老鼠眼眶取血
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大、小鼠摘眼球采血标准操作规程一、目的本规程规定了实验室大、小鼠摘眼球采血的操作步骤、注意事项和安全要求,以确保实验结果的准确性和动物福利的考虑。
二、适用范围本规程适用于实验室进行大、小鼠摘眼球采血的操作。
三、操作步骤1.准备工具和材料:眼科剪、眼科镊、止血棉球、生理盐水或肝素抗凝剂。
2.操作前准备:确保实验动物处于深度麻醉状态,以减少动物的痛苦和应激。
3.保定动物:将动物固定在实验台上,保持头部和身体稳定。
4.剪毛消毒:用剪刀轻轻剪去眼睑周围的毛发,然后使用消毒液对眼部进行消毒。
5.暴露眼球:用眼科镊轻轻分开眼睑,暴露出眼球。
6.采血:用眼科剪在眼球根部剪断血管,然后用止血棉球压迫止血。
如果需要采集较多血液,可以在剪断血管后轻轻挤出血液。
7.抗凝处理:将采集的血液样本放入含有肝素抗凝剂的试管中,轻轻摇匀,防止血液凝固。
8.清理动物:在采血完成后,用生理盐水清洁眼部,避免感染。
9.观察动物:密切观察动物的恢复情况,确保无并发症发生。
四、注意事项1.操作过程中要轻柔、迅速,减少动物的痛苦和应激。
2.采血时要注意血管的选择和剪断,避免破坏其他组织。
3.使用抗凝剂时要注意与血液的比例,防止影响实验结果。
4.在操作过程中要保持实验台和工具的清洁消毒,避免交叉感染。
5.如果动物出现并发症或死亡,应立即停止操作并向上级报告。
五、安全要求1.操作人员必须经过专业培训,熟悉操作步骤和注意事项。
2.实验动物必须处于深度麻醉状态,以减少动物的痛苦和应激。
3.在操作过程中要注意自我防护,避免受伤或感染。
4.对于使用过的工具和材料要进行妥善处理,防止交叉感染或环境污染。
5.在实验结束后要做好记录和分析,以便于数据的追溯和总结。
小鼠眼球取血技巧小鼠摘除眼球采血及分离血清一.器材离心管,弯头镊子,离心机,移液器二.步骤1. 摘除眼球采血(1)左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤,小指固定尾部;(2)中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位,无名指按在腹部,捻动拇指,轻压取血侧眼部皮肤,使眼球充血突出;(3)用弯头镊夹取眼球;(4)根据需要捻动拇指与食指的方向,使血液从眼眶内以不同速度垂直流入离心管;(5)同时用左手中指轻按小鼠心脏部位,以加快心脏泵血速度;(6)当血液流尽时,用脱臼法处死小鼠。
2. 分离血清(1)将离心管中的血置37℃温箱或水浴1小时,也可室温2小时;(2)再置4℃冰箱内3~4小时或过夜;(3)待血液凝固血块收缩后,4000rpm离心10分钟;(4)取上清于干净的离心管中,保存于-20℃,或加入防腐剂(0.01%硫柳汞或0.02%叠氮钠),置4℃冰箱中保存备用。
三.注意:1. 采血前,可给小鼠喂点水;2. 摘眼球采血取血量能达0.8~1.2ml,但老年和疾病小鼠血量会降低;3. 采血场所有充足的光线;室温夏季保持在25~28℃,冬季,15~20℃为宜;4. 防止血液浸入眼部周围毛发,否则会造成污染和溶血;5. 按压心脏时,用力一定要适度,若用力过度,一是会造成动物采血中途死亡,使采血不完全,二是有可能引起溶血现象发生,影响实验结果;6. 采血用的器材和试管必须保持清洁干燥;7. 采血时要防止小鼠挣扎,否则会损失比较多的血样;8. 血液凝固后不宜在4℃放置过久,否则会溶血。
另附其他几种采血方法1)尾尖取血:当所需血量很少时采用本法。
固定动物并历出鼠尾,将鼠尾在45℃温水中浸泡数分钟,也可用二甲苯等化学药物涂擦,使局新血管扩张。
将鼠尾擦干,剪去尾尖,血自尾尖流出,让血液滴入盛器或直接用移液器吸取。
如需间隔一定时间,多次采取鼠尾尖部血液,每次采血时,将鼠尾剪去很小一段,取血后,先用棉球压迫止血并立即用6%液体火棉胶涂于尾巴伤口处,使伤口外结一层火棉胶薄膜,保护伤口。
小鼠取血方法
主要有三类方法:
