His_FemA融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化李昂;谢红帼;梁平;朱春晖;石建峰;饶国洲;苟建重【摘要】目的克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因,构建原核表达载体,诱导其在大肠杆菌中融合表达,并鉴定、纯化其表达产物.方法克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因,构建表达载体pET15b-FimA,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLyS感受态细胞;异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,以抗6×His Tag单克隆抗体为一抗,Western blot鉴定、Co2+柱亲和层析纯化融合蛋白.结果克隆的FimA基因序列及插入表达载体中的FimA序列均与GenBank数据库中的序列呈现100%同源性;IPTG诱导后Western blot鉴定4.1×104处有目的蛋白表达;Co2+亲和层析法获得纯化的高浓度FimA蛋白.结论本实验成功构建了牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因的原核表达载体pET15b-FimA,并在大肠杆菌中获得成功表达和纯化,为进一步制备牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白单克隆抗体和研制开发预防牙周炎的亚单位蛋白疫苗奠定了实验基础.【期刊名称】《华西口腔医学杂志》【年(卷),期】2010(028)003【总页数】5页(P241-245)【关键词】牙龈卟啉单胞菌;菌毛蛋白A;融合表达【作者】李昂;谢红帼;梁平;朱春晖;石建峰;饶国洲;苟建重【作者单位】西安交通大学附属口腔医院,口腔医学研究中心,陕西,西安,710004;西安交通大学附属口腔医院,牙周科,陕西,西安,710004;西安交通大学附属口腔医院,牙周科,陕西,西安,710004;西安交通大学附属口腔医院,牙周科,陕西,西安,710004;西安交通大学附属口腔医院,口腔医学研究中心,陕西,西安,710004;西安交通大学附属口腔医院,口腔医学研究中心,陕西,西安,710004;西安交通大学附属口腔医院,牙周科,陕西,西安,710004【正文语种】中文【中图分类】R786牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.gingivalis）是目前公认的一种牙周致病菌，其表面含有大量毒性因子，如蛋白酶、菌毛、脂多糖、血凝素等[1]。

Exendin-4HSA长效融合蛋白的构建表达与活性研
究的开题报告
题目：Exendin-4HSA长效融合蛋白的构建表达与活性研究
研究背景和意义：
龙脑壳素（Exendin-4）是一种由蜥蜴产生的多肽，具有类似胰岛素的药理作用，在治疗2型糖尿病和肥胖症等疾病方面具有潜在的临床应用价值。

然而，Exendin-4的生物活性较短，需要多次注射才能维持其疗效。

因此，长效化Exendin-4的设计制备对于其临床应用具有重要意义。

人白蛋白（HSA）具有良好的稳定性和生物相容性，是作为长效药物运载体的理想载体之一。

因此，将Exendin-4与HSA融合可以延长其半衰期，提高药物的生物利用度和治疗效果。

研究内容：
本研究将利用基因重组技术构建Exendin-4HSA长效融合蛋白，包括以下内容：
1. 设计合成Exendin-4HSA长性融合蛋白的基因序列，并插入到表达载体中；
2. 将表达载体转染至哺乳动物细胞中，利用CHO细胞进行重组蛋白表达；
3. 利用纯化技术对重组蛋白进行纯化，并进行纯化蛋白的鉴定和检测；
4. 对Exendin-4HSA长效融合蛋白进行体外生物活性实验，包括对α-Glucosidase抑制和GLP-1R激活等实验的测定，分析其生物活性和稳定性。

研究意义：
通过本研究，将获得具有长效作用的Exendin-4HSA长效融合蛋白，并对其进行生物活性实验，进一步探究其在治疗2型糖尿病和肥胖症等相关疾病中的应用前景和潜力。

2014年牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白fimA基因在大肠杆菌中的融合表达和理学其它相关论文-牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白 fimA 基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化(三) 本实验表达的 His-FimA 融合蛋白主要用于后续实验获得免疫血清和多克隆抗体，因此需求量较大，而且不用考虑靶蛋白是否具有活性。

