区。 4.病人四周不应与人或金属物体接触。 5.暂停胸外心脏按压，在人工呼气末按下放电钮除颤，观察ECG，继续行心肺复苏术。 6.一分钟后若室颤持续存在，可将电能增至5J/kg，再次除颤和用药。一般首次除颤电能成人为200J，第二次300J，第三次加至360J，为1-2J/Kg。 [注意事项]:1.胸外电除颤时，为防止胸壁电阻抗过大而阻碍足够的电能通过胸壁作用于心脏，应尽可能降低胸壁的电阻抗。如用性能优良的导电胶涂抹电极板与胸壁的接触面。适当用力将电极板紧压在胸壁上（10Kg/电极），并在呼气末放电除颤。2.遇有除颤不成功者，不应盲目反复电击，需考虑和纠正诱发室颤的原因及影响除颤效果的因素：（1）室颤时间长短；（2）心肌缺血缺氧的程度；（3）内环境紊乱，如酸中毒、低钾或高钾血症；（4）心脏大小和体重，可能与电击能量有关；（5）电极局部的阻抗。
免疫荧光操作步骤及注意事项 免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术(比如流式细胞仪)测定含量。 紫外光激发荧光物质放射荧光示意图 免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透(或称为透化)、封闭、抗体孵育及荧光检测等。细胞片制备(通俗的说法是细胞爬片)是免疫荧光实验的第一步，细胞片的质量对实验的成败至关重要，原因很简单，如果发生细胞掉片，一切都无从谈起。这一步关键的是玻片(Slides or Coverslips)的处理以及细胞的活力，有人根据成功经验总结出许多有益的细节或小窍门，非常值得借鉴。固定和通透步骤最重要的是根据所研究抗原的性质选择适当的固定方法，合适的固定剂和固定程序对于获得好的实验结果是非常重要的。免疫荧光中的封闭和抗体孵育与其它方法(如ELISA或Western Blot)中的相同步骤是类似的，最重要的区别在于免疫荧光实验中要用到荧光抗体，因此必须谨记避光操作，此外抗体浓度的选择可能更加关键。最后需要注意的是，标记好荧光的细胞片应尽早观察，或者用封片剂封片后在4?或-20?避光保存，以免因标记蛋白解离或荧光减弱而影响实验结果。
由于操作步骤比较多，同时在分析结果时无法像WB那样可以根据分子量的大小区分非特异性识别，所以要得到一个完美的免疫荧光实验结果，除了需要高质量的抗体，以及对实验条件进行反复优化外，还必须设立严谨的实验对照。总之，免疫荧光实验从细胞样品处理、固定、封闭、抗体孵育到最后的封片及观察拍照，每步都非常关键，需要严格控制实验流程中每个步骤的质量，才能最终达到你的实验目的。 基本实验步骤: (1) 细胞准备。对单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次;对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，用PBS离心洗涤(1000rpm,5min)2次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。 (2) 固定。根据需要选择适当的固定剂固定细胞。固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4?保存3个月。PBS洗涤3×5 min. (3) 通透。使用交联剂(如多聚甲醛)固定后的细胞，一般需要在加入抗体孵育前，对细胞进行通透处理，以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。通透的时间一般在5-15min.通透后用PBS洗涤3×5 min. (4) 封闭。使用封闭液对细胞进行封闭，时间一般为30min. (5) 一抗结合。室温孵育1h或者4?过夜。PBST漂洗3次，每次冲洗5min. (6) 二抗结合。间接免疫荧光需要使用二抗。室温避光孵育1h.PBST漂洗3次，每次冲洗5min后，再用蒸馏水漂洗一次。 (7) 封片及检测。滴加封片剂一滴，封片，荧光显微镜检查。 (一)细胞准备 用于免疫荧光实验的细胞可以是直接生长在盖玻片上的贴壁细胞，也可以是经过离心后涂片的悬浮细胞或者是将取自体内的组织细胞悬液离心后涂片。贴壁良好
