高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量
【摘要】 目的建立金银花提取物中绿原酸含量的HPLC测定方法。方法国产C18柱（4.6 mm×250 mm，7 μm）;流动相为乙腈：0.4%磷酸（12∶88）；检测波长为327 nm；流速1 ml・min-1；进样量10 μl；柱温25℃。结果绿原酸在0.071
6～0.644 4 μg范围内线性关系良好，r=0.999 6；平均回收率99.99%，RSD=1.61%（n=6）。结论该方法简便、快速、准确，可用于金银花提取物的含量测定及质量控制。
【关键词】 金银花提取物； 绿原酸； 高效液相色谱法
AbstractObjectiveTo establish a method for the determination of
Chlorogenic acid in the extract of Flos Lonicerae.MethodsThe
chromatographic conditions were as follows: C18 chromatographic column
(4.6 mm×250 mm，7 μm)，a mobile phase of acetonitrile and 0.4%
H3PO4(12:88)，the detection wavelength at 327 nm and the flow rate being
1 ml・min-1. ResultsA linearity of Chlorogenic acid in the extract was
obtained in the range of 0.071 6～0.644 4 μg r=0.999 6(n=6).The average
recovery was 99.99% and RSD=1.61%(n=6). ConclusionThis method is easy，
河源人工种植金银花中绿原酸 含量测定和提取工艺研究
目的：检测河源人工种植金银花中的绿原酸含量，优化提取工艺。方法：将人工种植的金银花干燥后作为研究对象，采用紫光-可见分光光度法检测样本中的绿原酸含量，并对绿原酸提取的工艺条件进行设计、优化。结果：提取绿原酸的最佳工艺条件应为提取液酸碱度pH=7，微波功率450W，微波辐射时间45min，料液比1：25，溶剂体积分数60%。绿原酸在人工种植金银花中的含量为6.38%。结论：在人工种植的金银花中，所含绿原酸水平较高，能较好地满足药用要求，可大面积推广栽培。
标签：绿原酸；金银花；提取工艺；人工种植
金银花（也称双花）是临床应用十分广泛的一种中药材，其具有凉散风热、清热解毒之功效，也是民间的常用药物。金银花含有的绿原酸在纯度、含量方面均较高，同时绿原酸也是衡量金银花质量高低的一个重要标准[1]。为明确人工种植金银花中的绿原酸含量，本研究采用了紫光-可见分光光度法对人工种植的金银花中的绿原酸含量进行了检测，现报道如下。
1 材料与仪器
1.1 材料
金银花取自深圳市中康福药业有限公司于广东省河源市的中药材种植基地，并经高级农艺师鉴别、确认，是忍冬科忍冬植物的花蕾。将采集到的忍冬花蕾放置于恒温箱中，烘干（60℃）至恒质量后取出，样品自然阴干。阴干后将样品捣碎，使用80目筛筛选，备用。试剂NaOH、H2SO4、乙醇等都为分析纯，绿原酸对照品（99%）由上海纯优生物科技公司提供。
1.2 仪器
紫外-可见分光光度计：日本岛津公司，UV-2450型；
微波催化萃取（合成）仪：北京祥鹄科技公司，XH-300A型；
精密酸度计：上海雷磁仪器厂，pHS-2C型；
电子天平：METTLER TOLEDO，L-S型；
旋转蒸发器：宏兴科教仪器厂；RE-52A型。
2 方法与结果
2.1 建立标准曲线
称取1.0mg绿原酸对照品，放入乙醇中，溶解、摇匀，加乙醇至刻度线（50ml），获得绿原酸对照品溶液（20μg/ml）。在量瓶（10ml）中加入绿原酸对照品溶液0.5ml，加乙醇至刻度线，摇匀。使用紫外-可见光分光光度计扫描溶液，波长200nm~400nm，明确329nm为绿原酸对照品可吸收波长的最大值。取绿原酸对照品溶液和乙醇，分别配制出不同浓度的对照品溶液（2.0μg/ml、5.0μg/ml、7.5μg/ml、10.0μg/ml、12.5μg/ml），以波长为329nm的紫光进行照射，测得吸光度A。将绿原酸浓度C、吸光度A分别作为横坐标和纵坐标，描绘A-C曲线，获得吸光度的回顾方程（A=C×0.05528-0.003389，r=0.9997），由此说明绿原酸对照品溶液在2.0μg/ml~12.5μg/ml这一浓度范围内，线性关系良好。
HPLC-绿原酸检测方法
2020版本药典
有效成分测定参考2020版《中国药典》金银花项下绿原酸和木犀草苷测定的方法，采用高效液相色谱法测定其含量。
2.3.4.1 供试品溶液制备
取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率35kHz)30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液4ml，置5ml离心管中，摇匀，即得。
2.3.4.2 绿原酸的高效液相色谱检测方法
(1) 标准品溶液的配制
取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含50µg的溶液，即得对照品溶液10℃以下保存。