本实验所表达的His-FimA 融合蛋白主要位于包涵体中，这种以包涵体形式表达的蛋白很稳定，不易被降解。

这样在下一步实验纯化 FimA 蛋白时，可以在变性条件(使用变性剂 8M 尿素或者 6M 的胍盐酸)下溶解包涵体，以便于使用 Co2柱亲和层析得到纯化的靶蛋白。

本实验所使用的大肠杆菌 BL21DE3pLysS 所带 pLysS 具有氯霉素抗性。

在将重组质粒和空质粒转化入宿主菌时，不需要使用 IPTG 进行蓝白筛选，因为pET-15b Vector 含有氨苄青霉素抗性基因，转化了重组质粒和空质粒的BL21DE3pLysS 同时具有氯霉素和氨苄青霉素抗性，而未转化的菌珠只有氯霉素抗性，这样就可以使用氨苄青霉素来对转化菌进行筛选。

本实验用本课题组前期构建的 fimA 基因的原核表达质粒 pET-15b-fimA，在大肠杆菌 BL21DE3pLysS 中诱导表达后，fimA 基因得到正确表达。

4 实验二 FimA 蛋白的纯化与鉴定 4.1 实验携带有 pET-15b Vector 和 pET-15b-fimA 的大肠杆菌材料与仪器 4.1.1 菌珠BL21DE3pLysS:实验一获得。

4.1.2 主要试剂 1)BCA 法蛋白定量试剂盒:碧云天公司 2)TALON 纯化试剂盒:Clontech LaboratoriesIncUSA 3)其它:同实验一4.1.3 实验仪器 1)宝特 ELX-800 酶标仪:宝特仪器有限公司 2)其它:同实验一4.2 实验方法 4.2.1 样品制备按照 TALON 纯化试剂盒操作说明书制备样品，步)在转化了质粒 pET-15b-fimA 的 LB 固体培养基上，用接种环挑取阳骤如下: 1性克隆菌落，接种于 5 ml Amp100 μg/ml的 LB 培养液中，37?振摇过夜。

分析检测生姜蛋白酶基因的克隆及在原核细胞中的表达卢 瑛（莱芜职业技术学院，山东莱芜 271100）摘 要：提取莱芜生姜总RNA，采用RT-PCR技术扩增出生姜蛋白酶（Ginger protease）基因GP2和GP3，经序列比对，发现莱芜生姜蛋白酶基因GP2在945位的碱基与Gene bank中生姜蛋白酶的序列GP2b（GI:57118006）有差异，GP3在451、700和804这3个位置的碱基与GP3b（GI:57118011）有差异，在翻译后的氨基酸也不同，表明了不同生姜品种生姜蛋白酶基因的多样性。

将克隆的GP2片段GPII重组到带有His-tag的原核表达载体pET30a（+）中，构建重组表达载体pET-GPII。

将重组pET-GPII转化到大肠杆菌BL21（DE3）中构建工程菌株，工程菌株用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，在诱导6 h，IPTG浓度为0.1 mmol/L时，重组GPII表达量最高。

SDS-PAGE凝胶电泳分析结果表明蛋白大小约为21 kDa。

该实验结果表明生姜蛋白酶能够在原核表达系统进行大量表达，为生姜蛋白酶工程化生产奠定了基础。

关键词：莱芜生姜；生姜蛋白酶；克隆；原核细胞；表达生姜蛋白酶（Ginger protease/Zingibain,EC 3.4.22.67）是存在于生姜块状根茎中的一种巯基蛋白酶，有两种GP-I和GP-II（GPI和GPII分别与GenBank中GP3和GP2同源性较高），均含有221个氨基酸，含有6个Cys形成3个二硫键为糖蛋白，具有蛋白水解活性。

生姜蛋白酶能够水解胶原蛋白，可用于肉类嫩化、酒类澄清，乳制品凝固等［1］，以姜汁为添加剂开发的具有新型保健功能的凝固型酸奶，在广东地区颇受欢迎，因此该酶具有良好的工业化应用前景［2］。

