我国豇豆和绿豆根瘤菌的数值分类及16S rDNA PCR-RFLP研究

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青海省不同生态区蚕豆根瘤菌16S rDNA分析

青海省不同生态区蚕豆根瘤菌16S rDNA分析张小娟【期刊名称】《干旱地区农业研究》【年(卷),期】2018(036)004【摘要】为了阐明青海省蚕豆根瘤菌的遗传多样性和亲缘关系,同时为发现和获得新的根瘤菌物种提供资源,采集和分离了青海省不同生态区蚕豆主栽品种青蚕14中的根瘤菌,并对其中分离到的6个菌株(CD1～6)进行16S rDNA鉴定分析.将6株蚕豆根瘤菌的全序列结果与NCBI中已报道的序列进行相似性比对,发现其相似度较高,其中供试菌株CD4与KF008225.1相似度最高,达到98％,其余均在95％到96％之间.6株供试菌分属4个菌属,CD1和CD2共属节细菌属,CD3属于分枝杆菌属,CD4和CD5属于快生根瘤菌属,CD6属于中慢生根瘤菌属,表明来自不同地区的蚕豆根瘤菌存在较大差异.聚类分析结果显示,蚕豆根瘤菌的6个菌株分属5个不同系统发育分支,证明青海省不同生态区蚕豆根瘤菌种类多样性较为丰富.【总页数】5页(P259-263)【作者】张小娟【作者单位】青海大学生态环境工程学院,省部共建三江源生态与农牧业国家重点实验室,青海西宁810016【正文语种】中文【中图分类】S154.38+1【相关文献】1.不同刺槐种源根瘤菌16S rDNA的PCR-RFLP分析 [J], 张泽坤;韩骞;杨敏生;王进茂2.日照大豆、菜豆根瘤菌的16S rDNA多样性分析 [J], 马晓凡;李林3.我国蚕豆根瘤菌的数值分类及其16S rDNA PCR-RFLP研究 [J], 路敏琦;李俊;李力;姜昕;陈强4.含羞草、山蚂蟥等几种豆科植物根瘤菌的数值分类及16S rDNA PCR-RFLP分析 [J], 刘晓云;魏爽;刘庆辉;王立江;郭振国;郅慧梅5.利用16S-23S rDNA RFLP及16S rRNA基因序列分析方法对湖北省饭豆(Vigna umbellata L.)根瘤菌系统发育的研究 [J], 潘峰;王平;胡正嘉;何绍江;冯新梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

从豆科植物的根瘤中直接提取根瘤菌DNA的方法

从豆科植物的根瘤中直接提取根瘤菌DNA的方法陈强;张小平;等【期刊名称】《微生物学通报》【年(卷),期】2002(029)006【摘要】豆科植物的新鲜根瘤经表面灭菌、破碎后直接加入200μL 4mol/L异硫氰酸胍(GUTC)裂解液混匀,离心去掉根瘤残留物,再加入适量RNA酶,37℃温育30min后,加入20μL硅藻土吸附液,室温处理15min离心去掉上清,沉淀经GUTC 裂解液二次处理,再分别用洗涤液、70%酒精洗涤.最后,硅藻土沉淀经真空干燥,加入20μL超纯水洗涤硅藻土沉淀,即可获得类菌体根瘤菌DNA.所获得的DNA可以用于AFLP、16S rRNAPCR反应.【总页数】5页(P63-67)【作者】陈强;张小平;等【作者单位】四川农业大学农学院微生物学系,雅安,625000;中国农业大学生物学院微生物学系,北京,100094;四川农业大学农学院微生物学系,雅安,625000;四川农业大学农学院微生物学系,雅安,625000;中国农业大学生物学院微生物学系,北京,100094;Department of Applied Chemistry and Microbiology,Universty of Helsinki,Finland 00014;Department of Applied Chemistry and Microbiology,Universty of Helsinki,Finland 00014【正文语种】中文【中图分类】Q93【相关文献】1.文山石漠化地区豆科植物根瘤菌的16SrDNA序列分析 [J], 张敬宜;王金华;熊智;思斯;王凯;杨应勇2.会泽铅锌尾矿区豆科植物根瘤菌的耐铅锌及16S rDNA PCR-RFLP研究 [J], 缪福俊;熊智;李彪;龚秀会;孙浩3.根瘤菌诱变育种在根瘤菌-豆科植物共生体系中的研究进展 [J], 王艳霞;解志红4.西北部分矿区豆科植物根瘤菌重金属抗性及16S rDNA RFLP分析 [J], 曹莹;马宁;常佳丽;赵龙飞;孔召玉;李哲斐;韦革宏5.含羞草、山蚂蟥等几种豆科植物根瘤菌的数值分类及16S rDNA PCR-RFLP分析 [J], 刘晓云;魏爽;刘庆辉;王立江;郭振国;郅慧梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

