(完整版)HPLC谱图常见问题原因汇总及解决方式

一、色谱峰可能原因存在问题没峰 1.仪器故障；错误的洗脱条件2.没进针；没足够进样量3.高背景电流/噪音（电雾式检测器）4.样品太不稳定、挥发性太强（电雾式检测器）峰拖尾 1.碱性化合物/混合物与硅醇基团相互作用2.缓冲能力不足3.与固定相内的微量金属物发生螯合作用4.死体积太大。

5.错误的毛细管连接。

6.柱退化7.柱失效（特别在超高效液相色谱压力）峰前沿 1.在柱头堵塞熔块、微粒2.柱子里的通道（可能是空隙的意思）3.柱子过载4.样品在强洗提液中被分解宽峰 1.检测器池体积太大2.早出的峰比后洗脱出来的峰宽。

3.检测器响应时间（时间常数）太长4.电雾式检测器与例如，UV检测器相比5.高纵向扩散鬼峰/假峰 1.只有一些峰宽：从之前的进针中迟洗脱的峰2.污染（代表性的是进样器或柱子）3.洗脱液污染4.样品中的干扰5.被污染的喷雾器（电雾式喷雾器）分裂峰或双峰 1.柱子或保护柱的污染。

柱子不合适（这是我自己补充的）。

柱效降2.样品溶剂太强。

样品在强洗提液中被分解（这是我自己补充的）。

3.与未知的干扰共同洗脱出来。

4.磨损的转子密封圈5.填料损失（UHPLC应用）6.温度不匹配7.不正确的毛细管连接反峰/负峰 1.不适当的参照波长设定（DAD）2.被分析物的吸收/荧光比流动相弱3.模拟输出接口的错误极化4.排水尖峰（电雾式喷雾器）二、峰面积精度可能原因存在问题仪器或样品引起的 1.样品或取样器的问题峰一体化设定 1.一体化界限位置变化波动的基线 1.由泵脉动，混合纹波等引起的不可重现的峰集合进样量变化 1.自动取样器从小瓶抽了空气2.样品降解3.在自动取样器的射流中有空气。

4.自动取样器，进样阀，和/或注射器阀不紧5.进样针阻塞或针尖变形6.自动取样器抽样速度太快，样品有高空气含量。

7.进样器密封圈泄漏，注射器中有空气不恰当的检测器设置 1.错误的检测器波长3.不正确的蒸发器温度（电雾式喷雾器）从前面的进针传递过来的被分析物1.遗留（从针，样品环，针座）2.柱子储存效应(或者记忆效应）1.检测器是不是显示典型的基线噪音？如果检测器输出只是一条平滑的线，2.确认样品器已掰下来，样品已进入样品环。

HPLC谱图的各种问题及相应的解决办法随着2005年版药典的施行，高效液相色谱仪在新版药典中得到极为广泛的应用。

我们在平常的检验工作中，常常发现HPLC谱图会与理论上的有差别，出现各种各样的问题，一直是困扰着广大药品检验人员的一个主要因素。

当出现某种现象时，又该如何去有针对性的解决问题呢，这也是广大药检人士所共同期待的事，如今参考多种文献资料，讲义，教材，结合自身的平常工作经验，将一些常见的，主要的现象，原因及解决措施进行了整理总结，以供专业人士查阅参考,也。

这里所罗列的也只是一个大概内容。

如何做到真正解决问题，我认为坚持几个原则：一具体问题具体对待原则；二先外设后内部原则；三由简而繁原则；四单一处理到综全处理原则。

由于这方面所遇到的问题相对比较多，笔者打算做成几个系列化内容，分次发表。

下面先介绍几个最常见，最主要的问题。

（解决办法前的编号对应前面相应的原因编号，其他皆同。

）问题一：基线漂移原因主要有：1、柱温波动。

（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。

通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

）；2、流动相不均匀。

（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。

）；3、流通池被污染或有气体；检测器出口阻塞。

（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）；4、流动相配比不当或流速变化；5、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；6、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成；7、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线；8、使用循环溶剂，但检测器未调整；9、检测器没有设定在最大吸收波长处。

针对上述原因，有一些基本的解决办法：1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器；2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。

流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气；3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。

