乳酸菌检验方法

乳酸菌镜检方法及显微镜使用方法本页仅作为文档页封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March乳酸菌精简方法及显微镜使用方法第一部分：乳酸菌镜检可以采用革兰氏染色方法。

第二部分：使用显微镜的油镜进行镜检，下面是具体的染色方法和镜检方法，请参考。

第一部分：乳酸菌革兰氏染色方法1目的在乳酸菌发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的乳酸菌悬液或乳酸菌样品进行检测，观察乳酸菌乳酸菌在显微镜下的形态。

2原理通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

3 实验用品准备：灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器4 操作：1 涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。

2 干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。

3 固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60℃），放置待冷后，进行染色。

乳酸菌检验报告1. 引言本报告旨在对乳酸菌样本的检验结果进行详细分析和解释。

乳酸菌是一类益生菌，具有多种益处，包括改善肠道菌群平衡、促进消化系统健康等。

通过对乳酸菌样本的检验，了解其数量和种类，能够为人们提供有关肠道健康的重要指标。

本报告将详细介绍检验方法、结果分析以及相关建议。

2. 检验方法乳酸菌样本的检验通常采用以下方法之一：2.1 培养基法乳酸菌样本首先被接种在含有适宜营养物质的培养基上。

经过一段时间的培养，菌种将生长并形成可见的菌落数量。

通过观察培养基上形成的菌落数量和形态特征，可以初步了解乳酸菌的情况。

2.2 PCR法PCR法是一种通过扩增目标DNA片段的技术。

在乳酸菌检验中，可以通过PCR方法扩增乳酸菌特异性基因片段。

通过测量扩增产物的数量，可以推测乳酸菌样本中乳酸菌的数量。

2.3 16S rRNA测序法16S rRNA测序法是一种通过测序乳酸菌样本中16S rRNA基因的方法。

16S rRNA是一种在细菌中普遍存在的基因，其序列具有一定的保守性和变异性。

通过测序并比对乳酸菌样本中的16S rRNA序列，可以确定乳酸菌的种类。

3. 检验结果与分析3.1 培养基法检验结果经过培养基法检验，乳酸菌样本形成了X个可见的菌落，其形态特征为Y。

根据经验数据，通过数量与形态的分析，可以判断肠道菌群平衡的情况。

3.2 PCR检验结果PCR法检验得到的扩增产物数量为Z，据推测，乳酸菌样本中可能存在的乳酸菌数量约为W。

3.3 16S rRNA测序结果通过16S rRNA测序，确定了乳酸菌样本中存在的乳酸菌种类为A、B、C。

根据已知的乳酸菌种类特点，可以初步评估肠道健康状况。

4. 结果解释与建议根据乳酸菌检验结果，结合个人的生活习惯和饮食情况，可以给出以下解释和建议：•根据培养基法检验结果，乳酸菌样本形成的菌落数量适中，形态特征正常，表明肠道菌群平衡较好。

•根据PCR检验结果，乳酸菌样本中可能存在适量的乳酸菌，有益于维持肠道健康。

乳酸菌制剂检验法本试验法包括牛奶凝固力、乳酸鉴别法、活乳酸菌数测定法及鉴别法。

一、牛奶凝固力及乳酸鉴别法1.牛奶培养基的制备取脱脂奶粉,制成1015％的溶液分装于试管中,每管20ml,用115℃蒸汽灭菌20分钟。

2.试验法(1)牛奶凝固力取供试品0.1～0.3g，加至牛奶培养基20ml中，摇匀,在37℃培养48小时(必要时可延长至72小时)，同时作两管，作为供试品管，以牛奶培养基为对照管，供试品管的牛奶应呈正常凝固现象（表面无多量乳清分出，凝块均匀稠密结实，无气体产生，无消化现象）。

(2)乳酸鉴别取上述供试品管和对照管的培养液各1ml，分别注入两支试管(15×160mm)中，各加10％硫酸溶液3～5滴，振摇，加乙醚约10ml，猛烈振摇，放置数分钟，分别将上层乙醚液倒入两支试管(16×180mm)中，于热水浴中,除去乙醚。