1、少量取血:鼠尾采血法——固定动物并露出鼠尾,将尾部侵入45-50度温水中数分钟,使静脉充血,擦干,再用酒精棉球擦拭消毒。
剪掉尾尖约0.2-0.3cm。
拭去第一滴血。
然后用毛细管定量吸取尾血。
采血完毕用棉球压迫止血
2、中等量取血:眼眶静脉丛采血——左手拇指及食指紧紧握住小鼠颈部,压迫颈部两侧使
眶后静脉丛充血,但用力要恰当,防止动物窒息死亡。
右手持玻璃毛细管从右眼或左眼内眦部以45度角刺入,刺入深度为2-3mm。
若遇阻力稍后调整角度后再刺入,如穿刺恰当,血
液能自然流入毛细管内。
得到血厚,即除去颈部压力,拔出毛细管,用干棉球压迫止血
3、大量采血:断头采血——用于动物实验结束后。
左手握住小鼠,右手持剪刀,快速剪掉
头颈部,倒立动物让血液滴入容器。
注意防止断毛落入。
大鼠眼眶采血标准操作规程
目的:本标准描述实验人员进行大鼠眼眶采血的操作规程。
规程
1.按大鼠乙醚麻醉标准操作规程将大鼠浅麻醉。
2.采用侧眼向上固定大鼠体位,左手拇食指从背部较紧地握住大鼠的颈部(应防止动物窒息)。
3.取血时,左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧,使头部静脉血液回流困难,眼球充分外突,眶静脉丛充血。
右手持长颈(3~4cm)硬质毛细玻璃管(内径0.5mm~1.0mm),将采血管与鼠成45°角,在泪腺区域内,用采血管由眼内角在眼睑和眼球之间向喉头方向刺入。
4.刺入深度约为4mm~5mm,当达到蝶骨感到有阻力时,再稍后退0.1mm~0.5mm,边退边抽。
5.然后将采血管保持水平位,稍加旋转并后退吸引,由于血压的关系,血液即自动流入玻璃管中。
6.得到所需的血量后,即除去加于颈部的压力,同时拔出采血管。
为防止术后穿刺孔出血,用消毒纱布压迫眼球30秒。
体重200g~300g大鼠每次可采1ml~2ml血;间隔3d~7d采血部位大致修复。
小鼠眼眶静脉丛采血1、器材碘伏、1ml注射器或长颈(3~4cm)硬质玻璃管(毛细管内径0.5-1.0mm×100mm,对半折断)、5%葡萄糖注射液或生理盐水。
2、步骤先麻醉小鼠。
(可在采血前给予相应量5%葡萄糖注射液或生理盐水腹腔注射,这样可提高穿刺失血后小鼠的存活率)碘伏消毒眼周皮毛。
(必须等碘伏干后才可穿刺,否则会溶血)采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手套),应防止动物窒息。
当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧,使眶后静脉丛充血。
右手持注射器或玻璃管。
玻璃管平端先沿着鼻侧眼角慢慢滑动至眼球正下方的眼皮内,此时左手微微顺时针旋转,使小鼠头部相对位置微向右下偏转,即相当于玻璃管刺入时是对着口腔方向的(这样做可避免小鼠失明)。
从眼眶下端中间垂直于鼠面略斜向内眦方刺入,针头斜面先向眼球,当感到有阻力时即停止推进,刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。
(刺入深度,小鼠约2~3mm,大鼠约4~5mm,不能插过深!)这个动作应稳且迅速。
一般情况下,即会有血液流出,若不行,则将针退出约0.1-0.5mm,若还不行,可快速拧搓毛细管,进一步破坏内眦静脉丛,加快出血速度。
(若血量还是不足或要不惜处死小鼠以尽可能多取血,可使臀部高于头部)如出血速度满意,最好计数出血小滴数目,一般25g左右的小鼠28小滴血(0.4毫升)的出血量不会危及小鼠生命。
当得到所需的血量后,即除去加于颈部的压力,同时,将采血器拔出,清洁棉球压迫眼部片刻,碘伏消毒眼部。
若要重复采血,可左右两眼轮换,同一动物可反复交替穿刺双眼多次。
(每次采血后需要3到4周才可采下一次)。
小鼠眼眶采血的正确方法
小鼠眼眶采血是一种常用的实验动物采血方法,以下是正确的小鼠眼眶采血方法:
1. 术前准备:在采血前,要先给小鼠适当的麻醉,通常使用合适的麻醉剂,如异氟醚,在充分麻醉后,将小鼠放在一个舒适的采血台上。