药物临床试验急救预案标准操作规程 目的：制订药物临床试验急救预案标准操作规程，确保在临床试验中规范、及时、合理地处理受试者出现的严重不良事件，最大程度地保障受试者的生命安全。 适用范围：适用于药物临床试验中。 一、原则 防治结合，以防为主；群专结合，以专为主；强化培训，加强考核；统一领导，分级负责；快速反应，高效处置。 二、预防与控制 1、明确职责：药物临床试验专业科室必须制定参加临床试验的各类人员 职责，所有参加试验的人员均应明确职责，按章办事，各负其责。 2、制定标准操作规程：药物临床试验的各个环节均应制定标准操作规程， 与试验有关的各项仪器、设备的操作以及医疗、检查操作均应制定相 应的标准操作规程，相关人员必须严格遵守执行，减少差错事故的发生。 3、加强培训和考核:参加药物临床试验的所有研究者和药品管理员均应参 加由药物临床试验机构办公室组织的培训考核；科室内部应在试验 正式开始前对其他参与人员进行培训。培训内容必须包括GCP法规和 各项标准操作规程。 4、加强观察和随访:在药物临床试验中，研究人员应密切观察或随访受试者 用药后出现的各种反应，以便及时发现不良事件或严重不良事件，给予 及时处理。 三.处理措施：
1、药物不良反应处理措施：应将其症状体征或实验室检查结果、出现时间、 持续时间、程度、处理措施、经过等记录于病案，评价其与试验药物的相关性，由研究者签名并注明日期。根据药品不良反应报告制度报告医院药品不良反应监察中心，并由院药品不良反应监察中心报省、国家药品不良反应监测中心。
2、不良事件处理措施：发现不良事件时，研究者应立即处理并向科室负责人 报告，根据病情决定必要的诊断与治疗措施，决定是否中止临床试验观察。 所有不良事件都应追踪调查，详细记录处理经过及结果，直到妥善解决或病情稳定，若化验异常者应追踪至恢复正常。追踪随访方式可以根据不良反应事件的轻重选择住院、门诊、家访、电话、通讯等方式。 3、严重不良事件处理措施： （1）报告：研究者应向科室负责人报告并根据不良事件的性质迅速通知受试者损害和突发事件处理小组，如在节假日或夜间，当班医护人员应立即通知医院医疗行政总值班工作人员，由突发事件处理小组组长或总值班通知药物临床试验机构办公室负责人。药物临床试验机构办公室应当在24小时内向医学伦理委员会、申办者、省和国家食品药品监督管理局安监处（司）、卫生行政部门及医院药物不良反应监察组报告；紧急情况，包括严重、特别是致死的不良反应及其他严重不良事件，应以最快的通讯方式(包括电话、传真、特快专递、E-mail等)报告上述部门。 （2）紧急破盲：研究者在得到科室负责人批准后，从“试验药品管理员”处领取并拆封随药品下发的应急信件，查明所服药品的种类并及时抢救。需会诊时由受试者损害和突发事件处理小组或总值班紧急联系相关科室，必要时送ICU。已破盲的受试者将被中止试验。 （3）记录：研究者应在原始病案和CRF表中记录受试者的症状、体征、实验室检查，损害出现的时间、持续时间、程度、处理措施和经过等，保证记录真实、准确、完整、及时、合法，填写严重不良事件报告表，签名并注明日期；在原始记录中应记录时间、报告方式(电话、传真、书面)以及报
直接免疫荧光法测抗原 基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 l 磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4 l 荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释 l 缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制 l 搪瓷桶三只（内有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml） l 有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸湿的纱布垫） l 荧光显微镜 l 玻片架 l 滤纸 l 37℃温箱等。 实验步骤 1. 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。 2. 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30min）。 3. 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。 4. 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。 5. 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示： （-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；（+++
