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第一章1.酶工程：是生物工程的重要组成部分，是随着酶学研究迅速发展，特别是酶的推广应用，使酶学和工程学相互渗透、结合、发展而成的一门新的技术科学，是酶学、微生物学的基本原理与化学工程有机结合而产生的边缘科学技术。
2.化学酶工程：指自然酶、化学修饰酶、固定化酶及化学人工酶的研究和应用3.生物酶工程：是酶学和以基因重组技术为主的现代分子生物学技术结合的产物，亦称高级酶工程。
4.酶工程的组成部分？答：酶工程主要指自然酶和工程酶（经化学修饰、基因工程、蛋白质工程改造的酶）在国民经济各个领域中的应用。
内容包括：酶的产生；酶的分离纯化；酶的改造；生物反应器。
5.酶的结构特点？答：虽然少数有催化活性的RNA分子已经鉴定，但几乎所有的酶都是蛋白质，因而酶必然具有蛋白质四级结构形式。
其中一级结构是指具有一定氨基酸顺序的多肽链的共价骨架；二级结构为在一级结构中相近的氨基酸残基间由氢键的相互作用而形成的带有螺旋、折叠、转角、卷曲等细微结构；三级结构系在二级结构基础上进一步进行分子盘区以形成包括主侧链的专一性三维排列；四级结构是指低聚蛋白中各折叠多肽链在空间的专一性三维排列。
具有低聚蛋白结构的酶（寡聚酶）必须具有正确的四级结构才有活性。
具有活性的酶都是球蛋白，即被广泛折叠、结构紧密的多肽链，其氨基酸亲水基团在外表，而疏水基团向内。
6.酶活性中心：是酶结合底物和将底物转化为产物的区域，通常是整个酶分子中相当小的一部分，它是由在线性多肽链中可能相隔很远的氨基酸残基形成的三维实体。
7.酶作用机制有哪几种学说？答：锁和钥匙模型、诱导契合模型8.酶催化活力的影响因素？答：底物浓度、酶浓度、温度、pH等。
9.酶的分离纯化的初步分离纯化的步骤？答：（一）材料的选择和细胞抽提液的制备1.材料的选择：目的蛋白含量要高，而且容易获得2.细胞破碎方法及细胞抽提液的制备。
为了确保可溶性细胞成分全部抽提出来，应当使用类似于生理条件下的缓冲液。
动物组织和器官要尽可能除去结缔组织和脂肪、切碎后放人捣碎机中。
第一章绪论1.何谓酶工程，试述其主要内容和任务。
酶的生产、改性与应用的技术过程称为酶工程。
酶工程的主要内容包括：微生物细胞发酵产酶，动植物细胞培养产酶，酶的提取与分离纯化，酶分子修饰，酶、细胞、原生质体固定化，酶非水相催化，酶定向进化，酶反应器和酶的应用等。
酶工程的主要任务是经过预先设计，通过人工操作获得人们所需的酶，并通过各种方法使酶的催化特性得以改进，充分发挥其催化功能。
2.酶有哪些显著的催化特性？酶是生物催化剂，与非酶催化剂相比，具有专一性强、催化效率高和作用条件温和等显著特点。
3.简述影响酶催化作用的主要因素。
酶的催化作用受到底物浓度、酶浓度、温度、pH、激活剂浓度、抑制剂浓度等诸多因素的影响。
5.简述酶活力单位的概念和酶活力的测定方法。
酶活力单位：在特定条件下（温度可采用25℃，pH等条件均采用最适条件），每1min催化1μmol的底物转化为产物的酶量定义为1个酶活力单位，这个单位称为国际单位（IU）。
在特定条件下，每秒催化1mol底物转化为产物的酶量定义为1卡特（kat）酶活力的测定方法：振荡测定法，酶柱测定法，连续测定法，固定化酶的比活力测定，酶结合效率与酶活力回收率的测定，相对酶活力的测定。
或者测定方法：化学测定法、光学测定法、气体测定法其它.酶的发展历史：4000多年前的夏禹时代——酿酒技术。
3000多年前的周朝——制造饴糖、食酱等食品。
1833年——佩恩和帕索兹从麦芽的水抽提物中得到淀粉酶。
19世纪中叶——巴斯德对酵母的乙醇发酵进行研究。
1913年——米彻利斯和曼吞根据中间产物学说，推导出米氏方程。
1926年——萨姆纳得到脲酶结晶，并证明它具有蛋白质的性质。
1960年——雅各和莫诺德提出操纵子学说。
