幽门螺旋杆菌分型检测

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010994688.5(22)申请日 2020.09.21(71)申请人 南开大学地址 300071 天津市南开区卫津路94号(72)发明人 郗日沫　佟悦　王倍　王朔　甘奇　张瑞肖　(51)Int.Cl.C12Q 1/689(2018.01)C12Q 1/6858(2018.01)C12Q 1/04(2006.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称口腔中幽门螺杆菌耐药性分型检测的方法和试剂盒(57)摘要由于胃活检样本内窥镜取样困难、成本高，幽门螺杆菌(Hp)生长条件苛刻难以培养，Hp耐药性的侵入性诊断方法并不理想。

本发明提供一种非侵入性幽门螺杆菌耐药性检测的分子诊断方法，采用巢氏PCR技术结合测序技术对粪便样本进行快速检测与解析，利用核苷酸序列如表2及表3所示的引物联合检测23SrRNA，gyrA ,PBP1,16SrRNA ,porD ,oorD，rpoB等7种耐药基因的52个位点的突变及rdxA耐药基因的随机突变，进而对目前临床常用7种抗生素耐药情况进行判定。

本发明属于生物技术领域，快速灵敏，适合临床应用，在指导幽门螺杆菌患者的个性化诊疗根除方面有较大应用前景。

权利要求书2页 说明书14页序列表5页CN 112760391 A 2021.05.07C N 112760391A1.一种检测和判定幽门螺旋杆菌耐药性的诊断方法，其特征在于，此方法为非侵入性诊断，该幽门螺旋杆菌的来源为口腔内唾液及牙菌斑。

2.应用如权利要求1所述的诊断方法，其特征在于，采用巢氏PCR技术结合测序技术，灵敏度、特异性与准确率较高。

3.应用如权利要求1所述的诊断方法，其特征在于，口腔内唾液及牙菌斑标本进行全基因组提取时，采用改良的碘化钾提取方法，整个提取流程操作简单、耗时短、成本低，与试剂盒法相比，得到的后续PCR结果相同，能够满足当前实验需求，适合于临床样本的快速提取。

幽门螺旋杆菌标准值幽门螺旋杆菌是一种常见的胃肠道病原菌，也是胃癌和十二指肠溃疡的主要致病因素之一。

因此，对于幽门螺旋杆菌的检测和诊断具有重要意义。

下面是幽门螺旋杆菌检测的标准值及相关内容。

一、幽门螺旋杆菌检测标准值1. 快速尿素酶测试（RUT）：阴性2. 红细胞凝集试验（RBC）：阴性3. 呼气氢试验：正常值<20ppm4. 尿素酶链式反应（PCR）检测：阴性5. 幽门螺旋杆菌抗体检测（血清学）：血清幽门螺旋杆菌抗体IgG数值正常值<10IU/ml，IgA数值正常值<4IU/ml。

二、幽门螺旋杆菌检测方法1. 快速尿素酶测试（RUT）：该方法利用特定酶判定幽门螺旋杆菌存在的方法，需要从胃部粘膜分泌物中采集样本进行检测。

2. 红细胞凝集试验（RBC）：该方法通过测定幽门螺旋杆菌抗体处理红细胞的凝集能力来判定幽门螺旋杆菌是否存在。

3. 呼气氢试验：该方法是一种无创检测方法，通过检测呼气气体中氢气浓度的变化来判断幽门螺旋杆菌的存在。

4. 尿素酶链式反应（PCR）检测：该方法是一种高度敏感和特异性的分子生物学检测方法，能够快速准确地检测幽门螺旋杆菌。

5. 幽门螺旋杆菌抗体检测（血清学）：该方法通过检测血清中的IgG 和IgA抗体来判断幽门螺旋杆菌的感染情况。

三、幽门螺旋杆菌感染的症状常见的幽门螺旋杆菌感染症状包括：1. 腹痛和不适感。

2. 消化不良和胃灼热。

3. 恶心和呕吐。

4. 食欲下降和体重减轻。

5. 腹泻和便秘。

四、幽门螺旋杆菌感染的危害1. 导致胃炎和胃溃疡，甚至胃癌的发生。

2. 导致恶心、呕吐、腹泻等症状，严重者可能导致水分和电解质的失衡。

3. 幽门螺旋杆菌感染也与其他疾病如心血管疾病、胆囊炎、关节炎等有关。

五、幽门螺旋杆菌感染的预防和治疗1. 加强个人卫生，避免食用不洁食物和饮水。

2. 定期进行消化系统检查，避免病情进一步恶化。

3. 采用幽门螺旋杆菌治疗方案进行治疗，包括抗生素、质子泵抑制剂、降酸药等。

两种方法检测幽门螺旋杆菌抗体及其分型的比较目的为考核南京大渊生物技术工程有限责任公司生产的蛋白芯片法检测幽门螺杆菌（Hp）抗体及其分型试剂的敏感性和特异性，从而判断其在临床诊断中的应用价值。