如有需要，可以用1N的硝酸。

（不要用盐酸）；4、取出阻塞物或更换管子。

高压液相色谱HPLC常见故障及排除方法诊状(一)保留时间变化可能的原因: 解决方法1.柱温变化:柱恒温2.等度与梯度间未能充分平衡:至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够:用>25mmol/L的缓冲液4.柱污染:每天冲洗柱5.柱内条件变化:稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命:采用保护柱(二)保留时间缩短可能的原因: 解决方法1.流速增加:检查泵,重新设定流速2.样品超载:降低样品量3.键合相流失:流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化:防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加:柱恒温(三)保留时间延长可能的原因: 解决方法1.流速下降:管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化:用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失:同前(二)34.流动相组成变化:同前(二)45.温度降低:同前(二)5(四)出现肩峰或分叉可能的原因: 解决方法1.样品体积过大:用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强:采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道:更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效:更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏:更换进样器转子(五)鬼峰可能的原因: 解决方法1.进样阀残余峰:每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物:处理样品3.柱未平衡:重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六)基线噪声可能的原因: 解决方法1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) : 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声:更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡:流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾可能的原因: 解决方法1.柱超载:降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰:清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 : 同前(四)45.同前(四)3 5. : 同前(四)36.死体积或柱外体积过大:连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降:用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽可能的原因: 解决方法1.进样体积过大:同(四)12.在进样阀中造成峰扩展:进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢:设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大:设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高:增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大:用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长:等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大:将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载:进小浓度小体积样品液相色谱柱使用及保养液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。

高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。

解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。

-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。

解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。

2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。

解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。

3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。

-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。

解决方案包括更换流动相或清洗柱。

4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。

解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。

-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。

解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。

5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。

6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。

解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。

7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。

解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。

8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。

解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。

这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。

在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。

HPLC的故障诊断及其维修在实验室中，高效液相色谱(HPLC)是一种常用的分析方法，但是使用过程中可能会出现一些故障。

下面将对HPLC的常见故障进行诊断和维修。

1. 压力问题如果HPLC系统的压力异常升高或降低，可能是由于柱堵塞、封口件失效或泵的问题引起的。

此时需要检查柱是否需要更换，清洗封口件或者校准泵的工作方式。

2. 色谱峰形问题如果HPLC的色谱峰出现拖尾、畸变或分离不良的情况，可能是由于进样器、柱或检测器的问题。

此时需要检查进样器的清洁程度、柱的使用寿命以及检测器的工作状态。

3. 泄漏问题HPLC系统的泄漏可能会导致试剂的浪费并且对操作人员造成危险。

在发现泄漏时，需要立即停止使用HPLC系统，并检查管路和连接件是否紧固，替换损坏的零件。

4. 溶剂问题HPLC的溶剂可能会受到污染或者流速不稳定，导致分析结果不准确。

此时需要更换新的溶剂瓶、清洗管路和泵，并重新校准流速。

以上是HPLC常见的故障诊断和维修方法，为了保证分析结果的准确性和仪器的稳定性，实验室操作人员需要定期对HPLC进行检查和维护。

高效液相色谱（HPLC）作为一种准确、灵敏和可靠的分析技术，在化学、生物和制药领域中得到了广泛的应用。

然而，HPLC分析过程中常会遇到一些故障，这些故障可能会影响分析结果的准确性和可靠性。

因此，了解常见的HPLC故障并掌握相应的维修方法对于保障实验室分析工作的顺利进行至关重要。

5. 柱温度问题HPLC柱温度的稳定对于分离和检测分析结果非常重要。

如果发现柱温度不稳定或者超出设定范围，一般可以通过检查柱箱温度控制器、换热器或者冷却器来确定问题所在，并及时调整或更换相关部件。

6. 泵的稳压性能问题HPLC泵的稳压性能直接影响流速和流量的准确性。

如果发现流速或者流量不稳定，需要检查压力传感器、活塞密封件等部件是否出现损坏或者磨损，及时更换损坏部件进行维修。

7. 检测器故障检测器在HPLC分析中起着至关重要的作用，如果出现检测信号异常、漂移或者峰形畸变，需要检查检测器灯泡是否老化，光路是否受到污染或者调整参数设置是否准确，进行相应的维修和调整。