利用16S-23S rDNA RFLP及16S rRNA基因序列分析方法对湖北省饭豆(Vigna umbellata L.)根瘤菌系统发育

ｉｔｗｏｇｏｐｔｈｉｌｒｔｖｌｆ２．Ｇｏｐｗａｏｏｅｆｌｗｇｏｉｇｓａｎｎｏｌｅｆｒｅｉｉｅｔｎｏｔｕｓａｔｅｓｍｉｉｌｅ％ｒａｙｅｏ５ｒｕ１ｓｃｍｐｓｄｏｏ — ｗｎｔｉｓａｄｃｕｄｂｔｒｄｖｄｄｉｏｓｒｒｕｈｎｔｏｂａｃｅ。ＩＡａｄｔｈｉｌｒｙｌｖｌｆ９．Ｇｒｕ１ｗａｏｏｅｆｆｓ－ｒｗｎｔａｎ，ｗｈｃｌｏｃｕｄｗｒｎｈｓｎＩＢａｅｓｍｉｉｅｅ％ｔａｔｏ７ｏｐＩｓｃｍｐｓｄｏｔｇｏｉｇｓｒｉｓａｉｈａｓｏｌ
ａｄ１ＳｒｎＲＮＡｎｅｕｎｉｇ６ＧｅｅＳｑｅｃｎ
ＰＮＦｎ，Ｎｉｇ，Ｈｈｎｊ，ＥＳａｊｎＡｅｇＷＡＧＰｎ一ＵＺｅｇａＨｈｏａｇ＆ＦＮｉｍｉｉｉＥＧＸｎｅ
列相似性为９．６９８％．ＣＹ３２与Ｂａｙｈｏｉｍｅａｉ的参比菌株ＵＤ８Ｙ３０ｒｄｒｉｂｌｎｉｚｕｋＳＡ６有最近的亲缘关系，序列相似性近似于
１００％．图４表１参１３关键词根瘤菌；６一２ＳｒＮＧＣ１Ｓ３ＤＡＩＳＰＲ—ＲＬ；１ＳｒＮＦＰ６ＲＡ基因；系统发育；饭豆
维普资讯
应用与环境生物学报
２０，３１：８～８０７１（）７２
ＣｈｎＪＡｐＥｎｉｏＢｉｌ＝ＩＮ１０６８ＸｉｐｌｖｒｎｏＳＳ０６－７
利用１Ｓ一３ＤＡＲＬ２ｒＮＦＰ及１ＳｒＮ６ＳＲＡ基因序列６分析方法对湖北省饭豆（ｉｎｍｅａａＬ）Ｖａｕｂｌｔ．ｇｌ

两种扩增rDNA片段RFLP图谱用于快生型大豆根瘤菌的遗传多？…

两种扩增rDNA片段RFLP图谱用于快生型大豆根瘤菌的遗
传多？…
覃筱婷;周俊初
【期刊名称】《农业生物技术学报》
【年(卷),期】1998(006)004
【摘要】根据Ｅ．ｃｏｌｉ基因组ｒＤＮＡ保守序列设计的两对引物，分别用于扩增３０株来源于我国不同地区的快生型大豆根瘤菌菌株。