--++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为（±）或（-），即可判定为阳性。 注意事项 1. 对荧光标记的抗体的稀释，要保证抗体的蛋白有一定的浓度，一般稀释度不应超过1：20，抗体浓度过低，会导致产生的荧光过弱，影响结果的观察。 2. 染色的温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化，染色时间可以从10 min到数小时，一般30 min已足够。染色温度多采用室温（25℃左右），高于37℃可加强染色效果，但对不耐热的抗原（如流行性乙型脑炎病毒）可采用0-2℃的低温，延长染色时间。低温染色过夜较37℃30 min效果好的多。 3. 为了保证荧光染色的正确性，首次试验时需设置下述对照，以排除某些非特异性荧光染色的干扰。 （1）标本自发荧光对照：标本加1-2滴0.01mol/L，pH7.4的PBS。 （2）特异性对照（抑制试验）：标本加未标记的特异性抗体，再加荧光标记的特异性抗体。 （3）阳性对照：已知的阳性标本加荧光标记的特异性抗体。 如果标本自发荧光对照和特异性对照呈无荧光或弱荧光，阳性对照和待检标本呈强荧光，则为特异性阳性染色。 4. 一般标本在高压汞灯下照射超过3min，就有荧光减弱现象，经荧光染色的标本最好在当天观察，随着时间的延长，荧光强度会逐渐下降。
触电的急救措施教案 触电的危害非常大，所以在使用电的过程中，我们应采取措施预防触电事故的发生，但一旦发生触电事故就应该即使采取急救方法进行救助。以下是橙子整理的资料，仅供参考，欢迎阅读。 触电的急救措施教案 一、触电急救的要点 触电急救的要点是：抢救迅速和救护得法。就是用最快的速度在现场采取积极措施，保护触电者生命，减轻伤情，并根据伤情需要迅速联系医疗救护等部门救治。 大家想一想，一旦发现有人触电了，首先要干嘛?!首先应迅速拉闸断电，尽快使其脱离电源。然后将触电者迅速抬到宽敞、空气流通的地方，让他平躺在硬板床上，采取相应的急救措施。在医生到来之前，应该不间断的对触电者进行救护。低压触电通常都是假死，可能呼吸脉搏都没有了，但是这仍然不能确定这个人就死亡了，要耐心抢救到触电者复活为止，或者经过医生确定停止抢救方可停止，抢救过程中隔几分钟就判定一次触电者的呼吸和脉搏的情况，医护人员未到来之前，不得放弃抢救，触电急救十分辛苦，有时要不间断的抢救好几个小时才可以。(触电急救的案例) 二、解救触电者脱离电源的方法 刚才我们说到发现有人触电时，首先应该迅速断电，使触电者脱离电源。
那同学们知道哪些使触电者脱离低压电源触电的方法? 脱离高压电源的方法： 发现有人在高压设备上触电时,救护者应戴上绝缘手套,穿上绝缘鞋后拉开电闸,然后解脱触电者 三、触电急救的方法 对触电者采用的急救的基本方法有两种：人工呼吸和胸外心脏挤压。 1)简单诊断 触电者一经脱离电源，应立即进行检查。 1>移至通风、干燥处，将其仰卧，松开上衣和裤带; 2>观察曈昽是否放大。假死状态时，瞳孔放大; 3>观察有无呼吸，颈部动脉有无脉搏 2)对“有心跳而呼吸停止”的触电者的急救----口对口人工呼吸 1)病人取仰卧位，即胸腹朝天。 2)松开衣服和裤带，将患者头部偏向一侧,清除口中异物。 3)抢救者跪在病人的一边,使患者鼻孔朝天后仰，以保持呼吸道畅通。 4)用一只手捏紧触电者的鼻子,另一只手托在触电者颈后,将颈部上抬,深深吸一口气,用嘴紧贴触电者的嘴,大口吹气。 5)然后放松捏着鼻子的手,让气体从触电者肺部排出,如此反复进行,每5S吹气一次,坚持连续进行,不可间断,直到触电者苏醒为止 3)对“有呼吸而心跳停止”的触电者的急救----胸外心脏挤压法
细胞免疫荧光实验步骤 细胞免疫荧光实验步骤 简单实验步骤如下: 1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小时. 2.-20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥 10分钟 3.PBS洗净:3min＊3 4.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS 5.PBS洗净:2＊5min 6.羊血清封闭：３７度，２０分钟 ７.一抗，４度过夜，一般要大于１８小时或者３７度１－２小时 ８.４度PBS洗净，３min＊５次 ９.二抗３７度小于一小时 １０.３７度PBS洗净，３＊５min 凉干封片（封闭液ＰＨ８.５） 活细胞免疫荧光技术－流式细胞仪标本的制备 （一）制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、 胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法) ↓ 用10％FCS RPMI1640调整细胞浓度为 5×10６～１×10７／ml ↓ 取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(5～50μl) 的小玻璃管或塑料离心管，再加50μl 1∶20(用DPBS 稀释)灭活正常兔血清 ↓4℃ 30min 用洗涤液洗涤2次，每次加洗涤液2ml左右 1000rpm×5min
