HPLC故障及排除方法

hplc压力问题及排查方法
HPLC(高效液相色谱)的压力问题可能包括压力过高或过低。

下面是一些常见的排查方法：
1. 检查柱连接：确保柱连接紧密，并且没有漏气或松动的地方。

可以用手轻轻转动连接处，看是否有松动。

需要重新连接的话，确保连接处干净无异物。

2. 检查管道：检查管道是否有任何堵塞或压力泄漏的情况。

可以检查压力节流阀、减压阀和调节阀等部件。

3. 检查流量设置：检查流量设置是否正确。

如果设置过高，则可能会导致压力过高。

参考仪器的操作手册，按照所需的分析条件进行设置。

4. 检查溶剂：确保使用的溶剂无杂质或气泡。

杂质或气泡可能会导致压力过高。

可以尝试更换新鲜的溶剂，或者通过过滤器除去杂质。

5. 检查柱压力：检查柱的压力是否正常。

柱的堵塞、损坏或老化可能导致压力过高。

如果怀疑柱的问题，可以尝试更换新的柱试试。

6. 检查泵：检查泵的泵头、活塞和密封环是否良好。

泵的密封环磨损或泵头松动可能导致压力问题。

7. 检查压力传感器：检查压力传感器是否正常工作。

如果压力传感器损坏或失灵，可能导致压力测量不准确。

如果以上排查方法仍然无法解决问题，建议联系仪器厂家或技术支持，寻求进一步的帮助和建议。

一、色谱峰可能原因存在问题没峰 1.仪器故障；错误的洗脱条件2.没进针；没足够进样量3.高背景电流/噪音（电雾式检测器）4.样品太不稳定、挥发性太强（电雾式检测器）峰拖尾 1.碱性化合物/混合物与硅醇基团相互作用2.缓冲能力不足3.与固定相内的微量金属物发生螯合作用4.死体积太大。

5.错误的毛细管连接。

6.柱退化7.柱失效（特别在超高效液相色谱压力）峰前沿 1.在柱头堵塞熔块、微粒2.柱子里的通道（可能是空隙的意思）3.柱子过载4.样品在强洗提液中被分解宽峰 1.检测器池体积太大2.早出的峰比后洗脱出来的峰宽。

3.检测器响应时间（时间常数）太长4.电雾式检测器与例如，UV检测器相比5.高纵向扩散鬼峰/假峰 1.只有一些峰宽：从之前的进针中迟洗脱的峰2.污染（代表性的是进样器或柱子）3.洗脱液污染4.样品中的干扰5.被污染的喷雾器（电雾式喷雾器）分裂峰或双峰 1.柱子或保护柱的污染。

柱子不合适（这是我自己补充的）。

柱效降2.样品溶剂太强。

样品在强洗提液中被分解（这是我自己补充的）。

3.与未知的干扰共同洗脱出来。

4.磨损的转子密封圈5.填料损失（UHPLC应用）6.温度不匹配7.不正确的毛细管连接反峰/负峰 1.不适当的参照波长设定（DAD）2.被分析物的吸收/荧光比流动相弱3.模拟输出接口的错误极化4.排水尖峰（电雾式喷雾器）二、峰面积精度可能原因存在问题仪器或样品引起的 1.样品或取样器的问题峰一体化设定 1.一体化界限位置变化波动的基线 1.由泵脉动，混合纹波等引起的不可重现的峰集合进样量变化 1.自动取样器从小瓶抽了空气2.样品降解3.在自动取样器的射流中有空气。

4.自动取样器，进样阀，和/或注射器阀不紧5.进样针阻塞或针尖变形6.自动取样器抽样速度太快，样品有高空气含量。

7.进样器密封圈泄漏，注射器中有空气不恰当的检测器设置 1.错误的检测器波长3.不正确的蒸发器温度（电雾式喷雾器）从前面的进针传递过来的被分析物1.遗留（从针，样品环，针座）2.柱子储存效应(或者记忆效应）1.检测器是不是显示典型的基线噪音？如果检测器输出只是一条平滑的线，2.确认样品器已掰下来，样品已进入样品环。

氨基柱的使用：
需要注意的是，氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解，所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备，特别是当你的使用条件是反相条件下时。

反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。

所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。

有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质如果汁的分析时（分析其中的糖份），酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。