扩增产物经几种较少识别序列的内切酶消化后，得出特征的限制性内切酶酶切图谱。

该图谱可用于供试菌株种水平的鉴定及菌株ｒＤＮＡ分子的遗传多样性研究。

选用来源于Ｅ．ｃｏｌｉ基因组１６ＳｒＤＮＡ保守序列的一对引物将所有供试菌株都扩增出一条１．５ｋｂ的带，经四种内切酶消化后发现：新疆地区来源的菌株
【总页数】7页(P398-404)
【作者】覃筱婷;周俊初
【作者单位】华中农业大学农业微生物重点实验室;华中农业大学农业微生物重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】S154.381
【相关文献】
1.我国亚热带地区快生型大豆根瘤菌遗传多样性研究 [J], 杨成运;周俊初;杨江科;段广才
2.快生型大豆根瘤菌(Rhizobium fredii)15067与褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)10006的16S rDNA分析 [J], 李海英;刘金玲;张喜波;康妮;于海鹏;李鹏
3.慢生型大豆根瘤菌的结瘤基因转入快生型大豆根瘤菌中 [J], 周路明;黄通旺
4.16S rDNA-RFLP分析新疆快生大豆根瘤菌的分类地位 [J], 彭桂香;陈文新
5.快生型大豆根瘤菌（Rhizobium fredii）3．7Kb增效片段的亚克 [J], 张学贤;马立新;周俊初;陈华癸
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利用16s rdna序列对十株根瘤菌系统发育的研究

利用16S rDNA序列对十株根瘤菌系统发育的研究辛如1 张惠文2 李新宇2 寇巍1*刘宏生1(1 辽宁大学生命科学系沈阳，1100362 中国科学院沈阳应用生态研究所沈阳，110016）E-mail: liuhongsheng@摘要：为了确定本所保存的部分根瘤菌的种属地位，我们从中选出10株菌株，对其16S rDNA 进行扩增并测序，利用分子生物学软件对序列进行分析，得到根瘤菌系统发育树状图，对比相应的生理生化结果，重新定位了它们在根瘤菌系统发育中的种属地位，将生物信息学应用用于根瘤菌的种属命名具有重要的科学意义。

关键词：根瘤菌，16S rDNA，系统发育1．前言随着分子生物学的发展，根瘤菌的分类研究也取得很大进展，包括依据基因序列分析（16SrRNA，质粒基因等），基因组结构分析，基因组序列分析的系统发育分类方法等[1,2]，新分类方法的应用促进了根瘤菌新分类群的不断发现，也使根瘤菌的分类渐趋科学合理。

各种分类方法互相验证,共同构成多相分类体系，即首先采用依据表型特征和遗传特征的分类方法进行根瘤菌的初步聚群,然后选取群内代表菌株与同群内菌株及相关属种的代表菌株进行杂交,并测定其G+Cmol %和16SrRNA序列,判断其系统发育地位。

系统发育地位的判断在根瘤菌新属种的确认中起重要作用。

由于16SrRNA 基因进化速率缓慢，基因产物功能保守,因而常用于细菌的自然分类。

根瘤菌的系统发育关系主要是建立在16SrRNA基因序列分析基础上的。

许多研究者根据16SrRNA 基因部分或全序列分析,对根瘤菌及相关细菌进行了系统发育研究[3,4,5],大大地促进了根瘤菌及相关细菌的系统发育研究[6,7]。

2．材料和方法2.1菌株与仪器本实验室保存的菌株，编号为B015，B016,B019，B026，B027，B029，B031，B041，B083，B092 共10 株。

主要仪器：GeneAmp PCR System 9700，DYY－Ⅲ－5型稳压稳流电泳仪，SW－CJ －2FD洁净工作台，SORV ALL Biofuge Stratos离心机。