生姜蛋白酶的分离纯化工艺操作复杂，而且生姜蛋白酶的含量在不同生姜品种、不同栽培地区及不同气候条件下差异非常大，甚至同一品种的干姜与生姜之间的含量也不相同，导致生姜蛋白酶的提取率不稳定［3］。

融合His标签的HCV包膜糖蛋白E2的真核表达及意义杜德伟;贾战生;秦鸿雁;孙强;刘秋平;聂青和;周永兴;韩骅【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2004(29)10【摘要】目的构建HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合的真核表达载体并在CHO细胞中表达,为研究HCV包膜糖蛋白的功能奠定基础.方法利用PCR技术从HCV基因组序列中扩增出编码HCV包膜糖蛋白E2的基因,将其插入原核表达载体pET28(a)载体中,构建pET28(a)-HCVE2,从pET28(a)-HCVE2上获得His-HCVE2融合基因,插入pcDNA3.1,构建表达HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合蛋白的真核表达载体pcDNA3.1-His-E2.用脂质体介导法将pcDNA3.1-His-E2转染CHO 细胞,通过间接免疫荧光、Western blot检测融合蛋白在CHO细胞内的表达.结果转染HCV E2与His融合基因的真核表达载体的CHO细胞内有融合蛋白的表达.结论与His标签融合的HCV包膜糖蛋白E2能够在CHO细胞内表达.【总页数】3页(P904-906)【作者】杜德伟;贾战生;秦鸿雁;孙强;刘秋平;聂青和;周永兴;韩骅【作者单位】710038,西安,第四军医大学唐都医院;710038,西安,第四军医大学唐都医院;第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室;第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室;710038,西安,第四军医大学唐都医院;710038,西安,第四军医大学唐都医院;710038,西安,第四军医大学唐都医院;第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室【正文语种】中文【中图分类】R512.6【相关文献】1.HCV E2和HBV preS融合蛋白真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达[J], 谢尧;陶其敏2.HCV包膜糖蛋白基因真核表达载体的构建及其在HepG2中的瞬时表达 [J], 张建敏;姚敏;吕欣;黄小军;杨敬;雷迎峰;兰海云;汪爱勤;尹文3.猪瘟病毒E2基因在真核细胞中表达及抗E2蛋白单克隆抗体的制备 [J], 许信刚;胡建和;张彦明;张海棠;陈永耀4.逆转录病毒载体介导的猪瘟病毒E2基因在真核细胞中表达及动物免疫试验初报[J], 许信刚;胡建和;张彦明5.HCV包膜糖蛋白E2基因的克隆、蛋白表达及纯化 [J], 杜德伟;贾战生;秦鸿雁;刘秋平;周永兴;韩骅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HSA-TP5融合基因表达载体的构建及其真核表达田丹;颜伟群;孙新;安晓婷;张立岩;刘杨;佟海滨;李坦;申野;满枋霖【摘要】目的:构建人血清白蛋白(HSA)-胸腺五肽(TP5)融合蛋白表达载体,并在毕赤酵母中表达,阐明其生物学活性.方法:利用基因重组技术构建HSA-TP5融合基因,并转染至毕赤酵母中从而构建其真核表达体系,通过琼脂糖凝胶电泳分离及试剂盒纯化获得PPICZαC-HSA-TP5真核重组表达质粒;采用两步发酵法对HSA-TP5基因工程菌进行高密度发酵,对发酵液上清蛋白沉淀浓缩,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法、阳离子交换层析及疏水层析等方法分离纯化蛋白;采用MTT法检测该融合蛋白促淋巴细胞增殖活性.结果:PCR法获得HSA目的基因片段长度为1 845 bp.酶切鉴定融合质粒HSA-TP5-pPICZαC得到片段长度为707 bp.测序分析,目的基因HSA和TP5序列与GenBank公布的基因序列完全一致,并正向连接融合.PCR法鉴定PPICZαC-HSA-TP5真核重组质粒与酵母基因组DNA整合,与对照组比较,转化组出现基因片段长度为1 860 bp.SDS-PAGE分析,在甲醇诱导后72 h内,随着诱导时间延长,HSA-TP5融合蛋白表达量逐步升高.利用阳离子交换层析及AKTA多功能蛋白纯化系统纯化得到HSA-TP5融合蛋白.MTT法检测,HSA-TP5融合蛋白与TP5蛋白具有一致的促淋巴细胞增殖活性.结论:通过构建HSA-TP5毕赤酵母真核表达体系可获得HSA-TP5融合蛋白并具有生物学活性.