1982年——切克发现核酸类酶。
1983年——阿尔特曼发现核糖核酸酶P的RNA部分M1RNA具有核糖核酸酶P的催化活性。
酶的专一性分为绝对专一性和相对专一性。
相对专一性又可分为键专一性和基团专一性米氏方程：酶的可逆性抑制作用可以分为竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制。
由活细胞产生的生物催化剂，具有特殊作用的蛋白质，能在生命体内(包括动物、植物和微生物)催化一切化学反应，维持生命特征。
是酶学基本原理与化学工程相结合而形成的一门新兴的技术科学， 以应用目的为出发点来研究酶， 利用酶的催化特性并通过工程化将相应原料转化为目的物质的技术。
水溶性酶经物理或者化学方法处理后成为不溶于水的但仍 具有酶活性的一种酶的衍生物，在催化反应中以固相状态作用于底物。
表示酶活力大小的尺度；一个国际单位(IU)是指在特定条件下(25℃)，每分钟内转化 1mol 底物或者催化形成 1mol 产物所需的酶量。
一个 Kat(卡塔尔，酶活性国 际单位)是指每秒钟内转化 1mol 底物所需的酶量， 1 Kat = 6107 IU 。
(酶活力：指酶催化一定化学反应的能力；用在一定条件下， 所催化的反应初速度来表示； 是研究酶的特性，酶制剂生产应用以及分离纯化时的一项必不可少的指标。
) 是酶纯度的量度，是指单位分量酶蛋白所具有的酶活力，单位为 IU/mg 。
比活力越大，酶纯度越高。
比活力=活力单位数/每毫克酶蛋白。
可产生一种组成型调节蛋白(regulatory protein) (一种变构蛋白)，通过与效应物(effector) (包括诱导物和辅阻遏物)的特异结合而发生变构作用，从而改变它与控制基因的结合力。
调节基因常位于调控区的上游。
位于启动基因和结构基因之间的一段碱基顺序，能特异性地与调节基因产生的变构蛋白结合，控制酶合成的时机与速度。
决定某一多肽的 DNA 模板，与酶有各自的对应关系，其中的遗传信息可转录为mRNA ，再翻译为蛋白质。
是指在一定的条件下，用适当的溶剂或者溶液处理含酶原料，使酶充分溶解到 溶剂或者溶液中的过程。
是指在份子水平上不同粒径份子的混合物在通过半透膜时，实现选择分离的技术，半透膜又称为分离膜，膜壁弥漫小孔，根据孔径大小可以分为：微滤膜( )、超滤膜(uF)、纳滤膜(NF)、反渗透膜(RO)等，分离都采用错流过滤方式。
第二部分考核内容与考核目的第一章酶工程基础一、学习目的与规定规定学生识记酶工程的定义、研究内容及学科的发展历程。
了解酶工程的发展方向和趋势。
二、考核知识点与考核目的1、重点酶工程的定义（识记）酶工程:酶的生产.改性与应用技术过程酶工程（Enzyme Engineering）即运用酶的催化作用，在一定的生物反映器中，将相应的原料转化成所需的产品酶工程的应用范围1对生物宝库中存在天然酶的开发和生产2酶的分离纯化及鉴定技术3酶的固定化技术(酶和细胞固定化)4酶反映器的研制和应用5与其他生物技术领域的交叉和渗透.其中固定化酶技术是酶工程的核心.事实上有了酶的固定化技术,酶在工业生产中的运用价值才真正得以体现酶工程的研究内容（识记）。
酶工程是现代酶学理论与化工技术的交叉技术，它的应用重要集中于食品工业、轻工业和医药工业等领域。
➢对生物宝库中存在天然酶的开发和生产；➢自然酶的分离纯化及鉴定技术；➢酶的固定化技术（酶和细胞固定化）；➢酶反映器的研制和应用；➢与其他生物技术领域的交叉和渗透；2、次重点酶工程的发展方向和趋势（理解）酶在生物技术领域的用途:用酶除去细胞壁,如用溶菌酶除去细菌细胞壁;酶在大分子切割方面应用,如限制性内切核酸酶.DNA外切核酸酶;酶在分子拼接方面的应用，如DNA连接酶、DNA聚合酶第二章酶的发酵工程一、学习的目的与规定规定学生掌握酶生物合成的诱导作用、酶生物合成的反馈阻遏作用。