方法临床上采用经SFDA注册的深圳市伯劳特生物制品有限公司的幽门螺杆菌抗体分型检测试剂盒（免疫印迹法）检测幽门螺杆菌抗体及其分型（分为CagA、VacA和Urease），共检测血清476份，检测结果与对比试剂不同的标本用第三方经SFDA认证的试剂进行复核，对于Urease不符合的病例，采用北京康美天鸿生物科技有限公司的幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒（胶体金法）进行检测，对于CagA和VacA不一致的标本，则采用上海研域生物科技有限公司提供的ELISA试剂盒进行检测。

结果南京大渊生物技术工程有限责任公司生产的蛋白芯片法检测幽门螺杆菌抗体及其分型试剂CagA阳性符合率94.5%，阴性符合率96.5%，总符合率95.8%（P>0.05）；Urease阳性符合率95.1%，阴性符合率92.7%，总符合率95.4%（P>0.05）；VacA阳性符合率91.6%，阴性符合率97.1%，总符合率95.2%（P>0.05）；两种方法结果经统计学检验差异无统计学意义。

结论经以上结果的分析，本次临床试验的有效病例476例，大渊Hp 分型检测试剂盒（蛋白芯片法）与伯劳特幽门螺杆菌抗体分型检测试剂盒（免疫印迹法）的一致率均在90%以上，产品质量达到临床使用要求。

标签：幽门螺杆菌抗体；分型；蛋白芯片法；免疫印迹法幽门螺旋杆菌（helicobacter pylori，Hp）是一种革兰氏阴性杆菌，是能够在人的胃中生存的唯一微生物种类。

幽门螺旋杆菌外形为S形或弧形弯曲，细菌可以穿过胃黏膜而定居至胃上皮细胞，又能产生大量尿素酶，分解尿素在菌体周围形成一股碱性的“氨云”，可以抵抗胃中的酸性环境，免受胃酸杀死。

1 材料与方法1.1 研究对象随机选取2013年1月～2013年2月本院门诊及住院患者476例。

幽门螺杆菌分型抗体1型和ii型分型的原理嘿，朋友们！今天咱们来唠唠幽门螺杆菌分型抗体里的1型和II型分型的原理，这事儿可有趣又重要呢！咱先得知道幽门螺杆菌这小家伙，它就像个隐藏在咱们胃里的小捣蛋鬼。

幽门螺杆菌有不同的类型，这就跟人有不同性格似的。

1型和II型可不一样，那科学家们是怎么把它们区分出来的呢？这就涉及到它们产生的抗体啦。

想象一下，幽门螺杆菌就像一个个小小的外星生物入侵了咱们的胃部这个星球。

咱们的身体呢，可不会坐以待毙，身体里的免疫系统就像是星球的防御部队。

当幽门螺杆菌进来的时候，免疫系统就开始制造武器来对抗它们，这些武器就是抗体。

1型幽门螺杆菌啊，它就像是个比较“坏”的小坏蛋。

它会产生一些特殊的物质，这些物质会让咱们的胃变得很不舒服，容易引起比较严重的胃部问题。

1型幽门螺杆菌的这些特殊之处，会让身体的防御部队，也就是免疫系统，产生一种特定模式的抗体反应。

这就好比这个小坏蛋有独特的作恶手段，身体就针对这些手段打造特定的反击武器。

那II型幽门螺杆菌呢？它就相对没那么“坏”，有点像那种偶尔调皮一下的小捣蛋。

它引起的免疫反应，也就是身体制造的抗体情况，和1型是有区别的。

打个比方，如果1型是那种明目张胆搞破坏的大反派，II型可能就是偷偷摸摸做点小坏事的小喽啰，身体对待它们的防御策略，也就是制造的抗体类型和模式自然就不同。

我有个朋友，他老是胃不舒服，去医院一查，发现感染了幽门螺杆菌。

医生就给他做了这个分型检测。

他当时就特别好奇，问医生：“这分型到底是咋回事啊？”医生就跟他解释说：“你看啊，就像不同的敌人有不同的弱点，我们通过检测你身体里针对幽门螺杆菌的抗体类型，就能知道你感染的是哪种幽门螺杆菌。