基于rDNA的PCR-RFLP及序列分析对四种螺旋线虫的分子鉴定

基于rDNA的PCR-RFLP及序列分析对四种螺旋线虫的分子鉴定赵雷;郑炜;梅圆圆;郑经武【期刊名称】《农业生物技术学报》【年(卷),期】2010(018)005【摘要】利用rDNA ITS-PCR-RFLP及序列分析等技术对来自国内浙江、山西、山东以及德国等地6个不同螺旋线虫地理群体进行了分类和鉴定.结合形态学特征分别鉴定为小头螺旋线虫(Helicotylenchus microcephalus)、双角螺旋线虫(H.digonicus)、双宫螺旋线虫(H.dihystera)和翅尾铗螺旋线虫(H.pteracerus).其中3个不同地理群体的双角螺旋线虫PCR产物片段长度和限制性内切酶酶切图谱相同,其余3个种的PCR产物长度稍大,4个螺旋线虫种的酶切图谱各不相同.选用的6种限制性内切酶(Alu Ⅰ、Ava Ⅰ、HaeⅢ、Hinf Ⅰ、Msp Ⅰ和Rsa Ⅰ)组合能有效地鉴别四种螺旋线虫.这是我国有关该属线虫分子特征的首次报道.【总页数】4页(P981-984)【作者】赵雷;郑炜;梅圆圆;郑经武【作者单位】浙江大学,生物技术研究所,杭州,310029;浙江大学,生物技术研究所,杭州,310029;浙江大学,生物技术研究所,杭州,310029;浙江大学,生物技术研究所,杭州,310029【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.利用rDNA的PCR-RFLP对伞滑刃属线虫群体的分子鉴别 [J], 蒋立琴;梁定东;郑经武;顾建锋;杨兰英2.基于rDNA ITS序列分析的桑黄真菌菌株分子鉴定 [J], 谢丽源;张勇;邓科君;彭卫红;甘炳成;李洪军3.基于rDNA-ITS和大亚基的甘蔗凤梨病菌分子鉴定及序列分析 [J], 林善海;周主贵;潘雪红;商显坤;魏吉利;黄诚华;4.基于rDNA-ITS和大亚基的甘蔗凤梨病菌分子鉴定及序列分析 [J], 林善海;周主贵;潘雪红;商显坤;魏吉利;黄诚华5.基于12S rDNA的四种中国豹蛛的分子鉴定(蜘蛛目,狼蛛科) [J], 罗育发;叶有青因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

应用RFLP特异基因片段检测绿豆成分

应用RFLP特异基因片段检测绿豆成分
刘金华;魏春艳;马立晖
【期刊名称】《植物检疫》
【年(卷),期】2006(20)6
【摘要】通过对绿豆RFLP分子标记图中特异片段序列的扩增,建立了一种利用PCR方法来检测、鉴定绿豆成分的方法。

该方法成功地扩增出了470bp大小的绿豆特异基因片段,通过对大豆、豇豆等其他豆类作物的验证,表明该引物具有较强的特异性,可以用来作为食品中绿豆成分的鉴定基因或绿豆转基因检测中的参照基因。

【总页数】3页(P336-338)
【关键词】绿豆;RFLP;PCR;成分
【作者】刘金华;魏春艳;马立晖
【作者单位】吉林出入境检验检疫局;内蒙古呼伦贝尔市鄂伦春自治旗植保植检站【正文语种】中文
【中图分类】S522
【相关文献】
1.食品中绿豆成分PCR特异性检测方法的建立 [J], 赵仲麟;李瑞歌;秦志扬;王成;王永;袁超;兰青阔
2.肠出血性大肠杆菌O157毒力及黏附相关基因的PCR检测和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析 [J], 丁红雷;毛旭虎;王豪举;邹全明
3.PCR方法扩增种属特异性片段检测牛羊肉成分 [J], 晏华春;马晓燕;刘艳芳;依
明·苏来曼
4.PCR方法扩增种属特异性片段检测猪源成分 [J], 毕道荣;高宏伟;孙敏;梁君妮
5.第Ⅷ凝血因子基因内限制性片段长度多态性(RFLP)的研究及其在甲型血友病基因连锁分析中的应用 [J], 何小平;杜传书;曾瑞萍;安业浩;刘莉莉
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日照大豆、菜豆根瘤菌的16SrDNA多样性分析