掌握酶发酵工艺条件及其控制，理解酶发酵动力学。
酶的发酵生产:通过预先设计,通过人工操作,运用微生物的生命活动获得所需的酶的技术过程,称为酶的发酵生产液体深层发酵:采用液体培养基,置于生物反映器中,通过灭菌,冷却后,接种产酶细胞,在一定的条件下,进行发酵,生产得到所需的酶,液体深层发酵不仅适合于微生物细胞的发酵生产,也可用于植物细胞和动物细胞的培养,液体深层发酵的机械化限度高,技术管理较严格,酶的产率较高,质量较稳定,产品回收率高,是目前酶发酵生产的重要方式酶的发酵生产根据微生物的培养方式可分为:固体培养发酵.液体深层发酵.固定化微生物细胞发酵和固定化微生物原生质体发酵提高酶产量的措施有哪些一方面要选育或选择使用优良的产酶细胞,打破酶合成调节限制的方法:1通过条件控制提高酶产量:添加诱导物.减少阻遏物浓度2通过基因突变提高酶产量:使诱导型变为组成型,使阻遏型变为去阻遏型3其它提高酶产量的方法:添加表面活性剂.添加产酶促进剂二、考核知识点与考核目的共阻遏物:酶催化作用的产物或代谢物途径的末端产物使该酶的生物合成受阻.引起反馈阻遏的物质,称为共阻遏物1、重点（1）分解代谢物的阻遏作用（应用）是由分解代谢物（葡萄糖和其他容易运用的碳源等物质通过度解代谢而产生的物质）引起的阻遏作用。
《酶工程》复习题08生物技术林阳and曾洋名词解释：1.酶工程：又称为酶技术，是指酶的生产与应用的技术过程。
2.酶的生产：通过各种方法获得人们所需的酶的技术过程。
3.酶的改性：是通过各种方法改进酶的催化特性的技术过程。
4.酶的应用：是在特定的条件下通过酶的催化作用，获得人们所需的产物、除去不良物质或获得所需信息的技术过程。
5.酶工程的主要任务：经过预先设计，通过人工操作，获得人们所需的酶，并通过各种方法使酶充分发挥其催化功能。
6.酶活力：指在一定条件下，酶所催化的反应初速度。
7.酶活力单位：在特定条件下（温度可采用25℃，pH等条件均采用最适条件），每1 min 催化1 μmol 的底物转化为产物的酶量定义为1 个酶活力单位。
或在特定条件下，每秒催化1 mol底物转化为产物的酶量定义为1卡特（Kat）。
1 Kat =6×107 IU8.酶的比活力：是酶纯度的一个指标，是指在特定条件下，单位重量（mg）蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。
9.酶的转换数：Kp，又称为摩尔催化活性，是指每个酶分子每分钟催化底物转化的分子数。
即是每摩尔酶每分钟催化底物转化为产物的摩尔数。
10.酶的催化周期: 转换数的倒数称为酶的催化周期。
催化周期是指酶进行一次催化所需的时间。
11.固定化酶: 固定在载体上并在一定空间范围内进行催化反应的酶。
12.酶的结合效率：又称为酶的固定化率，是指酶与载体结合的百分率。
13.酶活力回收率：是指固定化酶的总活力与用于固定化的总游离酶活力的百分率。
14.相对酶活力：具有相同酶蛋白（或酶RNA）量的固定化酶活力与游离酶活力的比值称为相对酶活力。
15.酶的定向进化技术：模拟自然进化过程（随机突变和自然选择）在体外进行酶基因的人工随机突变，建立突变基因文库，在人工控制条件的特殊环境下，定向选择得到具有优良催化特性的酶的突变体的技术过程。
16.酶的提取分离法生产：是采用各种技术从动物、植物、微生物细胞或者其它含酶原料中将酶提取出来，再与所含杂质进行分离的技术过程。
《酶⼯程》复习⼤纲答案详解《酶⼯程》复习⼤纲试题题型：名词解释，判断题，选择题，简答题，论述题，实验设计题。
第⼀章酶⼯程基础⼀、名词解释：酶：指⽣物体产⽣的具有催化活性的⽣物⼤分⼦。
酶⼯程：由酶学与化学⼯程技术、基因⼯程技术、微⽣物学技术相结合⽽产⽣的⼀门新技术，是⼯业上有⽬的地设计⼀定的反应器和反应条件，利⽤酶的催化功能，在常温常压下催化化学反应，⽣产⼈类所需产品或服务于其它⽬的地⼀门应⽤技术。