↓ 弃上清，加入50μl工作浓度的羊抗鼠 (或兔抗鼠)荧光标记物，充分振摇 ↓4℃ 30min 用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml左右 1000rpm×5min ↓ 加适量固定液(如为FCM制备标本，一般加入 1ml固定液，如制片后在荧光显微镜下观察， 视细胞浓度加入100～500μl固定液) ↓ FCM检测或制片后荧光显微镜下观察 (标本在试管中可保存5～7天) （二）试剂和器材 1. 各种特异性单克隆抗体。 2. 荧光标记的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗体，灭活正常兔血清。 3. 10％ FCS RPMI1640, DPBS、洗涤液、固定液(见附录)。 4. 玻璃管、塑料管、离心机、荧光显微镜等。 （三）注意事项 1. 整个操作在4℃下进行，洗涤液中加有比常规防腐剂量高10倍的NaN ３，上述实验条件是防止一抗结合细胞膜抗原后发生交联、脱落。 2. 洗涤要充分，以避免游离抗体封闭二抗与细胞膜上一抗相结合，出现假阴性。 3. 加适量正常兔血清可封闭某些细胞表面免疫球蛋白Fc受体，降低和防止非特异性染色。 4. 细胞活性要好，否则易发生非特异性荧光染色。 附: 1. DPBS (×10, 贮存液)
2016年徒手心肺复苏技术操作规程及评分标准
徒手心肺复苏技术操作规程及评分标准 (根据《新编临床常用50项护理技术操作规程及评分标准》主编冯雁杨顺秋金丽芬制定） 【评估】 1、环境安全：排除不安全因素，如：电源、有毒气体等。 2、评估患者：心肺复苏是急救技术，需要分秒必争，患者的评估与操作同步进行。确认患者无意识、无运动、无呼吸（终末叹气应看作无呼吸）。 3、有无禁忌证：胸部严重挤压伤、大面积肺栓塞、张力性气胸。【准备】 1、护士：着装整洁。 2、物品：手电筒、血压计、听诊器、棉签、脚凳（必要时）、复苏板、屏风或布帘、快速手消毒液、护理记录单。 3、环境：安全，患者床单元周围宽敞，必要时屏风遮挡。 4、体位：仰卧位。 【方法】 发现患者突发病情变化→判断意识的同时检查脉搏（时间<10秒）→双手拍击患者双肩膀并大声呼唤（喂/ 呼姓名，您怎么啦）→呼救（快来人啊）或请人拨打“120”，记录时间，安置患者仰卧在坚实表面（在病室内迅速去枕仰卧位，卧于软床者，肩背部下垫复苏板）→解开衣扣、腰带、暴露胸部→有口腔分泌物时，清除口腔内分泌物及异物→快速判断有无呼吸、颈动脉搏动（示指和中指指尖触及患者气管正中喉结旁开两
横指部位，判断时间5—10秒→无动脉搏动→行胸外心脏按压→确定胸外按压部位：胸骨中下1/ 3处（男性为双乳头连线的胸骨中点；女性为胸骨下切迹上两横指）→一手掌根部置于胸骨下1/ 3处→另一手掌重叠放在手背上，两手手指相扣，并拢翘起不接触胸壁，以掌根部接触按压部位→双臂、双肘关节伸直，利用上身重量垂直、快速、有力、均匀地向下压，使胸骨下陷深度5㎝以上→放松时掌根应紧贴胸壁，并使胸廓完全回弹（按压与放松时间相等，按压次数30次，按压频率>100次/分。 人工呼吸：清理口腔内分泌物→开放气道→仰头举颏头法→一手小鱼际置于患者前额用力向后压使头后仰→ 压额手拇指与示指捏闭患者鼻孔，另一手抬颏→深吸气后张口用双唇紧包住患者口唇（口包严）用力吹气1--2秒/分，使患者胸廓明显起伏→吹气间隙放松鼻翼的手→再次捏鼻吹气连 续2次（吹气频率为成人10—12次/分）。 心脏按压与通气比为30：2，操作共计5个循环在2分钟内完成→再次判断：触摸颈动脉，观察颈动脉有无搏动和呼吸情况→若无搏动，继续心肺复苏→若复苏有效，进一步生命支持→撤除复苏板，头部垫枕→记录时间→洗手→继续后期高级生命支持。
