初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程
1、准备工作
1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。
2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.
3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。
4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。
2、试验步骤：
1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。
2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。
3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。
阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。制备2个平板均不得有菌生长。
3、注意事项：
1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。
2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。
编制：审核：批准：
ZC-14-8 初始污染菌监测操作规程
1范围
适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。
2职责
质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。
3生物负载测定方法
A.1概要
A.1.1生物负载测定，可使用不同的方法内容。负责进行测定的人员应运用原材料、部件、生产环境、生产过程和产品的特性方面的知识为每一步选择适当的方法。
学术论著中国医学装备2024年3月第21卷第3期 China Medical Equipment 2024 March Vol.21 No.3
Study on the influence factors of correction coefficient of biological load in testing the microorganism of medical device/Feng Qun1, Li Jing2, Zhan Bin2, Tian Guangjuan3, Li Xiaoyang31Department of Technique, Beijian Hengrun (Beijing) Measurement and Testing Technology Service Co., Ltd, Beijing 100176, China; 2Department of Technique, Beijianruhe (Beijing) Technical Service Co., Ltd, Beijing 100176, China; 3Department of Registration, Beijing Hongyi Runhe Management Consulting Co., Ltd, Beijing 101318, China Corresponding author: [Abstract] Objective: To study the different factors that affected the correction coefficient of biological load in microorganism test of medical device, so as to improve the accuracy of testing microorganism of medical device. Methods: According to the national standard "Sterilization of medical devices- Microbiological methods-Part 1: Determination of a population of microorganisms on products" (GB/T 19973.1-2015), the microorganisms of disposable sterile syringes were tested. The vaccination locations of different bacterial strains, the collection techniques of different eluents and the different microorganism count methods were selected to conduct experiment. And then, the correction coefficient of biological load was calculated. Results: Based on the data analysis of the correction coefficient of the biological load of disposable sterile syringes, the difference of the microorganism growth status on plate among three different vaccination locations of bacterial strains (cone head interior, tube inner wall and rubber piston) was statistically significant (F=36.575, P<0.05), and the correction coefficients for recovery rate were respectively 2.9, 16.5, and 9.9. The difference of the microorganism growth status on plate among three different microorganism collection techniques (manual shaking for 20 seconds, mechanical shaking for 5 and 20 minutes, 200 r/ min) was statistically significant (F=119.460, P<0.05), and the correction coefficients for recovery rate were respectively 14.1, 7.1 and 1.9. The difference of the microorganism growth status on plate among three different microorganism count methods (coating method, pouring method and membrane filtration method) was not significant (F=0.529, P>0.05), and the correction coefficients for recovery rate were respectively 1.2, 1.1 and 1.2. Conclusion: In testing biological load, multiple sites should be selected to conduct simultaneous infection of bacteria, and mechanical shaking should be used to collect eluent. In the test of biological load of medical device, the selection of the sites of bacterial infection and microorganism collection technique are important factor of the correction coefficient of biological load. [Key words] Medical device; Microorganism testing; Correction coefficient; Recovery rate; Biological load[摘要] 目的：研究医疗器械微生物检测中影响生物负载修正系数的不同因素，以提高医疗器械微生物检测结果的准确性。方法：依据国家标准《医疗器械的灭菌 微生物方法学 第1部分：产品上微生物总数的测定》(GB/T19973.1-2015)，对一次性使用无菌注射器进行微生物检测，选择不同菌种接种位置、不同洗脱液采集技术和不同微生物计数方法进行试验，计算生物负载的修正系数。结果：基于一次性使用无菌注射器生物负载的修正系数数据分析，选取锥头内部、管内壁、橡胶活塞3个不同菌种接种部位平板微生物生长情况比较，差异有统计学意义(F=36.575，P＜0.05)，回收率的修正系数分别为2.9、16.5和9.9；选取手工振摇20 s、机械振摇5和20 min(200 r/min)3种不同的微生物采集技术平板微生物生长情况比较，差异有统计学意义(F=119.460，P＜0.05)，回收率的修正系数分别为14.1、7.1和1.9；选取涂布法、倾注法、薄膜过滤法3种不同的微生物计数方法平板微生物生长情况比较，差异无统计学意义(F=0.529，P＞0.05)，回收率的修正系数分别为1.2、1.1和1.2。结论：在检测生物负载时，应选择多个部位同时染菌进行操作，并采用机械振摇的方式采集洗脱液，在医疗器械生物负载的检测中，染菌部位和微生物采集技术的选择是生物负载修正系数的重要因素。 [关键词] 医疗器械；微生物检测；修正系数；回收率；生物负载引用本文：冯群,李婧,战玢,等.医疗器械微生物检测中生物负载修正系数的影响因素研究[J].中国医学装备,2024,21(3):34-38.DOI:10.3969/j.issn.1672-8270.2024.03.007.冯 群1 李 婧2 战 玢2 田光娟3 李晓洋31北检恒润(北京)计量测试技术服务有限公司技术部 北京 100176；2北检润和(北京)技术服务有限公司技术部 北京 100176；3北京弘颐润和管理咨询有限公司注册部 北京 101318通信作者：李婧，Email：DOI: 10.3969/j.issn.1672-8270.2024.03.007中图分类号：R197.39 文献标识码：A医疗器械微生物检测中生物负载修正系数的影响因素研究
XXX有限公司 文件编号
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工 作 指 引 名称:生物负载检测方法的确认
制定 : XXX 確認 : 日期: 2-Mar-19 修訂版次 : 2
1 适用范围
适用于运用重复性回收的方法对生物负载检测方法进行确认.