%Objective:To construct the expression vector of the fusion protein of human serum albumin (HSA) and thymopentin (TP5) and to express it in Pichia pastoris,and to elucidate the biological activity of fusionprotein.Methods:The HSA-TP5 fusion gene was constructed by gene recombination and transfected into Pichia pastoris to construct the eukaryotic expression system of HSA-TP5.The recombinant eukaryoticexpression plasm id of PPICZα-HSA-TP5 was obtained by agarose gel electrophoresis and purification reagent.The two step fermentation method was used to ferment gene engineering bacteria of HSA-TP5 in high density,and the fermentation supernatant protein was precipitated and concentrated;the purified fusion protein was obtained by cation exchange chromatography and hydrophobic chromatography and analyzed by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis.The effect of the fusion protein on the proliferation of lymphocytes was detected by MTT assay.Results:The HSA target gene fragment with length of 1 845 bp was achieved by PCR method.The HSA-TP5-pPICZαC fusion plasmid was identified by restriction endonuclease digestion,and the fragment length was 707 bp.The sequence analysis showed that the HSA and TP5 sequences of the target genes were identical with the gene sequences reported in GenBank and were fused by forward fusion.PCR method confirmed that the eukaryotic recombinant plasmid PPICZ αC-HSA-TP5 was integrated into the yeast genome,and compared with control group,the target gene PCR product length was found to be 1 860 bp.SDS-PAGE analysis showed that the expression level of HSA-TP5 fusion protein was gradually increased with the induction time within 72 h.HSA-TP5 fusion protein was purified by cation exchange chromatography and AKTA multifunctional protein purification system.The MTT assay results showed that HSA-TP5 fusion protein was consistent with TP5 protein in promoting lymphocyte proliferation activity.Conclusion:HSA-TP5 fusion protein canbe obtained by constructing the eukaryotic expression system of Pichia pastoris and owns the biological activity.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(043)005【总页数】6页(P948-952,后插5)【关键词】胸腺五肽;人血清白蛋白;融合基因;基因表达【作者】田丹;颜伟群;孙新;安晓婷;张立岩;刘杨;佟海滨;李坦;申野;满枋霖【作者单位】北华大学生命科学研究中心,吉林吉林132013;吉林大学药学院生物工程教研室,吉林长春130021;北华大学生命科学研究中心,吉林吉林132013;北京大学人民医院血液研究所骨髓移植病房,北京100044;北华大学附属医院骨外1科,吉林吉林132013;北华大学生命科学研究中心,吉林吉林132013;北华大学生命科学研究中心,吉林吉林132013;北华大学生命科学研究中心,吉林吉林132013;北华大学生命科学研究中心,吉林吉林132013;北华大学生命科学研究中心,吉林吉林132013【正文语种】中文【中图分类】Q786胸腺五肽(TP5)由精氨酸、赖氨酸、天门冬氨酸、缬氨酸和酪氨酸5种氨基酸组成，是胸腺生成素Ⅱ的活性中心，具有诱导T淋巴细胞及其亚群分化、成熟和活化的功能，能够使T淋巴细胞亚群比例趋于正常，具有增强巨噬细胞吞噬功能、提高红细胞及自然杀伤细胞的活力的作用[1-2]。