(2) 检测条件
色谱条件：色谱柱为安捷伦SB-C18柱（250mm×4.6mm，5µm）；流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液（13:87）；检测器为安捷伦G1314B可变波长紫外检测器；流速为1.0ml/min；柱温为25℃；检测波长为327nm；进样量为10µl。用外标法进行定量。
(3) 标准曲线的绘制
分别吸取绿原酸对照品溶液2、4、6、8、10、20µl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以进样量为横坐标X，色谱峰峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，得回归方程Y = 830.69X -16.516(R2=1)。
(4) 精密度实验
取同一浓度的对照品溶液每次进样10µl，连续进样6次，按上述色谱条件测定绿原酸含量，根据检测结果计算相对标准偏差（RSD）。
(5) 稳定性考察
分别取同一浓度的对照品溶液10µl，每隔两小时进样一次，连续进样检测６次，根据结果计算相应的相对标准偏差（RSD），检测10小时之内绿原酸的稳定性。
(6) 重现性实验
取同一批次的提取样品，在设定的HPLC条件下连续进样6次，测定绿原酸含量，计算标准偏差（RSD）。
(7) 加样回收率实验
分别取已知含量的提取样品6份，各加入对照品溶液（0.1mg/ml）2ml，按2.3.4.2项下(1)中样品溶液的配制方法，制备加样样品溶液，在上述色谱条件下测定绿原酸含量，并计算相应的回收率。
・２０４６・ 光明中医２０１３年１０月第２８卷第１０期 ＣＪＧＭＣＭ ０ｃｔｏｂｅｒ ２０１３．Ｖ０１ ２８．１０
ＨＰＬＣ法测定金银花的花、叶、茎中绿原酸
和木犀草苷的含量
何孝金
摘要：目的 比较金银花的花、叶、茎中绿原酸和木犀草苷的含量。方法 采用２０１０年版中国药典一部收载的提取方法，采用 ＨＰＬＣ法测定金银花的花、叶、茎中绿原酸和木犀草苷的含量。结果 绿原酸在金银花的花、叶、茎中含量分别为１．５５％、１．６８％、 ０．７１％；木犀草苷在金银花的花、叶、茎中含量分别为０．０６５％、０．２００％、０．０３６％。结论 金银花叶中所含绿原酸和木犀草苷高于 花中的含量。因此资源丰富的金银花叶具有药用开发价值。
关键词：金银花；绿原酸；木犀草苷；高效液相色谱法 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００３—８９１４．２０１３．１０．０２７ 文章编号：１００３—８９１４（２０１３）一１０—２０４６．０４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ Ｌｕｔｅｏｌｏｓｉｄｅ ｉｎ Ｆｌｏｗｅｒ，Ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ Ｓｔｅｍ ｏｆ Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ ｂｙ ＨＰＬＣ
Ｈｅ Ｘｉａｏｊｉｎ （Ｎａｎｐｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｎａｎｐｉｎｇ ３５３０００） Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｌｕｔｅｏｌｏｓｉｄｅ ｉｎ Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ ｂｙ ＨＰＬＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ ｉｎ ｅｘｔｒａｃｔ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ２０１０ ｅｄｉｔｉｏｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｅｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ ｆｌｏｗｅｒｓ，ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｓｔｅｍ ｗｅｒｅ １．５５％，１．６８％ａｎｄ ０．７１％．Ｔｈｅ ｌｕｔｅｏｌｏｓｉｄｅ ｗｅｒｅ ０．０６５％．０．２００％ａｎｄ ０．０３６％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｌｕｔｅｏｌｏｓｉｄｅ ｉｎ ｌｅａｖｅｓ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｆｌｏｗｅｒｓ．Ｓｏ ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ ｌｅａｖｅｓ ｈａｄ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｖａｌｕｅ ｆｏｒ ｄｅｅｐ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ；ｅｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ；ｌｕｔｅｏｌｏｓｉｄｅ；ＨＰＬＣ