免疫组化与免疫荧光 一、两者都是蛋白定位的检测（也就是确定蛋白是表达在细胞核/浆/膜）。 二、区别是： 1、概念和基本原理 免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜的现像和放大作用，在细胞，亚细胞水平检测各种抗原物质，并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。免疫组织化学技术现已有：免疫荧光组织（细胞）化学技术、免疫酶组织（细胞）化学技术、亲和组织化学技术、免疫金银及铁标记免疫组织化学技术等。 免疫荧光组织（细胞）化学技术是采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），形成的抗原抗体复合物上带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原（或抗体）的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量。以达到对抗原物质定位、定性、定量测定的目的。 2、标本制作： 免疫荧光一般用冰冻切片，减少杂质干扰；而酶免疫组化一般用石蜡切片或冰冻切片均可以。 3、实验步骤：免疫荧光染色步骤简单，而酶免疫组化方法较为复杂，多了DAB显色过程。 4、染色后的标本保存：免疫荧光染色后的标本一般短时间拍照，时间长了荧光衰退；而酶免疫组化染色标本可以长期保存。 5、免疫组化结果除了知道蛋白是在细胞浆还是细胞膜表达高些，还可以用软件做相对定量分析。 6、免疫荧光得到的图片是彩色的，漂亮些，可以发高档次文章。 免疫学三大工具：免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。
电焊工作人员触电急救处理措施 电焊工触电多数是属于低压触电。发现有人触电时，切勿惊慌失措。触电急救的要点是动作迅速、救护得法。首要的任务是立即使触电者脱离电源或带电体。 一、解脱电源 为使触电者脱离电源，必须注意急救者的自身安全。在低压电网（对地电压小于250V）中，可采取下列措施。 1. 低压触电事故 (1) 如果电源的闸刀开关或插销就在附近，应迅速拉开关或拔掉插头。但此时应注意，一般拉线开关和扳把开关只能断开一根导线，而不一定控制的是相线（俗称火线），虽然断开了开关，人身触电的导线可能仍然带电，所以拉这种开关并不保险，还应该拉开闸刀开关。 (2) 如闸刀开关或插销距离触电地点很远，则应迅速用绝缘良好的电工钳或有干燥木柄的斧头、铁锹等利器切断电源线。切断后，有电的一头应妥善处理，防止带电导线触及
其他人体，多股绞合线应分相切断，以防短路伤人。 (3) 如果导线搭落在触电者身上或压在身下，可用干燥的木棒、竹竿、木条等迅速将导线拨离触电者，或者用干燥的绝缘绳索套拉电线或触电者，使其脱离电源。 (4) 若现场附近无任何合适的绝缘物可利用，而触电人的衣服又是干的，则救护人员可用包有干燥毛巾或衣服的一只手去拉触电人的衣服，使其脱离电源，若救护人未穿鞋或穿湿鞋，则不宜这样做抢救工作。 (5) 救护人可站在干燥的木板、木桌椅或橡胶垫等绝缘物品上，用一只手把触电者拉脱电源。 (6) 如果触电者由于触电痉挛，手指紧握导线或导线缠绕在身上时，可用干燥的木柄斧、胶把钳等工具切断电线；或用干燥的木板等绝缘物塞进触电者身下，使其与地绝缘来隔断电源，然后采用其他办法切断电源。 2. 高压触电事故 (l) 立即通知有关部门停电。 (2) 带上绝缘手套，穿上绝缘靴，采用相应电压等级的
方法一： 1.首先需要把细胞养在玻璃片上（悬浮细胞需要用多聚赖氨酸包被过的玻璃片） 2.然后在4％PFA里面室温下固定30分钟，PBS洗两次，0.1% TX-100室温下作用1－2分 钟使细胞膜通透。 3.接下来进行荧光标记，需要在一个大的容器（面积大，扁平状的，比如大的培养皿）里面， 放一张用水打湿的滤纸，以保持湿度。 4.剪一片合适大小的parafilm，在上面滴上稀释在1％BSA/TBS中的一抗（稀释倍数依具体 抗体而定），每个玻璃片30ul足够，把玻璃片盖在上面（细胞面朝下），室温下孵育30分钟，然后在PBS里洗三次。 5.接下来二抗孵育步骤同上。 6.最后，在载玻片加上mounting medium（大约每个玻璃片加10ul），把玻璃片放上去（细 胞面朝下），37度30分钟，然后就可以在荧光显微镜下观察了。 7.抗体很重要，不能有非特异性结合。你可以先做WB检测一下你的抗体，看看有没有杂带。 8.双标的话，可以把两个一抗一起加或者分别标记两次（可以都试一下看看那种方法合适）。 如果一个抗体需要二抗，一个是直接荧光标记的，可以把荧光标记的那个和另外一个的二抗一起加。 方法二： 1.