Dlk-1蛋白在结肠癌中的表达及其临床意义

·临床研究·2012年10月第9卷第29期中国医药导报CHINA MEDICAL HERALD[作者简介]胡钦勇(1974.3-)，博士，主治医师。

结肠癌是常见的恶性肿瘤，在美国，结肠癌居癌症死因第二位，仅次于肺癌。

与其他癌症一样，结肠癌的病因至今尚未明了，目前认为结肠癌的发生是机体内因（遗传易感性）和外因（饮食和环境因素）共同作用的结果。

Dlk-1蛋白（Delta-like 1protein ）也被称为Pref-1、FA1、pG2、ZOG 蛋白，是一种跨膜和分泌性蛋白，是表皮生长因子（epidermal growth fac -tor ，EGF ）家族中的一员[1]。

由于EGF 家族蛋白在人体内有很多受体和配体，在很多器官的发展过程中调节细胞命运和分化，Dlk-1可能也在细胞发展和分化中起着重要作用。

而且已有文献报道，Dlk-1在成神经细胞瘤、神经胶质瘤、小细胞肺癌、急性白血病等很多肿瘤中高表达[2]。

这些结果提示Dlk-1可能在肿瘤形成中发挥着重要作用。

但是对Dlk-1作为相关因素进行结肠癌的研究国内外报道较少。

因此，笔者应用SP 免疫组织化学法研究Dlk-1蛋白在结肠癌组织和癌旁组织中的表达情况，初步探讨Dlk-1蛋白表达与结肠癌及其分级、分期的相关性，为临床结肠癌的治疗和预后提供新的思路。

1材料与方法1.1材料收集2007年7月~2010年7月我院行结肠癌根治术的结肠癌标本53例，其中，男38例，女15例；年龄40~81岁，平均63岁。

全部病例均由组织学病理确诊，术前均未行放疗及化疗。

原发灶组织学分级：高度分化20例，中度分化9例，低分化24例。

肿瘤分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期18例，Ⅲ期29例。

转移情况：淋巴结转移30例，无淋巴结转移23例。

选择其中19例距肿瘤边缘>5cm 、病理组织检查为正常的癌旁组织为对照组。

1.2方法石蜡切片采用柠檬酸抗漂修复缓冲液高温抗原修复法，应用SP 免疫组织化学法染色，严格按照试剂盒上的步骤进行，同时用已知阳性片比照。

采取PBS 液代替一抗作空白对照，并与癌旁组织进行对照。

1.3结果判定Dlk-1蛋白阳性定位于细胞质或细胞膜，呈明显棕黄色反应即为阳性。

每个标本切片选取5个高倍视野（400倍），计算出各个视野中阳性细胞数的平均百分比数作为该切片的阳性细胞百分比进行计分，计算阳性细胞平均百分比。

染色评判标准按阳性细胞百分比将染色结果分为3级：阳性细胞百分比小于10％为阴性(-)，10％~50％为阳性(+)，>50％为强阳性(++)，阳性和强阳性标本全部统计为阳性组进行统计学处理。

1.4统计学方法采用SPSS 12.0软件进行统计分析，组间计数资料进行用χ2检验，以P <0.05为差异有统计学意义。

2结果2.1免疫组化染色结果Dlk-1蛋白在结肠癌组织标本中表现为细胞膜或细胞质内深浅不一、粗细不等的颗粒状、棕褐色染色，细胞核未见明显着色，阳性细胞多呈弥漫性或局灶性分布。

2.2Dlk-1蛋白在结肠癌组织和正常组织中的表达情况Dlk-1蛋白在19例癌旁正常组织中均无表达；在53例Ｄｌｋ－１蛋白在结肠癌中的表达及其临床意义胡钦勇武汉大学人民医院肿瘤科，湖北武汉430063[摘要]目的探讨Dlk-1蛋白在结肠癌中的表达及临床意义。

方法收集我院53例结肠癌术后病理切片，应用免疫组化的方法检测Dlk-1蛋白在结肠癌组织及19例癌旁正常组织中的表达情况。

结果Dlk-1蛋白在结肠癌组的表达（54.72%）与癌旁正常组织中的表达（0）差异有高度统计学意义（P <0.01）。

结肠癌中Dlk-1蛋白的阳性表达随着肿瘤组织分化程度的降低而明显升高，随着临床分期的增高而升高。

结论Dlk-1的表达与结肠癌的发生、发展有密切相关，将为临床结肠癌的治疗及预后判断提供新的思路。

[关键词]结肠癌；Dlk-1蛋白；免疫组织化学；基因表达[中图分类号]R735.35[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2012）10（b ）-0046-03Expression of Dlk-1in colorectal carcinoma and its clinical significanceHU QinyonDepartment of Oncology,the People's Hospital of Wuhan University,Hubei Province,Wuhan 430063,China[Abstract]Objective To explore the expression of Dlk-1in colorectal carcinoma and its clinical significance.Methods The expression of Dlk-1protein was detected in 53colorectal carcinoma samples and 19normal mucosas by immunohisto -chemistry SP method.The relationship between them was analyzed.Results The positive expression of Dlk-1protein was 54.72%.But Dlk-1protein was 0in normal colorectal tissues.The difference between two groups was statistical signifi -cance (P <0.05).Dlk-1protein expression of colon cancer with the degree of differentiation of tumor tissue was signifi -cantly higher with higher clinical stage and increased.Conclusion The expression of Dlk-1protein was significantly relat -ed with colorectal carcinoma,which could supply new ideas to the treatment and prognosis of colorectal carcinoma.[Key words]Colorectal carcinoma;Dlk-1protein;Immunohistochemistry;Gene expression462012年10月第9卷第29期·临床研究·CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报结肠癌组织中，有29例（54.72％）Dlk-1蛋白阳性表达。