日照大豆、菜豆根瘤菌的16SrDNA多样性分析作者：马晓凡李林来源：《湖北农业科学》2017年第15期摘要：在山东日照地区同时采集大豆[Glycine max （L.） Merr]、菜豆（Phaseolus vulgaris L.）根瘤，分离纯化，保藏根瘤菌共54株，通过提取DNA，PCR recA基因，通过Blast比对及recA基因的系统进化分析，研究日照地区大豆与菜豆根瘤菌遗传多样性。

结果表明，在90%以上的相似水平上，日照大豆中的根瘤菌分布于根瘤菌属、慢生根瘤菌属、伯克霍尔德菌属3大属，圆明慢生根瘤菌、大豆慢生根瘤菌、菜豆根瘤菌、豌豆根瘤菌4个种，3个未定种。

日照菜豆中的根瘤菌全部分布于根瘤菌属，菜豆根瘤菌、豌豆根瘤菌、赤小豆根瘤菌3个种，2个未定种，其中一个进化距离较远，可能为潜在新种。

证明了日照大豆、菜豆根瘤菌丰富的遗传多样性，且日照大豆根瘤菌多样性大于日照菜豆。

关键词：大豆[Glycine max （L.） Merr]；菜豆（Phaseolus vulgaris L.）；根瘤菌；遗传多样性中图分类号：S565.1；S643.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）15-2938-04DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2017.15.035Abstract： The soybean[Glycine max （L.） Merr] and kidney bean（Phaseolus vulgaris L.）rhizobia were collected simultaneously，and a total of 54 rhizobia were separated， purified and then preserved. After the extraction of total DNA，the recA gene was amplified using PCR and the obtained sequences were blasted with those selected from genbank，and phylogenetic analysis was then done. The genetic diversity of soybean and kidney bean rhizobia from Rizhao was studied. At a similarity of more than 90%， soybean rhizobia from Rizhao were identified as Bradyrhizobium yuanmingense，Bradyrhizobium japonicum，Rhizobium phaseoli， Rhizobium leguminosarum，and other three undetermined species. They were affiliated with Rhizobium，Bradyrhizobium and Burkholderia. The kidney bean rhizobia from Rizhao were identified as Rhizobium phaseoli，Rhizobium leguminosarum，Adzuki bean rhizobia，and other two undetermined species， among which one species showing a remote evolutionary distance from the others was probably a potential new species. The results proved the high genetic diversity of soybean and kidney rhizobia from Rizhao and revealed that the soybean rhizobia were more diverse than the kidney bean rhizobia.Key words： soybean[Glycine max （L.） Merr]；kidney bean（Phaseolus vulgaris L.）；rhizobia；genetic diversity氮是植物所需要的大量元素之一。