如果是1型，那我们就得更加重视，因为它可能带来的危害更大。

”我朋友听了之后，恍然大悟，就像突然打开了一扇知识的新大门。

从科学原理上来说，这两种类型的幽门螺杆菌在基因层面就存在差异。

这些基因差异就导致了它们在感染人体后，表面的一些蛋白质或者其他分子的表达不一样。

幽门螺杆菌抗体分型检测在上消化道疾病中的应用价值发布时间：2023-06-25T11:54:29.711Z 来源：《中国医学人文》2023年2月2期作者：畅彦红[导读]幽门螺杆菌抗体分型检测在上消化道疾病中的应用价值畅彦红（大庆市第五医院；黑龙江大庆163711）【摘要】目的：分析幽门螺杆菌（Hp）抗体分型检测在上消化道疾病中的应用价值。

方法：选取我院2020年1月-2023年收治的100例上消化道疾病患者为研究对象，所有患者均行胃镜检查、检测Hp感染情况及抽取静脉血，采用免疫印迹法检测患者血清中Hp抗体分型，包括细胞毒素相关蛋白A（CagA）、空泡毒素相关蛋白A（VacA）、尿素酶A（UreA）、尿素酶B（UreA）。

结果：CagA及VacAHp抗体阳性率在GC组最高，FD组最低；GC组患者的CagA抗体及VacAHp抗体阳性率高于其他组；GC组UreA和UreB抗体均高于其他各组，其中和CSG、CAG、RE、FD组比较差异明显；PU组UreA和UreB抗体均高于CSG、CAG、RE、FD、PU组（P＜0.05）；其与组间无明显差异（P＞0.05）。

CSG、CAG、PU、GC、RE、FD组HpⅠ型感染率均显著高于HpⅡ型；其中GC组HpⅠ型感染率显著高于CSG、RE、FD组；PU 组、CAG组HpⅠ型感染率高于FD组（P＜0.05）；其与组间无差异（P＞0.05）。

结论：上消化道疾病患者普遍存在Hp感染，其中叫人破能够以发生感染的是PU、GC患者，Hp抗体主要为Ⅰ型，采用Hp抗体检测可评估患者疾病情况，并对其预后治疗提供可靠依据。

【关键词】幽门螺杆菌抗体分型检测；上消化道疾病；应用价值随着医学研究中对HP的深入了解，发现HP是引起上消化道疾病的主要原因。

根据调查结果发现，国内HP的感染率比较高，且感染HP 对患者的机体有一定程度的损伤，需要及时进行相应的预防和治疗。

Hp是一种微厌氧细菌，可导致患者发生慢性胃炎、消化性溃疡等疾病，若不及时进行治疗则会发展为胃癌，严重威胁患者生命安全。

幽门螺旋杆菌如何检测幽门螺旋杆菌作为寄生在胃黏膜中的菌群，患者发生感染后，容易导致人们感到胃部不适，有些人在感染后发生胃炎及消化性溃疡。

幽门螺旋杆菌引发的疾病较多，人们往往在感染前无法发现感染，等到出现胃部不适后，进入临床诊断已经确诊疾病。

现阶段，幽门螺旋杆菌已经被世界卫生组织认为是一种致癌因子，医学界对幽门螺旋杆菌感染的关注度增高。

对此，人们应当认识到幽门螺旋杆菌如何检测，等待身体出现不适症状后，及时进入医院完成检查，那么，幽门螺旋杆菌究竟是什么？如何进行检测呢？幽门螺杆菌是什么幽门螺旋杆菌是人们身体中常见的菌群，不同地区及国家发病率存在差异，与人们生存的地区及人口密集情况相关，幽门螺旋杆菌会随着人们年龄增加，发生率随之增加。