残留物中各加水2ml，摇匀，分别吸取0.2ml置另两支试管中，各加硫酸2ml，摇匀，置水浴中加热2分钟，取出，立刻用冷水冷却，分别滴加10％愈创木酚的乙醇溶液1滴，振摇后,对照管显橙色。

供试品管应显红色。

3.结果的判断(1)乳酸鉴别试验呈正反应，牛奶呈正常凝固现象，供试品优良。

(2)乳酸鉴别试验呈正反应，牛奶呈不均匀的凝块，并分出大量乳清,凝块有汽泡及消化现象，表示有杂菌生长，供试品符合规定。

(3)乳酸鉴别试验呈负反应，牛奶呈不正常凝固或者不凝固，供试品不合格规定。

二、活乳酸菌数测定法1.培养基的制备(1)含糖牛肉汤培养基牛肉浸液(或0.3％牛肉浸膏1000ml氯化钠5g胨10g乳糖20g取氯化钠、胨、乳糖加入牛肉浸液中，置水浴上加温，搅拌，使完全溶解，放冷至室温，调节pH值使灭菌后为6.0，115℃灭菌20分钟。

(2)含糖牛肉汤琼脂培养基照含糖牛肉汤培养基处方的基础上,加溴甲酚紫0.06g,再加琼脂使每1000ml中含琼脂15～20g，在水浴上加热使溶解，分装后，115℃灭菌20分钟。

乳酸菌的鉴定
1.革兰氏染色
对分离所得的菌株进行革兰氏染色
（1）制片：将一小滴水滴于载玻片中央，挑取一个菌落于水滴中，涂匀后将载玻片通过火焰2-3次后进行干燥、固定；
（2）初染：干燥、固定后，于载玻片上滴加草酸铵结晶紫，使其完全覆盖菌体，约1-2 min后，水洗载玻片至流出液完全无色；
（3）媒染：于载玻片上滴加碘液覆盖菌体约1 min左右，水洗载玻片至流出液完全无色；
（4）脱色：用滤纸将载玻片上的水吸干后，用95%的酒精滴洗约20-30 s，立即用水冲洗；
（5）复染：用滤纸将载玻片上的水吸干后，用番红复染2 min，水洗后晾干；（6）镜检：用擦镜纸擦拭油镜后，将载玻片置于100倍油镜下，滴加香柏油，观察，红色即为革兰氏阴性菌，紫色即为革兰氏阳性菌。

我们选革兰氏阳性菌。

革兰氏阳性菌。

乳酸菌检测国标方法乳酸菌检测方法1 适用范围本方法适用于清谷田园食品有限公司系列产品及原料中的乳酸菌的检测。

2 设备和仪器2.1 恒温培养箱：36±1℃2.2 天平：感量为0.01g2.3 无菌吸管：1 ml、2ml、10ml2.4 无菌锥形瓶：500ml2.5 无菌培养皿：直径为90mm2.6 无菌试管：18×180mm2.9 酒精灯2.10 立式蒸汽压力灭菌器2.11 超净工作台2.12 厌氧缸3试剂3.1 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。

3.2 MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基3.2.1 成分蛋白胨 10.0g牛肉粉 5.0g酵母粉 4.0g葡萄糖 20.0g吐温80 1.0mLK2HPO4.7H2O 2.0g醋酸钠.3H2O 5.0g柠檬酸三铵 2.0gMnSO4.7H2O 0.2gMnSO4.4H2O 0.05g琼脂粉 15g3.2.2制法：将上述成分加于1000mL蒸馏水中，调节PH至6.2±0.2，加热煮沸溶解，分装于锥形瓶中，在121℃高压灭菌15-20min。

3.3莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）和半胱氨酸盐酸盐改良 MRS 培养基：3.3.1 莫匹罗星锂盐储备液制备：称取50mg莫匹罗星锂盐加入到50 mL蒸馏水中，用0.22 mm微孔滤膜过滤除菌。

