小鼠眼球取血.doc

小鼠摘除眼球采血及分离血清
一．器材离心管，弯头镊子，离心机，移液器
二．步骤
1. 摘除眼球采血
（1）左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤，小指固定尾部；（2）中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位，无名指按在腹部，捻动拇指，轻压取血侧眼部皮肤，使眼球充血突出；（3）用弯头镊夹取眼球；（4）根据需要捻动拇指与食指的方向，使血液从眼眶内以不同速度垂直流入离心管；（5）同时用左手中指轻按小鼠心脏部位，以加快心脏泵血速度；（6）当血液流尽时，用脱臼法处死小鼠。

2. 分离血清（1）将离心管中的血置37℃温箱或水浴1小时，也可室温2小时；（2）再置4℃冰箱内3～4小时或过夜；（3）待血液凝固血块收缩后，4000rpm离心10分钟；（4）取上清于干净的离心管中，保存于-20℃，或加入防腐剂(0.01％硫柳汞或0.02％叠氮钠)，置4℃冰箱中保存备用。

三．注意： 1. 采血前，可给小鼠喂点水； 2. 摘眼球采血取血量能达0.8～1.2ml，但老年和疾病小鼠血量会降低；3. 采血场所有充足的光线；室温夏季保持在25～28℃，冬季，15～20℃为宜；4. 防止血液浸入眼部周围毛发，否则会造成污染和溶血； 5. 按压心脏时，用力一定要适度，若用力过度，一是会造成动物采血中途死亡，使采血不完全，二是有可能引起溶血现象发生，影响实验结果；6. 采血用的器材和试管必须保持清洁干燥；7. 采血时要防止小鼠挣扎，否则会损失比较多的血样；8. 血液凝固后不宜在4℃放置过久，否则会溶血。

实验小鼠眼眶静脉丛采血方法
优点：眼眶后静脉丛采血法方法简单，便于掌握。

血流较快，采血量多，能在较短时间内采约0.5mL血。

伤口较小，愈合较快。

成功率高，死亡率低。

缺点：不能避免组织液的混入，对于血样要求较高的研究应谨慎使用。

小鼠经气体麻醉后，左手拇指及食指压迫小鼠的颈部两侧，阻碍静脉回流，使眼球充分外突，提示眼眶后静脉丛充血。

也可以将小鼠放置在侧卧位，拇指与食指分别置于小鼠头顶和下颌，将皮肤向后及向下拉。

抓握时要避免对气管施压，否则可能会影响小鼠呼吸。

将毛细采血管（建议采用0.5*100mm规格的毛细管，在使用前折成小段，每段大约3-4cm）置于内侧眼角处，并且以与鼻翼平面成30-45度沿内眦插入内眼角，滑入眼球后方，轻轻向眼底方向刺入。

当感到有阻力时即轻轻旋转采血管的同时施加压力以切开静脉丛，血液将通过毛细作用流入采血管。

不能刺地过深，一般2-3mm即可。

采血结束后，立即松开手指对小鼠的压迫，使眼球复位，同时将采血器拔出。

可用干棉球压住眼眶，确保止血。

一般眼眶静脉丛采血量可以达到0.2-0.3ml。

小鼠眼球取血技巧小鼠摘除眼球采血及分离血清一．器材离心管，弯头镊子，离心机，移液器二．步骤1. 摘除眼球采血（1）左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤，小指固定尾部；（2）中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位，无名指按在腹部，捻动拇指，轻压取血侧眼部皮肤，使眼球充血突出；（3）用弯头镊夹取眼球；（4）根据需要捻动拇指与食指的方向，使血液从眼眶内以不同速度垂直流入离心管；（5）同时用左手中指轻按小鼠心脏部位，以加快心脏泵血速度；（6）当血液流尽时，用脱臼法处死小鼠。

2. 分离血清（1）将离心管中的血置37℃温箱或水浴1小时，也可室温2小时；（2）再置4℃冰箱内3～4小时或过夜；（3）待血液凝固血块收缩后，4000rpm离心10分钟；（4）取上清于干净的离心管中，保存于-20℃，或加入防腐剂(0.01％硫柳汞或0.02％叠氮钠)，置4℃冰箱中保存备用。

