最新免疫测定室内质控血清的应用

体外免疫分析室内质量控制一、质量控制的目的质量控制方法是用于监测检验方法的分析性能，警告检验人员存在的问题。

质量控制一般通过检测质控品来实行。

根据统计量判断检验结果的质量，是否需要做系统的纠正，患者检验结果是否可接受。

室内质量控制主要是控制每次检测的重复性，即精密度；通过对常规工作进行质量控制，监测测定方法或检测系统的稳定性，按规定的指标对每次测定的质量做出评估，并决定测定结果的取舍，以保证标记免疫分析的精密度和可比性，及时发现和克服造成误差的原因，提高检测的质量。

为此，必须建立检测项目操作规程，完善标本采集、运输、接受与保存过程，严格检测报告核对签发制度，加强仪器与试剂的管理，严格工作分区、制订工作制度，对相关人员制订业务学习与培训计划，完善质量管理记录。

二、质量控制的计划1.规定质量要求根据允许总误差规定质量要求。

允许误差包括随机误差和系统误差，即方法的不精密度和偏倚。

超过此限说明检验质量不可接受。

2.确定方法性能确定分析方法的关键指标：不精密度和偏倚。

除了这两者外，还需了解方法的不稳定性，如：分析误差预期的类型、大小和产生的频率。

对质控品进行重复检测可求出不精密度。

可以根据美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）EP5-A求出不精密度。

在实际工作中，可以测定值与室间质评/能力验证（PT）的均值作为偏倚的估计。

3.制定质量控制策略应确定：检测不同浓度质控品的种类及每种的次数；质控品放置的位置；选择的质控规则。

4.预测质量控制的性能质量控制性能的指标是指误差检出概率和假失控概率。

可根据功效函数图预测不同质量控制规则在不同质控测定结果个数时的误差检出概率和假失控概率。

5.设定质量控制的性能根据预测出的不同质量控制规则的多种特性，结合临床要求和检验工作实际情况，可选定出合适的误差检出概率和假失控概率。

6.选择合适的质量控制规则基于功能函数图、临界误差图和操作过程规范图选择适当质量控制规则、质控品的测定数。

ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与应用分析目的探讨分析ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与临床应用。

方法应用ELISA对我血库收集的血液标本32000份进行HIV抗体检测；同时选择正常人群血清与试剂盒内HIV阳性血清混合稀释，混合恰当比例，冷藏保存使用；同时将自制的质控血清保存1～12个月，对其均匀性、精确性及稳定性进行评价。

结果ELISA法检测结果显示阳性115例，阳性率为0.36%，实际上HIV 抗体为阳性共120例，漏诊率为0.016%；研究结果显示正常人群的血清与试剂盒内HIV阳性血清以10：1的比例进行混合最为恰当；对自制的质控血清为期1～12个月的观察，发现其均匀性、S/CO值、准确性12个月的差异不显著（P＜0.05），无统计学意义。

结论ELISA在HIV抗体的检测中具有较高的准确度，且检测结果能够在短时间内反映，值得临床推广应用；同时发现自制质控血清经济方便，且具有稳定性高的优点，具有较大的应用前景。

标签：ELISA；HIV抗体；质控血清HIV指人类免疫缺陷病毒，HIV病毒对人体的免疫系统造成破坏进而削弱机体的免疫抵抗力，造成健康人群患上获得性免疫缺陷综合征，感染HIV的途径主要包括血液传染、性交、母婴传播。

现阶段，临床上对于艾滋病的治疗尚无显著进展，患者大都以死亡告终，其对人类的身体健康和生命安全产生极大的威脅，引起了国内外医学的高度重视[1]。

目前，艾滋病主要以早发现及早控制为主，ELISA法在HIV抗体的检测中作用显著，然而有诸多因素会导致其检测结果出现偏差，故进行室内控制十分有必要，本文旨在探讨分析ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与临床应用，具体信息如下。

1 资料与方法1.1一般资料由上海纪宁实业有限公司提供的人抗人类免疫缺陷病毒抗体（HIV）酶联免疫试剂盒；由北京万泰生物药业有限公司提供的HIV抗体试剂盒，批准文号：国药准字S2*******；由卫生部临检中心提供的临界值质控血清，批号为NCCL 070049；由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供的酶标仪。