选取一抗时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于rabbit和rat的抗体，二抗则是不 同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti-rat-Tex-Red（红）。 2.我的做法是两种一抗同时孵育，然后两种二抗同时孵育。抗体浓度、孵育时间要仔细摸索， 我感觉一抗4度孵育过夜比较好，背景比较清晰。 3.我的阳性对照用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG，荧光标记物对 照是PBS+荧光标记物。 4.封闭血清与二抗来源动物一致，我用的是10%的正常donkey血清。 5.其余步骤同一般免疫荧光单标操作。 方法三： 1.片子的制作：可以做细胞爬片，细胞甩片，还有直接在24well/12well/96well中直接染色 2.细胞爬片的制作：直接购买公司的已经处理过的细胞爬片，要是自己制作的话，就用无菌 的盖玻片用多聚赖氨酸处理后让细胞自己爬片 3.细胞甩片：需要甩片机将细胞悬液均匀甩到玻片上。
免疫荧光技术的实验方法及其分类 一、免疫标记法及其分类 1.荧光免疫法 原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。底物用磷酸-4-甲基伞形酮，检测产物发出的荧光，荧光强度与Mb浓度呈正比，可在8min 内得出结果。结果以Mb每小时释放的速率表示(△Mb)表示。该法重复性好，线性范围宽，具有快速、敏感、准确的特点。 以双抗夹心法为例，首先将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体。除去未结合抗体，然后加受检标本，使其中的蛋白抗原与固相抗体形成抗原抗体复合物。洗涤除去未结合物，接着加入荧光标记的抗体，使之与抗原特异性结合，形成抗体—抗原—抗体复合物。最后根据荧光强度，即可对蛋白抗原进行定量。 传统的荧光免疫法受本底荧光的干扰较大，时间分辨荧光免疫测定法是以具有特长寿命的稀土金属如铕，作为标记物，加入正常液后激发测定，能有效去除短寿命本底荧光的干扰。
2.放射免疫法 放射免疫法是以过量的未标记抗原与放射性物质标记的抗原，竞争性地与抗体结合，形成有放射性的抗原—抗体复合物与无放射性的抗原—抗体复合物，并有过剩的标记抗原与未标记的抗原。然后通过离心沉淀等方法，将抗原—抗体复合物与游离抗原分离，分别测定其放射性强度与标准曲线比较，即可对未标记的待测抗原进行定量。 RIA法测定血清蛋白灵敏度高、特异性强，可准确定量到ng/ml 水平。但早期的方法操作麻烦，耗时长，且有放射性污染。近年来，随着单克隆抗体的应用，RIA的灵敏度又有了较大提高，且操作大为简化，并已有商品试剂盒供应，使用方便。 3.酶联免疫法(ELISA) ELISA法有竞争法和夹心法两种。竞争法是基于标准或血清Mb 和微孑L板上包被的Mb竞争性地与单克隆抗体相结合的原理而建立，该法的最低检测限为10μg/L，线性范围达1 000ug/L。夹心ELISA 法与EIA具有良好的相关性(r=0.92)。ELISA法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，操作简单，适用于多份标本的检测，不需特殊仪器设备等优点，易于推广普及。但不适合急诊的快速检测。
在同一组织细胞标本上需要同时检测两种抗原时，需进行双重荧光染色。双重免疫荧光标记法(double immunofluorescence labeling method)也分为直接法和间接法。 (1)直接法双重免疫荧光标记：将标记有两种不同荧光素的抗体(如抗A 和抗B)以适当比例混合，滴加在标本上孵育，然后洗去未结合的荧光抗体，在荧光显微镜下分别选择两种相应的激发滤片观察，即可对两种抗原进行定位和定量。直接法简便可靠，但灵敏度较低。 (2)间接法双重免疫荧光标记：用未标记的两种特异性第一抗体孵育组织或细胞，洗去多余的第一抗体后，再用两种不同的荧光素分别标记的第二抗体孵育组织或细胞，洗去多余的第二抗体，后在荧光显微镜下分别选择两种相应的激发滤片观察，从而对两种抗原进行定位和定量。使用此法应注意两种特异性第一抗体必须来源于不同种属，且荧光标记第二抗体的种属必须与第一抗体的种属相匹配。 免疫荧光双标技术中操作要点和注意事项 一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化，不同点如下： 1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其相同。 2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。 3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。 4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油：0.01M PBS (1：1)。条件许可，建议购买抗淬灭的封片液，使标本可以保存更久。