转换数：酶使底物每分钟变化的分⼦数。
催化周期：单位时间内每个酶分⼦将底物分⼦转换成产物的最⼤值，即每摩尔酶单位时间催化底物转化为产物的摩尔数。
酶活⼒：也称为酶活性，是指酶催化某⼀化学反应的能⼒。
其⼤⼩可⽤在⼀定条件下，酶催化某⼀化学反应的速度来表⽰，酶催化反应速度愈⼤，酶活⼒愈⾼。
⽐活⼒：指在特定条件下，单位质量的蛋⽩质或RNA所拥有的酶活⼒单位数。
酶活国际单位IU: 1961年国际酶学会议规定：在特定条件(25℃，其它为最适条件)下，每分钟内能转化1µmol底物或催化1µmol产物形成所需要的酶量为1个酶活⼒单位，即为国际单位（IU）。
催量kat：每秒钟转化 1 摩尔底物（被反应物）所需的酶活⼒为1个katal ,简称 kat⼆、问答题1、酶催化的特点有哪些？⾼效性：酶的催化效率⽐⽆机催化剂更⾼,使得反应速率更快；专⼀性：⼀种酶只能催化⼀种或⼀类底物,如蛋⽩酶只能催化蛋⽩质⽔解成多肽、⼆肽酶可催化各种氨基酸脱⽔缩合形成的⼆肽；温和性：是指酶所催化的化学反应⼀般是在较温和的条件下进⾏的.活性可调节性：包括抑制剂和激活剂调节、反馈抑制调节、共价修饰调节和变构调节等. 有些酶的催化性与辅因⼦有关.易变性：由于⼤多数酶是蛋⽩质,因⽽会被⾼温、强酸、强碱等破坏2、影响酶催化作⽤的因素有哪些？◇1温度：酶促反应在⼀定温度范围内反应速度随温度的升⾼⽽加快；但当温度升⾼到⼀定限度时，酶促反应速度不仅不再加快反⽽随着温度的升⾼⽽下降。
第一章绪论1．酶：是具有生物催化功能的生物大分子，分为蛋白类酶和核酸类酶两大类别。
酶的生产：是指通过各种方法获得人们所需的酶的技术过程，主要包括微生物发酵产酶、动植物培养产酶和酶的提取与分离纯化等。
酶的改性：是通过各种方法改进酶的催化特性的技术过程，主要包括酶分子修饰、酶的固定化、酶非水相催化和定向进化。
酶的应用：是通过酶的催化作用获得人们所需的物质或者除去不良物质的技术过程，主要包括酶反应器的选择与设计以及酶在各个领域的应用等2．酶催化的作用特点：专一性强、催化效率高和作用条件温和等。
酶的催化作用受到底物浓度、酶浓度、温度、pH值、激活剂浓度、抑制剂浓度等诸多因素的影响。
在酶的应用过程中，必须控制好各种环境条件，以充分发挥酶的催化功能。
3．米氏方程：V=VmS/Km+S,Km为米氏常数，是酶催化反应速度等于最大反应速度一半时的底物浓度。
抑制剂的影响：有可逆抑制剂和不可逆抑制剂之分。
不可逆抑制剂与酶分子结合后，抑制剂难于除去，酶活性不能恢复。
可逆抑制剂与酶的结合是可逆的，只要将抑制剂除去，酶酶活力即可恢复。
可逆性抑制作用可以分为竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制三种。
①竞争性抑制：是指抑制剂和底物竞争与酶分子结合而引起的抑制作用。
抑制的效果强弱与竞争性抑制剂的浓度、底物浓度以及抑制剂和底物与酶的亲和力大小有关，随着底物浓度增加，酶的抑制作用减弱。
特点：酶催化反应的最大反应速率Vm不变，米氏常数Km 增大。
②非竞争性抑制：是指抑制剂与底物分别于酶分子上的不同位点结合而引起酶活性降低的抑制作用。
特点：最大反应速度Vm减少，米氏常数Km不变。
③反竞争性抑制：在底物与酶分子结合生成中间复合物后，抑制剂再与中间复合物结合而引起的抑制作用称为反竞争性抑制。
特点：最大反应速度Vm和米氏常数Km同时减少。
4．酶的活力测定酶活力：是指在一定条件下，酶所催化的反应初速度。
在外界条件相同的情况下，反应速度越大，意味着酶活力越高。
微生物动植物细胞培养产酶3.质体固定化6.8.振荡测定法在特定的条件下，一边振荡发货搅拌，一边进行催化反应。
经过一定时间，取出一定量的反应液进行酶活力测定。
2，酶柱测定法将一定量的固定化酶装进具有很稳装置的反应柱中，在适宜的条件下让底物溶液以一定的流速流过酶柱，收集流出的反应液。