目的：室内质量控制〔IQC〕是由实验室的工作人员采用一系列的方法，连续的评价实验室工作的可靠程度，确立报告能否发出。

旨在检测、控制本室常规工作的精密度，并检测其准确度的改变，提高本室常规工作中批间、批内标本检测的一致性。

2.0分析前质控:人员培训: 实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：检验项目的基本原理〔ELISA原理〕；临床意义；熟悉检测技巧，了解易出过失的环节及难点；熟悉检测试剂性能〔包括试剂盒组成，包被片段及其组成〕；熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。

某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。

2.2 室内质控血清：采用卫生部或省临床检验中心制备的质控血清卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品。

2.4试剂盒评价:试剂评价需要有权威的血清考核盘〔Panel〕进行检测，价格昂贵，操作繁琐，一般实验室不易开展，可以通过以下信息，了解试剂质量。

根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；2.4.2通过询问试剂包被物的组成，如原料来源〔基因工程或合成多肽〕，片段的组合〔按比例混合或化学合成〕，片段的长短等判断试剂的优劣；参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩。

根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。

2.5仪器质控:移液器：ELISA加样量小〔5-100ｕl〕，其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内；水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中〔或温箱内〕实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul ，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。

怎样做好免疫室项目室内质控及防范措施一、免疫室项目室内质量控制的内容1、定性试验所有的ELISA法，包括HCV、HIV、HA V、TP、乙肝五项等。

免疫定性试验质量控制ELISA定性试验的临床意义在于是否检出病原体，与检出量无关，因此QC 要保证试验的灵敏度和特异性。

我们使用临界值血清界定法：将试剂盒所设的阴阳性对照作为内对照指示反应；另设临界值质控血清，与标本同时检测。

临界值S/C.O应该为2～4之间，正常人血清OD值在0.05~0.07 之间。

临界值质控血清可以作为试剂盒中的阳性对照品和阴性对照品以外的第三个对照品，它可以灵敏地反映出试剂盒的检出水平，确保弱阳性反应的标本不漏检。

一般最常用的是Levey-Jennings质控图，以最初20个数据和3-5个月在控数据汇集的所有数值作为质控品有效期内的常用靶值，并以此作为以后室内质控图的平均数。

在求出均值及标准差后确定控制限，±3S作为上下控制限。

2、定量试验化学发光相关项目(AFP、CEA、CA125、CA199、CA153等)免疫定量试验质量控制包括激素类，糖类抗原等，这些物质在体内有一定的量（正常范围），超出这个量才呈病理情况，故需定量测定。

二、质量控制基本概念质量控制是监视全过程，排除误差，防止变化，维持标准化现状的一个管理过程。

这一过程是通过一个反馈环路进行的。

室内质控所用的质控血清是已知的有靶值的血清，在每次的常规检验中加入一份或数份，通过所得结果来了解本次检验的情况。

质控血清检验的结果如能控制其误差在一定范围内，就说明该检验没有发生不允许的误差。

如果出现超过允许误差范围的异常结果，提示该检验不合格，应寻找原因，纠正后，重检待测标本。

因此质控血清在质控工作中起重要作用。

质量控制主要采用质控图进行。

质控图是把某一检验的性能数据与所计算出来的预期的"控制限"进行比较的图。

这种性能数据是在按规程正常进行时，按时间顺序而抽选出来的，其目的是检测检验过程中变异的"可追查"性原因。

生化免疫室室内质控管理程序1.目的检测、控制本试验室测定工作的精密度,并检测其准确度的改变,提高常规测定工作的批间、批内标本检测结果的一致性。

室内质控品每批标本检测应与标本检测同时进行。

2.适用范围生化免疫实验室3.术语室内质控(IQC):在实验室内用于满足质量要求的作业技术和活动。

4.职责4.1室组长检查和督促本室各工作站按其室内质控(IQC)要求进行日常监测工作,保证检测质量。

4.2工作站负责人负责各站室内质控程序的制定,设计本实验的室内质控方案,建立室内质控规则,制定失控处理原则及失控原因分析步骤,操作人员的培训,并检查本实验室人员是否遵守室内质控程序做好室内质控工作。