在发展中国家，幽门螺旋杆菌感染的概率非常高，半数以上的人群会出现幽门螺旋杆菌感染，而发达国家发生感染的概率则相对较低。

幽门螺旋杆菌是具有传染能力的菌群，消化道传播的概率高，也有人群通过粪便及口腔传播。

粪便传播与人们的饮食结构相关，实物中含有幽门螺旋杆菌，在排便后，粪便中也会出现幽门螺旋杆菌。

家长经常亲吻婴儿，也容易诱发幽门螺旋杆菌感染，这种便是经口传播，也有一些医院对感染物品处理不恰当，导致人们出现幽门螺旋杆菌感染。

对菌群属性进行分析，幽门螺旋杆菌属于革兰阴性菌，呈现螺旋状或者海鸥状，幽门螺旋杆菌容易诱发一些慢性炎性病变，包括慢性胃炎或者消化道溃疡。

所以，面对幽门螺旋杆菌人们无需害怕，经常参与体检，或者在胃肠道感到不适后及时进入医院检查，均能发现幽门螺旋杆菌，经过有效的治疗后，可消除幽门螺旋杆菌。

幽门螺旋杆菌如何检查呢幽门螺旋杆菌作为一种胃肠道中的革兰阴性菌，对生活条件要求较高，也会对人们的人体产生重大的损害。

菌群主要是对人们的胃黏膜产生影响，导致胃黏膜破坏，从而发生不同类型的胃部病变。

长此以往，人们没有重视，容易导致患者发生胃部癌性病变，甚至导致人们死亡。

那么幽门螺旋杆菌究竟如何检测呢，以下几种方法均具有适用性。

２０２１年８月 第１５期影像学及诊断检验抗体分型检测在幽门螺杆菌感染诊断中的应用价值李春鸿，林养，吴春芳，杨康土湛江市第四人民医院，广东 湛江 524008【摘要】目的：探讨抗体分型检测在幽门螺杆菌感染诊断中的应用价值。

方法：选取健康体检者200名，使用免疫印迹法进行幽门螺杆菌抗体分型检测，根据抗体分型分为I型(98例)和II型(102例)，记录两组患者的幽门螺杆菌感染情况。

结果：①200名体检者中共发现幽门螺杆菌感染140例，幽门螺杆菌感染率为70.0%。

其中I型组感染84例，感染率为42.0%；感染抗体分型主要是细胞毒素、空泡毒素、尿素酶A、尿素酶B，均为阳性20例，占23.8%；细胞毒素、尿素酶B阳性10例，占11.9%；II型组感染56例，感染率为28.0%，尿素酶B为阳性，细胞毒素、空泡毒素、尿素酶A为阴性最为常见，10例，占17.9%，其次为尿素酶A为阳性、细胞毒素、空泡毒素、尿素酶B为阴性，3例，占5.4%，尿素酶A与尿素酶B阳性、细胞毒素、空泡毒素为阴性，3例，占5.4%。

②幽门螺杆菌抗体分型I型患者呼气实验阳性率52.4%，显著高于抗体分型II型患者呼气实验阳性率10.7%，P<0.05。

结论：抗体分型检测有助于诊断幽门螺杆菌感染，提高诊断水平，值得临床推广。

【关键词】抗体分型检测；幽门螺杆菌；感染[中图分类号]R57 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2021)09-0196-02幽门螺杆菌是寄生在人体胃黏膜表层的病原菌，其不仅是慢性活动性胃炎、消化性溃疡等疾病的重要诱因，而且与胃癌的发生、发展也有直接关系[1]。

本文对抗体分型检测在幽门螺杆菌感染诊断中的应用价值进行了探讨，现报道如下：1 资料与方法1.1一般资料　选取2019年1月～2019年12月的健康体检者200名，其中，男性122例，女性78例，年龄在18～82岁之间，平均45.9±5.8岁。

幽门螺旋杆菌五分型标准
幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori）是一种革兰氏阴性杆菌，常定植于胃黏膜上。

在幽门螺旋杆菌的研究中，科学家们发现了不
同的分型标准，其中比较常见的是根据细菌的表面抗原进行分类，
主要包括cagA基因和vacA基因的分型。

cagA基因是编码细菌细胞质蛋白的基因，它的存在与幽门螺旋
杆菌引起的胃炎、溃疡和胃癌等疾病密切相关。

根据cagA基因的多
态性，幽门螺旋杆菌可分为cagA阳性和cagA阴性两种类型。

cagA
阳性菌株通常与更严重的胃黏膜病变和胃癌风险增加相关。

另一个常见的分型标准是vacA基因的分型。

vacA基因编码的
毒力因子能够导致细菌对胃部组织的损害。

根据vacA基因的多态性，幽门螺旋杆菌可分为不同类型，包括s区（s1和s2）和m区（m1
和m2）。

不同的vacA基因型与幽门螺旋杆菌相关疾病的发生和发
展密切相关。

除了cagA和vacA基因的分型外，还有一些其他的分子标记，
比如iceA基因、dupA基因等，这些基因的存在也与幽门螺旋杆菌
引起的疾病相关性有所不同。

总的来说，幽门螺旋杆菌的五分型标准主要是基于其不同基因型的分类，这些基因型与幽门螺旋杆菌相关疾病的发生和发展密切相关。

通过对不同基因型的研究，可以更好地了解幽门螺旋杆菌的致病机制，为相关疾病的预防和治疗提供更有效的策略。