微生物限度检验方法验证方案
1.适用范围
本方案适用于本公司各品种微生物限度检验方法的验证。
2.目的
通过验证确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度的测定 。
3.职责
项目责任人：负责验证方案的起草及具体实施。
验证管理员：负责验证工作的组织、协调及管理。
QA现场监控员：负责验证实施过程中的监督检查，取样，确保结果的可靠性。
QC负责人：负责验证方案中检验方法的审核及按照规定的取样计划对标准检验操作程序的准确执行，负责组织实施。
QC检验员：负责验证方案的起草与参与实施，并对所测数据准确性负责。
质量部经理：负责验证方案及报告的审核和批准。
4.内容
4.1.概述
通过验证以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定；确认所采用的方法适合于该药品的控制菌的检查。根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
4.2细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证
当建立药品的微生物限度检查时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定。验证试验可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同时进行。
4.2.1.验证用菌株及菌种要求
大肠埃希菌【CMCC（B）44102】
金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】
枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】
黑曲霉【CMCC（F）98003】
白色念珠菌【CMCC（F）98001】。
验证实验所用的菌株传代次数不得超过5代 （从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为0 代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
4.2.2.验证菌菌液制备
4.2.2.1. 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液制备：接种大肠埃希菌、金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，35～37℃ 培养18～24小时。取此培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4~10-5，制成每1ml含菌数 50～100cfu的菌悬液。
微生物检验方法验证
微生物检验方法的验证包括以下几个步骤：
1. 确定目标微生物：首先需要确定要检测的目标微生物种类，确定待测微生物的特性以及所需检测方法的适应范围。
2. 确定样品类型：确定待测样品的类型，例如食品、水样、空气样等，并对不同类型的样品制定相应的采样方案。
3. 方法准备：选择合适的检验方法，例如培养法、PCR法、免疫学方法等。根据待测微生物的特性选择培养基和检测试剂，并准备所需的设备和试剂。
4. 方法验证设计：根据相关的验证准则和要求，设计验证实验方案。验证实验应包含合适的正性对照和负性对照，以验证方法的灵敏度、特异性、重复性和稳定性等指标。
5. 样品处理：按照采样方案采集样品，并进行必要的预处理，例如分离、富集、过滤等，以提高待测微生物的检出率。
6. 方法验证实验：按照验证实验方案进行实验操作，根据实验结果评估方法的准确性和可靠性。可能需要重复实验、对比不同方法和分析相关数据。
7. 数据分析与评估：统计和分析验证实验的数据，比较不同方法的结果，并评估方法的适用性和准确性。结果应与参考方法进行比较，获取可靠的验证结果。
8. 验证报告：根据实验结果撰写验证报告，包括验证实验的目的、方法、结果、讨论和结论等，推荐结果的适用范围和限制，并提出建议和改进意见。
以上是微生物检验方法的一般验证流程，具体的验证步骤和方法可能会有所不同，根据不同的检测需求和标准进行相应的调整。
药品微生物限度检查及方法验证
从事药品微生物限度检查工作两年时间，从学做到承担工作到变得有点经验，经历了一个摸索、学习和积累的过程，回过头来做一个总结，把一些零散的经验和体会做一个梳理和归整，以供在此岗位工作的同仁参考。
第一部分：外围工作
外围工作主要有器皿清洗、灭菌，培养基、试剂配制及灭菌，无菌室清洁消毒等。
器皿的清洗是每个实验室和每一个实验员必须要做的最起码的工作，工作要求简单，操作方便，把握一个原则：干净。
培养基、试剂配制后一般都要求调PH到7.20，因为高温灭菌之后PH值会下降0.2左右。固体培养基在灭菌前要先加热煮沸，使琼脂均匀分散。煮沸时要注意不要溢出容器，以免发生烫伤。万一不小心溢出，可用一湿抹布盖住容器口，迅速将其从加热源上移开，不要在情急之下徒手去拿或者在容器侧面拿，那样容易被从容器口源源不断溢出的培养基烫伤。液体物品灭菌后，不能立即打开放气阀放气，因为此时被灭菌物品的温度大于100℃，在压力等于常压时，液体会暴沸，造成液体喷出或容器炸裂，发生事故。
万级洁净度的无菌室应当每周进行一次消毒，消毒剂每月更换一次，防止长期使用同一种消毒剂而使微生物形成耐药性。消毒范围包括墙壁，地面，天花板以及空气。表面消毒可以用消毒剂擦拭，尤其注意门框边缘以及出风回风口，不能留有死角；空气消毒宜采用臭氧或者紫外灯。可以使用专门的臭氧发生器产生臭氧进行消毒，也可以在每一个操作间包括净化台安装适宜功率的紫外灯，一方面紫外线可以对近距离的物体表面进行消毒，另一方面紫外线的作用也可以使空气中的氧气转换成臭氧，从而能够杀死空气中的微生物。另外在每次做完实验之后，都应当对实验台面以及地面进行消毒处理。
第二部分：检验过程
整个无菌室的检验操作过程应当有一个标准的操作规范，严格按照无菌操作的规定进行操作，包括进入无菌室的程序以及人员清洁消毒，都应当遵守标准来进行。
首先，进入无菌室应当严格按照洁净区（室）有关规定进行。进入之前先进行洗手消毒，在一更换鞋，脱去外衣，进入二更，穿洁净工作服，注意穿戴洁净工作衣帽时必须做到衣服的任何部位不得拖地。穿戴好后通过缓冲间进入无菌操作间。
附件2：
实 习 计 划 书
实习名称 食品微生物检验实习
系 别 生物与化学工程系
年级专业 2008级食品质量与安全专业
实习时间 2010年下学期第17-19周
拟订人（签名） 王瑶琼 蒋盛岩
邵 阳 学 院
2010 年 12 月 13 日
一、实习目的
1、加强学生对微生物学实验的基本技能和动手能力的培养
2、培养学生运用理论知识分析、解决实际问题的能力
二、实习内容、方式和要求
（一）实习内容
1、豆制品中细菌含量检测
2、豆制品中酵母菌含量检测
3、豆制品中霉菌含量检测
4、豆制品中大肠菌群的检测
（二）实习方式
开放实验室，提供实验用品，在老师的指导下，学生自主完成豆制品的微生物检测
（三）实习要求
1、对豆制品的微生物检测能制订出详细的方案。
2、合理地选择和使用所需的仪器。
3、合理、准确地配制各种试剂培养基并进行正确的消毒与灭菌。
4、能在无菌室中正确地进行各项无菌操作。
5、能在规定的时间内完成细菌、酵母菌、霉菌、大肠菌群的检测。
6、实习笔记每天记录及时、清楚、真实。
7、各组内成员要相互配合，有问题应主动向老师请教。
8、每次（天）操作完成后，要对工作区域进行清理整洁工作。
9、爱惜仪器、节约试剂和水电，注意安全，防止意外事故发生。
三、实习时间、地点和单位
实习时间： 2010年下学期第17-19周
实习地点：生物与化学工程系微生物实验室
四、指导老师和学生编组名单
（一）指导老师
王瑶琼、蒋盛岩
(二)学生分组名单
表1 2008级食品质量与安全专业学生编组名单
序号 组长 成 员
1 罗进022 曹望002、谌礼炎006、董俊峰007、刘栋材018、罗进022
2 周沧042 梅从顺024、翁志清034、周沧042、陈静046、陈用048