HPLC谱图的各种问题及相应的解决办法随着2005年版药典的施行，高效液相色谱仪在新版药典中得到极为广泛的应用。

我们在平常的检验工作中，常常发现HPLC谱图会与理论上的有差别，出现各种各样的问题，一直是困扰着广大药品检验人员的一个主要因素。

当出现某种现象时，又该如何去有针对性的解决问题呢，这也是广大药检人士所共同期待的事，如今参考多种文献资料，讲义，教材，结合自身的平常工作经验，将一些常见的，主要的现象，原因及解决措施进行了整理总结，以供专业人士查阅参考,也。

这里所罗列的也只是一个大概内容。

如何做到真正解决问题，我认为坚持几个原则：一具体问题具体对待原则；二先外设后内部原则；三由简而繁原则；四单一处理到综全处理原则。

由于这方面所遇到的问题相对比较多，笔者打算做成几个系列化内容，分次发表。

下面先介绍几个最常见，最主要的问题。

（解决办法前的编号对应前面相应的原因编号，其他皆同。

）问题一：基线漂移原因主要有：1、柱温波动。

（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。

通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

）；2、流动相不均匀。

（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。

）；3、流通池被污染或有气体；检测器出口阻塞。

（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）；4、流动相配比不当或流速变化；5、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；6、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成；7、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线；8、使用循环溶剂，但检测器未调整；9、检测器没有设定在最大吸收波长处。

针对上述原因，有一些基本的解决办法：1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器；2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。

流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气；3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。

如有需要，可以用1N的硝酸。

（不要用盐酸）；4、取出阻塞物或更换管子。

液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1．样品量不足，解决办法为增加样品量2．样品未从柱子中流出。

可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3．样品与检测器不匹配。

根据样品化学性质调整波长或改换检测器4．检测器衰减太多。

调整衰减即可。

5．检测器时间常数太大。

解决办法为降低时间参数6．检测器池窗污染。

解决办法为清洗池窗。

7．检测池中有气泡。

解决办法为排气。

8．记录仪测压范围不当。

调整电压范围即可。

9．流动相流量不合适。

调整流速即可。

10．检测器与记录仪超出校正曲线。

解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

为什么HPLC柱柱压过高柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。

其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

1．拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；2．把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；3．将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。

这时，如果柱压仍不下降，再检查；4．更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。

若柱压还高，请与厂商联系。

一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。

液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？1．筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

2．存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化漂移现象1．温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2．流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3．柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡快速变化现象1. 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2．泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

高效液相色谱使用中常见问题及对策
高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分
析技术。

在使用HPLC的过程中，可能会遇到一些常见问题，以下是一些可能的问题及对策：
1. 峰形不对称或分离不良：可能是由于柱问题引起的。

可以尝试更换柱，确保柱的性能良好，
并尽量避免超出柱的最大推荐压力。

2. 峰形峭度低：这可能意味着分离不充分。

可以尝试调整流动相的组成、pH值或流速来改善
分离。

3. 噪音较大：可能是由于进样器或检测器的问题引起的。

可以检查进样器和检测器的状态，并
确保它们正常运行。

4. 色谱柱寿命较短：这可能是由于样品中的杂质或试剂导致的。

可以尝试优化样品的准备方法，如前处理或过滤样品，以减少对柱的损害。

5. 流动相配制错误：这可能导致峰错位或分离不良。

可以仔细检查流动相的配制方法和溶剂的
纯度，确保配制正确。

6. 峰定量不准确：可能是由于进样量不准确或方法参数设置不合适引起的。

可以检查进样量的
准确性，并根据实际情况调整仪器参数。

7. 泵压过高：可能是由于管路堵塞或柱封堵引起的。

可以检查管路是否通畅，并根据需要更换
柱或清洗柱。

8. 柱渗漏：可能是由于柱端部密封不良或柱老化引起的。

可以检查柱端部的密封情况，并确保
柱处于良好状态。

针对以上问题，及时检查、调整和维护HPLC设备，并根据具体情况进行修复或更换，可以提
高HPLC分析的效果和结果的准确性。

液相色谱常见问题及处理办法一、问：用HPLC进行分析时，保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：1．温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。

2．流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。

3．柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。

关于快速变化问题：1．流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定。

2．泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

3．流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。

二、问：色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题？1．柱效要高2．热稳定性好3．化学惰性强具体选择应注意：1．柱极性。