测定反应液中底物的消耗量或产物的生成量3，连续测定法利用连续分光光度法等测定方法可以对固定化酶反应液进行连续测定，从而测定固定化酶的酶活力4，比活力测定比活力=酶活力单位/cm2.5，酶结合效率(固定化率)=（加入的总酶活力-未结合的酶活力）/加入的总酶活力x100%.酶活力回收率=固定化酶总活力/用于固定化的总酶活力具有相同酶蛋白（或酶RNA提取分离法2.生物合成法3.分成的作用2.酶生物合成的诱导作用，加入某些物质能使酶的生物合成开始或加速进行的现象3.酶的生物合成与细胞生长同步进行。
延续合成型，在细胞进入平衡期后酶还可以继续合成一段时间。
中期合成型，容易培养和管理3..放线菌.霉菌. 1.调4.添加诱导物（分三类：酶的作用底物、酶的催化反应产物、作用底物类3.添加表面活性剂(离子型、非离子型)4.μ为比生长提高产酶率2.7.1.固定化细胞的预培养2.溶解氧的供给3.是指固定在载体上，在一定的空间范围内进行新陈2.提高酶产率3.稳定性较好4.疫苗2.激素3.多肽生长因子4.酶5.单克隆抗体6. 2.锚地依耐性、接触抑制性、功能全能性4.主要生产功能蛋白和多肽2.生长较慢，倍增时间较长3. 4.因为体积大、无细胞壁保护对剪切力敏感，所以在培养过程中必须严格控制温度、PH、渗透压、通风等条件 5.大部分适于贴壁培养、少部分适于悬浮培养6.7.原代细胞培养50：1.悬浮培养2.贴壁培养3.3.温度的控制4.PH的控制5.渗透压的控制6.机械破碎法(捣碎法、研磨法、匀浆法) 2.3.化学破碎法（化学试剂）4.盐溶液提取2.酸溶液提取3.碱溶液提取4.提取液的体积使酶的溶解降低，而从溶液析出，与其他溶盐析沉淀法2.等电点沉淀法3.有机溶剂沉淀法4.复合沉淀pH4.底物2.包埋法了细胞的完整结构和天然状态，有的酶系、辅助酶系和代谢调控体系，可以按照原来的代谢途径进行新陈代谢，并并进行有效的代谢调控3.发酵稳定性好，可以反复使用或使用较长时间4.5.利用固定化微生物细胞生产各类产物如（a2.提高细胞4.吸附法2.包埋法（a凝胶包埋发b酶等酶类，抗菌肽等多肽类药物，搅拌罐式反5.膜反应器（连续式）6.2.pH的确定及其调控3.调控6. 2.防止酶的变性失活3. 2.用酶进行疾病的预防和治疗3.生产方面的应用。
《酶工程》总复习整理生物酶工程主要研究内容（1）用基因工程技术大量生产酶（克隆酶）如：尿激酶原和尿激酶是治疗血栓病的有效药物。
用DNA重组技术将人尿激酶原的结构基因转移到大肠杆菌中，可使大肠杆菌细胞生产人尿激酶原，从而取代从大量的人尿中提取尿激酶。
（2）用蛋白质工程技术定点改变酶结构基因（突变酶）如：酪氨酰－tRNA合成酶，用Ala5（第5位的丙氨酸）取代Thr51（第51位的丝氨酸），使该酶对底物ATP的亲和力提高了100倍。
（3）设计新的酶结构基因，生产自然界从未有过的性能稳定、活性更高的新酶。
酶工程原理和基本过程菌种→扩大培养→发酵→发酵酶液→酶的提取→酶成品↓原料→前处理→杀菌→酶反应器←酶的固定化↓反应液→产品提取→产品●世界三大酶制剂公司Novo Nordisk （丹麦）Genencor International(美国杰能科国际公司）Cuitor(芬兰）●三大公司销售额占世界总额的70%2、米氏常数的意义Km：米氏常数，物理意义为反应速率为最大速率Vmax一半时底物的浓度，单位与底物浓度同（1）Km 是酶的一个特性常数，Km大小只与酶性质有关，而与酶浓度无关。
当底物确定，反应温度，pH及离子强度一定时，Km值为常数，可用来鉴别酶。
Km一般在1×10-6~10-1mol/L之间不同的酶Km 值不同，测定Km要在相同测定条件（pH、温度、离子强度）下进行。
（2）Km 值可用于判断酶的专一性和天然产物，若一个酶有几种底物就有几个Km值，其中Km值最小的底物称为该酶的最适底物，又称天然底物。