尖峰岭抗逆性根瘤菌的筛选及其16S rDNA序列的测定

尖峰岭抗逆性根瘤菌的筛选及其16S rDNA序列的测定彭玉红;焦如珍;牟新涛【期刊名称】《林业科学研究》【年(卷),期】2010(023)004【摘要】为了探讨木本豆科植物根瘤菌对不良环境的抵抗能力,对分离自海南尖峰岭国家自然保护区的9株根瘤菌进行了初步研究.结果发现:9株根瘤菌最适生长pH值均为7,最适NaCl含量均为10.0 g·kg-1;菌株CAF224的最适生长温度为37 ℃,菌株CAF416、CAF438和CAF279的最适温度为20NFA4828 ℃,其余5株为28 ℃.9株根瘤菌均可在pH值4NFA4811、NaCl 20.0 g·kg-1 、37 ℃条件下生长,其中CAF224和CAF276菌株耐受pH值3; CAF226可以在40.0 g·kg-1 NaCl培养基中生长;CAF276可耐受20 min 50 ℃、10 min 60 ℃高温.不同宿主、不同生态条件下的根瘤菌株具有不同的抗逆性,通过综合分析,筛选出4株高抗菌株(CAF226、CAF276、CAF224、CAF414).16S rDNA序列系统发育分析表明:9菌株在系统进化树上与GenBank中序列号为EF054889的Rhizobium tropici Clone H12(热带根瘤菌)聚为一族,相似度为99.4%,初步确定9株根瘤菌为热带根瘤菌.【总页数】7页(P530-536)【作者】彭玉红;焦如珍;牟新涛【作者单位】中国林业科学研究院林业研究所,国家林业局林木培育重点实验室,北京,100091;中国林业科学研究院林业研究所,国家林业局林木培育重点实验室,北京,100091;中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所,北京,100091【正文语种】中文【中图分类】S711【相关文献】1.三株田间分离大豆根瘤菌16S rDNA基因鉴定及序列比较 [J], 李琬;李璐;李景鹏;许修宏2.一株抗铜根瘤菌的分离鉴定及其16S rDNA序列分析 [J], 樊连梅;李哲斐;韦革宏3.四川高效白三叶根瘤菌筛选及16S rDNA鉴定 [J], 凌瑶;潘明洪;彭燕4.甘草根瘤菌的16S rDNA全序列测定及系统进化分析 [J], 杨雪颖;张执欣;杨亚珍;韦革宏5.利用16S-23S rDNA RFLP及16S rRNA基因序列分析方法对湖北省饭豆(Vigna umbellata L.)根瘤菌系统发育的研究 [J], 潘峰;王平;胡正嘉;何绍江;冯新梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

不同刺槐种源根瘤菌16S rDNA的PCR-RFLP分析

不同刺槐种源根瘤菌16S rDNA的PCR-RFLP分析张泽坤;韩骞;杨敏生;王进茂【摘要】为了研究不同刺槐种源根瘤茵的遗传多样性,采用4种限制性内切酶对分离自保定和高邑的38株不同刺槐种源根瘤茵进行16S rDNA PCR-RFLP多态性分析,共产生26种16SrDNA遗传图谱类型.UPGMA聚类分析结果显示,所有供试菌株分为4大类,第3类又分为3个亚类.16S rDNA全序列分析表明,代表菌株GY-2与S.morelense LMG20571序列相似性达到99.6％,在系统发育分类地位上属于Sinorhizobium.刺槐根瘤菌遗传多样性丰富,遗传差异受地理环境影响较大,与寄主种源相关性不明显.%A study was performed to analyze the genetic diversity of rhizobia isolated from different provenances of Robinia pseud-oacacia. PCR-RFLP polymorphism analysis of 16S rDNA of 38 rhizobia grown in Baoding and Gaoyi was made with four restriction endonucleases. A total of 26 geneticmap patterns were generated from the tested strains. UPGMA cluster analysis indicates that all strains can be clustered into four groups, and the third group into three subgroups. 16S rDNA sequence analysis indicates that the representative strain GY-2 has a similarity level of 99. 6% with Sinorhizobium morelense LMG20571, and belongs to Sinorhizobium in the phylogenetic classification status. Results show that the rhizobia isolated from R. pseudoacacia reveal a high level of genetic diversity, and genetic differences are influenced by geographical environment, but its correlation with host provenance is not obvious.【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2012(040)009【总页数】5页(P81-85)【关键词】刺槐根瘤菌;16S rDNA PCR-RFLP;地理环境;种源【作者】张泽坤;韩骞;杨敏生;王进茂【作者单位】河北农业大学,保定,071000;河北农业大学,保定,071000;河北农业大学,保定,071000;河北农业大学,保定,071000【正文语种】中文【中图分类】S154.32;Q939.114根瘤菌是一类存在于土壤中的能侵染豆科植物的根部共生形成根瘤，并将空气中的氮还原成氨供植物营养的一类革兰氏阴性菌。