经列联表χ2检验分析得出：结肠癌组织与癌旁正常组织之间的Dlk-1蛋白表达差异有统计学意义（P <0.05）。

2.3Dlk-1蛋白表达与结肠癌病理分级及分期的关系Dlk-1蛋白在结肠癌组织学分级中，高分化、中分化、低分化级中的阳性表达率分别为35.00％、44.44％、70.83％，随着分化程度的降低，其阳性表达率也明显升高；Dlk-1蛋白在结肠癌TNM 临床分期中，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中的阳性表达率分别为33.33％、44.44％、62.07％，其阳性率随着临床分期的增高而升高。

表1结肠癌Dlk-1蛋白表达与常见病理学参数之间的关系（例）3讨论现在很多文献已证实肿瘤实际上是一群异质细胞群体，只有一小部分细胞具有自我更新的能力。

肿瘤干细胞或起始细胞最先在血液恶性肿瘤中发现，后来在乳腺、大脑、前列腺、肝脏、肺、黑色素瘤、胰腺和大肠肿瘤等多种实质肿瘤中也能检测到肿瘤干细胞[3-5]。

而且大量研究发现干细胞有特定的分子标记，比如CD133在包括结肠癌等多种肿瘤干细胞中表达，但是正常组织干细胞和肿瘤干细胞的关系在多种肿瘤中都不是很清楚[6-7]。

Dlk-1蛋白是一种1型跨膜蛋白，包含6个EGF 样序列胞外结构域，一个单一的跨膜结构域和一小段胞内尾巴。

其细胞外结构域与Delta （果蝇黑素原配体）具有同源性，但是缺少重要的DSL 结合结构[8]。

由于其整个结构和氨基酸的同源性，Dlk-1被归于同型EGF 样家族蛋白，主要通过细胞间的链接调节细胞生长和分化。

Dlk-1在多种胚胎组织中高表达，具有保持胚胎细胞处于未分化状态功能。

在胎儿发育过程中，Dlk-1对肝细胞、骨骼细胞、神经元、胰腺细胞和肌肉细胞等的分化有重要作用[9-11]。

而且有证据表明Dlk-1是中胚层分化的抑制剂[12]。

通过Dlk-1基因敲除小鼠研究发现小鼠出现生长迟缓、骨骼畸形、脊柱侧凸、张力减退和肥胖症等表现[13]。

实验证实Dlk-1在维持脐带血中无限制性干细胞的不分化和增殖状态中发挥着关键作用，决定着细胞的命运[14]。

由此可见，Dlk-1在胚胎发育过程发挥着重要作用。

成年后，Dlk-1在机体大多数细胞中表达下降。

但是现有文献报道Dlk-1在成年人前脂肪细胞、前B 细胞、胰腺β细胞、胸腺细胞和肾上腺细胞中表达，并在脂肪形成、血细胞生成、胰腺、肾上腺的生长中发挥重要作用[15-16]。

而且在很多肿瘤组织中也能检测到Dlk-1的表达。

有学者利用氧化偶氮甲烷诱导敏感型A/J 小鼠远端结肠癌模型，通过基因芯片技术发现Dlk-1表达明显增高，在多种结肠癌细胞系中也能检测Dlk-1的表达[17]。

本研究通过免疫组织化学的方法检测Dlk-1蛋白在结肠癌组织的表达显著高于癌旁组织，而且与肿瘤的分级、分期具有相关性。

因此，笔者初步认为Dlk-1在结肠癌的形成中发挥着重要作用。

那么Dlk-1在结肠癌的形成中发挥着怎样的作用呢，推测可能是Dlk-1抑制结肠细胞分化，并促进其生长。

这与之前的很多结论是相一致的，大量文献证实Dlk-1控制前脂肪细胞的分化，高表达Dlk-1的前脂肪细胞不能分化为脂肪细胞，抑制脂肪的形成，而且有研究发现胰腺β细胞增殖到最大时，Dlk-1表达量也增高。

另外Dlk-1参与血细胞生成，对肿瘤的发展有利。

研究证实Dlk-1在肝基底细胞的表达较高，参与肝细胞的增殖和分化，有助于血细胞的生成[18]。

而且在妊娠中期胎儿血细胞生成最活跃，Dlk-1表达也很高，说明Dlk-1能促进血细胞的生成。

但是Dlk-1介导的信号转导途径尚未完全了解，推测其对细胞分化的抑制作用是其EGF 样结构域与未鉴别出的受体结合，通过旁分泌或邻分泌机制发挥作用的。

综上所述，Dlk-1与结肠癌的发生、发展密切相关，其表达情况是结肠癌预后的重要标志，而对骨肉瘤预后因素的研究可以较好地指导临床治疗及预后判断。