根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析。

2．柱子内径。

内径大小决定柱容量。

3．液膜厚度。

分析样品温度不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄。

4．柱长度。

柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长度。

5．外涂层（柱体）的选择。

6．另外还有仪器型号、分析对象等因素。

三、问：液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？1．筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

2．存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子。

四、问：从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏？1．分配容量（或容量因子）K，好的柱子在高温运行后，分配容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好。

2．理论塔板数n，热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定。

3．柱子的极性。

热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，具体表现为保留指数I 值没有大的变化。

4．噪声。

热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加。

5．柱子的去活层，毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性。

质量好的毛细管柱子高温后，去活层不应该变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。

HPLC谱图常见问题原因及解决方式汇总液相色谱系统的许多问题都可以在谱图上反映出来。

其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。

对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键所在。

A.峰拖尾
B.峰前延
C.峰分叉
D.峰变形
E．早出的峰变形
F．早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
G．K’增加时，脱尾更严重
H．酸性或碱性化合物的峰拖尾
I．额外的峰
J.保留时间波动
K.保留时间不断变化
L.基线漂移
M.基线噪音（规则的）
N.基线噪音（不规则的）
O.宽峰
P.分离度降低
Q.所有的峰面积都太小
R.所有峰面积都太大。

HPLC常见的8个问题与实用对策高效液相色谱是色谱法的一个重要分支。

该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。

以制药领域为例：我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：1、保留时间发生漂移或快速变化原因？关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定；②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等；③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。

关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定；②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出；③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。

2、出现拖尾或双峰的原因？①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子；②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子；改换流动相或更换选择性好的柱子；③可能柱超载，减少进样量。

3、HPLC柱验收测试时柱压过高为什么？柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。

其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。

这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。

4、为何出现鬼峰？①进样阀残余峰－－每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗；②样品中未知物－－处理样品；③柱未平衡－－重新平衡柱,用流动相作样品溶剂（尤其是离子对色谱）；④三氟乙酸（TFA）氧化－－每天新配,用抗氧化剂；⑤水污染（反相）－－通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水。

5、为何出现峰拖尾？①柱超载，降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相；②峰干扰，清洁样品,调整流动相；③硅羟基作用，加三乙胺,用碱致钝化柱,增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,纯化样品；④柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品；⑤柱塌陷或形成短路通道，更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件；⑥死体积或柱外体积过大，连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管；⑦柱效下降，用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱。

液相色谱常见问题及处理方法液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要缘由及解决方法1、样品量不足，解决方法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。

可依据样品的化学性质转变流淌相或柱子3、样品与检测器不匹配。

依据样品化学性质调整波长或改换检测器4、检测器衰减太多。

调整衰减即可。

5、检测器时间常数太大。

解决方法为降低时间参数6、检测器池窗污染。

解决方法为清洗池窗。

7、检测池中有气泡。

解决方法为排气。

8、纪录仪测压范围不当。

调整电压范围即可。

9、流淌相流量不合适。

调整流速即可。

10、检测器与纪录仪超出校正曲线。

解决方法为检查纪录仪与检测器，重作校正曲线。

为什么HPLC柱柱压过高柱压过高是HPLC柱用户最常遇到的问题。

其缘由有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

1、拆去爱护预柱，看柱压是否还高，否则是爱护柱的问题，若柱压仍高，再检查；2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流淌相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流淌池）。

这时，假如柱压仍不下降，再检查：4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力提升。

若柱压还高，请与厂商联系。

一般状况下，在进样器与爱护柱之间接一个在线过滤器便可避开柱压过高的问题，SGE供应的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。

液相色谱中峰消失拖尾或消失双峰的缘由是什么？1、筛板堵塞或柱失效，解决方法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

2、存在干扰峰，解决方法为使用较长的柱子，改换流淌相或更换选择性好的柱子如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化漂移现象1、温度掌握不好，解决方法是采纳恒温装置，保持柱温恒定2、流淌相发生变化，解决方法是防止流淌相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡快速变化现象1.流速发生变化，解决方法是重新设定流速，使之保持稳定2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

HPLC常见问题原因及解决方案HPLC常见问题原因及解决方案一）压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。