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［4］基，菌体收集时用液体 1Y 培养基，培养温度为［］ #&K 。全部供试菌株均按照 [9;*);@ 经典方法 ! 进［#］
豇豆［ *D:I)6，,$-%" +%-+$.+*"/"（ QT ）U62I）］和绿豆［+V;W ,)6;，,$-%" 0"1$"/"（ QT ）U92*A)X］同属于，蝶形花亚科（ 5"($*$4%4$1#"# ），豇豆科（ 2#-+3$%4’"# ），是一年生草本植物。豇豆和绿豆都属豆属（ ,$-%" ）于小杂粮，生育期短，适应范围广，耐旱耐瘠；能与大宗作物实行间作套种，是我国种植业结构调整的特色作物；富含植物蛋白、多种氨基酸和维生素及其它多种特殊营养素，具有医、食双重功能，是人类食物构成中的重要粮食品种，是食品工业的重要原料和养殖业的重要饲料。我国幅员辽阔，自然生态条件复杂多样，豆科植
4
摘
要：对分离自中国 %! 个不同省（自治区）的 0/ 株豇豆和绿豆根瘤菌及 %# 株参比菌株进行了唯一碳、氮源利用，
抗生素抗性，抗逆性和酶活性等 %#& 个表型性状的测定，并用 EFG1H 软件进行聚类分析。表型性状测定结果发现，（ IJ .?$ ’ %%?$）值范围内生长，大部分菌株能所有菌株都有极其广泛的碳、氮源利用谱，大多数菌株可在较宽的 IJ 在 40K 高温条件下生长，个别菌株能耐受 "$K 高温较长时间（#$ ’ !.+9;）的热激。聚类分析结果表明，全部供试菌一个群为慢生菌群，另一群为快生和中慢生菌群；在 0/L 的相似性水平上株在 "4?.L 的相似性水平上分为两大群：分为 0 个亚群。在数值分类的基础上，又将参比菌株增加到 ## 株，对 0/ 株待测菌株进行了 %"H -(GM NOP3P5QN 分析，经 R)2OD+I6%"H -(GM NOP 产物经 !"# !、 !$% C"、 &’( " 和 )*+ " ! 种内切酶酶切共产生 4! 种遗传图谱类型，软件聚类后，在的相似性水平上也可划分为个亚群，与数值分类的结果有很好的一致性。 0/L 0 # 关键词：豇豆；绿豆；根瘤菌；数值分类；%"H -(GM NOP3P5QN；多样性中图分类号： S/4/ 文献标识码： M 文章编号： $$$%3"#$/（#$$"）$"3$&"%3$&
［%］。中可发挥重要作用在根瘤菌系统发育中的确切分类地位，为豇豆及绿豆根瘤菌种质资源的保护、开发和利用奠定基础。
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材料和方法
材料
共选取待测菌株 0/ 株，参 !.!.! 菌株及培养条件：比菌株 ## 株。待测菌株宿主为豇豆和绿豆，分别采自山东、河南、河北、新疆、内蒙、湖北、江苏、浙江、安徽、江西、四川、广东、福建和云南等省（自治区），供试根瘤菌的菌株代号、宿主植物名称及来源参图 %、图 #。供试菌株均用 YEM （ B)6Z@3+6;;9@D2 6W6- ）培养
根瘤菌是一类广泛存在于土壤中的革兰氏阴性细菌，它能够侵染豆科植物的根部或茎部形成共生体— — —根瘤（或茎瘤），并在其中将空气中游离态的氮气转化成植物可以利用的化合态氮，为宿主植物生长提供必需的氮素营养。根瘤菌与豆科植物的共生固氮作用是生物固氮中固氮效率最高的体系，在我国 “西部大开发” 和农、林、牧业的可持续发展过程
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结果和分析
数值分类结果和分析
从图 " 中可以看出，所 #"!"! 数值分类聚类分析：有供试菌株在 0:1!3 的相似性水平上分成两个大群，其中一群为慢生菌群，包括 /0’1203%4#5%.6 属的另一群为快生和中 : 株参比菌株和 ?" 株待测菌株；慢生菌群，包括 73%4#5%.6 、 8%)#03%4#5%.6 、和 -90#5’":(0%.6 中的参比菌株及 :! *(+#03%4#5%.6 、