2 参考文件
2.1 ISO11737-1 Sterilization of medical devices --Microbiological methods--Part 1:
Determination of a population of microorganisms on products
2.2 WI.XXX 产品生物负载检测操作指引
3 定义
3.1 生物负载:产品或无菌阻隔系统上的存活微生物的总数.
3.2 CF修正系数Correction Factor(CF):用于补偿无法从产品或培养基中完全除去微生物的数值;
3.3 样品份额Sample item portion(SIP):从产品上取的用于测试的规定部分.
4 职责
4.1 实验员:具备微生物方面知识,熟悉测试操作,负责产品的测试及报告.
4.2 实验工程师:熟悉测试,指导实验员测试,检查测试报告.
4.3 质量主管/经理:负责审批测试报告.
5 确认程序
5.1 本方法的基础原理是生物负载测定方法应重复进行,直到回收的微生物累计数量没有明显增加.每重复一次,都将洗脱液从产品或产品部份上完全回收并计数,比较连续回收得到的累计结果.
5.2 测定产品生物负载后,应将该技术再次应用于同一产品份额上研究微生物是否进一步移除,应用于同一产品份额的该过程可在规定次数的场合下重复进行;
5.3 样品的选择,被测试样品必须具有代表性,可以体现产品的真实生物负载的情况;
5.4 测试样品份额(SIP)的选择,若验证生物负载在产品上是均匀分布的,SIP可以是该产品的任何部份,否则样品应包含能代表所制产品的每种相应材质而随机选取的产品部位.若已知生物负载分布,可以从认为对灭菌工艺最有挑战性的产品部份选取SIP.可在长度,质量,体积或表面积基础上计算SIP:
辐照灭菌剂量确认的微生物学方法
无菌状态是一个绝对的概念，但是要确定一个体系的无菌状态却是一个概率问题。产品的无菌保证水平是指一个体系经过灭菌操作后达到无菌状态的概率，要确定一个产品的无菌状态，必须要符合欧洲标准EN556的条件，EN556规定无菌保证水平为10-6，即每一百万细菌中有一个存活的概率。
ISO 11137-2-2006中规定了如何确定辐照产品的无菌保证水平。（医疗器械的灭菌，辐照灭菌，第二部分，灭菌剂量的确认）
剂量确认的方法
ISO 11137-2-2006中有两种方法来确认灭菌剂量使产品达到某一无菌保证水平，分别是方法一和方法二，下面列出了这两种方法的原理和过程。
方法一
方法二可用来确定：为了达到某一无菌保证水平所需的辐照剂量，在这种方法中，我们需要用到一个反映微生物耐受剂量的标准表格。
第一步：测定初始生物负载
为了做生物负载分析，至少要分别从三批独立的产品中抽出10个样品进行检测。生物负载分析必须按照一个经验证的、可行的方法进行分析。计算出每一批产品的平均生物负载，用30个样品的平均生物负载作为三批样品的总平均生物负载。如果三批产品中有一批的平均生物负载比总平均生物负载大两倍或两倍以上，就用此批的平均值来做剂量验证，否则，用三批的总平均值来做剂量验证。
第二步：获得验证剂量
一旦确定了原始生物负载量，就可以运用ISO 11137-2-2006标准中的参考表格确定达到10-2灭菌水平的剂量，使用该剂量处理100个样品得出的无菌实验结果，可以外推出10-6无菌保证水平对应的剂量是否合适。使用该参考表格时，产品中实际平均生物负载量应小于或等于表格中列出的生物负载量。
第三步：进行剂量验证试验
用参考表格确认的验证剂量辐照100个样品，所用验证剂量的相对误差不得超过±10%，然后将辐照后的产品移入无菌实验室进行无菌检测，每100个样品的无菌检测要独立进行。样品于30±2℃培养箱中培养14天， 对阳性结果进行计数。培养的14天内，定期观察阳性实验的数目。