这时，Kromasil专家所给的建议是：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。

高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。

解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。

-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。

解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。

2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。

解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。

3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。

-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。

解决方案包括更换流动相或清洗柱。

4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。

解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。

-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。

解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。

5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。

6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。

解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。

7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。

解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。

8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。

解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。

这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。

在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。

HPLC的故障诊断及其维修在实验室中，高效液相色谱(HPLC)是一种常用的分析方法，但是使用过程中可能会出现一些故障。

下面将对HPLC的常见故障进行诊断和维修。

1. 压力问题如果HPLC系统的压力异常升高或降低，可能是由于柱堵塞、封口件失效或泵的问题引起的。

此时需要检查柱是否需要更换，清洗封口件或者校准泵的工作方式。

2. 色谱峰形问题如果HPLC的色谱峰出现拖尾、畸变或分离不良的情况，可能是由于进样器、柱或检测器的问题。

此时需要检查进样器的清洁程度、柱的使用寿命以及检测器的工作状态。

3. 泄漏问题HPLC系统的泄漏可能会导致试剂的浪费并且对操作人员造成危险。

在发现泄漏时，需要立即停止使用HPLC系统，并检查管路和连接件是否紧固，替换损坏的零件。

4. 溶剂问题HPLC的溶剂可能会受到污染或者流速不稳定，导致分析结果不准确。

此时需要更换新的溶剂瓶、清洗管路和泵，并重新校准流速。

以上是HPLC常见的故障诊断和维修方法，为了保证分析结果的准确性和仪器的稳定性，实验室操作人员需要定期对HPLC进行检查和维护。

高效液相色谱（HPLC）作为一种准确、灵敏和可靠的分析技术，在化学、生物和制药领域中得到了广泛的应用。

然而，HPLC分析过程中常会遇到一些故障，这些故障可能会影响分析结果的准确性和可靠性。

因此，了解常见的HPLC故障并掌握相应的维修方法对于保障实验室分析工作的顺利进行至关重要。

5. 柱温度问题HPLC柱温度的稳定对于分离和检测分析结果非常重要。

如果发现柱温度不稳定或者超出设定范围，一般可以通过检查柱箱温度控制器、换热器或者冷却器来确定问题所在，并及时调整或更换相关部件。

6. 泵的稳压性能问题HPLC泵的稳压性能直接影响流速和流量的准确性。

如果发现流速或者流量不稳定，需要检查压力传感器、活塞密封件等部件是否出现损坏或者磨损，及时更换损坏部件进行维修。

7. 检测器故障检测器在HPLC分析中起着至关重要的作用，如果出现检测信号异常、漂移或者峰形畸变，需要检查检测器灯泡是否老化，光路是否受到污染或者调整参数设置是否准确，进行相应的维修和调整。

高效液相色谱仪故障排除指南高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种常用的分析仪器，可以广泛应用于药物分析、环境检测、食品科学等领域。

然而，在使用过程中，不可避免地会出现一些故障情况。

本文将介绍一些常见的HPLC故障，并提供相应的排除方法。

一、进样器故障1. 进样器漏液若观察到进样口出现漏液现象，首先可以检查密封件是否完好，如若密封件损坏应及时更换。

若密封件完好，还可以检查进样器盖上是否存在污垢，若有，则可清洗并重新安装。

2. 进样器堵塞如果在进样过程中发现进样器堵塞，可以先使用无机溶液进行冲洗，以清除可能存在的样品残留物。

如果仍然无法解决堵塞问题，可以采取拆卸进样器进行彻底清洗的方法。

二、柱温箱故障1. 温度控制不稳定若柱温箱的温度控制不稳定，可能会导致分离信号的漂移，影响分析结果的准确性。

这时，可以首先检查温度控制仪是否设置正确，如有必要，可以重新设置。

另外，也可以检查柱温箱是否存在漏气现象，若存在，应及时修复。

2. 柱温箱泄漏柱温箱泄漏可能会导致温度失控，因而影响分析结果。

检测到泄漏时，应首先检查柱温箱的密封性能，如有必要，可以更换密封圈，确保密封良好。

三、流动相泵故障1. 流量不稳定如果在使用流动相泵时，发现流量不稳定，可能是由于空气进入了系统，导致气泡形成。

这时，可以检查胶管连接是否松动，以及胶管中是否有积气现象。

如果检查后仍然无法解决问题，可以考虑更换胶管或检修流动相泵。

2. 压力异常如果HPLC系统在运行过程中压力异常，可能是由于流动相泵的压力传感器出现问题。

此时，应检查压力传感器是否损坏，如有必要，可以进行维修或更换。

四、检测器故障1. 检测器信号异常如果在分析过程中，检测器的信号异常，可能是由于光源出现故障导致。

这时，可以检查光源是否正常工作，如有必要，可以更换光源。

另外，也可以尝试调整检测器的增益或灵敏度，以改善信号异常问题。

HPLC常见故障排除完美版注意：在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。

**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。

色谱柱的维护1.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)2.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围3.避免流动相组成及极性的剧烈变化4.流动相使用前必须经脱气和过滤处理5.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中6.压力升高是需要更换预柱的信号HPLC六通阀进样器的使用及保养六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。

美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。

工作原理：1、手柄位进样(Load)位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出;2、将手柄转动至进样(Inject)位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相分析柱进行分析。

虽然六通阀进样器具有结构简单、使用方便、寿命长、日常无需维修等特点，但正确的使用和维护将能增加使用寿命，保护周边设备，同时增加分析准确度。

如使用得当的话，六通阀进样器一般可连续进样3万次而无需维修。

以下浅谈有关六通阀进样器的使用及保养事宜(仅供参考)：1、手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。

在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。

一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气;另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子。