三．注意：1. 采血前，可给小鼠喂点水；2. 摘眼球采血取血量能达0.8～1.2ml，但老年和疾病小鼠血量会降低；3. 采血场所有充足的光线；室温夏季保持在25～28℃，冬季，15～20℃为宜；4. 防止血液浸入眼部周围毛发，否则会造成污染和溶血；5. 按压心脏时，用力一定要适度，若用力过度，一是会造成动物采血中途死亡，使采血不完全，二是有可能引起溶血现象发生，影响实验结果；6. 采血用的器材和试管必须保持清洁干燥；7. 采血时要防止小鼠挣扎，否则会损失比较多的血样；8. 血液凝固后不宜在4℃放置过久，否则会溶血。

另附其他几种采血方法1）尾尖取血：当所需血量很少时采用本法。

固定动物并历出鼠尾，将鼠尾在45℃温水中浸泡数分钟，也可用二甲苯等化学药物涂擦，使局新血管扩张。

将鼠尾擦干，剪去尾尖，血自尾尖流出，让血液滴入盛器或直接用移液器吸取。

如需间隔一定时间，多次采取鼠尾尖部血液，每次采血时，将鼠尾剪去很小一段，取血后，先用棉球压迫止血并立即用6％液体火棉胶涂于尾巴伤口处，使伤口外结一层火棉胶薄膜，保护伤口。

.眼眶静脉丛采血采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手套)，应防止动物窒息。

当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。

右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3～4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5-1.0mm)，使采血器与鼠面成45℃的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。

刺入浓度，小鼠约2～3mm，大鼠约4～5mm。

当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1-0.5mm，边退边抽。

若穿刺适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。

若技术熟练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。

左右两眼轮换更好。

体重20-25g 的小鼠每次可采血0.2-0.3ml；体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。

小鼠取血方法主要有三类方法：1、少量取血：鼠尾采血法一一固定动物并露出鼠尾，将尾部侵入45-50度温水中数分钟，使静脉充血，擦干，再用酒精棉球擦拭消毒。

剪掉尾尖约0∙2-0.3cm。

拭去第一滴血。

然后用毛细管定量吸取尾血。

采血完毕用棉球压迫止血2、中等量取血：眼眶静脉丛采血一一左手拇指及食指紧紧握住小鼠颈部，压迫颈部两侧使眶后静脉丛充血，但用力要恰当，防止动物窒息死亡。

右手持玻璃毛细管从右眼或左眼内眦部以45度角刺入，刺入深度为2-3mm。

若遇阻力稍后调整角度后再刺入，如穿刺恰当，血液能自然流入毛细管内。

得到血厚，即除去颈部压力，拔出毛细管，用干棉球压迫止血3、大量采血：断头采血一一用于动物实验结束后。

左手握住小鼠，右手持剪刀，快速剪掉头颈部，倒立动物让血液滴入容器。

注意防止断毛落入•卜鼠利大鼠剪尾取IilL祛；将清嘔鼠袈入探顒色的布袁中，粽鼠身塩疾・用酒精涂擦或用锻水浸趟怏机管扩张，剪斷尾光已堆静肚血脚可就出，川丁轻轻地从厘根绷冋尾次挤崔，可取到一定量的血敲U UlIl 后，川柿球斥迫止血・也可采刖交誓切割壓静脉方法収血’用一糠利刀片在尾光部切破一段尾靜J⅛∙ ⅛J⅛ 血即可流曲毎⅛∏Γ⅛0.3-0. S nl・⅛-⅛lfr^⅛⅛J⅛.三根毘清關町替换册害IL ⅛J≡⅛∣5J⅛⅛C切⅛L 由丁鼠血易瓶屈要仝血时，应事先将抗旅刘直丁和IiL管中”如用ιliL⅛D∣J⅛⅛⅛HS・⅛±j½i⅛⅛⅛i⅛.恨琲同抄怵妝取血法：左于持孤脚忻与中捋抓仕现讯皮抓疲壻按托头都向下，阴瞬静膩冋流,便腹球后静肮丛范机，眼球外突.右于持俠肝素浒浸池过的FI制吸血器，从内毗部刺入，沿内卜谨咂⅛向眼球后折谜4~5血.旋转吸Mtt头，切开静脉M t IfiL液H初斑入吸Ill憎筒.轮轻拥吸M管〔防止负乐压1⅛^⅛A⅛抽血电圉恭人拔出吸Ifiith放松手床力.4⅞∣f∣ι⅛J∏⅛⅛f?止-也可用转制的披璃取血管悄长7〜10 Ui IJ前刑憧成毛MU管，内⅛0- 1 -L 5皿1 UIl l后站管悴为0«T “哮要吋可在屈S I剌？L重覆収血・it法也适用諱鼠和家兔。