3.3.2 半胱氨酸盐酸盐储备液制备：称取250mg莫匹罗星锂盐加入到50 mL 蒸馏水中，用0.22 mm微孔滤膜过滤除菌。

3.3.3 制法将A.1.1 成分加入到950 mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH，分装后121 ℃高压灭菌15 min～20 min。

临用时加热熔化琼脂，在水浴中冷至48 ℃，用带有0.22 mm微孔滤膜的注射器将莫匹罗星锂盐储备液及半胱氨酸盐酸盐储备液制备加入到熔化琼脂中，使培养基中莫匹罗星锂盐的浓度为50 mg/mL，半胱氨酸盐酸盐的浓度为500 mg/mL。

食品中乳酸菌的筛选与活性鉴定乳酸菌是一类对人体健康具有益处的细菌，在许多食物中都可以找到它们的踪迹。

从酸奶到发酵食品，乳酸菌都发挥着重要的作用。

然而，如何筛选出具有较高活性的乳酸菌，并对其进行鉴定，这是一个令人感兴趣的话题。

首先，我们需要选择适当的食品样本进行筛选。

常见的食品包括酸奶、奶酪、纳豆等发酵产品。

这些食品中含有大量的乳酸菌，因此是我们进行筛选的理想选择。

此外，还可以考虑其他一些食物，如蔬菜和肉类，它们也可能含有乳酸菌。

接下来，我们需要从样本中分离出乳酸菌。

这可以通过培养基选用和分离培养来实现。

培养基的选用非常重要，它应提供乳酸菌所需要的营养物质。

我们可以选择常用的乳酸菌培养基，如MRS培养基。

通过将样品接种于MRS培养基中，我们可以让乳酸菌生长并形成可见的菌落。

然后，通过将这些菌落转移至其他培养基中，可以进行单菌落分离，确保我们获得的是纯种的乳酸菌菌株。

鉴定乳酸菌的活性也是我们的重点之一。

活性乳酸菌可以产生乳酸、酶和抗菌物质，这些物质对人体健康有益。

因此，我们想要筛选出活性较高的乳酸菌菌株。

常见的活性鉴定方法包括测定乳酸产量、酶活性和抗菌活性。

乳酸产量是乳酸菌活性的重要指标之一。

我们可以通过高效液相色谱法（HPLC）来测定乳酸的含量。

通过将培养基或发酵物转移到HPLC系统中，我们可以分析出乳酸的浓度。

通过与不同菌株之间的比较，我们可以确定哪些菌株产乳酸的能力更强。

酶活性是另一个衡量乳酸菌活性的重要指标。

乳酸菌常常能够产生多种酶，如蛋白酶和纤维素酶。

我们可以使用相应的酶活性试剂盒来检测其酶活性。

高酶活性的乳酸菌意味着它们能够更好地消化蛋白质和纤维素，从而提高食物的可消化性和营养吸收能力。

除了乳酸和酶活性外，抗菌活性也是评估乳酸菌活性的重要指标之一。

乳酸菌可以产生抗菌物质，对抗病原菌的侵袭。

我们可以通过抗菌活性试验来评估乳酸菌的抗菌能力。

将不同乳酸菌菌株与病原菌一起接种在琼脂平板上，观察是否形成抑制区域。

一、乳酸菌检测方法植物乳杆菌的检验1原理植物乳杆菌能在相应的厌氧培养条件下，于MRS培养基表面生长成白色、细密、圆形光滑突起的菌落，根据长出的菌落数和稀释倍数，计算出活菌数。

2仪器与试药2.1 仪器超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温干燥箱、电冰箱、恒温培养箱（60℃±1℃）、恒温水浴锅、显微镜（10x—100x）、架盘天平（0—500g，精确至0.5g）、250ml锥形瓶、250ml 盐水瓶、灭菌吸管：1ml(具0.01ml刻度）、10ml(具0.1ml刻度）、灭菌平皿（直径90mm）、灭菌试管（15mm×160mm）、灭菌L型玻璃棒等。