（3）可近似表示酶与底物亲和力的大小。
真正表示酶与底物亲和力为Ks =k2/k1(注 Km = k2+k3/ k1)（4）已知Km可由[S]计算v，或由v计算[S]。
酶活力是指一定条件下，酶所催化的反应初速度;酶催化反应速度用单位时间内底物的减少量或产物的增加量来表示。
V=-dS/dt=dP/dt二、酶的活力单位：表示酶活力大小所用的两个国际单位1IU：在最适反应条件下，每分钟催化1μmol底物转化为产物所需的酶量，称一个IU。
酶工程复习1.生物酶工程：在化学酶工程基础上发展起来的，以酶学理论和以DNA重组技术为主的现代分子生物学技术相结合的产物，又称为高级酶工程2、化学酶工程、研究的主要内容：又为初级酶工程，是酶学理论与化学工程技术相结合的产物。
主要研究内容：酶的工艺制备、酶和细胞的固定化技术、酶分子化学修饰、人工酶的合成、酶反应器和酶传感器、酶的应用等。
3．如何控制发酵产酶工艺条件：a. pH调节办法：改变培养基组成或其比例；使用缓冲剂；添加适宜的酸碱溶液以调节pH值。
b.温度调控的方法：一般采用热水升温、冷水降温；在发酵罐中，均设计有足够热传面积的热交换装置，如排管、蛇管。
c.溶氧量调控的方法：调节通气量、调节氧的分压、调节气液接触时间、调节气液接触面积、培养液的特性对溶氧速率有明显影响，若培养物粘度大，则不利于溶氧。
4．酶生物合成模式包括哪些类型？各类型有何特点？如何提高各种模式下酶产量？各产酶模式的一般产酶动力学方程是怎样的？a.同步和成型：又称生长偶联型，酶的合成与细胞生长同步进行，当细胞进入对数生长期，酶大量产生，细胞生长进入平衡期后，酶合成随即停止。
其方程为：dE/dt=αμX 特点：此类型生产的酶，其生物合成可以诱导，但不受分解代谢物阻遏和反应产物阻遏。
这类酶相应的mRNA是很不稳定的。
提高酶产量：增加细胞生长速率，提高mRNA稳定性，降低发酵温度。
b.延续合成型：部分生长偶联型，酶的合成伴随细胞生长开始，但在细胞生长进入平衡期后，酶还可以延续合成较长的一段时间。
其方程：dE/dt=αμX+βX 特点：延续合成型的酶可受诱导但不受分解代谢物阻遏和产物阻遏，其对应的mRNA很稳定。
提高酶产量：最理想模式，添加诱导物。
c.中期合成型：酶的合成在细胞生长一段时间以后才开始，而在细胞生长进入平衡期后，酶的合成也随即停止。
其方程：dE/dt=αμX 特点：此类型合成的酶，受反应产物反馈阻遏，其对应的mRNA是不稳定的。
提高酶产量：增加细胞生长速率，提高mRNA稳定性，解除阻遏。
d.滞后合成型：当细胞生长进入平衡期后，酶才开始大量合成。
其方程：dE/dt=βX 特点：此类型合成的酶，受分解代谢物阻遏，故在对数生长期不合成，但其mRNA稳定性强，当细胞停止生长，分解代谢物阻遏解除，才开始利用积累的mRNA进行翻译合成。
提高酶产量：减少阻遏物浓度，尽量降解产生的阻遏物。
5.提高酶产量的方法有哪些？A.要选育或选择使用优良的产酶细胞。
B.打破调控机制。
C添加表面活性剂、酶促进剂、诱导物。
6．在发酵产酶中，溶氧速率受哪些因素的影响？a.通气量：当通气量增大时可提高溶氧速率，反之使溶氧速率降低。
b.氧的分压：增加空气压力，或提高空气中氧的含量都能提高氧的分压，从而提高溶氧速率。
反之则使溶氧速率降低c.气液接触时间：气液两相接触时间延长，可使更多的氧溶解，从而提高溶氧速率；反之则使溶氧速率降低。
d.气液接触时间：增加气流接触界面的面积，有利于提高溶氧率。
e.培养物的特性：培养液的粘度大，产生气泡多，则不利于氧的溶解。
通过改变培养液的组分或浓度，可有效地降低培养液粘度7．影响酶提取的主要因素有哪些？a.温度：通常抽提温度应控制在0-10℃，对某些耐温的酶，如胃蛋白酶等，可以适当提高抽提温度。