====Word行业资料分享--可编辑版本--双击可删====小鼠摘除眼球采血及分离血清一．器材离心管，弯头镊子，离心机，移液器，剪毛剪，乙醚。

二．步骤1.取血前准备在相对封闭的空间内用棉花蘸取乙醚，对小鼠进行麻醉。

用剪毛剪剪去胡子，防止发生溶血反应。

2 摘除眼球采血（1）左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤，小指固定尾部；（2）中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位，无名指按在腹部，捻动拇指，轻压取血侧眼部皮肤，使眼球充血突出；（3）用弯头镊夹取眼球；（4）根据需要捻动拇指与食指的方向，使血液从眼眶内以不同速度垂直流入离心管；（5）同时用左手中指轻按小鼠心脏部位，以加快心脏泵血速度；（6）当血液流尽时，用脱臼法处死小鼠。

3. 分离血清（1）将离心管中的血置37℃温箱或水浴1小时，也可室温2小时；（2）再置4℃冰箱内3～4小时或过夜；（3）待血液凝固血块收缩后，4000rpm离心10分钟；（4）取上清于干净的离心管中，保存于-20℃，或加入防腐剂(0.01％硫柳汞或0.02％叠氮钠)，置4℃冰箱中保存备用。

三．注意：1. 采血前，可给小鼠喂点水；2. 摘眼球采血取血量能达0.8～1.2ml，但老年和疾病小鼠血量会降低；3. 采血场所有充足的光线；室温夏季保持在25～28℃，冬季，15～20℃为宜；4. 防止血液浸入眼部周围毛发，否则会造成污染和溶血；5. 按压心脏时，用力一定要适度，若用力过度，一是会造成动物采血中途死亡，使采血不完全，二是有可能引起溶血现象发生，影响实验结果；6. 采血用的器材和试管必须保持清洁干燥；7. 采血时要防止小鼠挣扎，否则会损失比较多的血样；8. 血液凝固后不宜在4℃放置过久，否则会溶血。

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一、实训目的1. 掌握小白鼠眼球采血的方法和技巧。

2. 了解小白鼠眼球采血的适应症和禁忌症。

3. 培养无菌操作意识和实验技能。

二、实训时间2021年X月X日三、实训地点实验室四、实训材料1. 小白鼠2. 无菌操作台3. 10号金属针头4. 生理盐水5. 无菌棉球6. 采血管7. 麻醉剂（可选）五、实训步骤1. 准备工作（1）将小白鼠放置在实验台上，用棉球轻轻擦拭眼部，确保眼部清洁。

（2）打开无菌操作台，准备好实验器材。

2. 固定小白鼠（1）用一只手轻轻抓住小白鼠的颈部皮肤，使其头部向上抬起。

（2）用另一只手轻轻向下压迫颈两侧，使眼球充血。

3. 采血操作（1）用10号金属针头垂直插入内眦，向眼底方向转动，以便切开静脉丛。

（2）血液便会连续不断地滴入采血管。

4. 采血完毕（1）拔出针头，用无菌棉球压迫止血。

（2）将小白鼠放回笼子，观察其状态。

5. 无菌操作（1）在实验过程中，始终保持无菌操作，避免细菌污染。

（2）实验完毕后，对实验台、器材进行清洁和消毒。

六、实训结果1. 采血成功，血液质量良好。

2. 小白鼠状态稳定，无不良反应。

七、实训讨论1. 眼球采血是一种常用的动物采血方法，具有操作简单、采血量较大、成功率高等优点。

2. 在采血过程中，应注意以下几点：（1）确保小白鼠眼部清洁，避免细菌污染。

（2）固定小白鼠时，力度适中，避免造成伤害。

（3）采血时，保持针头垂直，避免损伤眼部组织。

（4）采血完毕后，及时止血，避免出血过多。

3. 眼球采血的禁忌症：（1）眼部有炎症或感染的小白鼠。

（2）有严重心脏病或血液病的小白鼠。

4. 在实训过程中，发现以下问题：（1）部分小白鼠在采血过程中出现挣扎，影响采血效果。

（2）个别小白鼠采血后出现眼部出血现象。

八、实训总结本次小白鼠眼球采血实训，使我掌握了小白鼠眼球采血的方法和技巧，提高了无菌操作意识和实验技能。

在实训过程中，我深刻体会到以下几点：1. 眼球采血是一种实用的动物采血方法，具有广泛的应用前景。