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不能与原宿主结瘤，还有待重复结瘤试验或并对其中心菌株进行 "0( 46$. 基因或 )#1 、 )%; 等与结瘤固氮相关基因的序列分析来确定其是否为土壤杆菌。亚群 = 由参比菌株 73%4#5%.6 (:$% 5M$?=’ 和 > 株待测菌株组成，说明 > 株菌应属于 73%4#5%.6 。但达到只有 55N.+ !":>@ 与参比菌株相似性较高，其余 0 株菌与参比菌株相似性相对较低，其中 2@3 ， 55N.+ =!==#、 55N.+ =!=:= 和 55N.+ :!=!09" 在 2!3 相似性水平上聚在一起。亚群 : 由 = 株 73%4#5%.6 $(9.6%)#+’0.6 参比菌株（+(/. =:>#’ 、和分离自湖北的 : 株豇豆 "=>O">）根瘤菌组成，相似性为 2:1!3 。亚群 ? 由分离自浙江的 = 株绿豆根瘤菌（55N.+ :!#"!、和 8%)#03%4#5%.6 属 : 55N.+ :!#:#）株参比菌株组成，相似性为 2:3 ，说明这 = 株菌应归属 8%)#03%4#5%.6 。亚群 ! 由 = 株 /0’1203%4#5%.6 <’,#)%".6 已知参比菌株和 2 株待测菌株组成。其中 55N.+ =:=:0、 55N.+ ?:"@>、55N.+ ::#?" 与已知参比菌株 /0’1203%4#5%.6 <’,#)%".6 +(/. 0’ 和 N"! 的相似性高达 2!3 ，可能属于 / ; <’,#)%".6 的不同菌株；而其余 ! 株菌则可能为不同于 / ; <’,#)%".6 的慢生根瘤菌。亚群 0 全部由 "? 株待测菌株组成。这些菌有很大的多样性，在 2"3 的相似性水平上又分成 = 个小的分支： 55N.+ ?:#:"、55N.+ ?:"="、55N.+ 都是豇豆根瘤菌； 0!#00、 55N.+ 0":"2 组成分支 "， 55N.+ :!"209"、 55N.+ :!=>=、 55N.+ 0":":、 55N.+ 0":"0、 55N.+ !""">、 55N.+ !"=@!、 55N.+ !":!>、 55N.+ !"=0:、 55N.+ ::#02、 55N.+ ?:#22 组成分支 =。亚群 > 由已知参比菌株 /0’1203%4#5%.6 ($=’)%% 这群菌也 +(/. >0’ 和 ": 株待测菌株组成。同样，存在较大的多样性，在 223 的相似性水平上也分成其中 55N.+ ::#"=9"、 = 个小的分支： 55N.+ ::#"=9 =、55N.+ ::#""、55N.+ :!"":、55N.+ ::":>、 55N.+ !"">>、55N.+ !"=!? 和已知参比菌株 /0’1203%4#5%.6 ($=’)%% +(/. >0’ 组成分支 "； 55N.+ ::">?、 55N.+ =:#""、 55N.+ =:##"、 55N.+ :!=!09=、 55N.+ !"#"=、 55N.+ :!"=" 组成分支 =。 #"!"# 鉴别特征的选择：从上述聚类结果的各亚群中找出出现频率!@!3 的特征为该亚群的鉴别特征。即该亚群中 @!3 以上的菌株均表现为正反应的记为 “P” ，均表现为负反应的记为 “Q” ，出现频率介于 03 < @!3 记为 “ R” （表 "）。
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作者简介：张勇法（%/0! < ），男，河南濮阳人，博士研究生，主要从事根瘤菌多相分类及其系统发育研究。 83+692：ABC < %$$% > %"4? *D+ 收稿日期：#$$"3$43%.；接受日期：#$$"3$!3%%；修回日期：#$$"3$"3%$
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