5、荧光抗体的孵育以及后续处理需要避光。 6、荧光抗体染色假阳性可能会多，需要分别设定阳性和阴性对照。 二、注意事项 1、荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长，可能会使荧光提前衰退。 2、每次试验均需设置以下三种对照： (1) 阳性对照：阳性血清+荧光标记物; (2) 阴性对照：阴性血清+荧光标记物; (3) 荧光标记物对照：PBS+荧光标记物。 三、免疫荧光双标的经验之谈 1、选取一抗时，要求来源于两种不同的动物，我用的是来源于家兔和大鼠的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC(绿)和donkey anti-rat-Tex-Red(红)。 2、我的做法是两种一抗同时孵育，然后两种二抗同时孵育。抗体浓度、孵育时间要自我摸索，我感觉一抗4℃孵育过夜比较好，背景比较清晰。 3、我的阳性对照采用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG，荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。 4、封闭血清是二抗来源动物的正常血清，我用的是10%正常donkey 血清。 5、其余事项同免疫荧光单标操作。 免疫组化双重染色方法和步骤 在生物医学和临床研究实践中，经常需要检测两种不同物质是否在同一
XXXX 医院 重 症 医 学 科 技术规范与操作规程
目录 一、气管插管术 (3) 二、气管切开术 (4) 三、经皮气管切开术 (6) 四、胸腔穿刺术 (8) 五、胸腔闭式引流术 (9) 六、腹腔穿刺术 (10) 七、骨髓穿刺术 (11) 八、腰椎穿刺术 (12) 九、中心静脉穿刺术 (14) 十、血液净化临时血管通路的建立 (18) 十一、肺动脉漂浮导管植入术 (20) 十二、亚低温治疗 (22) 十三、心脏电转复及除颤术 (23) 十四、心肺复苏术 (26) 十五、心包腔穿刺术 (29) 十六、经皮肺穿刺活检术 (31) 十七、体表肿块穿刺取样活检术 (33) 十八、关节穿刺术 (34) 十九、清创术、清创缝合术 (35)
气管插管术 [适应证]:各种原因所致的呼吸衰竭,需心肺复苏以及气管内麻醉者;加压给氧;防止呕吐物分泌物流入气管及随时吸除分泌物;气道堵塞的抢救;复苏术中及抢救新生儿窒息等。 [禁忌证]:明显喉头水肿或声门及声门下狭窄者、急性呼吸道感染者。 [用品]:麻醉喉镜、气管导管、气管导管衔接管、牙垫、导管管芯、吸痰管、注射器以及供给正压通气的呼吸器及氧气等。 [方法]: 1、患者仰卧,头垫高10cm,后仰。术者右手拇、食、中指拨开上、下唇,提起下颌并启开口腔。左手持喉镜沿右口角置入口腔,将舌体稍向左推开,使喉镜片移至正中位,此时可见腭垂(悬雍垂)。 2、沿舌背慢慢推进喉镜片使其顶端抵达舌根,稍上提喉镜,可见会厌的边缘。继续推进喉镜片,使其顶端达舌根与会厌交界处,然后上提喉镜,以撬起会厌而显露声门。 3、右手以握笔式手势持气管导管,斜口端对准声门裂,轻柔地插过声门而进入气管内。放入牙垫于上、下齿之间。退出喉镜。听诊两肺有呼吸音,确定气管导管在气管内,且位置适当后,妥善固定导管与牙垫。 4、气管导管套囊注入适量空气(3-5ml),使导管与气管壁密闭,便于辅助呼吸或控制呼吸,并可防止呕吐物、口腔分泌物或血液流入气管。 [注意事项]: 1、插管前,检查插管用具就是否齐全合用,特别就是喉镜就是否明亮。 2、气管插管时患者应呈中度或深昏迷,咽喉反射消失或迟钝;如嗜睡或浅昏迷,咽喉反应灵敏,应行咽喉部表面麻醉,然后插管。 3、喉镜的着力点应始终放在喉镜片的顶端,并采用上提喉镜的方法。声门显露困难时,可请助手按压喉结部位,可能有助于声门显露,或利用导管管芯将导管弯成“L”形,用导管前端挑起会厌,施行盲探插管。必要时,可施行经鼻腔插管、逆行导管引导插管或纤维支气管镜引导插管。 4、插管动作要轻柔,操作迅速准确,勿使缺氧时间过长,以免引起反射性心搏、呼吸骤停。 5、插管后吸痰时,必须严格无菌操作,吸痰持续时间一次不应超过15s,必要时于吸氧后再吸引。经导管吸入气体必须注意湿化,防止气管内分泌物稠厚结痂,影响呼吸道通畅。 6、目前所用套囊多为高容低压,导管留置时间一般不宜超过2-3周,预计2-3周内病情不改善,可考虑尽早行气管切开术。 气管切开术