PML-RARα融合基因相关蛋白原核表达载体的构建、表达和纯化杜琴;蔡嘉镜;蒋春萍;徐磊;张国元;王东生【期刊名称】《国际医药卫生导报》【年(卷),期】2017(23)13【摘要】Objective To construct,express,and purify the prokaryotic expression vector for PML-RARα fusion gene related proteins.Methods PML-RARα-pET32a(+) plasmid was used as a template and 1 200 bp sequences of PML and RARα were amplified by polymerase chain reaction and subcloned into expression vector pET32a(+) to construct recombinant plasmid;then the ligated products were transformed into DH5α.The positive clone was propagated and the recombinant plasmids were extracted for further identification and sequencing.The correct recombinant plasmids were named after PML-Flag-pET32a(+) and Flag-RARα-pET32a(+) respectively.E.coli BL21(DE3) were transformed with PML-Flag-pET32a(+) and Flag-RARα-pET32a(+),respectively,and induced with IPTG for protein expression.Fusion protein with an N-terminal Histag could be purified by Ni2+-resin affinity chromatography.Purified protein was identified by SDS-PAGE and Western blotting.Results The purpose gene was got by PCR amplification;it was confirmed by EcoRI/HindⅢdouble enzyme digestion and DNA sequencing that the recombinant plasmids PML-Flag-pET32a(+) and Flag-RARα-pET32a(+) were constructedsuccessfully.PML and RARα proteins were exp ressed efficiently after the recombinant plasmids had been transformed and induced in E.coliBL21(DE3);SDS-PAGE and Western blotting demonstrated that the purified proteins were interest proteins.Conclusions Construction of recombinant plasmids and express ion and purification of the PML and RARα proteins laid a solid foundation for antibody preparation.%目的构建PML-RAR o[融合基因相关重组表达质粒,在大肠埃希菌中表达可溶性蛋白并进行纯化.方法利用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)以PML-RAR α全长质粒为模板分别扩增出长度均为1 200 bp的PML和RAR o[序列,并将它们分别插入PET32a(+)质粒中,构建重组表达质粒,化学法转化大肠埃希菌DH5α进行克隆,菌落PCR筛选阳性转化子,双酶切和测序鉴定重组质粒的正确性.正确重组的表达质粒分别命名为PML-Flag-PET32a(+)和Flag-RARα-PET32a(+).将正确重组的表达质粒转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用表达蛋白的组氨酸“标签”(His-tag)进行Ni2+-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化蛋白质.结果 PCR扩增获得目的基因,重组表达质粒经EcoRI/HindⅢ双酶切和测序鉴定证明构建正确.转化感受态BL21(DE3)并经诱导后得到高效表达,SDS-PAGE和Western blotting显示纯化蛋白为目的蛋白.结论成功构建重组表达质粒,并经诱导表达后可纯化出目的蛋白,为进一步的抗体制备等实验奠定了基础.【总页数】5页(P1998-2001,2025)【作者】杜琴;蔡嘉镜;蒋春萍;徐磊;张国元;王东生【作者单位】637000 南充,川北医学院附属医院检验科;637000 南充,川北医学院医学检验系;637000 南充,川北医学院转化医学研究中心;637000 南充,川北医学院医学检验系;637000 南充,川北医学院转化医学研究中心;637000 南充,川北医学院医学检验系;637000 南充,川北医学院转化医学研究中心;637000 南充,川北医学院附属医院检验科;637000 南充,川北医学院附属医院检验科;637000 南充,川北医学院转化医学研究中心【正文语种】中文【相关文献】1.癌钙调蛋白/鱼精蛋白截短体融合基因在原核表达载体中的构建及鉴定 [J], 石燕红;薛铮;朱彤;马丽娜;胡丹;崔志利2.肿瘤相关抗原MART-1蛋白原核表达载体的构建、表达纯化和活性鉴定 [J], 孟昭婷;李凯;颜焱锋;焦顺昌3.G250抗原肽与HBcAg融合基因原核表达载体的构建及表达蛋白的免疫分析 [J], 刘波;孙泽强;刘庆勇;陈杰;王司军;杨广笑;王全颖4.肺表面活性物质相关蛋白C原核表达载体的构建、表达及纯化 [J], 王静;杜江;周细中;刘茹;沈蔚;王斌5.肺表面活性物质相关蛋白C原核表达载体的构建、表达及纯化 [J], 王静;杜江;周细中;刘茹;沈蔚;王斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HIF-1α和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定李永明;吕刚;范仲凯;曹阳;王岩松;庄培袁;张王强;李刚【期刊名称】《解放军医学院学报》【年(卷),期】2014(035)002【摘要】目的构建pAdeno-EGFP-HIF-1α 重组腺病毒载体，探讨其在脊髓损伤中的作用。