2. 术中操作:用一只手轻轻地按住小鼠头部,小鼠的眼眶区域会突出一些,用另一只手用消过毒的棉签或纱布在眼眶区域上轻轻搽拭,以保持清洁。
3. 采血:使用专业的眼眶采血针或毛细管,将其插入到小鼠眼眶下方的眶隔内,稍微向后侧运动并慢慢吸取血液。
注意要控制好采血的力度和速度,以免对小鼠产生过多伤害。
4. 采血后处理:完成采血后,用消毒纱布或棉签在小鼠的采血点轻轻按压几秒钟,以避免出血。
然后将小鼠放回适当的饲养环境,等待其从麻醉中恢复。
需要注意的是,小鼠眼眶采血是一项技术要求较高的操作,需要经过专业培训并遵循相关的实验动物使用和操作规范,以确保采血的成功率和对小鼠的伤害最小化。
小白鼠采血三种方法的优缺点(1)眼眶后血管丛采血(2)摘除眼球采血(3)心脏采血1.采血部位:眼眶采血采血方法:将鼠固定在实验台边缘,左手抓紧鼠颈部皮肤固定头部,并轻轻向下压迫颈两侧,使眼球充血。
用事先准备好的10号金属针头顶端(针尖斜面朝内)垂直插入内眦并向眼底方向转动以便切开静脉丛,血液便会连续不断地滴入采血管。
用此法大约可取3~5mL 血液。
取血完毕,立刻用脱脂棉压迫止血。
优点:眼眶后静脉丛采血法方法简单,便于掌握。
血流较快,采血量多,能在较短时间内采到3~5mL血。
伤口较小,愈合较快。
成功率高,死亡率低。
缺点:不能避免组织液的混入,对于血样要求较高的研究应谨慎使用。
另外,多次使用易引起大鼠的感染。
对后续试验结果存在一定影响。
2.摘眼采血:鼠可以眼球取血,需要多多练习。
一般来说,可以三人配合取血。
取血前不需麻醉,用眼科剪剪掉大鼠的胡须(胡须过长,血液滴下的时候容易沾在胡须上,既浪费,又造成溶血,故应剪掉)。
所需器械:眼科小剪、眼科弯镊、止血钳。
一人抓大鼠并用眼科弯镊摘眼球,一人用止血钳夹住大鼠的嘴部以固定大鼠头部,另一个人拿试管接血。
大鼠在挣扎过程中,很容易导致血液丢失,因此固定头部很重要,否则只有眼看着血液乱飞,却不入试管。
摘眼球也需要技巧,否则眼球摘下来了,而血液却不流出来,应多多练习优缺点不太清楚啊,只知道我一个学长摘眼球的时候被咬了一口,挺残忍的3.采血部位:心脏取血(其实这个一般用在家兔)采血方法:将实验动物做仰卧有助手固定,术者在其左前肢腋下处剪毛及消毒。
在胸部心脏跳动最明显处,用一寸长的12好针头直刺心脏,感到以针头跳动或有血液内流动时。
即可抽血。
一次可采血15-20ml优点:抽血快,血液不易凝集,心区面积大, 进针准确性较高, 易一针见血, 且采血量能满足大量试验需要缺点:心脏损伤较大,难以迅速愈合,不利于短期连续采血。
3‘.采血部位:心脏采血(剪开皮肤)采血方法:从胸部正中剪开皮肤2.0~2.5cm。
.眼眶静脉丛采血采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手套),应防止动物窒息。
当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧,使眶后静脉丛充血。
右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3~4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5-1.0mm),使采血器与鼠面成45℃的夹角,由眼内角刺入,针头斜面先向眼球,刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。
刺入浓度,小鼠约2~3mm,大鼠约4~5mm。
当感到有阻力时即停止推进,同时,将针退出约0.1-0.5mm,边退边抽。
若穿刺适当血液能自然流入毛细管中,当得到所需的血量后,即除去加于颈部的压力,同时,将采血器拔出,以防止术后穿刺孔出血。
若技术熟练,用本法短期内可重复采血均无多大困难。
左右两眼轮换更好。
体重20-25g 的小鼠每次可采血0.2-0.3ml;体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml,可适用于某些生物化学项目的检验。