b.pH值：抽提液的pH值应远离酶的等电点，不宜过高或过低。
c.提取液体积：增加提取液用量，可提高提取率。
d.添加保护剂：为了提高酶稳定性，防止酶变性、失活等常加入一些保护剂。
8．常用的细胞破碎的方法主要有哪些？a.机械破碎法：通过机械运动所产生的剪切力作用，使细胞破碎的方法，称为机械破碎法。
包括：机械捣碎法、研磨法、匀浆法。
b.物理破碎法：通过温度、压力、声波等各种物理因素作用，使组织细胞破碎的办法，包括：温度差破碎法、压力差破碎法、超声波破碎法。
c.化学破碎法：利用各种化学试剂与细胞膜的作用，使细胞膜结构改变而破碎的方法。
包括：有机试剂、表面活性剂。
d.酶学破碎法：在一定条件下，通过外加的酶或细胞自身存在的酶的作用，包括：外加酶处理、自溶法。
9、利用沉淀技术分离制备酶有哪些方法？沉淀分离是通过改变某些条件，使溶液中某种溶质的溶解度降低，从而从溶液中沉淀析出，与其他溶质分离。
方法：a.盐析沉淀法：根据球蛋白在低盐浓度的溶液中，溶解度随盐离子升高而增加，表现为盐溶，而随着盐浓度继续升高，并超出某一上限时，其溶解度又会以不同速度下降，表现为盐析。
由于酶和杂蛋白在高盐浓度的溶液中，其溶解度存在差别而建立的一种纯化方法。
最常用的盐析盐为（NH4)2SO4 b.等电点沉淀法：两性电解质在等电点时，溶解度最低，而不同的两性电解质使不同等电点，由此可将酶纯化。
c.有机溶剂沉淀法：利用不同蛋白质在有机溶剂中溶解度不同而使之分离的方法。
d.复合沉淀法（选择性沉淀法）：在酶液中加入某些物质，使它与酶形成复合物而沉淀，再用适当方法把酶从复合物中重新析出。
e.选择性变性沉淀法：选择一定的条件使酶液中存在的某些杂质变性沉淀而不影响所在的酶，从而使酶与杂质分离。
10．利用蛋白质的等电点不同可以选择哪些技术将蛋白质分离？等电聚焦，等电点结晶，等电点沉淀，层析聚焦11、什么是分子筛凝胶层析？又称凝胶过滤、分子排阻层析，是以多孔凝胶为固定相利用溶液中酶与其他杂质分子大小不同而进行的分离技术。
12．什么是膜分离技术？借助一定口径的各种高分子薄膜，将不同大小、不同性状、不同特性的物质颗粒或分子分离的技术，统称为膜分离技术。
13. 什么是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳？其原理及用途是什么？指在聚丙烯酰胺凝胶制备时，加入1~2%的十二烷基硫酸钠（SDS），制成SDS-聚丙烯胺凝胶进行电泳。
原理：当蛋白质溶液中加入SDS和硫基乙醇（一种还原剂）以后，硫基乙醇使蛋白质中的二硫键还原，SDS 使蛋白质的共价键破坏，使多亚基的蛋白质解离成各个亚基，在一定条件下1.4g SDS与1g 蛋白质或亚基结合形成SDS-蛋白质复合物。
由于SDS阴离子带负电荷，SDS-蛋白质复合物上就结合了大量阴离子，掩盖了蛋白质之间原来的电荷的差别。
而SDS与蛋白质结合后，引起蛋白质构象的变化，在水溶液中都变成长椭圆形，为此，SDS-蛋白质复合物在凝胶电泳中迁移率不再受到其原有电荷和分子形状影响，而只决定于蛋白质的分子量。
用途：SDS-凝胶电泳主要用于测定蛋白质的分子量。
14. 亲和层析技术的原理是什么？亲和层析是利用生物分子之间所具有的专一而又可逆的亲和力，使生物分子分离纯化的技术。
原理：酶与底物（包括辅助因子）、底物类似物或其竞争性抑制剂之间都具有较高的生物亲和力，能专一而可逆地形成酶-配基络合物。
因此，将这类配基偶联固定于载体作为固定相时，含有待纯化酶的溶液流经该固定相，该酶就能迅速而有选择性地与相应配基结合，而其他杂质流出固定相，从而达到纯化该酶的目的。
15.何谓酶分子修饰？通过各种方法使酶分子结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的过程，称为酶分子修饰。
