微生物化验方法

摘要：

微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。

概述：

一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。

生长量测定法

体积测量法：又称测菌丝浓度法。

通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。

001纯化水微生物限度检查法操作规程

操作规程：001纯化水微生物限度检查法

一、目的和适用范围

本操作规程适用于纯化水微生物限度检查法的操作流程。检查目的是为了评估纯化水中微生物的数量和种类，确保纯化水的质量符合相关法规和标准。

二、设备和试剂

1.无菌工作台

2.显微镜

3.火焰消毒器

4.纯化水样品

5.温度控制设备

6.无菌试剂瓶

7.营养基培养物

8.细菌计数板

三、操作步骤

1.检查前准备

1.1确保工作区域干净整洁，并进行必要的消毒。

1.2准备所需的设备和试剂。 1.3校验设备的准确性和完整性。

2.样品取样

2.1使用无菌容器取样纯化水样品。

2.2尽量避免样品接触到空气。

2.3快速将样品送至检测实验室。

3.样品处理

3.1使用无菌器具将样品分配到多个无菌试剂瓶中。

3.2确保样品的稀释比例符合标准要求。

4.培养试验

4.1取一定量的样品，将其滴入细菌计数板的每个孔中。

4.2使用无菌移液器将细菌计数板放入孔内的细菌培养基中。

4.3将细菌计数板密封，并标注好样品信息。

4.4将细菌计数板放置于设定好的温度和湿度下进行培养。

4.5培养时间根据实验要求确定。

5.计数和分析

5.1培养结束后，取出细菌计数板，使用显微镜在指定区域进行微生物计数。

5.2统计每个孔中微生物的数量，并记录下来。

5.3分析结果，与相关法规和标准进行比较。 5.4如结果符合要求，则纯化水样品通过检查；如结果不符合要求，则需进行进一步处理。

6.结果记录和报告

6.1将检查结果记录在检测报告中，包括样品信息、检测日期、微生物数量等。

6.2将报告存档，并按要求进行归档保存。

四、操作注意事项

1.操作过程必须保持无菌状态，避免样品的污染。

2.使用的设备和试剂必须保持干净和完整。

3.细菌计数板的培养条件必须按标准要求进行控制。

4.操作人员应熟悉操作流程和相关法规和标准，严格遵守操作规程。

五、操作记录

附件2：

实 习 计 划 书

实习名称 食品微生物检验实习

系 别 生物与化学工程系

年级专业 2008级食品质量与安全专业

实习时间 2010年下学期第17-19周

拟订人（签名） 王瑶琼 蒋盛岩

邵 阳 学 院

2010 年 12 月 13 日

一、实习目的

1、加强学生对微生物学实验的基本技能和动手能力的培养

2、培养学生运用理论知识分析、解决实际问题的能力

二、实习内容、方式和要求

（一）实习内容

1、豆制品中细菌含量检测

2、豆制品中酵母菌含量检测

3、豆制品中霉菌含量检测

4、豆制品中大肠菌群的检测

（二）实习方式

开放实验室，提供实验用品，在老师的指导下，学生自主完成豆制品的微生物检测

（三）实习要求

1、对豆制品的微生物检测能制订出详细的方案。

2、合理地选择和使用所需的仪器。

3、合理、准确地配制各种试剂培养基并进行正确的消毒与灭菌。

4、能在无菌室中正确地进行各项无菌操作。

5、能在规定的时间内完成细菌、酵母菌、霉菌、大肠菌群的检测。

6、实习笔记每天记录及时、清楚、真实。

7、各组内成员要相互配合，有问题应主动向老师请教。

8、每次（天）操作完成后，要对工作区域进行清理整洁工作。

9、爱惜仪器、节约试剂和水电，注意安全，防止意外事故发生。

三、实习时间、地点和单位

实习时间： 2010年下学期第17-19周

实习地点：生物与化学工程系微生物实验室

四、指导老师和学生编组名单

（一）指导老师

王瑶琼、蒋盛岩

(二)学生分组名单

表1 2008级食品质量与安全专业学生编组名单

序号 组长 成 员

1 罗进022 曹望002、谌礼炎006、董俊峰007、刘栋材018、罗进022

2 周沧042 梅从顺024、翁志清034、周沧042、陈静046、陈用048

ISO13485-2016/ISO9001/HACCP/GMP文件范例

文件名称： 表面微生物测定操作规程 生效日期： 2022-02-21

文件编号： 页数 1/3 生效版本： A0

文件制修订记录

NO 制/修订日期 修订编号 制/修订内容 版本 页次

1 2022-02-21 - 新制订 A0

核准 审核 制订

ISO13485-2016/ISO9001/HACCP/GMP文件范例

文件名称： 表面微生物测定操作规程 生效日期： 2022-02-21

文件编号： 页数 2/3 生效版本： A0

一、目的：建立表面微生物测定操作规程，使操作标准化，规范化。

二、范围：各生产车间、化验室。

三、责任人：质控部检验员。

四、管理内容：

1 洁净区微生物监测的动态标准如下：

级别 浮游菌

cfu/m3 沉降菌（90mm）

cfu/4小时(2) 表面微生物

接触碟（55mm）

cfu /碟 5指手套

cfu /手套

A级 1 1 1 1

B级 10 5 5 5

C级 100 50 25 －

D级 200 100 50 －

注：（1）表中各数值均为平均值。

2 检测方法

2.1 培养皿接触法

培养皿接触法(Rodac Plate法)最为简单，但仅适用于平的表面。在层流下开启表面接触碟，碟内无菌琼脂培养基 (通常直径为50mm)直接与设备表面接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀接触10秒钟左右，再盖上碟盖；用蘸有75%酒精的棉球擦拭被取样表面，除去残留琼脂。将取样后的接触碟置于预定时间内和规定温度下(例如

30～35℃或20～25℃)进行培养，用肉眼对微生物计数并识别，有疑似控制菌应鉴别菌种。此方法要求将培养基倒人培养皿中并使之隆起，应防止培养基溢出。

2.2 棉球擦抹法

对洁净区消毒结束后，可对洁净室内的机械表面＼内部及缝隙间、墙壁、窗台、试验台等量取25cm2 的面积，用事先经过灭菌的生理盐水、精制水或缓冲液(例如磷酸缓冲生理盐水)润湿的适当大小的灭菌纱布或灭菌脱脂棉充分擦拭，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内振摇(或作超声波洗涤)，再对浸出液进行增菌培养。