4.3检测技术人员必须按照本实验室的室内质控结果的检测、记录工作,发现质控数据违背质控规则,或质控结果落在可接受以外,应填写失控报告单,上交组长。

组长查明失控原因,确定是真失控或假失控,以便决定是否对失控项目的标本进行复测,操作人员不能擅自处理失控结果和发出失控结果报告单,处理情况和结果需由组长、操作人员共同签名存档。

4.4质量监督员负责对IQC过程进行监控。

5.程序5.1定量检测方法室内质量控制的要求:生化免疫实验室贝克曼DXC600全自动生化分析仪、西门子ADVIA Centaur CP 全自动化学发光免疫分析仪的常规检验项目按(见《定量检测室内质控项目及其总允许误差(Tea)表》)的要求开展室内质控。

5.1.1质控品的选择5.1.1.1质控品的来源:生化免疫实验室贝克曼DXC600全自动生化分析仪、西门子ADVIA Centaur CP 全自动化学发光免疫分析仪所做项目使用贝克曼公司及西门子公司生产的质控血清——质控品。

5.1.1.2质控品浓度:使用2个不同浓度及正常和病理两种浓度水平的定制质控血清。

5.1.2质控品的使用和保存购买的冻干定制质控血清到科室后必须有1年到1年半以上的有效期,原包装质控血清的要求储存,使用时按要求加入稀释液或蒸馏水复溶,复溶后的质控血清用1ml带Ependoff管分装,分装后放臵在-20℃冰箱保存(稳定3个月),每天取出1-2只,进行测定,每瓶质控血清可以使用1-2周。

定性免疫测定中质控物的应用张 瑞卫生部临床检验中心National Center for Clinical Laboratories定性免疫测定中的质控物标准 室间质 阴阳性 对照 室内质 控品血清盘/样本盘 阳性参考品National Center for Clinical Laboratories物质评样本阳性对照阴性对照室内质控1室内质控2National Center for Clinical Laboratories阴阳性对照判断本次实验的有效性。

National Center for Clinical Laboratories例1：问题：ELISA实验，阴性对照OD值为0.157、 0.191。

试剂盒说明书要求阴性对照OD值 <0.100。

阳性对照正常，室内质控结果未失控。

整板的 结果，弱阳性结果增多，有阴性结果，但多处 于临界值。

实验过程全部按照SOP操作。

原因查找：洗液有细菌污染。

处理：清洁洗液瓶，更换新配制的洗 液。

National Center for Clinical Laboratories室内质控失控分析总体分 析：样本阴阳性结 果；实验过程； 检查仪器设备 等。

重测同一 质控品重测新的 质控品仪器维 护，重新 校准试剂批与 批差异？ 仪器问 题？National Center for Clinical Laboratories例2：问题：ELISA实验，室内质控做了两孔，其中 一孔未失控，另一孔结果略偏高。

阳性对照、阴性对照均没有问题。

检查整板的 结果，与失控的室内质控同一行的样本结果均 为阳性（强阳性或弱阳性）。

实验过程全部按 照SOP操作。

原因查找：洗板机吸液针有渗漏。

处理：更换新的分配头。

National Center for Clinical Laboratories例2：National Center for Clinical Laboratories例3：问题：ELISA实验，室内质控做了两孔，其中 一孔未失控，另一孔结果略偏高。

室内质量控制SOP文件冀中能源峰峰集团总医院检验科免疫组一、室内质量控制原则3二、室内质控品3三、室内质控品的正确使用和保存4四、室内质控的实际操作 4所有相关人员上岗前或文件有变动时均应及时阅读此文件并签字。