方法采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）法扩增目的基因HIF-1α 并亚克隆到含有报告基因EGFP 的pShuttle-CMV-EGFP 穿梭载体中，得到pShuttle-EGFP-HIF-1α 重组穿梭质粒。

将已构建的重组穿梭质粒转移至pAdeno 骨架载体上，获得pAdeno-EGFP-HIF-1α 重组腺病毒质粒，继而在H293 细胞中扩增，纯化后进行PCR 鉴定并测定病毒滴度。

结果pShuttle-EGFPHIF-1 α 经KpnI/BamHI 双酶切后琼脂糖凝胶电泳可见阳性克隆组在2.5 kb 和5.1 kb 处出现两条带，而阴性克隆组只有5.1 kb 处一条带，证明pShuttle-EGFP-HIF-1α 重组穿梭质粒构建成功；pShuttle-EGFP-HIF-1α 重组穿梭质粒与pAdeno 载体重组后，经XhoI 单酶切后琼脂糖凝胶电泳可见阳性克隆组出现14.5 kb，11.7 kb，2.66 kb，2.6 kb，2.48 kb，2.47 kb，1.45 kb，0.6 kb 八条带，而阴性克隆的腺病毒空载组有14 kb，11.8 kb，4.0 kb，2.47 kb，1.45 kb，0.6 kb 六条带，证明重组pAdeno-EGFP-HIF1α 腺病毒质粒构建成功；pAdeno-EGFP-HIF-1α 重组腺病毒成功包装纯化后经PCR 鉴定，实验组和阳性对照组中均扩增到2.5 kb 片段，证明目的病毒中成功整合了HIF-1α 基因；TCID50 法测定纯化后的病毒滴度为2×10 10 PUF/ml 。

HIF1α-shRNA表达载体的构建与鉴定作者：李正堃李慧瑾来源：《科技视界》2020年第07期摘要目的：构建HIF1α-shRNA表达载体并鉴定，为进一步研究其在肿瘤发生发展中的作用奠定基础。

方法：设计合成两条互补的编码HIF1α-shRNA的DNA寡核苷酸单链，退火形成互补双链，后将退火产物与酶切线性化的表达载体pG1.1连接后，转化至感受态细胞DH5α中，提取重组质粒并酶切鉴定，挑取克隆正确的重组质粒去测序鉴定插入序列。

结果：重组质粒酶切结果显示退火片段连接到pG1.1载体里，经测序分析重组质粒插入序列与合成的寡核苷酸序列一致。

结论：HIF1α-shRNA表达载体构建成功，为后续研究提供基础。

关键词HIF1α;shRNA;载体构建中图分类号： Q78;R378.11 ; ; ; ; ; ; ; ; ;文献标识码： ADOI：10.19694/ki.issn2095-2457.2020.07.062缺氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor-1， HIF-1）最初是从缺氧诱导的肝癌细胞Hep3B的细胞核中发现的一个转录因子，由氧敏感的α 亚基（HIF-1α）和持续稳定表达的β亚基（HIF-1β）以异源二聚体的形式组成，HIF-1α是调节亚单位，决定HIF-1的活性，HIF-1β则与稳定HIF-1及其二聚化有关[1]。

已经证实，HIF-1可介导肿瘤细胞产生一系列的缺氧适应反应，与肿瘤细胞的糖酵解途径密切相关，使肿瘤细胞在相对缺氧的状态下获得更多的能量供应，以维持存活、生长和分裂[2]。

本研究将构建HIF1α-shRNA表达载体，为进一步研究其在肿瘤发生发展中的作用提供生物学基础。

1 材料和方法1.1 材料表达载体pG1.1（武汉巴菲尔），限制性内切酶BsaI、SacI （美国NEB），T4 DNA连接酶、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒、质粒提取试剂盒、感受态细胞DH5α（北京天根），DNA 寡核苷酸由上海生工合成。