这里为您介绍二代测序的相关流程和应用。
随着人类基因组工程的完成，对于低花费的测序技术的需求促进了高通量二代测序技术的发展。这些新的测序平台允许进行高通量测序，具有广泛的应用：
• 全基因组从头测序或者重测序
• 目标序列重测序
• 转录组分析
• 微生物组研究
• 基因调控研究
NGS序列
二代测序仪器有很多种组合，在通量、片段长度、准确度、每一轮测序成本、每百万碱基对测序成本、初始成本、规格和技术方面存在存在差异。?
从规格和初始成本的角度而言，二代测序仪器可轻松地分类为更窄的范围，也就是所谓的“台式测序仪”和高通量仪器。
台式测序仪使得任何实验室都可以像使用real-timePCR一样，自己进行测序。这些仪器可以和一些靶标序列富集技术相结合，用在一些临床的应用中，其中：选定的靶标基因用于深度分析，以检测稀有的突变，或者检测多样样本中（比如癌症样本）中的突变。目前，这些仪器的通量在10Mb到7.5Gb之间，但是随着硬件，软件和试剂的持续改善，通量也在稳步增加。
高通量测序仪非常适合于大量的，基因组范围的研究，每次测序能测定600Gb的序列。一些这样的高通量和高精度的平台，能测定的片段长度相对较短，这对于高重复性的序列和未知基因组的从头测序就可能成为问题。与此相反，也有一些仪器能测序的片段较长（达到2500bp），但是其精度和测序能力（90Mb）要低很多。还有一些测序能力位于两者之间的仪器（~800bp，700Mb）。
因此，应用决定了哪一种仪器是最合适的。
有一种新的方法被称作“纳米孔测序”。这种技术中，根据一个DNA链通过一个合成的或者蛋白纳米孔道所引起的电流的改变，可以确定通过这个孔道的碱基。这理论上可以仅用一步就测序一个完整的染色体，而不需要生成新的DNA链。
DNA测序
二代DNA测序的工作流程如下：
• DNA样本制备
• 文库构建和验证
• 文库分子大规模平行克隆扩增 • 测序
2019,38( 1 )河南大学学报(医学版)
• 67・
文章编号
：1672-7606 (2019)01-0067 -10
基于二代测序技术的转录组测序生物信息分析
汤冬-张国森2,
赵晓芳回
1.江苏苏博生物医学股份右限公司，江苏宿迁
22380()； 2.河南犬学基础恢学院医学生物信息学研究所细胞信号转导实验室，
河南开封
475004
摘要:随着二代测序技术和生物岱息学的发展，越来越多的科研人员通过转录组测序
(RNAseq)研究基因表达调控、疾
病发生机制和遗传育种上的问题面对测序所产生的大量数据.生物信息学分析策略对于数据的解读显得尤为車:要
本文结合不同
RNA( mRNA J.ncRNA、
miRNA和
eireRNA)的特点，对转录组测序中的儿类分析流程及其所涉及的软件和
数据库分别做简要的介绍.为
RNAseq的生信分析研究提供参考
关键词：二代测序;转录组;测序；个物信息
中图分类号
：Q786 文献标志码：
A
Bioinformatics analysis of transcriptome sequencing based on next
generation sequencing
TANG Dong1, ZHAGN Guo sen2, ZHAO Xiaofang"3
1 .Jiangsu Superbio Life Science Co. Ltd.. Suqian 223800. China: 2. Institute of Biomt'dical Informatics. Cell Sigiuil Transduction
1 laboratory, School of Basic Medical Sciences of Henan University, Kaifeng 475004. China
Abstract：
With the rapid(lev(4opinent of the nexl generation sequencing ( N(；S) and bioinfonnatics recently, more and more
ngs杂交捕获原理
NGS杂交捕获（Next-generation sequencing capture）是一种高通量测序技术，其原理是利用特异性的探针捕获目标序列，从而对该区域进行深度测序。本文将详细介绍NGS杂交捕获的原理、应用和优势。
一、NGS杂交捕获的原理
NGS杂交捕获的原理基于互补配对的原则，通过引入特异性的DNA或RNA探针与目标序列中的互补区域结合，从而实现目标序列的富集。此过程包括以下几个步骤：
1. 探针设计：根据目标序列的信息，设计一系列特异性的探针。这些探针通常是短的DNA或RNA序列，长度通常为50-150个碱基。
2. 杂交反应：将目标DNA或RNA样本与探针进行杂交反应。在适当的条件下，探针与目标序列的互补区域会形成双链结构，形成探针-目标复合物。
3. 富集：通过选择性的探针结合，从混合的样本中富集目标序列。这可以通过磁珠、凝胶或离心等方法实现。
4. 清洗：将非特异性的DNA或RNA从富集的复合物中去除，以减少杂交噪音和提高测序质量。
5. PCR扩增：对富集的目标序列进行PCR扩增，以增加样品的数量和测序的灵敏度。
6. NGS测序：最后，对PCR扩增的样品进行高通量测序，得到目标序列的详细信息。
二、NGS杂交捕获的应用
NGS杂交捕获技术在基因组学研究中具有广泛的应用。以下是其主要的应用领域：
1. 基因组重测序：NGS杂交捕获可以用于对整个基因组进行重测序，从而快速获得基因组的完整信息，并发现与疾病相关的基因变异。
2. 靶向测序：通过设计特定的探针，NGS杂交捕获可以选择性地富集某些特定的基因、外显子区域或功能区域，从而减少测序成本和数据分析的复杂性。
3. 人类疾病研究：NGS杂交捕获可以用于研究人类疾病的遗传基础。通过富集和测序，可以发现与疾病相关的突变、单核苷酸多态性（SNP）等变异。
4. 癌症研究：NGS杂交捕获可以帮助研究人员深入了解肿瘤的发生机制和治疗靶点。通过富集和测序，可以检测癌症相关基因的突变和拷贝数变异。
毕 业 设 计（论文）
外 文 文 献 翻 译
文献、资料中文题目：第二代测序（NGS）技术
文献、资料英文题目：
文献、资料来源：
文献、资料发表（出版）日期：
院 （部）：
专 业：
班 级：
姓 名：
学 号：
指导教师：
翻译日期： 2017.02.14
Science has kept changing its form from observational to experimental to data-driven in the field
of life science. With the advancement of Next Generation Sequencing (NGS) technology, new
findings are coming up with a great amount of responsibilities whereas storing
and analysing these data is concern Li [1], Stephens et al. [2]. During last
decade, the cost of sequencing has reduced heavily by allowing access to more scientists. A
simple search in PUBMED can provide the scenario of exponential growth of
the number of reports published using NGS technology. However, the deposition of
raw data in the public domain is increasing dramatically outstripping the proper annotation of