一、室内质量控制原则1.免疫实验室开展的所有检测项目均要求进行室内质量控制。

2.室内质控应在日常常规工作中进行，以监测方法或者检测系统的稳定性，质控品的测定要与日常标本的检测一致。

3.质控过程要遵守制造商对质控的要求和说明。

测定过程遵循各检测项目的SOP。

4.每个工作日做一次室内质控，每次至少做两个不同浓度水平的质控品。

室内质控图中心线（均值）和控制限（标准差）的设定见下文详细说明。

5.每天检查室内质控结果，依据13s，12s，22s，R4s规则(见下文详细说明)结合质控图分析本次测定结果是否在控。

如违反规则，按失控程序处理(详见下文)并填写失控记录单。

6.每月末打印当月质控图，并对当月质控图进行分析，填写室内质控月报表。

如有无违背其它质控规则，如10x，则分析存在系统误差的可能原因。

二、室内质控品1.室内质控测定项目包括： HbsAg，抗-HCV，抗-HIV。

2.室内质控品特性及说明名称：科美质控品生产厂家：北京科美东雅生物技术有限公司，康彻思坦生物；浓度水平：低浓度；成分：用人血清制备的，采用乙二醇将其稳定。

乙二醇有三重稳定效应。

高渗透性使细菌很难生长，抗氧化性保证组份不易被氧化。

此外，乙二醇会降低凝固点，使得该液在通常的凝固点（-15℃～-20℃）依然保持液态。

液态的质控液可以避免因灌装，干燥，和重新对冻干进行配制而造成的差错。

稳定性: 当密封贮存于-15℃～-20℃时，使用有效期同试剂瓶上标签所标注的时间。

试剂开启后，贮存于2℃～8℃，可保存5天（在有效期内）。

贮存时应避光、隔热、隔绝空气。

溯源性：该质控品中所有分析物可溯源至相应的校准物质。

溯源程序基于prEN ISO 17511。

免疫室室内质控规则室内质控是实验室内部对所有影响检测质量的各个环节进行系统控制，目的是控制本实验室常规工作的精密度，提高常规工作前后的一致性。

室内质控品的选择质控品应当选用与人血清基质相同、分析物含量均一、无传染危险性、稳定性好、瓶间差小、有较可靠的靶值或预期结果等。

我室目前常规开展了TSH、TT3、TT4、FT3、FT4、AFP、CEA、TPSA等项目的每日室内质控工作。

一、质控品的保存和使用购买回质控品后，严格按照要求及时保存在-20℃以下，并做好标识。

使用时应根据实验用量，有规律、有计划地对其融解，不要一次融解过多，长时间使用。

冰冻状态融化使用时，应轻轻摇匀，切忌剧烈振摇。

未用完部分可在4℃冰箱内保存，避免反复冻融。

另外，在实验过程中应当尽量减少质控血清在室温的放置时间，加样完毕后及时收回放进冰箱。

只有这样才能保证质控血清内各成分相对稳定，从而使监测实验结果的精确性得到保证。

二、均值和质控限的确定在开始室内质控时，首先要确定质控图的均值和质控限，将质控品应与常规标本一起测定。

根据20次质控结果对数据进行离群值检验(剔除超过3s外的数据)，计算出平均数和标准差，作为暂定均值和暂定标准差，以此暂定值作为下一个月室内质控图的均值和标准差进行室内质控。

一个月结束后，将该月的在控结果与前20个质控测定结果汇集在一起，计算累积平均数和累积标准差（第一个月），以此累积平均数和标准差作为下一个月质控图的均值和标准差。

重复上述操作过程，连续三至五个月。

以最初20个数据和三至五个月在控数据汇集的所有数据计算的累积平均数和标准差作为质控品有效期内的常规均值和标准差，并以此作为以后室内质控图的均值和标准差。

三、室内质控图的绘制我室主要采用Levey-Jennings质控图。

四、质控规则的选择1.1_2s：1个测定值超过X士2s质控限，这是L-J质控图的警告限；2.1_3s:1个质控点落在士3s之外，这是L-J质控图的失控限；3.2_2s:连续两个点超过X+2s或X-2s，或同一天不同水平同时超过士2s；4.R4s：连续2个质控点相差超出4s范围；5.41s:连续4个质控点落在同一侧士1s之外；6.10x靶：连续10个质控点落在均值之一侧；7.7t：连续7个质控点呈连续上升或下降，或周期性波动变化。