16．酶分子修饰有哪些方法？分别有哪些修饰剂？a.金属离子置换修饰：通过改变酶分子中所含的金属离子，使酶的特性和功能发生改变的方法称为金属离子置换修饰。
通常都是二价金属离子，如Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+、Co2+、Cu2+、Fe2+等。
金属离子置换修饰只适用于本来结构中含有金属离子的酶。
b.大分子结合修饰：利用水溶性大分子与酶结合，使酶的空间结构发生某些精细改变，从而改变酶的特性与功能的方法，常用修饰剂：右旋糖酐，聚乙二醇、肝素、蔗糖聚合物、聚氨基酸等。
修饰剂在使用前一般需经活化。
c.有限水解修饰：肽链的水解在限定的肽键上进行，称为肽链有限水解，利用肽链有限水解，使酶的空间结构发生某些精细的改变，从而改变酶的特性和功能的方法，常用修饰剂：各种专一性较强的蛋白酶或肽酶d.酶蛋白侧链基团修饰：酶蛋白侧链基团修饰是指用各种小分子化合物对酶蛋白的AA残基上的侧链功能基团进行修饰，使这些基团发生改变，从而引起次级键的变化，使蛋白质空间结构发生变化，导致酶的功能与特性的改变。
常用修饰剂：氨基修饰剂、羧基修饰剂、胍基修饰剂、巯基修饰剂e.氨基酸置换修饰：酶蛋白多肽链特定位置上的各种AA，是酶化学结构和空间结构基础，若将肽链上某AA换成另外的AA，则会引起酶蛋白空间构象某些改变f.物理修饰：通过各种物理方法，使酶分子的空间构象发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的方法。
17．什么是固定化酶和固定化细胞？固定化酶：固定在载体上，并在一定空间内进行催化反应的酶。
固定化细胞：固定在载体上，并在一定空间范围内进行生命活动的细胞。
18．常用的酶和菌体固定化的方法有哪些？A.吸附法：通过载体表面和酶分子表面之间的氢键、疏水键和π-电子亲和力等物理作用力，将酶固定于不溶性载体的方法，称为物理吸附法，简称吸附法。
b.包埋法：将酶或含酶菌体包埋于各种多孔载体中，使酶固定化的方法，称为包埋法。
c.结合法:选择适宜的载体，使之通过共价键或离子键，与酶结合在一起的固定化方法，称为结合法。
d.交联法：利用双功能试剂或多功能试剂在酶分子间，酶分子与惰性蛋白间，或酶分子与载体间进行交联反应，以共价键制备固定化酶的方法。
e.热处理法将含酶细胞在一定温度下加热处理一段时间，使酶固定在菌体内，而制备得到固定化菌体。
19、酶固定化后其性质都有哪些变化？为什么？酶分子经固相化后，从游离态变为结合态。
酶分子处在一个与游离态酶完全不同的微环境中，微环境的许多性质会影响酶原有的性质。
如微环境的化学组成，与酶相结合的表面结构，底物进入与底物排出微环境的速度，微环境的局部pH等。
稳定性：固相酶的稳定性比游离酶高。
热稳定性；对蛋白酶水解作用稳定性；对变性试剂作用的稳定性；保藏稳定性；最适温度：固相酶的最适温度一般比天然酶高，个别会有所降低；同种酶，采用不同的方法或不同载体固定化后，其最适温度可能不同。
最适pH：a.载体性质对最适pH影响：用带负电荷载体制备的固定化酶，最适pH比游离酶最适pH高；用带正电荷载体制备的固定化酶，最适pH比游离酶最适pH低；用不带电荷载体制备的固定化酶，最适pH一般不改变。
b.产物性质对最适pH影响；若酶催化反应产物为酸性时，固定化酶最适pH比游离酶的最适pH要高。
若酶催化反应产物为碱性时，固定化酶最适pH比游离酶的最适PH要低。
若酶催化反应产物为中性时，固定化酶最适pH 不变。
底物特异性：固定化酶底物特异性与游离酶相比，有一定变化，一般为：作用于小分子底物的酶类经固定化后，专一性基本不变。
而既可作用大分子也可作用小分子底物的酶类经固定化后专一性会发生变化。
20．什么是酶传感器？是由固定化酶与能量转换器密切结合而成的传感器装置，是生物传感器的一种，已广泛用于临床诊断、工业发酵、环境监测等。