A、没有压力显示，没有流动相流动：原因解决方法1、电源问题接通电源，开机2、保险丝被烧坏更换保险丝3、控制器设定不正确或设定失败采取恰当的设定、、修理或更换控制器4、柱塞杆折断更换柱塞杆5、泵头内有空气溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足补充流动相、更换入口滤头7、单向阀损坏更换单向阀8、漏液拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常，但没有压力显示：原因解决方法1、仪表损坏更换仪表2、压力传感器损坏更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高调整流速设定2、柱前筛板堵塞反冲色谱柱、更换筛板、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀使用恰当的流动相、冲洗柱塞杆。

4、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏清洗或更换进样阀6、柱温过低提高温度7、控制器失常修理或更换控制器8、保护柱阻塞清洗或更换保护柱9、在线过滤器阻塞清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低：原因解决方法1、流速设定过低调整流速2、系统漏液确定漏液位置并维修3、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱4、柱温过高降低温度5、控制器失常维修或更换控制器E、压力波动：原因解决方法1、泵中有气体溶剂脱气、从泵中除去气体2、单向阀损坏更换单向阀3、泵密封损坏更换泵密封4、脱气不充分重新过滤一遍、溶剂脱气5、系统漏液确定漏液位置并维修6、使用梯度洗脱由于流动相粘度的变化引起的压力波动二）漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。

但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。

如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。

A）接头处漏液原因解决方法1、接头松动拧紧2、接头磨损更换3、接头过紧拧松，再重新拧紧、更换4、接头被污染拆下清洗、更换5、部件不匹配使用同一品牌的配件B）泵漏液原因解决方法1、单向阀松动拧紧单向阀（不必拧的过紧）、更换单向阀。

HPLC常见问题HPLC常见问题和对策—对实验⼈员⼗分有⽤HPLC⾊谱常见问题1.⽤HPLC进⾏分析时保留时间有时发⽣漂移，有时发⽣快速变化，原因何在？如何解决？2.液相⾊谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？5.我最近更换了另⼀种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不重现，为什么？6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过⾼，请问为什么？7.⾊谱双峰产⽣的可能及判断和处理8.⾊谱柱中的流动相会排⼲吗？9.使⽤PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题？10.液相⾊谱梯度洗脱中柱温的影响有那些？11.为何基线会漂移12.规则的基线噪⾳是如何产⽣的13.不规则的基线噪⾳是如何产⽣的14.保留时间漂移的故障排除15.为何出现肩峰或分叉？16.为何出现⿁峰？17.为何出现峰拖尾？18.为何出现峰展宽？19.除了流速外，还有哪些因素能引起压⼒改变？20.什么是强溶剂、弱溶剂？21.怎样才会使峰位发⽣重排？22.除了在线脱⽓常⽤的实验室脱⽓⽅式还有哪些？23.评价⼀个⾊谱柱的最基本指标有那些？24.什么是时间常数？25.为什么在实验过程中有时会出现倒峰？26.为何会出现“胖”峰和平头峰？怎样避免？27.什么是次级保留效应？28.前延峰的发⽣及处理？29.峰变宽的原因？30.柱平衡慢的常见原因有哪些？31.⽤内标法实验时对内标物的要求有哪些？32.管⼦切割与安装注意事项？33.什么是HPLC的“⽆限直径效应”？34.如何评价⼀台检测器？35.如何简单判断⽐例阀是否内漏？1.⽤HPLC进⾏分析时保留时间有时发⽣漂移，有时发⽣快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：①温度控制不好，解决⽅法是采⽤恒温装置，保持柱温恒定②流动相发⽣变化，解决办法是防⽌流动相发⽣蒸发、反应等③柱⼦未平衡好，需对柱⼦进⾏更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发⽣变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定②泵中有⽓泡，可通过排⽓等操作将⽓泡赶出。

高效液相色谱常见问题与解决方法汇总
1压力异常
操作压力的变化往往是故障的征兆。

从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法。

A、没有压力显示，没有流动相流动
G、压力不断下降，但不回零
2 漏液
通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。

但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。

如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。

D、色谱柱漏液
3 液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。

其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。

对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

D、峰变形
L、基线漂移
4以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。

D、自动进样阀，其它问题
5由气味、景象和声音可以发现的问题，你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。

你最好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。

例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。

大部分的问题是可以通过眼睛看到。

6常见故障及日常维护
下表中列出了液相色谱常见的一些问题，右侧中则列出的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。

括号中的数字是建议进行维护的时间间隔。

用户手册则提供您更多的维护方法。

泵。