触电急救措施 日常生活中，时常会发生一些突发的意外事故，如电击、溺水等。遇到这些情况时，周围的人员不能紧张慌乱，应该首先通 过电话通知急救部门。在急救部门未到现场院之前，周围人员应及时对伤者采取有效的急救措施。如果伤者有神智不清、抽搐、 颈动脉摸不到搏动、心跳停止、瞳孔散大、呼吸停止、面色苍白等症状时，可判断为心跳骤停。心跳骤停是临床最紧急的情况， 必须分秒必争、不失时机地进行抢救。 紧急抢救的方法如下 在心跳骤停的极短时间内，首先进行心前区叩击，连击2~3次。然后进行胸外心脏按压及口对口人工呼吸。具体方法是，双 手交叉相叠用掌部有节律地按压心脏，这种做法的目的在于使血液流入主动脉和肺动脉，建立起有效循环。做口对口人工呼吸时 ，有活动假牙者应先将假牙摘下，并清除口腔内的分泌物，以保持呼吸道的通畅。然后，捏紧鼻孔吹气，使胸部隆起、肺部扩张 。心脏按压必须与人工呼吸配合进行，每按心脏4~5次吹气一次，肺部充气时不可按压胸部。 现场急救触电才人工呼吸法 触电人脱离电源后，应立即进行生理状态的判定。只有经过正确的判定，才能确定抢救方法。 （1）判定有无意识；救护人轻拍或轻摇触电人的户膀（注意不要用力过猛或摇头部，以免加重可能存在的外伤），并在耳 旁大声呼叫。如无反应，立即用手指掐压人中穴。当呼之不应，刺激也毫无反应时，可判定为意识已丧失。该判定过程应在5S内 完成。 当触电人意识已丧失时，应立即呼救。将触电人仰卧在坚实的平面上，头部放平，颈部不能高于胸部，双臂平放在驱干两侧 ，解开紧身上衣，松开裤带，取出假牙，清除口腔中的异物。若触电人面部朝下，应将头、
户、驱干作为一个整体同时翻转，不 能扭曲，以免加重颈部可能存在的伤情。翻转方法是：救护人跪在触电人肩旁，先把触电人的两只手举过头，拉直两腿，把一条 腿放在另一条腿上。然后一只手托住触电人的颈部，一只手扶住触电人的肩部，全身同时翻转。 （2）判定有无呼吸：在保持气道开放的情况下，判定有无呼吸的方法有：用眼睛观察触电人的胸腹部有无起伏；用耳朵贴 近触电人的口、鼻，聆听有无呼吸的声音；用脸或手贴近触电人的口、鼻，测试有无气体排出；用一张薄纸片放在触电人的口、 鼻上，观察纸片是否动。若胸腹部无起伏、无呼气出，无气体排出，纸片不动，则可判定触电人已停止呼吸。该判定在3~5S内完 成。以上的抢救方法虽然只是在遇到突发事件时才需要用到的，但它是家庭急救的必备手段，我们应该及时学习并掌握。 触电急救方法 当触电者脱离电源后，应根据触电者的具体情况，迅速组织现场救护工作。要视触电者身体状况，确定护理和抢救方法。 人触电后不一定会立即死亡，出现神经麻痹、呼吸中断、心脏停跳等症状，外表上呈现昏迷的状态，此时要看作是假死状态，如现场抢救及时，方法得当，人是可以获救的。现场急救对抢救触电者是非常重要的。 国外一些统计资料指出，触电后1分钟开始救治者，90％有良好效果；触电后12分钟开始救治者，救活的可能性就很小。这说明抢救时间是个重要因素。因此，争分夺秒，及时抢救是至关重要的。平时要对职工进行触电急救常识的宣传教育，对与电气设备有关的人员还应进行必要的触电急救培训。 触电失去知觉后进行抢救，一般需要很长时间，必须耐心持续地进行。只有当触电者面色好转，口唇潮红，瞳孔缩小，心跳和呼吸逐步恢复正常时，才可暂停数秒进行观察。如果触电者还不能维持正常心跳和呼吸，则必须继续进行抢救。触电急救应尽可能就地进行，只有条件不允许时，才可将触电者抬到可靠地方进行急救。在运送医院途中，抢救工作也不能停止，直到医生宣布可以停止为止。 抢救过程中不要轻易注射强心针，只有当确定心脏已停止跳动时，才可使用。 一、救护方法(1)触电者神志清醒，但有些心慌、四肢发麻、全身无力或触电者在触电过程中曾一度昏迷，但已清醒过来。应使触电者安静休息、不要走动、严密观察，必要时送医院诊治。(2)触电者已经失去知觉，但心脏还在跳动、还有呼吸，应使触电者在空气清新的地方舒适、安静地平躺，解开妨碍呼吸的衣扣、腰带。如果天气寒冷要注意保持体温，并迅速请医生到现场诊治。(3)如果触电者失去知觉，呼吸停止，但心脏还在跳动，应立即进行口对口(鼻)人工呼吸，并及时请医生到现场。(4)如果触电者呼吸和心脏跳动完全停止，应立即进行口对口(鼻)人工呼吸和胸外心脏按压急救，并迅速请医生到现场。应