2.2 试药酪蛋白胨、牛肉浸膏、酵母提取物、琼脂等均为生化试剂；无水乙酸钠、柠檬酸三胺、硫酸镁、硫酸锰、葡萄糖、磷酸氢二钾、碳酸钙、吐温-80、氯化钠等均为分析纯；水为双蒸馏水，其他化学试剂均为分析纯。

2.3 MRS琼脂培养基的组成与制备2.3.1培养基的组成酪蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母提取物5g、葡萄糖20g、无水乙酸钠5g、柠檬酸三胺3g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.2g、磷酸氢二钾2.0g、碳酸钙20g、吐温-801ml、琼脂15g、蒸馏水1000ml。

2.3.2培养基制备将上述的各组分在80～90℃加热使溶解，校正pH6.2，加蒸馏水至1000ml中，摇匀，分装于盐水瓶，每瓶100ml。

在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。

2.4营养琼脂平板的制备取冷至45℃左右的MCA琼脂培养基，在无菌的条件下倒入无菌的培养皿中，每平皿各约15ml，待冷却凝固后，备用。

2.5无菌生理盐水的制备称取氯化钠9.0g，用蒸馏水溶解并定容于1000ml量瓶中，摇匀，分装于250ml三角瓶中，每瓶装90ml. 在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。

3供试品溶液的制备以无菌操作法取检品10.0g，加入盛有90ml无菌生理盐的三角瓶中，充分振荡10分钟，制成1﹕10样品悬液。

引言概述：乳酸菌饮料是一种富含乳酸菌的食品，乳酸菌在食品工业中广泛应用于酸奶、乳饮料等产品中。

本文将详细介绍乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法。

正文内容：一、样品采集和制备1.确定样品采集时机：乳酸菌饮料中的乳酸菌数量会随着储存时间的增加而增加或减少，因此需要在存储时间稳定的情况下进行采集。

2.采集样品方法：使用无菌技术采集样品，避免外部微生物的污染。

3.样品制备：将采集到的样品进行均匀搅拌，以保证样品的均匀性。

二、总菌数检验方法1.琼脂平板法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，在琼脂平板上涂布，经过一定孵育时间后，根据菌落的数量计算总菌数。

2.膜过滤法：将样品通过膜过滤器过滤，将过滤后的膜放置在琼脂平板上孵育，根据菌落的数量计算总菌数。

三、乳酸菌检验方法1.培养基选择：根据乳酸菌的生长特性选择适合的培养基，常见的培养基有MRS培养基、LBS培养基等。

2.乳酸菌的分离：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在选定的培养基上。

经过一定孵育时间后，可以观察到乳酸菌形成的菌落。

3.鉴定乳酸菌：使用形态学观察、生理生化试验和分子生物学方法等进行乳酸菌的鉴定。

四、活菌数检验方法1.孵育培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在含有乳酸菌生长所需营养物质的培养基上。

经过一定孵育时间后，观察活菌的生长情况，计算活菌数。

2.阻碍培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，与含有抑制剂的培养基混合。

通过观察生长情况，计算活菌数。

五、质量指标评价方法1.pH值测定：使用pH计或试纸对乳酸菌饮料中的pH值进行测定，根据标准范围评价产品的质量。

2.乳酸浓度测定：使用乳酸测定仪器或化学试剂对乳酸菌饮料中的乳酸浓度进行测定，根据标准范围评价产品的质量。

3.品尝评价：通过专业的品尝人员进行品尝评价，评估乳酸菌饮料的口感和风味。

总结：乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法包括样品采集和制备、总菌数检验、乳酸菌检验、活菌数检验和质量指标评价方法。

乳酸菌的鉴定吲哚试验1）.试管标记：取装有蛋白胨水培养基的试管2支，分别标记乳酸菌和空白对照。

2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔到标记乳酸菌的试管中，标记有空白对照的不接种，置37摄氏度恒温箱中培养24~48小时。

3）.观察记录：在培养基中加入乙醚1~2 ml ,经充分振荡，使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5~10滴吲哚试剂，如有吲哚存在，乙醚层呈玫瑰色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应。

糖发酵试验1）.试管标记：取分别装有葡萄糖，蔗糖发酵培养液试管各2支，每种糖发酵试管中分别标记乳酸菌和空白对照。

2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。

将装有培养液的杜氏小管倒置试管中，置37摄氏度恒温培养箱中培养24小时，观察结果。

3）.观察记录：与对照管比较，若接种培养液保持原由颜色，其反映结果为阴性；如果培养液呈黄色，反映结果为阳性。

培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，杜氏小管内没有气泡为阴性反应。

1.2.3 乳酸的检测选用已经分离的菌种做小型发酵实验，取发酵液的上清液约10 ml于试管中，加入10%硫酸1 ml ,再加2%高锰酸钾 1 ml ,此时乳酸转化为乙醛，把事先在含氨的硝酸银溶液中侵泡的滤纸条搭在试管口中，微火加热试管至沸，观察滤纸变化。

1.结果和分析2.1 乳酸菌的分离提纯在平板上出现了圆形稍扁平的黄色菌落，周围培养基变为黄色，初步定为乳酸菌⑴，取出少量在显微镜下观察到了链球状和杆状两种形状（如图一2.2乳酸菌的鉴定该菌种的菌落为圆形稍扁平的黄色菌落，有杆状和链球状两种形状。

在吲哚试验中，加入菌种的试管无任何变化，证明为阴性反应（如图二）。

说明该菌不具有分解色氨酸产生吲哚的能力。

也说明此菌种不是大肠杆菌，因为大肠杆菌的吲哚试验证明为阳性。

在糖发酵试验中，在加入葡萄糖的发酵培养液中加入菌种后，培养液变为黄色，反应结果为阳性，且杜氏小管内无气泡（如图三）；加入蔗糖的发酵培养液中加入菌种后的反应结果也为阳性且杜氏小管内无气泡（如图四）。

乳酸菌检测思考题与讨论乳酸菌检测思考题与讨论引言：乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有重要的生物学功能和应用价值。

乳酸菌不仅可以产生乳酸，还能够抑制有害菌的生长，增强人体免疫力，并对人体健康具有多种益处。

乳酸菌的检测对于食品、医药、农业等领域具有重要意义。

一、乳酸菌检测方法1. 培养基法：这是最常用的乳酸菌检测方法之一。

通过将样品接种到含有特定培养基的琼脂平板上，利用乳酸菌对特定营养物质的需求进行筛选和培养。

通过观察琼脂平板上是否出现特定形态和颜色的细菌落，可以初步判断样品中是否存在乳酸菌。

2. PCR法：PCR（聚合酶链式反应）是一种分子生物学技术，可以在短时间内扩增目标DNA片段。

通过设计特异性引物，可以选择性地扩增与乳酸菌相关的基因序列。

通过检测PCR反应产物的存在与否，可以判断样品中是否存在乳酸菌。

3. 酶法：乳酸菌在代谢过程中会产生一些特定的酶，如乳酸脱氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶等。

利用这些特定的酶可以进行乳酸菌的检测。

常用的方法有色谱法、比色法等。

二、乳酸菌检测的应用领域1. 食品行业：乳制品是乳酸菌最常见的应用领域之一。

通过对食品中乳酸菌含量的检测，可以评估产品质量和卫生安全，并指导生产工艺和储存条件的控制。

还可以通过检测食品中潜在致病菌和有害物质的含量来保障消费者健康。

2. 医药领域：乳酸菌具有调节肠道微生态平衡、增强免疫力等作用，在医药领域有广泛应用。

通过对患者粪便或血液样本中乳酸菌含量的检测，可以评估肠道健康状况，并指导医生制定个体化的治疗方案。

3. 农业领域：乳酸菌在农业领域中也有一定的应用价值。

通过检测土壤或植物体内乳酸菌的含量，可以评估土壤质量和植物健康状况，并指导农民合理施肥和防治病虫害。

三、乳酸菌检测中存在的问题与挑战1. 检测方法选择：不同的乳酸菌检测方法具有不同的灵敏度、特异性和操作难度。

在实际应用中，需要根据具体需求选择合适的检测方法。

同时，还需要考虑成本、时间等因素。